基于网络通路调控食管鳞状细胞癌发生的分子机制

目的:探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)中circSSPO/microRNA-6820-5p(miR-6820-5p)网络通路调控ESCC增殖、迁移和侵袭的可能分子机制。方法:对收集得到的ESCC组织样本进行RNA提取和全转录组测序和差异分析，使用流式细胞术检测细胞的凋亡水平，平板克隆检测细胞的增殖情况，Transwell迁移和侵袭实验检测细胞的迁移与侵袭情况。结果:生物信息学预测和RNA测序结果筛选得出circSSPO和miR-6820-5p与ESCC的进展相关，在ESCC中，miR-6820-5p低表达，circSSPO高表达。而且通过体外细胞实验进一步证明circSSPO可以通过抑制miR-6820-5p从而诱导ESCC细胞致癌特性。结论:circSSPO是一种在ESCC组织中丰富表达的致癌circRNA,并且circSSPO/miR-6820-5p网络通路与ESCC的增殖、迁移和侵袭有关。     

长链非编码 RNA LINC01419调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的机制

目的研究长链非编码 RNA(lncRNA)LINC01419调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的机制。方法收集漯河市中心医院 2015年 10月至 2018年 5月因结直肠癌手术切除的组织标本 20例,以距离结直肠癌边缘 ≥3 cm的癌旁正常组织标本 20例为对照。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测结直肠癌组织中 lncRNA LINC01419和微小 RNA-132-3p(miR-132-3p)表达。构建干扰 lncRNA LINC01419或 miR-132-3p过表达的结直肠癌 SW620细胞, MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡, Transwell检测细胞迁移、侵袭,蛋白质印迹法( Western blotting)检测细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1A(P21)、 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)蛋白、 Bcl-2相关 X(Bax)蛋白、基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)蛋白表达。生物信息学预测结合双荧光素酶报告实验分析 lncRNA LINC01419和 miR-132-3p的靶向关系。 si-LINC01419和 anti-miR-123-3p共转染,观察抑制 miR-132-3p表达对干扰 lncRNA LINC01419诱导的 SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。结果与癌旁组织［(1.00±0.09)、(1.01±0.08)］比较,结直肠癌组织中 lncRNA LINC01419表达量( 2.74± 0.26)明显增加( P<0.05)miR-132-3p表达量( 0.51±0.05)显著减少( P<0.05)。干扰 lncRNA LINC01419或 miR-132-3p过表达显著抑制 SW620细胞增殖、,迁移、侵袭、 cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达,并促进细胞凋亡、 P21、Bax蛋白表达。 lncRNA LINC01419靶向调控 miR-132-3p的表达。抑制 miR-132-3p表达逆转了干扰 lncRNA LINC01419对结直肠癌细胞 SW620增殖、迁移、侵袭的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用。结论 lncRNA LINC01419通过靶向 miR-132-3p调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭。     

环状 RNA肌球蛋白轻链激酶靶向微小 RNA-497-5p调控结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨环状 RNA肌球蛋白轻链激酶( circMYLK)对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和可能机制。方法本研究 2019年 3月至 2020年 1月进行。实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测检测正常结肠上皮细胞( NCM460)和结肠癌细胞(SW480、SW620、Caco-2)中 circMYLK和微小 RNA-497-5p(miR-497-5p)表达水平。将 circMYLK小干扰 RNA(si-circMYLK)、 miR-497-5p模拟物分别转染 SW480细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、 Transwell实验分别检测干扰 circMYLK或过表达 miR-497-5p对 SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验和 RT-qPCR确定 circMYLK对 miR-497-5p的调控作用。结果与 NCM460细胞比较,结肠癌细胞中 circMYLK表达( 1.00±0.06比 3.39±0.23、2.31±0.24、2.98±0.18)显著升高, miR-497-5p表达( 1.00±0.08比 0.36±0.04、0.63±0.05、0.54±0.05)显著降低( P<0.05)。干扰 circMYLK表达后 SW480、细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低( P<0.05)。过表达 miR-497-5p后 SW480细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低( P<0.05)。 circMYLK靶向负性调控 miR-497-5p表达。抑制 miR-497-5p表达能够逆转干扰 circMYLK对 SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响,恢复细胞活力、迁移和侵袭能力( P<0.05)。结论结肠癌细胞中 circMYLK呈高表达,干扰 circMYLK通过靶向 miR-497-5p能够抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

下调微小 RNA-425-5p靶向第 10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白调控宫颈癌细胞侵袭和迁移的分子机制

