中､晚期妊娠胎盘单核-巨噬细胞经内皮穿越后免疫调节活性的比较

目的 :观察中、晚期妊娠胎盘单核-巨噬细胞经内皮穿越分化后免疫调节活性的差异。方法:分离新生儿脐静脉内皮细胞,建立单层内皮细胞。分离中、晚期妊娠胎盘CD14+单核-巨噬细胞,与单层内皮细胞共培养诱导其分化。以ELISA法检测经内皮单层诱导分化前后单核-巨噬细胞培养上清中的IL-12、IL-10水平;以流式细胞术检测经内皮穿越而分化的细胞诱导同种异型脐血淋巴细胞CD69分子和核因子Foxp3的表达。结果:1晚期妊娠胎盘单核-巨噬细胞IL-12分泌水平显著高于、IL-10分泌水平显著低于中期妊娠胎盘单核-巨噬细胞,培养上清中IL-10/IL-12比值在晚期和中期妊娠胎盘单核-巨噬细胞中分别为2.59±0.71和71.4±8.49;经内皮单层穿越诱导分化后,中、晚期妊娠胎盘单核-巨噬细胞IL-12分泌水平均显著增高、IL-10分泌水平则显著降低,但晚期妊娠单核-巨噬细胞IL-12分泌水平提高倍数不及中期妊娠单核-巨噬细胞[(2.00±0.35)倍vs(8.91±1.49倍)],而IL-10分泌水平下降比中期妊娠显著[(92.1±8.2)%vs(57.8±4.98)%],导致IL-10/IL-12比值下降仅到0.11±0.04,而中期妊娠单核-巨噬细胞依然保持IL-10/IL-12比值>1(3.16±0.96);2两类细胞经内皮(逆)穿越后都能激活同种异型脐血T淋巴细胞表达CD69,其中晚期妊娠胎盘来源细胞的激活作用显著高于中期妊娠胎盘来源的细胞[(73.59±3.52)%vs(45.32±7.47)%];3在与同种异型脐血淋巴细胞共育的过程中,与晚期妊娠胎盘来源的细胞相比,中期妊娠胎盘来源的细胞则能诱导T细胞分化形成更多的Foxp3+T细胞。结论 :中、晚期妊娠胎盘单核-巨噬细胞经内皮单层穿越系统的诱导培养,可分化成具有不同免疫学特性的细胞。晚期妊娠胎盘来源的细胞经诱导分化后能刺激T细胞充分活化,表达高水平CD69,而中期妊娠胎盘来源的细胞经分化后具有显著地诱导Treg的免疫调节活性。     

吲哚胺2，3-双加氧酶及IL-12/IL-10细胞因子平衡与妊娠免疫耐受

目的:观察妊娠不同时期胎盘来源的单核-巨噬细胞吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的表达及细胞因子白细胞介素(IL)-10?IL-12的分泌情况,探讨其在妊娠免疫耐受中的可能作用?方法:机械分离中期妊娠(21周 ± 3天,19例)及足月妊娠(39周 ± 5天,25例)胎盘中的单核-巨噬细胞,ELISA法检测其分泌IL-10?IL-12的水平;RT-PCR及Western blot法分别检测IDO mRNA及蛋白水平的表达;以CCK-8法检测其激发同种异体T细胞增殖能力的不同?结果:足月妊娠较中期妊娠胎盘来源的单核-巨噬细胞产生更多的IL-12,但IL-10及IDO的表达较之明显减低;并且,足月妊娠较中期妊娠胎盘来源的单核-巨噬细胞刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力更强?结论:中期及足月妊娠胎盘来源的单核-巨噬细胞参与维持妊娠免疫耐受及分娩发动可能与其调节IL-12/IL-10细胞因子平衡及影响IDO的表达有关,但IL-12/IL-10细胞因子平衡与单核-巨噬细胞IDO表达的关系还有待进一步研究?     

CpG-ODN对鼠巨噬细胞TLR-9及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响

目的探讨非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸序列(CpG-ODN)对鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7Toll样受体9(TLR-9)的表达及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法体外培养小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)及Western blot检测Cp-ODN,鸟嘌呤胞嘧啶二核苷酸序列(Non-CpG-ODN),CpG-ODN 氯喹刺激24h后巨噬细胞TLR-9的表达,放免法及ELISA法检测刺激前后巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-12(IL-12)的表达水平。结果刺激24h后,CpG-ODN与CpG-ODN 氯喹组巨噬细胞TLR-9 mRNA及蛋白的表达明显增加(P<0.01,P<0.05);细胞上清液中TNF-α水平CpG-ODN组明显高于其他组,差异有显著性(P<0.05);各组IL-6、IL-12水平无显著性差异(P>0.05)。结论CpG-ODN刺激可引起鼠巨噬细胞TLR-9表达增高,调节Th1/Th2类细胞因子的分泌。     

