熊果酸对大鼠角膜移植排斥反应的抑制作用

目的探讨熊果酸对大鼠角膜移植排斥反应的治疗效果。方法以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,将48只Wistar大鼠
随机分为4组。A组为正常角膜对照组,B组为Wistar鼠自体原位角膜移植,C、D 组为SD-Wistar大鼠之间进行同种异体角膜移
植。术后当天腹腔给药,A、B、C三组分别给予生理盐水作为空白对照,D组给予熊果酸（UA）（20 mg·kg-1·d-1）,连续给药12 d。
根据Larkin等角膜排斥反应评分系统,判断术后植片排斥情况。比较角膜植片的存活时间和植片存活率。术后14 d检测各组
中IL-2、IFN-γ、NF-κBp65、VEGF及ICAM-1的表达含量,并对角膜植片进行组织学检查与Western blot分析。结果D组角膜
植片的存括时间为29.12±9.58 d,与C组9.67±2.16 d 相比,两组间差异有显著性意义（P<0.01）。术后14 d D组角膜植片中的
IL-2、IFN-γ、NF-κBp65、ICAM-1及VEGF的相对含量明显下降,而IκB-α蛋白含量较高。未见明显淋巴细胞浸润和新生血管形
成。结论熊果酸作为NF-κB的核因子抑制剂,可以抑制角膜新生血管的形成与排斥反应,从而显著延长大鼠角膜植片的存活
时间。
     

基质细胞衍生因子-1与趋化因子受体4在大鼠角膜移植排斥反应中的作用

目的探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）与基质细胞衍生因子-1（CXCR4）在大鼠角膜组织中的表达及其在角膜移植术后 免疫排斥反应中的作用。方法取15只Wistar大鼠作为正常对照组;取22只Wistar大鼠行自体角膜移植术作为自体组;取22只 SD大鼠与44只Wistar大鼠,以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体行穿透性角膜移植,术后随机抽取22只归入典必殊组,术眼滴 典必殊眼液（每日2次）,剩余22只归入异体组,术眼滴同等量生理盐水,共一个月。参照Larkin法对各组角膜植片进行临床评 估;分别于术后第5、9天取术眼角膜植片,行组织病理学观察、免疫组化检查、实时荧光定量PCR检测。结果自体组不发生排 斥反应,典必殊组角膜存活时间为24±0.32 d,远高于异体组10±0.36 d（P<0.001）。组织病理学检查发现异体组角膜有大量炎 性细胞浸润以及新生血管形成。SDF-1和CXCR4 mRNA在异体组角膜组织中表达水平明显升高（第5天P<0.001,第9天P< 0.01）,典必殊组较异体组明显降低。免疫组化检查发现SDF-1/CXCR4主要表达在角膜植片的上皮层与基质层,异体组角膜组 织SDF-1和CXCR4含量明显升高。结论SDF-1/CXCR4可能参与了大鼠角膜移植术后早期的排斥反应,其机制可能为SDF-1 特异性诱导CXCR4+细胞成熟和朝着排斥部位趋化,并促进角膜新生血管形成。     

COX-2在角膜新生血管中的表达及血管形成抑制实验研究

目的:检测COX-2、VEGF在角膜新生血管形成中的表达及探讨COX-2选择性抑制剂对新生血管的抑制作用.方法:建立碱烧伤致大鼠角膜新生血管模型,通过裂隙灯和病理学观察,免疫组化方法检测COX-2和VEGF的表达.结果:阳性组见大量炎性细胞浸润,角膜新生血管丰富,用药组的上述改变明显减轻,且术后各时间点COX-2和VEGF表达均较阳性组明显减弱,有显著性差异(P<0.01).二者表达变化与病理组织学表现相平行.且COX-2与VEGF呈显著正相关(P<0.05).结论:COX-2和VEGF参与了角膜新生血管的形成过程,COX-2选择性抑制剂可抑制和延缓新生血管的发生、发展.     

