聚合酶链反应分子灯塔法检测结核分枝杆菌

目的 评价聚合酶链反应（PCR）分子灯塔法检测临床标本中结核分枝杆菌（结核菌）的应用价值。方法 应用涂片镜检法、培养法及PCR分子灯塔法检测142份结核病患者痰标本,42份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 涂片镜检法检测结核病患者临床标本中结核菌阳性率为35.2%(50/142),培养法阳性率为35.9%(51/142),PCR分子灯塔法阳性率为44.4%(63/142)。用PCR分子灯塔法检测临床标本特异性为100％。结论 PCR分子灯塔法是一种全新的PCR分子交模式,PCR扩增、荧光探针杂交、检测一体化,在单一管内完成,其简便、快速、防污染,敏感性较高、特异性强,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

荧光定量聚合酶链反应在淋巴结结核鉴别诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测结核分枝杆菌(MTB)DNA在淋巴结结核鉴别诊断中的作用。方法选取近4年来74例淋巴结结核病例及24例其他对照病例,同时作细针吸取细胞学(FNAC)、抗酸染色、MTBDNA检测,采用χ2检验比较抗酸染色与FQ-PCR检测阳性率的差异。结果 74例标本中,抗酸染色阳性32例(43.2%),MTBDNA阳性52例(70.3%),抗酸染色与FQ-PCR检测MTB的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。结论在干酪型淋巴结结核诊断中PCR阳性率达82.3%,与涂片抗酸染色相比诊断率明显提高,有很大优势和应用价值。     

结核分枝杆菌荧光定量聚合酶链反应对结核性脑膜炎的早期诊断价值

目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(荧光定量PCR)检测技术对诊断结核性脑膜炎的应用价值。方法:对165例确诊为结核性脑膜炎患者和38例非结核性脑膜炎患者行腰椎穿刺术,标本送检结核分枝杆菌的荧光定量PCR、结核分枝杆菌培养、涂片找抗酸杆菌,比较各种检测方法的敏感性和特异性。结果:荧光定量PCR反应检测阳性率52.7%,明显高于脑脊液涂片找抗酸菌(1.2%)及结核分枝杆菌培养(11.5%)。荧光定量PCR与抗酸杆菌培养方法对比,P<0.01,差异有统计学意义,PCR检测明显优于细菌学培养。结论:结核分枝杆菌的荧光定量PCR对结核性脑膜炎诊断特异性高,分析周期短,在早期诊断结核性脑膜炎方面有重要的参考价值。     

聚合酶链反应—增强化学发光检测结核分枝杆菌

目的 探讨微孔板杂交技术结合增强化学发光（ECL）检测结核分枝杆菌（MTB）。方法 同时应用聚合酶链反应（PCR）－ECL、PCR－比色法与PCR电泳检测60例活动性肺结核和54例健康对照痰标本，比较结果。结果 PCR－ECL、PCR－比色法与PCR电泳总阳性率分别为76.7%、63.3%、50.0%，其中PCR－ECL阳性率显著高于PCR电泳（P＜0.05)；对涂片阳性标本，阳性率分别为85.7%、85.7%、71.4%，差异无显著性（P＞0.05)；对涂片阴性标本，阳性率分别为73.9%、56.5%、43.5%，PCR－ECL阳性率高于PCR电泳（P＜0.05)。另外PCR－ECL、PCR－比色法与PCR电泳特异性分别为92.6%、96.3%、96.3%，差异无显著性（P＞0.05)。结论 PCR－ECL灵敏度高，能提高临床标本MTB检出率，尤其是对涂片阴性痰标本，并且该方法操作简单，结果客观。     

应用聚合酶链反应检测胸水中结核分枝杆菌DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２８例胸水中结核分枝杆菌ＤＮＡ，并将涂片镜检和分离培养作为参比方法。试验结果显示：ＰＣＲ直接检测胸水中结核分枝杆菌的灵敏为３１个菌体单位，敏感性为４２．３％，特异性为９６．８％，高于涂片镜检和分离培养的检出率（３８．２％和３５．１％）。该法具有敏感性高，特异性强和简便快速等优点，特别适合含微量结构分枝菌临床标本的检测，可用于结核性胸膜炎早期和鉴别诊断。     