口腔癌组织中缺氧微环境对单核/巨噬细胞分泌VEGF影响的实验研究

目的通过缺氧微环境对单核/巨噬细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)影响的实验研究,探讨口腔癌组织局部微环境对单核/巨噬细胞功能的影响。方法从健康人的外周血中分离单个核细胞并通过培养将其转化为单核/巨噬细胞;分别在缺氧(O2<1%)和常氧条件(20%O2)下加入口腔鳞癌细胞系Tca8113培养上清液进行单核/巨噬细胞培养,在3、5、7 h采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养上清液中VEGF的表达。结果在缺氧微环境下,单核/巨噬细胞分泌VEGF的能力较常氧环境下增加,并随时间的延长而增加(P<0.05)。结论在缺氧的微环境下,单核/巨噬细胞可能更多的通过生长因子的分泌参与肿瘤的生长,但单核/巨噬细胞在肿瘤组织中的作用其具体机制及在肿瘤免疫治疗中的意义还需进一步的研究。     

足月胎盘单核-巨噬细胞体外诱导分化为树突状细胞

目的:研究人类足月胎盘中的单核-巨噬细胞是否能分化为树突状细胞(DCs).方法:机械分离足月胎盘中的单核-巨噬细胞,加入内皮细胞单层中,经正逆两次穿越内皮,48 h后收集返回到内皮单层上方得到的细胞,以扫描电子显微镜和普通光学显微镜观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞表型及3H-TdR检测DCs激发异体T细胞增殖能力.结果:足月胎盘中的单核-巨噬细胞经过(逆)穿越内皮系统后,具有典型的DCs的形态学特征,相对于胎盘单核-巨噬细胞而言高表达CD80、CD86以及HLA-DR,并具有激发异体T细胞增殖能力.结论:足月胎盘中的单核巨噬细胞在内皮(逆)穿越系统中可以分化为DCs.     

妊娠不同时期胎盘单核-巨噬细胞免疫学特性的比较

目的:通过比较妊娠不同时期胎盘树突状细胞(dendritic cells,DCs)的前体细胞——单核-巨噬细胞的免疫学特性的差异,探索胎盘免疫细胞及微环境在妊娠耐受和分娩发动中的可能作用?方法:机械法分离中?晚期胎盘中的蜕膜组织细胞,密度梯度离心法提取外周血单个核细胞(PBMC),经CD14+免疫磁珠分选,获得胎盘组织的单核-巨噬细胞?流式细胞仪分析其细胞表型,ELISA检测其细胞培养上清中的细胞因子?再将分离获得的胎盘组织单核-巨噬细胞与同种异体淋巴细胞混合培养,以CCK-8法检测单核-巨噬细胞激发同种异体淋巴细胞增殖的能力,ELISA检测混合培养上清中的细胞因子?结果:自胎盘蜕膜组织中分离获得的单核-巨噬细胞纯度达到93%左右?足月胎盘来源的单核-巨噬细胞低表达与细胞免疫激活有关的细胞表面标志物CD80?CD86? HLA-DR,不表达CD83;细胞培养上清中低表达IL-10?TGF-β;具有较弱的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,与同种异体淋巴细胞混合培养,上清中低表达IL-10,高表达TGF-β?相比之下,中期妊娠胎盘单核-巨噬细胞CD80?CD86的表达水平较高,以HLA-DR更显著(P < 0.05),CD83也有微弱的表达;细胞培养上清中高表达IL-10?TGF-β(P < 0.05);其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力也很弱,混合培养上清中高表达IL-10?TGF-β?结论:作为DCs的前体细胞,妊娠不同时期的单核-巨噬细胞在不同的子宫胎盘环境中已处于不同的状态?中期妊娠胎盘来源的单核-巨噬细胞可能通过IL-10发挥免疫抑制功能?     