IL-1ra抑制大鼠角膜移植免疫排斥反应的研究

目的　观察白细胞介素 - 1受体拮抗剂 (IL 1ra)对大鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应的影响。方法　建立大鼠同种异体穿透性角膜移植动物模型 ,受者随机分为生理盐水对照组 ,CsA治疗组 ,IL - 1ra治疗组。术后连续观察 2周 ,对各组大鼠角膜植片存活情况进行评分比较 ,评价药效。结果　IL - 1ra组与CsA组角膜植片存活时间分别为 (19.5 83± 0 .2 88)d和 (16.667± 0 .43 2 )d ,与对照组 (11.0 0 0± 0 .3 2 6)d相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;IL - 1ra组和CsA组排斥反应指数 (RI)均明显低于对照组 (P <0 .0 1) ;IL - 1ra组新生血管评分明显低于对照组和CsA组 (P <0 .0 1)。结论　IL - 1ra可明显抑制角膜移植术后免疫排斥反应 ,减轻炎性反应 ,减少新生血管生成 ,延长角膜植片的存活时间     

白细胞介素-1受体拮抗剂抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的 观察白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)抑制大鼠高危角膜移植后免疫排斥反应、促进植片存活的作用。方法 对40只SD大鼠(40眼)用缝线法诱导角膜新生血管增生,选取其中的30只大鼠(30眼)并随机分为实验Ⅰ、Ⅱ组及对照组Ⅲ组,每组均接受同种异系(Wistar大鼠)供体角膜,行穿透性角膜移植术。实验组于术后第1日起分别滴用50 μg/ml的IL-1ra滴眼液(Ⅰ组)和1%的CsA滴眼液(Ⅱ组),每日3次。受试动物术后均每日滴用典必殊滴眼液及托品卡胺滴眼液3次,连续14 d。术后比较各组大鼠免疫排斥反应发生的时间,对角膜植片存活情况进行评分,观察其效果。结果 两实验组角膜植片平均存活时间分别为(12.00±1.50) d和(10.44±1.13) d,明显高于对照组(8.00±1.25) d,差异有显著性(P<0 01);两实验组间比较,差异亦有显著性(P<0 01)。结论 IL-1ra可抑制高危角膜移植后的免疫排斥反应,减少新生血管的生成,减轻免疫性炎性反应,延长角膜植片的存活时间。     

肌注不同剂量环孢霉素A抑制大鼠角膜移植的免疫排斥反应

目的：探讨环孢霉素A不同剂量对大鼠角膜移植免疫排斥反应的影响。方法：以Wistar大鼠为供体,Lewis大鼠为受体建立角膜移植实验模型。将33只Lewis大鼠（33眼）随机分为A、B、C3组,每组11只。A组术后肌注CsA【1mg,（kg·d）】,B组给予CsA【10mg／（kg·d）】,C组给予等量不含药物的PBS,每次100ul,3次/d,连续用药10d。术后判断植片排斥情况,比较3组角膜植片的平均存活时间和新生血管评分。术后10d,病理组织学检查角膜的结构变化,并进行T细胞增殖实验,观察各组间T细胞增殖情况。结果：A、B组植片发生排斥反应的时间明显延迟,A组植片平均存活时间为（12．5±0．43）d,B组为（58±18．79）d,C组为（9±0．45）d,3组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。B组术后各时间点角膜新生血管的生长明显低于C组（P〈0．05）。A组与c组除第6天外,其余时间点无统计学意义。A、B组角膜植片中炎性细胞和新生血管较c组减少。角膜A、B组T细胞增殖量明显低于C组（P〈0．05）。结论：10mg／（kg·d）CsA能够有效抑制大鼠角膜移植术后免疫排斥的发生。     

不同抗炎药物对缺氧所致大鼠离体肺血管环张力变化的影响

为研究离体大鼠肺血管在缺氧时张力的变化,以及甾体、非甾体类抗炎药物对此变化影响的异同性,采用等长收缩技术,测定加入消炎痛或地塞米松前后张力改变的特点及两药作用的差异。结果发现Wistar大鼠与Sprague-Dawley大鼠肺血管环对缺氧的反应不同,后者仅出现收缩反应,而Wistar大鼠在收缩前出现一内皮依赖的舒张;COX非特异性抑制剂消炎痛对缺氧所致的舒张和收缩均有增强作用;COX-2特异性抑制剂地塞米松则在明显抑制舒张的同时轻度增强收缩反应。结果表明不同种属大鼠的肺血管缺氧反应可能存在差异;缩管性PGs和扩管性PGs分别调节急性肺血管缺氧的舒张和收缩反应,这一过程呈一定的内皮依赖性;非选择性和选择性的COX抑制剂对肺血管缺氧反应的作用不尽相同。     

青藤碱防治角膜移植排斥反应的实验研究

目的观察青藤碱滴眼液对大鼠穿透性角膜移植术后急性排斥期免疫排斥反应的影响。方法建立Wistar→SD大鼠同种异体穿透性角膜移植动物模型,受者随机分为生理盐水对照组(A组),0.5%SIN(B组),1%SIN(C组),2%SIN(D组),术后连续观察,并对各组大鼠角膜植片存活情况和排斥反应指数进行评分比较,评价药效。结果术后各组角膜移植排斥指数及发生角膜移植排斥时间,A组与B组,A组与C组,A组与D组,B组与C组,C组与D组比较差异均有显著性(P均<0.05);B组与D组比较差异无显著性(P>0.05)。结论SIN滴眼液可以有效的防治角膜移植免疫排斥反应,1%SIN滴眼液更有效。     

雷帕霉素抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的：研究雷帕霉素对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用。方法：建立大鼠高危穿透性角膜移植动物模型，以角膜新生血管化sD大鼠为受体。Wistar大鼠为供体，分别腹腔注射0．5％羧甲基纤维素（对照组）、雷帕霉素、环孢霉素A、雷帕霉素＋环孢霉素A，共12d。用裂隙灯显微镜对角膜植片进行临床观察，记录角膜植片存活时间，并进行组织学检查。结果：用药组角膜植片的存活时间显著增加（P〈0．01）；组织学发现联合用药组的角膜炎性细胞浸润、新生血管形成度水肿程度均明显好于其他各组。结论：雷帕霉素能显著延长角膜植片的存活时间，对大鼠高危穿透性角膜移植排斥反应具有抑削作用，与环孢霉素A联合用药具有协同作用，优于各单药物治疗组。     

树突状细胞在大鼠穿透性角膜移植排斥反应中的作用

目的 观察大鼠角膜组织中树突状细胞的分布,以了解树突状细胞在穿透性角膜移植排斥反应中的作用.方法 制作大鼠穿透性角膜移植模型,观察角膜透明度、新生血管.采用免疫组织化学方法检测OX-62 树突状细胞在角膜的分布.结果 术后角膜植片均出现不同程度的新生血管、角膜水肿、混浊、基质增厚.排斥反应发生率100%.正常角膜组织中未见OX-62 树突状细胞分布,在发生急性排斥反应的角膜上皮层中有阳性细胞表达.脾脏阳性细胞表达与文献报道一致.结论 OX-62 树突状细胞出现在移植后发生排斥的角膜组织中,角膜组织中的树突状细胞可能参与角膜移植后的免疫反应.     

靶向bcl-2小分子化合物抑制角膜新生血管研究

目的探讨靶向bcl-2小分子化合物（Z24）对大鼠角膜新生血管的抑制作用。方法采用完全随机化方法将30只大鼠分为2组,每组15只鼠（15只眼）,应用角膜基质缝线法诱导角膜新生血管,采用灌胃给药。治疗组：Z24混悬液（80mg/kg）;对照组：等量不含Z24的空白液;自术后第1天起,1次/d,连续用药7d。每组预先标定8只大鼠进行新生血管的定量观察,其余大鼠进行组织学观察。结果缝线后第7天,治疗组新生血管的面积明显小于对照组（P〈0.05）。结论全身应用Z24能够延缓角膜新生血管的生成。     

COX-2和VEGF蛋白在HCC组织中表达及其与HCC血管形成的关系 

目的：通过检测COX-2蛋白与VEGF蛋白在肝细胞癌(HCC)中的表达情况，探讨COX-2对HC血管形成的影响。方法：应用免疫组织化学（SP）法对30例肝癌组织、10例正常肝组织中的COX-2、VEGF蛋白进行定量检测。同时应用CD34标记肿瘤新生血管，根据CD34阳性的血管内皮细胞计数来测定微血管密度（MVD）值。结果：HCC组织中COX-2和VEGF表达阳性率明显高于对照组（P＜0.001），COX-2表达与VEGF表达显著相关（r=0.632,P＜0.01），且COX-2和VEGF均阳性的HCC组织MVD值明显高于两者均为阴性的组织（P＜0.01）。结论：VEGF的表达随着COX-2表达增高而增高，提示COX-2可能通过诱导VEGF表达而促进HCC血管形成。     

Celecoxib plays a multiple role to peripheral blood lymphocytes and allografts in acute rejection in rats after cardiac transplantation

Background Celecoxib, a selective cyclooxygenase-2 （COX-2） inhibitor, is a non-steroidal anti-inflammatory drug used as an adjuvant to sensitize cancer cells to apoptosis. However, in rats suffering from acute rejection, celecoxib reduced apoptosis of myocardial cells. We hypothesize that celecoxib reduces myocardial apoptosis either by inducing apoptosis in peripheral blood lymphocytes （PBLs） or by altering the percentage of CD4~ and CD8~ lymphocytes. Methods After cardiac transplantation, rats were administered intragastrically with celecoxib （50 mg/kg per day） for 3, 5 or 7 days, at which time the graft was excised and evaluated for organ rejection. In addition, PBLs were isolated from the blood to determine PBLs apoptosis, and the percentage of CD4＋ and CD8＋ lymphocytes. Results Celecoxib induced PBLs apoptosis in 3 days, but protected the cells from apoptosis at 5 and 7 days. Also, the percentage of CD4＋ lymphocytes decreased only at 3 days, but a reduction in the percentage of CD8＋ lymphocytes was not seen until 7 days after the transplant surgery. Celecoxib only decreased acute rejection at 5 days, with no discernible difference in rejection after 3 and 7 days. Conclusions The results suggested that celecoxib displayed a multiple physiological function in a time-dependent manner. Chin Med J 2009; 122（2）： 188-192     

重组质粒Psilencer1.0-U6-siRNA-stat3对移植静脉新生内膜的增生抑制作用

目的：观察重组质粒Psilencer1.0-U6-siRNA-stat3对移植静脉内膜增生的影响,为预防冠状动脉旁路移植术后移植血管再狭窄提供新的方法。方法：40只雄性Wistar大鼠随机分为空质粒组和重组质粒组,每组20只。脂质体Lipofectamine　2000与该空质粒或者重组质粒混合15 min再与生物蛋白胶混合后,转染大鼠移植静脉（右颈外静脉中段）,在3、7、14和28 d时,经左心室灌注4%甲醛并提取移植静脉,采用免疫组织化学方法（增殖细胞核抗原 PCNA）检测移植静脉内膜血管平滑肌细胞(VSMCs)的增生及表达,以增殖指数表示。采用HE法检测移植静脉新生内膜增生病理形态学变化,在40倍镜下测量其内膜厚度。结果：免疫组织化学检测,术后7和14 d空质粒组移植血管管壁内膜层可见许多PCNA阳性细胞,重组质粒组PCNA阳性细胞数明显少于空质粒组。7 d时重组质粒组增殖指数（23.3±2.8）低于空质粒组（31.3±4.7）(P<0.05);14 d时重组质粒组增殖指数（15.6±0.4）低于空质粒组（27.2±5.7） (P<0.05)。7 d时重组质粒转染组内膜厚度［(0.50±0.02)μm］明显低于空质粒组［(0.90±0.02)μm］（P<0.05）。结论：重组质粒Psilencer1.0-U6-siRNA-stat3对冠状动脉旁路移植术后移植静脉内膜增生有明显的抑制作用。     

术后不同时间给予外源性VEGF对大鼠放疗皮瓣成活的影响

目的：探讨不同时间局部注射外源性血管内皮生长因子（VEGF）对大鼠背部放疗皮瓣成活的影响,阐明VEGF的促血管生成作用及最佳给药时间。方法：50只Wistar大鼠,随机分为3、5、7、9d和对照组,全部大鼠背部做3 cm×4 cm带蒂皮瓣,术后第2、4和6天进行　60Co照射,总剂量12 Gy,各实验组分别于术后第3、5、7和9天,每只局部注射VEGF 120 ng,对照组仅形成皮瓣,等剂量照射,术后第3天给等量生理盐水。通过病理观察、荧光染色法和琥珀酸脱氢酶（SDH）检测等,评估皮瓣的血管密度、血管直径、皮瓣微循环状况及皮瓣细胞活力。结果：术后第5～7天给予足量VEGF组,皮瓣新生毛细血管数量及血管密度明显增加（P<0.05）,微循环良好,皮瓣细胞活力最强。第9天组皮瓣厚度及皮下纤维结缔组织增生明显。荧光素钠染色及SDH值检测显示第7天组皮瓣活性较其他组增强。结论：术后第5～7天给予足量的VEGF可明显促进皮瓣成活,故放疗中VEGF给药时间应适当延迟。     

双 mTORC1/2 抑制剂 AZD2014 可抑制大鼠肝移植后的急性排斥反应

目的 在同种异基因大鼠肝移植模型中验证AZD2014是否具有抑制肝移植术后急性排斥反应的作用。方法 采用Kamada 提出的“二袖套”法建立Lewis→BN 同种异基因大鼠肝移植急性排斥反应模型,随机分成对照组和AZD2014组,各4只。AZD2014组腹腔内注射AZD2014药物,5 mg/kg,1次/d;对照组腹腔内注射药物溶剂2.5 mL/kg,1次/d。不同时间点取外周血检测肝功能（丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶和总胆红素）。记录生存时间,进行生存分析。移植肝脏行免疫组化检测CD3和Foxp3的表达水平,评估T淋巴细胞和Treg淋巴细胞浸润的程度;移植肝脏行HE染色,采用Banff方案评估肝移植术后排斥反应的严重程度。结果 对照组在术后14 d内有3/4 的大鼠死亡,而AZD2014组在术后14 d内无大鼠死亡,AZD2014组与对照组相比生存时间明显延长（χ2=4.213,P=0.040）。对照组血清中ALT、AST和TBIL进行性升高,上述指标均高于同时间AZD2014组（P<0.05）。病理检查显示对照组移植肝内排斥反应明显重于AZD2014组（排斥指数P<0.01）,对照组中T淋巴细胞（CD3阳性）浸润相较于AZD2014组更为严重（P<0.01）,而Treg细胞（Foxp3阳性）明显少于AZD2014组（P<0.01）。结论 双mTORC1/2抑制剂AZD2014可以有效地抑制同种异基因大鼠肝移植术后的急性排斥反应。     

兔眼碱烧伤后VEGF的表达与角膜新生血管的关系探讨

目的:研究兔眼碱烧伤后角膜血管内皮生长因子(VEGF)的表达与角膜新生血管(CNV)的关系。方法:56只兔随机分成实验组A、实验组B、实验组C及对照组。实验组用N aOH碱烧伤法诱导CNV模型,按碱烧伤后24h、3d、1周、2周、3周、4周,2月、6月处死兔取出角膜,进行CNV的形态学检查及免疫组化法评价VEGF的表达。结果:实验组兔碱烧伤后1d开始出现CNV,2周达高峰;碱烧伤后1d出现VEGF表达,持续升高至碱烧伤后1周,随后表达水平开始下降。对照组中未出现CNV及VEGF不表达。结论:碱烧伤后兔眼VEGF的表达与CNV的形成有密切相关性,并发挥了作用。     

奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成的抑制作用

目的　探讨生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成的抑制作用。方法　采用人肝癌LCI D2 0裸鼠角膜微囊移植模型 ,利用体视显微镜和显微数码摄像系统 ,动态观测奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成能力的影响。应用人肝癌LCI D2 0皮下移植瘤模型 ,采用CD34免疫组织化学SP法检测肿瘤标本微血管密度 (MVD) ,观察奥曲肽对人肝癌诱导的肿瘤血管生成和皮下移植瘤生长的影响。结果　LCI D2 0肝癌组织移植裸鼠角膜微囊能够诱导角膜新生血管形成 ;与对照组相比 ,奥曲肽组动物角膜新生血管芽生延迟 ,新生毛细血管网稀疏、生长缓慢 ;术后第 7、9、12、15、18、2 1天 ,奥曲肽组人肝癌诱导的角膜新生血管积分比对照组减少 (P <0 0 5 )。奥曲肽对LCI D2 0皮下肿瘤生长具有抑制作用 ,免疫组化研究表明 ,治疗组肿瘤内MVD(2 1 7± 4 2 7)比对照组MVD(31 8± 3 87)减少 (P <0 0 1)。结论　生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌诱导肿瘤血管生成具有抑制作用 ,可能为肝癌的治疗提供一个新的途径。     

常用选择性环氧合酶-2抑制剂的临床研究进展

选择性环氧合酶-2抑制剂具有较理想的抗炎镇痛作用,而且其不良反应较非选择性NSAIDs明显减少,被广泛应用于治疗关节炎的疼痛和其他疼痛的治疗。本文对选择性环氧合酶-2抑制剂如美洛昔康、尼美舒利、塞来昔布和帕瑞昔布等临床应用及不良反应进行评价。     

腺苷通过NHE-1/CaN途径拮抗大鼠低氧性右心室心肌肥厚

目的观察腺苷及其激动剂拮抗右心室肥厚的作用,并探讨其作用机制。方法 56只Sprague-Dawley大鼠随机分成常氧对照组、低氧对照组、低氧处理组(低氧+腺苷组、低氧+腺苷A1受体激动剂(CPA)、低氧+腺苷A2受体激动剂(NECA)、低氧+CPA+A1受体阻滞剂(DPCPX)、低氧+NECA+A2b受体抑制剂MRS1754组)。大鼠置于低氧仓(氧浓度为9.5%~10.5%)连续低氧21 d。各处理组于低氧第7天使用植入式胶囊渗透压泵给药,持续时间为14 d,实验终点时,测定大鼠右心室肥厚程度,采用PCR法检测右心室心肌组织中NHE-1 mRNA、CnAβmRNA的相对含量。结果 1、慢性低氧对照组大鼠RV/(LV+S)为0.369±0.033、RV/BW比值为0.75±0.095,均明显高于常氧组(0.271±0.010,0.59±0.039)(均P<0.001)及低氧腺苷处理组(0.281±0.022,0.650±0.077)(P<0.001,P=0.025)低氧+CPA组(0.313±0.021,0.66±0.067)(均P<0.001)、低氧+NECA组(0.333±0.019,0.68±0.074)(均P<0.001);2、右心室心肌NHE-1 mRNA、CnAβmRNA表达在低氧组均高于常氧组(均P<0.001)及腺苷处理组低氧+CPA、低氧+NECA组(均P<0.001)。结论腺苷及其受体激动剂可通过NHE-1/CaN信号通路拮抗低氧性右心室心肌肥厚。