目的研究下调微小 RNA(miR)-425-5p靶向第 10号染色体同源缺失性磷酸酶 -张力蛋白( PTEN)调控宫颈癌 Caski细胞侵袭和迁移的分子机制。方法本研究起止时间为 2018年 12月至 2019年 11月。以宫颈癌 Caski细胞为探讨对象,转染 miR-425-5p抑制剂( inhibitor),PTEN siRNA和 miR-425-5p inhibitor共转染到宫颈癌 Caski细胞; MTT法测定细胞增殖, Transwell小室测定细胞侵袭和迁移;在线靶基因预测软件发现 PTEN与 miR-425-5p可能互为靶向关系,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系;蛋白质印迹法( Western blotting)测定上皮钙黏素( E-cadherin)、神经钙黏素( N-cadherin)蛋白表达。结果转染 miR-425-5p inhibitor后的宫颈癌 Caski细胞 miR-425-5p表达量降低［( 0.96±0.15)比( 0.32±0.04)］,增殖［( 0.47±0.05)比( 0.23±0.04)］、侵袭［( 95.32±7.86)比( 63.17±5.22)］及迁移［( 140.88±13.94)比( 89.64±9.57)］能力降低, E-cadherin表达上调［( 0.29±0.05)比( 0.65±     

微RNA-182-5p激动剂和抑制剂对肝癌细胞增殖和迁移的影响

目的研究微RNA(miR)-182-5p激动剂和抑制剂对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法检测非肝细胞癌(HCC)肝组织,HCC组织及邻近组织标本中miR-182-5p的表达水平以及RND3的mRNA/蛋白表达水平。建立患者来源的HCC细胞培养物,并进行miR-182-5p激动剂和抑制剂转染处理,以分别模拟miRNA的过表达和敲减。通过Transwell细胞侵袭实验监测体外HCC细胞的迁移。通过细胞活力和增殖评价体外HCC细胞的生长。结果与非HCC或邻近的HCC组织相比,HCC组织中的miR-182-5p明显上调,与RND3 mRNA表达呈负相关。使用miR-182-5p激动剂可显著降低HCC细胞中RND3 mRNA/蛋白质表达水平。通过荧光素酶试验和顺乌头酸酶2(AGO2)-RNA免疫沉淀分析,验证了miR-182-5p对RND3 mRNA具有靶向作用。MiR-182-5p激动剂可显著降低RND3表达,促进HCC细胞体外迁移和侵袭,可能是通过Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)和ROCK2的抑制来实现。结论miR-182-5p可以通过靶向RND3来提高体外HCC细胞的迁移和增殖。使用miR-182-5p抑制剂,可以抑制体外肝癌细胞的迁移和增殖。     

苦参碱通过lncRNA CASC11/miR-381-3p轴调控宫颈癌细胞的恶性生物学行为的研究

目的 探讨苦参碱是否通过调控lncRNA CASC11/miR-381-3p的表达,调控宫颈癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。方法 宫颈癌细胞SiHa分别转染pcDNA3.1空载体、pcDNA3.1-lncRNA CASC11、mimics阴性对照和miR-381-3p mimics,经不同质量浓度(25、50和100 mg·L^-1)的苦参碱处理后,采用qRT-PCR试验检测细胞中lncRNA CASC11和miR-381-3p表达,CCK-8试验检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell小室试验检测细胞迁移和侵袭,双荧光素酶试验验证lncRNA CASC11和miR-381-3p的靶向关系,Western blot试验检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、Cleaved-caspase3、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 lncRNA CASC11在宫颈癌细胞中高表达,miR-381-3p在宫颈癌细胞中低表达;不同质量浓度的苦参碱均能抑制SiHa细胞增殖、迁...     

微小 RNA-425-5p靶向调控 PTEN表达促进宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移的实验研究

目的 探讨微小RNA(miR)-425-5p对宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 2018年10月至2019年10月,利用Lipofectamine TM 2000将miR-425-5p模拟物(mimics)、抑制剂(inhibitor)及其阴性对照转染至海拉细胞中,采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-425-5p的表达情况,MTT法检测细胞增殖活力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白的表达.采用生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验验证miR-425-5p和PTEN的靶向关系.将PTEN过表达质粒pcDNA3.1-PTEN和PTEN干扰序列siRNA-PTEN转染至海拉细胞后,观察PTEN对海拉细胞增殖活力、克隆形成能力、侵袭能力和迁移能力的影响.结果 与各自阴性对照比较,miR-425-5p过表达可促进海拉细胞增殖[(142.25±11.32)％比(100.00±6.67)％]、克隆形成、侵袭[(133.28±9.86)个比(77.46±5.32)个]和迁移[(187.56±15.12)个比(115.35±10.26)个]并下调PTEN蛋白表达,而miR-425-5p低表达则抑制海拉细胞增殖[(58.38±3.45)比(100.00±5.74)]、克隆形成、侵袭[(43.32±3.62)个比(75.65±6.15)个]和迁移[(62.28±4.05)个比(109.72±9.84)个]并上调PTEN蛋白表达(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,PTEN是miR-425-5p的靶基因;PTEN过表达可促进海拉细胞增殖[(66.52±4.36)％比(100.00±6.18)％]、克隆形成、侵袭[(46.23±3.13)个比(71.65±5.24)个]和迁移[(62.65±4.26)个比(108.42±8.57)个],而PTEN低表达则抑制海拉细胞增殖[(136.52±9.85)个比(100.00±7.05)个]、克隆形成、侵袭[(110.27±9.85)个比(70.52±6.18)个]和迁移[(168.78±16.96)个比(113.26±10.13)个].结论 miR-425-5p可通过靶向调控PTEN表达促进宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移.     

miR-96-5p通过下调肌动蛋白结合蛋白1促进卵巢癌干细胞顺铂耐药性

目的 探索微小核糖核酸(miRNA)miR-96-5p通过调控肌动蛋白结合蛋白1(profilin 1,PFN1)对卵巢癌干细胞(SiHa细胞)顺铂耐药的分子机制。方法 采用RT-qPCR检测miR-96-5p表达水平；将SiHa细胞置于不同浓度顺铂的培养基中，构建顺铂耐药细胞SiHa/DDP;采用Western blot检测蛋白的表达水平；双荧光素酶报告实验验证miR-96-5p与PFN1的靶向关系；MTT、Transwell和流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡；成球实验检测细胞的成球能力。结果 miR-96-5p在SiHa细胞中高表达，且在SiHa/DDP细胞中的表达最高；敲降miR-96-5p可抑制SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球能力并促进细胞凋亡；PFN1是miR-96-5p的潜在靶基因，过表达miR-96-5p通过下调PFN1促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭和干细胞成球，抑制细胞凋亡。结论 miR-96-5p通过靶向调控PFN1,促进SiHa/DDP细胞增殖、侵袭及其干细胞成球并抑制凋亡，从而增强SiHa/DDP细胞对顺铂的耐药性。     

舒芬太尼通过调控miR-410-3p/TIAM1轴影响宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

摘要：目的:探讨舒芬太尼在宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用与机制。方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,用不同剂量(2,10,50 ng·ml-1)舒芬太尼干预24 h、转染miR-410-3p mimics或T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（TIAM1）干扰RNA至Hela细胞、或50 ng·ml-1舒芬太尼干预转染miR-410-3p抑制剂的Hela细胞24 h后,细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞存活率,Transwell检测细胞迁移和侵袭,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测细胞中miR-410-3p表达,蛋白印迹法检测细胞中细胞增殖抗原Ki67、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和TIAM1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-410-3p与TIAM1的调控关系。结果:舒芬太尼可降低Hela细胞存活率、迁移数、侵袭数及Ki67、MMP-2和TIAM1蛋白表达（P<0.05）,促进miR-410-3p表达（P<0.05）。上调miR-410-3p或下调TIAM1后,Hela细胞存活率、迁移数、侵袭数及Ki67和MMP-2蛋白表达均降低（P<0.05）。miR-410-3p靶向负调控TIAM1表达。下调miR-410-3p逆转舒芬太尼对Hela细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论:舒芬太尼可能通过调控miR-410-3p/TIAM1轴降低宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-186-5p靶向CXCL13基因通过Wnt/β-catenin信号调节胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭

目的 探讨miR-186-5p对胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法 在胃癌HGC-27细胞中通过脂质体转染miR-186-5p模拟物（mimics）,采用实时荧光定量PCR检测转染效果, MTT实验分析HGC-27细胞增殖水平,流式细胞术分析细胞周期变化和细胞凋亡情况,Transwell实验分析HGC-27细胞迁移和侵袭能力,生物信息学、双荧光素酶报告基因实验以及Western blotting分析miR-186-5p和CXCL13的靶向关系,Western blotting分析Wnt/β-catenin信号通路活化情况。结果 体外转染miR-186-5p mimics可上调HGC-27细胞中miR-186-5p的表达。上调miR-186-5p表达能够抑制HGC-27细胞体外增殖、细胞周期进程、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。miR-186-5p可靶向抑制CXCL13的表达,上调miR-186-5p表达能够抑制β-catenin和c-Myc的表达。结论 miR-186-5p可靶向抑制CXCL13的表达,阻断Wnt/β-catenin信号通路,并抑制胃癌HGC-27细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。     

miR-1307-3p通过靶向ISM1促进乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的 探讨miR-1307-3p通过靶向ISM1促进乳腺癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法 （1）利用TCGA 数据库分析miR-1307-3p在乳腺癌患者中的表达水平及其与临床指标的关系。（2）利用qPCR、CCK-8实验、细胞划 痕实验和流式细胞术检测过表达或沉默miR-1307-3p后乳腺癌MCF-7细胞miR-1307-3p表达、细胞增殖、迁移和凋 亡水平变化。（3）生物信息学分析软件预测 miR-1307-3p 的靶基因,同时采用双荧光素酶实验进行验证。结果 miR-1307-3p在乳腺癌细胞及乳腺癌组织中均显著上调。miR-1307-3p过表达可促进MCF-7细胞增殖和迁移;而 miR-1307-3p inhibitor则抑制细胞迁移,并诱导凋亡。ISM1可能是miR-1307-3p的靶基因。乳腺癌组织中ISM1表 达水平明显低于正常乳腺组织,且与临床病理分期有关。 结论miR-1307-3p可促进乳腺癌细胞增殖和迁移,可能 通过调控ISM1基因而影响乳腺癌的发生发展。     

lncRNA OIP5-AS1调节miR-942-5p/CHEK1轴对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)OPA相互作用蛋白5反义转录本1(OIP5-AS1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响机制。方法 收集33例胶质瘤患者（低级别胶质瘤14例、高级别胶质瘤19例）和33例颅脑损伤患者的组织标本。实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织和细胞中OIP5-AS1、微小RNA-942-5p(miR-942-5p)和检查点激酶1(CHEK1)mRNA表达,分析胶质瘤组织中OIP5-AS1、miR-942-5p和CHEK1 mRNA表达水平的相关性。体外培养人脑胶质瘤细胞系U87、SHG-44、U251、H4和正常人星形胶质细胞NHA,Western blot检测细胞中CHEK1蛋白表达。将U87细胞分为对照（NC）组、siRNA阴性对照（si-NC）组、OIP5-AS1 siRNA(si-OIP5-AS1)组、siOIP5-AS1+inhibitor阴性对照（si-OIP5-AS1+anti-NC）组、si-OIP5-AS1+miR-942-5p抑制剂（si-OIP5-AS1+anti-miR-942-5p）组,采用Lipofectamine 30...     

miR-149抑制结直肠癌细胞迁移的分子机制研究

目的 探讨miR-149对结直肠癌（CRC）细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及其作用机制。方法 实时荧 光定量PCR（q-PCR）方法检测miR-149在CRC细胞SW620、LS174T和人结肠上皮细胞FHC中的表达水平;荧光素酶 分析法验证 STAT3 与 miR-149 之间的靶向结合关系;q-PCR 和 Western blot 检测 miR-149 过表达对 CRC 细胞中 STAT3、p-STAT3 mRNA和蛋白表达的影响。将miR-149 mimics与STAT3过表达质粒单独或者共转染至CRC细胞 中,并分为miR-NC组、miR-149 mimics组、miR-149 mimics+pEGFP/STAT3组。采用CCK-8法、Transwell法、细胞划 痕法、流式细胞术分别检测各分组CRC细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡情况。结果 与正常结肠上皮细胞FHC相比, CRC 细胞 SW620、LS174T 中 miR-149 表达水平受到抑制（P＜0.01）。荧光素酶实验证实,在 CRC 细胞中 STAT3 是 miR-149的一个直接靶基因。过量表达miR-149抑制STAT3、p-STAT3 mRNA和蛋白的表达,降低CRC细胞增殖能 力、侵袭能力以及迁移能力（P＜0.01）。同时,过量表达 miR-149 也可促进 CRC 细胞的凋亡（P＜0.01）。但过表达 STAT3可解除miR-149对CRC细胞增殖、侵袭以及迁移能力的抑制作用。结论 miR-149通过靶向STAT3抑制结直 肠癌细胞的增殖、侵袭与迁移,同时促进细胞的凋亡。     

miR-552通过PTEN/AKT信号通路促进非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为

目的 探讨miR-552通过调控PTEN/AKT信号通路促进人非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为及其相关机制。方法 通过qRT-PCR检测人肺癌组织样本和人非小细胞肺癌A549细胞系中miR-552、PTEN mRNA的表达情况;通过Western blotting检测PTEN、AKT、p-AKT蛋白的表达情况;通过CCK-8检测miR-552表达对A549细胞增殖能力的影响;通过Transwell小室检测miR-552表达对A549细胞迁移和侵袭能力的影响;通过流式细胞术检测miR-552表达对A549细胞凋亡能力的影响。结果 miR-552在肺癌组织和A549细胞中的表达显著上调。过表达miR-552可显著促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡,而抑制其表达则结果相反。与癌旁组织相比,肺癌组织中PTEN表达显著下调。过表达miR-552可下调PTEN蛋白表达,上调p-AKT蛋白表达,对AKT蛋白无影响,而抑制其表达则结果相反。结论 miR-552可能通过PTEN/AKT信号通路促进人非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为。     

LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的　探讨LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞迁移和侵袭作用的影响。方法　qPCR检测30例TNBC患者肿瘤组织、癌旁正常组织以及6种乳腺细胞（乳腺正常细胞MCF-10A,乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468、BT549、T47D）LincRNA-P21和miR-17-3p的表达。取MDA-MB-231细胞,单独过表达LincRNA-P21（实验设对照组、pcDNA3.1空白组、pcDNA-LincRNA-P21组）,抑制miR-17-3p表达（实验设对照组、miR-17-3p空白组、miR-17-3p抑制剂组）,过表达LincRNA-P21+抑制miR-17-3p表达（实验设对照组、miR-17-3p抑制剂组和pcDNA-LincRNA-P21+miR-17-3p inhibitor组）。CCK-8法检测MDA-MB-231细胞增殖,集落形成实验检测细胞的集落数量,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。Western blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果　TNBC患者组织中LincRNA-P21的表达明显低于癌旁组织（0.48±0.03 vs. 1.03±0.06,t=11.714,P＜0.01）,miR-17-3p的表达显著高于癌旁组织（2.93±0.17 vs. 1.02±0.04,t=15.593,P＜0.01）。乳腺癌细胞系中LincRNA-P21表达量明显低于MCF-10A,miR-17-3p表达量高于MCF-10A（P＜0.01）。单独过表达LincRNA-P21或抑制miR-17-3p后,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力均明显下降。过表达LincRNA-P21的同时抑制miR-17-3p,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力出现进一步下降,且上调E-cadherin的表达,抑制Vimentin的表达（P＜0.05）。结论　LincRNA-P21通过竞争性结合miR-17-3p来抑制MDA-MB-231细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭。     

微小 RNA-301b-3p靶向第 10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-301b-3p(miR-301b-3p)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 本研究起止时间为2019年3—9月.人成骨细胞(hFOB)和骨肉瘤细胞U2OS、MG63购自美国菌种保藏中心.U2OS细胞分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-301b-3p抑制物(anti-miR-301b-3p)组、anti-miR-301b-3p+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-301b-3p+第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)小干扰RNA(si-PTEN)组;实时荧光定量PCR(RT-qP-CR)检测miR-301b-3p表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-301b-3p和PTEN的靶向关系.结果 与hFOB细胞相比,U2OS、MG63中miR-301b-3p表达水平[(0.89±0.09),(0.70±0.07)比(0.20±0.02)]显著升高.与anti-miR-NC组比较,anti-miR-301b-3p组U2OS细胞活性[(0.59±0.06)比(1.33±0.13)]显著降低,而凋亡率[(22.06±2.31)％比(7.48±0.78)％]、PTEN蛋白表达[(0.69±0.07)比(0.35±0.03)]显著升高.PTEN是miR-301b-3p的直接靶基因.与anti-miR-301b-3p+si-NC组比较,anti-miR-301b-3p+si-PTEN组U2OS细胞活性[(1.16±0.12)比(0.56±0.06)]显著升高,而凋亡率[(10.28±1.16)比(22.12±2.34)]显著降低.结论 抑制miR-301b-3p表达可通过调控PTEN抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡.     

miR-891a-5p通过CPEB1调控结肠癌细胞生物过程的机制研究

目的 探讨miR-891a-5p通过细胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白1(CPEB1)调控结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的机制。方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）检测结肠癌组织、癌旁组织、人正常结肠上皮细胞和人结肠癌细胞中miR-891a-5p的表达;将LOVO细胞分为A组（不做任何处理）、B组（转染anti-miRcon）、C组（转染anti-miR-891a-5p）、D组（共转染anti-miR-891a-5p和si-con）、E组（共转染anti-miR-891a-5p和siCPEB1）、F组（转染miR-con）、G组（转染miR-891a-5p）;CCK-8法检测细胞增殖率、Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹实验检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、胱天蛋白酶-3酶原（Pro-caspase-3）、裂解的胱天蛋白酶-3(C-caspase-3)、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的蛋白表达;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭;双荧光素酶报告基因检...