应用聚合酶链反应—反相膜杂交技术检测结核分枝杆菌

目的：探讨应用聚合酶链反应（PCR）－反相膜杂交技术检测结核分枝杆菌的价值。方法：收集52例活动性肺结核病人和12例非结核病人的痰标本,以双盲法进行痰涂片抗酸染色检查、结核菌培养、PCR－反相膜杂交技术,PCR－琼脂糖凝胶电泳技术检查对比。结果：涂片法、培养法、PCR－反相膜杂交法的敏感性分别为28．8％、42．3％、82．7％,PCR－反相膜杂交法的敏感性显著高于培养法和涂片法（P＜0．01）。PCR－反相膜杂交法和PCR琼脂糖凝胶电泳法的敏感性分别为82．7％和84．6％,特异性分别显91．7％和83．3％,前者特异性与后者相比差异有显著性（P＜0．01）。结论：PCR－反相膜杂交技术可应用于临床检测检测结核分枝杆菌。     

聚合酶链反应检测稳定L型结核分枝杆菌

目的探讨聚合酶链反应(PCR)在结核分枝杆菌稳定L型检测的应用价值.方法采用结核分枝杆菌染色体基因重复保守序列为引物的PCR诊断试剂检测非高渗培养的结核分枝杆菌稳定L型纯培养物的染色体DNA.结果结核分枝杆菌稳定L型的染色体DNA经PCR扩增后电泳可见2条DNA带,其中1条主带与其亲代细菌型一致,另1条为相对分子质量较小的次带.结论结核分枝杆菌稳定L型仍保留了与细菌型染色体PCR引物反应的特异性序列和出现1条相对小分子质量的带,但仍然可用结核分枝杆菌PCR对其进行特异性检测与鉴定.     

聚合酶链反应-增强化学发光检测结核分枝杆菌

目的探讨微孔板杂交技术结合增强化学发光(ECL)检测结核分枝杆菌(MTB).方法同时应用聚合酶链反应(PCR)-ECL、PCR-比色法与PCR电泳检测60例活动性肺结核和54例健康对照痰标本,比较结果.结果 PCR-ECL、PCR-比色法与PCR电泳总阳性率分别为76.7%、63.3%、50.0%,其中PCR-ECL阳性率显著高于PCR电泳(P<0.05);对涂片阳性标本,阳性率分别为85.7%、85.7%、71.4%,差异无显著性(P>0.05);对涂片阴性标本,阳性率分别为73.9%、56.5%、43.5%,PCR-ECL阳性率高于PCR电泳(P<0.05).另外PCR-ECL、PCR-比色法与PCR电泳特异性分别为92.6%、96.3%、96.3%,差异无显著性(P>0.05).结论 PCR-ECL灵敏度高,能提高临床标本MTB检出率,尤其是对涂片阴性痰标本,并且该方法操作简单,结果客观.     

荧光定量PCR技术检测结核分支杆菌DNA的应用价值

目的评价荧光定量PCR技术检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法,对179例活动性肺结核患者晨痰、123例活动性肺结核患者外周血、34例结核性胸膜炎患者胸水、20例非结核性呼吸系统疾病患者的晨痰标本进行检测。结果179例活动性肺结核患者晨痰、123例活动性肺结核患者外周血、34例结核性胸膜炎患者胸水,涂片抗酸染色阳性率分别为20．67％（37／179）、0．00％、0．00％;细菌培养阳性率分别为41．34％（74／179）、0．00％、2．94％（1／34）;荧光定量PCR技术阳性率分别为64．25％（115／179）、38．21％（47／123）、44．12％（15／34）。3种标本荧光定量PCR技术阳性率高于抗酸染色和结核杆菌培养,经统计学处理发现,差异有统计学意义。用荧光定量PCR技术检测临床标本特异性为95．00％。结论荧光定量PCR技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性高等优点,是结核病诊断的有效方法之一。     

肠杆菌基因间重复序列PCR指纹图谱技术分析结核分枝杆菌流行情况

目的利用肠杆菌基因间重复序列为引物的聚合酶链反应（enterbacterial repetitive intergenic consensus-PCR，ERIC-PCR）分型技术分析我市结核分枝杆菌流行情况。方法收集2003年9月至2006年5月门诊痰菌阳性标本，培养并提取DNA做ERIC—PCR指纹图，并利用RAPDPHYLIP及Treeview软件对其进行聚类分析。结果122株临床分离株产生42种不同的指纹图，聚类分析结果显示可分为3簇，成簇率76、2％。指纹图谱与患者年龄、菌株的耐药性及耐药种类有关。结论ERIC—PCR具有不需已知核酸序列，分辨效果好，简便快捷等优点，是进行分子流行病学调查的有效工具。我市结核病呈高水平传播，主要为耐药菌株并以中青年患者传播为主。     

二步温控法聚合酶链反应检测脑脊液结核杆菌DNA

应用二步温控法聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测脑脊液结核杆菌微量ＤＮＡ，并扩增出标准人型结核杆菌１５８ｂｐ的基因片段。实验结果表明：ＰＣＲ用于结核性脑膜炎患者脑脊液结核杆菌ＤＮＡ的检测，与传统检验方法相比较，具有敏感、快速、特异、高效等优点，是基因水平上检测结核杆菌的一项新技术，用于结核性脑膜炎的早期诊断，具有很强的实用价值，值得临床推广应用。     

PCR—ELISA测定结核分枝杆菌DNA临床应用评价

目的　评价聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)测定结核分枝杆菌DNA临床应用价值。方法　用PCR ELISA测定 436例肺结核、172例非结核病人痰标本中的结核分枝杆菌DNA ,并结合临床诊断和痰菌检查对实验结果进行分析。结果　 436例活动性肺结核病人本法最终阳性 341例 ,阳性率 78.2 1% ,其中痰菌阳性病人本法阳性率为 97.0 7% ,痰菌阴性病人阳性率为 5 5 .33 % (10 9/ 197) ;而 172例对照患者只有 3例假阳性 ,假阳性率 1.74%。结论　本法测定痰液结核分枝杆菌DNA对肺结核的诊断具有很高的敏感性和特异性 ,尤其对痰菌阴性的活动性肺结核病人具有重要辅助诊断价值     

应用聚合酶链反应-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变

目的应用聚合酶链反应(PCR)-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变，建立一种新的分子药敏试验方法。方法以传统药敏试验、PCR-单链构象多态性和PCR-直接测序方法为对照，对利福平、链霉素(SM)和乙胺丁醇耐药的结核菌基因rpoB、rpsL、ITS和embB的寡核苷酸探针，通过反向斑点杂交检测78株结核菌临床分离株PCR产物。结果18株结核菌药物敏感株的4种耐药基因均为野生型。60株结核菌耐药分离株中，59株为耐RFP株，rpoB基因突变率为93．2％，最常见的突变位点为531位和526位密码子，33株为耐SM株，rpsL基因突变率为75．8％，均为43位密码子AAD AGG突变，ITS基因突变率为9．1％，均为513位A→C突变，rpsL和ITS基因总突变率为84．8％；43株为耐EMB株，embB基因突变率为58．1％，均为306位密码子突变。结论应用PCR一寡核苷酸探针反向斑点杂交技术可简便、快速、准确地分析大多数结核菌耐药基因突变，检测其耐药性。     

荧光定量聚合酶链反应检测在肺结核诊断中的应用价值

目的分析荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(TbDNA)在诊断肺结核中的应用价值。方法选择2018年1月-2020年1月湖南省儿童医院收治的21例肺结核患儿作为肺结核组,另外选择同时期21例排除肺结核感染的肺部疾病患儿作为非肺结核组。全部患儿均行痰涂片抗酸染色镜检、纤维支气管镜(纤支镜)痰涂片抗酸染色镜检和BALF中TbDNA荧光定量PCR检测。比较3种检测方法对肺结核诊断的特异度、敏感度、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)。结果痰涂片抗酸染色镜检、纤支镜痰涂片抗酸染色镜检和荧光定量PCR的敏感度分别为19.05%、14.29%、76.19%,特异度分别为100.00%、100.00%、95.24%,PPV分别为100.00%、100.00%、94.12%,NPV分别为55.26%、53.85%、80.00%。荧光定量PCR检测BALF中TbDNA的敏感度明显高于痰涂片抗酸染色镜检和纤支镜痰涂片抗酸染色镜检(76.19%比19.05%、14.29%),差异有统计学意义(P<0.05);3种检测方法的特异度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过荧光定量PCR检测BALF中的TbDNA,具有快速、敏感度高、特异度高的特点,利于早期诊断肺结核,尤其是对于痰涂片检测呈阴性及无典型影像学特征的患儿,可以明显提高确诊率,其结果能够作为诊断肺结核的主要指标。     

聚合酶链反应-微孔板杂交法检测结核分支杆菌的临床应用及其评价

目的:对聚合酶链反应-微孔板杂交法检测结核分支杆菌的临床适用性和可行性进行评价。方法:收集1130份临床标本,用抗酸染色、培养、PCR 电泳、PCR 微孔板杂交法分别进行结核杆菌的检测,并结合临床诊断和疗效观察对实验结果进行分析。结果:100份临床证实未含结核杆菌的临床标本,抗酸染色和 PCR 电泳分别有1例和2例假阳性;培养和 PCR 微孔板杂交法未查出阳性。1030份高度怀疑含有结核杆菌的体液标本的检测结果,以 PCR 微孔板杂交阳性检出例数最高(481/1030),其次为 PCR 电泳(406/1030)、培养(365/1030)以及抗酸染色(256/1030);x~2检测结果显示 PCR 微孔板杂交的结核杆菌阳性检出例数与其它三种方法比较均呈显著或极显著差异。结论 PCR-微孔板杂交方法是一种特异、灵敏、准确、快速的结核杆菌检测方法,具有广泛推广应用的价值。     

分子信标荧光探针检测结核分枝杆菌的临床应用

目的:探讨分子信标荧光探针检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法:应用设置内参照的分子信标荧光探针检测178例肺结核标本,并与痰涂片和培养结果进行比较。结果:肺结核组分子信标荧光探针阳性率显著高于痰涂片和培养,检出率分别为56.2%(100/178),34.8%(62/178)、34.8%(62/178)。结论:分子信标荧光探针具有较高的灵敏度和特异度,对结核病的辅助诊断有一定的临床意义。     

实时荧光定量聚合酶链反应技术在结核性脑膜炎中的诊断价值

目的 用涂片、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结核分枝杆菌,探讨其临床应用价值.方法 对临床确诊的结核性脑膜炎(n =110)、可疑结核性脑膜炎(n=205)和非结核性脑膜炎(n=100)患者的脑脊液标本分别采用涂片、RT-PCR两种方法进行检测,对结果进行对比分析.结果 415例脑脊液标本中,脑脊液涂片检查阳性率为2.4％(10/415),PCR检测阳性率为12.5％(52/415);脑脊液涂片、PCR法检测110例临床确诊的结核性脑膜炎患者脑脊液标本阳性率分别为6.4％(7/110)、26.4％(29/110);检测205例临床可疑结核性脑膜炎患者脑脊液标本阳性率分别为1.5％(3/205)、11.2％(23/205).比较两种方法的阳性检测率,差异有统计学意义(P＜0.05),检测100例非结核患者脑脊液标本,涂片及PCR检测均为阴性.结论 RT-PCR法检测脑脊液中TB-DNA对结核性脑膜炎的诊断有决定意义,具有较高临床应用价值.     

实时荧光聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA诊断肺结核价值

目的探讨实时荧光聚合酶链反应(FQ-PCR)检测支气管肺泡灌洗液结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(TBDNA)诊断肺结核的临床价值。方法选取我院收治的115例肺结核患者作为研究对象,所有患者均进行支气管肺泡灌洗液TB-DNA检测、血清结核分枝杆菌特异性抗原(TB-SA)抗体检测、痰涂片抗酸染色镜检等。结果支气管肺泡灌洗液TB-DNA检测、血清TB-SA抗体检测、痰涂片抗酸染色镜检诊断肺结核的敏感度分别为65.2%(75/115)、50.4%(58/115)、20.9%(24/115)。支气管肺泡灌洗液检测TB-DNA诊断肺结核的敏感度显著高于血清TBSA抗体、痰涂片抗酸染色镜检(均P0.05)。结论采用FQ-PCR检测支气管肺泡灌洗液TB-DNA诊断肺结核具有较高的敏感度。