瘦素对单核/巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1的表达效应

目的　研究瘦素对单核 /巨噬细胞转分化过程中酰基辅酶A :胆固醇酰基转移酶 - 1(ACAT - 1)表达效应的影响。方法　在RPMI16 4 0培养基中培养人单核细胞 (THP - 1) ,加入佛波酯 (PMA)培养 4 8h ,细胞贴壁呈巨噬细胞样分化。运用免疫细胞化学、逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)、蛋白质免疫印迹等方法 ,观察单核巨噬细胞转分化前后瘦素对ACAT - 1mRNA和蛋白表达水平的影响。结果　单核巨噬细胞转分化前后ACAT - 1表达增加 ,瘦素可明显增加ACAT - 1的表达。结论　动脉粥样硬化 (AS)事件的发生可能与ACAT - 1表达增强有关 ,瘦素可能通过ACAT - 1表达增强导致AS提前发生。     

Rho激酶抑制剂对类风湿关节炎患者滑膜单核巨噬细胞分泌炎症因子的影响

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜单核巨噬细胞Rho激酶(ROK)活化情况,并探讨该激酶抑制剂对滑膜单核巨噬细胞分泌炎症细胞因子的影响.方法 单核巨噬细胞分离采用Ficoll密度梯度离心法和黏附法;ROK活性用磷酸化MYPTl蛋白表达来表示,磷酸化MYPTl蛋白检测采用免疫印迹法,单核巨噬细胞活性检测采用MTT法,细胞因子水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的RA患者关节滑液单核巨噬细胞ROK活性显著高于自身配对的和正常对照组外周血单核细胞;新鲜分离的RA患者滑液单核巨噬细胞磷酸化MYPTl表达量与RA患者DAS28评分呈正相关关系(r=0.69,P<0.05),ROK抑制剂Y27632在抑制RA滑膜单核巨噬细胞ROK活性的同时,对肿瘤坏死因子(TNr)α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6等炎症细胞因子分泌也有显著抑制作用,但对抗炎细胞因子IL-10分泌没有影响.结论 RA滑液巨噬细胞中ROK处于异常活化状态,并与RA疾病活动有关.ROK特异性抑制剂对RA滑液巨噬细胞分泌多种炎症细胞因子均有抑制作用,提示ROK可能是治疗RA滑膜炎症的潜在靶点.     

DFMG调节TLR4信号通路对氧化损伤的内皮细胞诱导巨噬细胞增殖的影响

目的:观察7-二氟甲氧基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素(DFMG)对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)诱导的THP-1(人单核细胞系)源性巨噬细胞(MΦ)增殖的影响及探索其可能的发生机制.方法:制备溶血性磷脂酰胆碱(LPC)氧化损伤HUVE-12与MΦ 共培养模型,浓度梯度DFMG、TLR4特异性拮抗剂(CLI-095)、TLR4特异性激动剂(LPS)干预LPC氧化损伤HUVE-12与MΦ 共培养;MTT法观察MΦ 的增殖;western blot检测HUVE-12 TLR4蛋白的表达水平.结果:LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞增殖,DFMG抑制LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞的增殖,上调TLR4表达进一步促进LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞的增殖,下调TLR4表达抑制LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞的增殖.结论:DFMG可能通过下调LPC氧化损伤HUVE-12的TLR4蛋白表达水平,抑制炎症反应,从而抑制巨噬细胞增殖.     

连翘苷对金黄色葡萄球菌刺激的人单核巨噬细胞炎性反应的抑制作用

目的探讨连翘苷对金黄色葡萄球菌引起的人单核巨噬细胞Toll样受体2(TLR2)和TLR4表达增高的抑制作用,研究其在感染性疾病时对机体的保护作用。方法采用金黄色葡萄球菌刺激人单核巨噬细胞,构建感染性疾病的体外模拟炎症模型,实时定量多聚酶链反应(RT-PCR)检测TLR2和TLR4表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定连翘苷对金黄色葡萄球菌刺激人单核巨噬细胞释放炎性介质白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和巨噬细胞集落刺激因子-1(MCSF-1)的影响。结果 RT-PCR检测结果显示,金黄色葡萄球菌能够使人单核巨噬细胞表达TLR2和TLR4升高,但经连翘苷预处理后,TLR2和TLR4的表达显著下降(P<0.05),当连翘苷为200 mg·L~(-1)时,TLR2与TLR4的抑制剂阳性对照OxP APC和MST510组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测结果显示,当连翘苷为50 mg·L~(-1)时,抑制金黄色葡萄球菌刺激人单核巨噬细胞分泌TNF-α、IL-8水平明显增强(P<0.05),且随着连翘苷浓度升高,抑制效果更为明显(P<0.001,P<0.01),呈浓度依赖关系;当连翘苷为100 mg·L~(-1)时,抑制金黄色葡萄球菌刺激人单核巨噬细胞分泌IL-6、MCSF-1水平明显增强(P<0.05,P<0.01),且随着连翘苷浓度升高,抑制效果更为明显(P<0.01,P<0.001),呈浓度依赖关系。结论连翘苷能够抑制人单核巨噬细胞活化产生的炎症反应,其抗炎作用机制可能是通过抑制TLR2和TLR4信号通路而发挥效用。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …