树状DNA杂交技术在戊型肝炎病毒检测中的应用

目的　研究树状DNA杂交 (DDH)技术在戊型肝炎病毒 (HEV)检测中的应用。方法　以逆转录巢式PCR法 (RT nPCR)检测筛选HEV阳性标本 ,逆转录产物进行DDH。研究DDH技术检测HEV病毒的敏感性和通用性。结果　 2 5份HEV阳性标本的逆转录产物DDH检测均显阳性 ,HEV 5个不同基因型和亚型逆转录产物DDH检测也呈阳性。结论　RT DDH检测HEV病毒有较好的敏感性和通用性     

TthDNA聚合酶在丙型肝炎病毒RNA检测中的应用

用ＴｔｈＤＮＡ聚合酶行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５’端非编码序列，对２６２例肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ测定，结果ＨＣＶＲＮＡ阳性者５３例，阳性率２０．２％。凡阳性者用酶联免疫吸附法测其抗ＨＣＶＩｇＧ，其中３０例测到抗ＨＣＶ，阳性重叠率５６％（３０／５３）；ＨＣＶＲＮＡ阳性中的１５例同时用成髓细胞瘤病毒酶行传统逆转录。套式聚合酶链反应检测对照，１４例阳性，符合率达９３．３％（１４／１５）。ＴｔｈＤＮＡ聚合酶用于ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ５’端非编码序列片段具有敏感性高、特异性强、稳定性好的优点。     

PCR-BHEL技术对血清中HCV RNA的检测

目的比较聚合酶链反应偶联印迹杂交和酶联放大（PCR-BHEL）技术与逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测血清中丙型肝炎病毒核糖核酸（HCVRNA）的结果。方法采用PCR-BHEL技术和RT-PCR对65例血清标本的HCVRNA进行检测,并将这两种检测方法的检测结果进行比较,以确定PCR-BHEL技术在检测HCVRNA中的高敏感性。结果38例抗-HCV阳性血清标本经PCR-BHEL技术和RT-PCR检测HCVRNA的检出率分别为84．21％（32／38）和55．26％（21／38）;27例抗-HCV阴性血清标本经PCR-BHEL技术检测HCVRNA的检出率为11．11％（3／27）;而经RT-PCR检测HCVRNA结果均为阴性。两种方法检测HCVRNA结果的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PCR-BHEL技术较RT-PCR的灵敏度高,能够有效地提高HCVRNA的检出率。     

环介导逆转录等温扩增技术在输血前HCV检测中的应用

目的尝试使用环介导逆转录等温扩增技术用于输血前检测HCV RNA。方法同时采用抗-HCVELISA检测和HCV RT-LAMP检测,比较2者检测结果的差异。结果 2 716例输血前标本,ELISA检测发现19例(0.70%)阳性结果,HCV RT-LAMP检测发现32例(1.18%)阳性结果(P<0.05),2种方法在检测效率上具有显著性差异。RT-LAMP检测在灵敏度上略高于ELISA方法。结论基于HNB颜色反应的环介导逆转录等温扩增技术检测HCV的方法具有快速、灵敏度高的特点。     

化学发光法检测HCV核心抗原在丙型肝炎初期筛查中的应用研究

目的探讨采用化学发光法(CLIA)检测丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)、抗体(HCV-Ab)及HCV-RNA在丙型肝炎初期筛查中的价值。方法应用CLIA分别检测HCV-cAg和HCV-Ab,以HCVRNA定量检测结果作为参照,分别对220例标本进行检测,并对结果进行统计分析。结果 75例疑似人群的筛查标本中HCV-Ab阳性15例(20%)、HCV-cAg阳性6例(8.0%)、HCV-RNA阳性7例(9.3%)。70例确诊组标本中HCV-Ab阳性66例(94.3%)、HCV-cAg阳性62例(88.6%)、HCV-RNA阳性60例(85.7%)。75例健康人群的筛查标本中HCV-Ab阳性5例(6.7%)、HCV-cAg阳性2例(2.7%)、HCV-RNA阳性0例。HCV-Ab和HCV-cAg联合检测与HCV-RNA检测阳性率比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论在使用CLIA进行丙型肝炎早期筛查时,建议进行HCV-cAg与HCV-Ab联合检测。若需要确诊建议结合临床表现和作进一步的HCV-RNA定量检测。     

非甲～戊型肝炎患者血清HCV RNA测定及基因型分析

目的 探讨临床诊断为“非甲-戊型肝炎”患者中丙型肝炎病毒感染状况及基因型分析。方法 应用逆转录巢式PCR(nPCR)法检测HCV RNA，并对HCV RNA核心区部分序列克隆测序分析。结果 60例临床诊断为“非甲-戊型肝炎”患者中，应用nPCR法检测有3例阳性，检出率为5％。3个HCV北京分离株与HCV Ⅱ型核苷酸同源性为94％-96％。基因进化树分析显示3个北京分离株为HCV Ⅱ型。结论 临床诊断为“非甲-戊型肝炎”患者中，存在少数丙型肝炎病毒感染，其基因型以HCV Ⅱ型为主。     

二种分子杂交技术定量检测临床标本中HBV DNA的比较

目的　第 2代核酸杂交捕获系统 (HCⅡ )与分枝链DNA信号放大系统 (bDNA)定量检测HBVDNA的临床应用比较。方法　 4 0例乙型肝炎病毒表面抗原阳性的慢性乙型肝炎患者临床血清标本共 79份 ,采用 2种杂交方法定量检测HBVDNA。结果　HCⅡ与bDNA定量检测HBVDNA的阴阳性符合率为 85 .9% ,相关系数r =0 .96 ,P <0 .0 0 1;经敏感性比较 ,HCⅡ灵敏度较bDNA提高 10 1拷贝 /ml～ 10 2 拷贝 /ml。HCⅡ与bDNA定量检测HBVDNA结果的换算方程为 :HCⅡ (HBVDNA拷贝 /ml) =1.0 14×〔bDNA (HBVDNAEq/ml)〕0 .963 2 ;或bDNA (HBVDNAEq/ml) =4 .0 34×〔HCⅡ (HBVDNA拷贝 /ml)〕0 .9574。在操作上HCⅡ比bDNA更为简便、快速。结论　HCⅡ与bDNA法检测HBVDNA具有较好的相关性 ,可用于临床HBVDNA水平的定量检测、监控及抗病毒药物的筛选、考核。     

特异核酸捕获RT-PCR技术建立及在HCV RNA检测中的应用

目的 解决ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ方法的重复性较差问题,使其成为常规实验室检测方法。方法 采用亲合素生物素系统将ＨＣＶ特异的核酸片段包被在微孔板上,利用特异核酸捕获样本中的ＨＣＶＲＮＡ然后进行逆转录和ＰＣＲ扩增,从而建立了特异核酸捕获ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ方法,并与酶消化法和抽提法进行比较,评价其敏感性、特异性、重复怀及抗污染能力。结果 特异性核酸获ＲＴ－ＰＣＲ获得的电要带较为清晰,其特     

二种分子杂交技术定量检测临床标本中HBV DNA的比较

目的第2代核酸杂交捕获系统(HCⅡ)与分枝链DNA信号放大系统(bDNA)定量检测HBV DNA的临床应用比较.方法40例乙型肝炎病毒表面抗原阳性的慢性乙型肝炎患者临床血清标本共79份,采用2种杂交方法定量检测HBV DNA.结果HCⅡ与bDNA定量检测HBV DNA的阴阳性符合率为85.9%,相关系数r=0.96,P＜0.001;经敏感性比较,HCⅡ灵敏度较bDNA提高101拷贝/ml～102拷贝/ml.HCⅡ与bDNA定量检测HBV DNA结果的换算方程为HCⅡ(HBV DNA拷贝/ml)=1.014×[bDNA(HBV DNA Eq/ml)]0.9632;或bDNA(HBV DNA Eq/ml)=4.034×[HCⅡ(HBV DNA拷贝/ml)]0.9574.在操作上HCⅡ比bDNA更为简便、快速.结论HCⅡ与bDNA法检测HBV DNA具有较好的相关性,可用于临床HBV DNA水平的定量检测、监控及抗病毒药物的筛选、考核.     

杂交酶联定量PCR检测HBV DNA的初步应用

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)ＤＮＡ定量检测已越来越受到临床的重视[1～3] 。我们采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)杂交定量检测试剂测定乙型肝炎 (乙肝 )患者血清ＨＢＶＤＮＡ含量 ,并且对检测试剂作初步评价和临床应用观察 ,现报道如下。材料和方法一、检测对象乙型肝炎患者 5 3 8例 ,男 40 2例 ,女 1 3 6例 ,平均年龄 3 5岁。二、ＨＢＶＰＣＲ杂交酶联定量检测1 .试剂　由上海浩源生物科技有限公司提供 ,按说明书操作。2 .仪器　ＢＩＯ -ＲＡＤ5 5 0型酶标仪 ,ＭＪ - 1 0 0热循环仪。结果一、扩增效率由于ＰＣＲ反应的定量结果与ＰＣＲ平均效率直接有…     

T.th DNA聚合酶在检测登革病毒感染中的应用

用T.th DNA聚合酶进行逆转录/多聚酶链反应(一步法)检测登革病毒4型(DV4)感染，通过与传统的逆转录/多聚酶链反应二步法比较，发现一步法敏感性是2个TCID 50，二步法敏感性是3个TCID 50。对56例DV4患者急性期血清进行检测，一步法阳性率85.7%，二步法阳性率76.8%。     

福州市五种人群中HCV感染状况的调查分析

目的了解福州市吸毒人群、梅毒、乙肝携带者、服务行业健康体检人员、卫生防疫人员中丙肝病毒(HCV)感染的情况。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行HCV抗体检测。结果吸毒者、梅毒、乙肝携带者、服务行业健康体检人员、卫生防疫人员的抗-HCV阳性率分别为60.58%、0、0、1.00%、0.71%。结论吸毒人群是HCV感染的高危人群,应加强对此群体的健康教育和行为干预,对控制丙肝等传染病的传播具有重要意义。     

丙型肝炎病毒不同编码区重组抗原在抗体检测中的应用

目的　探讨丙型肝炎病毒 (HCV)不同编码区重组蛋白片段的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法　分别以 4种HCV单片段抗原 (C、NS3、NS4或NS5 )检测抗 HCV抗体阳性血清 ;以 4种单片段抗原的混合物 (MIX)检测抗 HCV抗体阳性血清、大学生体检血清和抗 HCV抗体阴性质控血清。结果　 90份抗 HCV抗体阳性血清中共有 75份可与一种或多种单片段抗原反应 ,阳性率分别为 70 .0 % (C)、6 1.1% (NS3)、5 2 .2 % (NS4 )、4 4 .4 % (NS5 ) ,其中仅与C、NS3、NS4和NS5一种抗原发生反应的分别有 8份、1份、2份和 3份血清标本 ;90份抗 HCV阳性血清经MIX抗原检测 ,阳性率为 83.3% (75 / 90 ) ;10 0份大学生血清和39份阴性质控血清经混合抗原检测均阴性。结论　HCV不同编码区重组蛋白片段有不同的免疫反应性 ,在发展抗 HCV抗体诊断试剂时 ,应采用各种不同编码区的混合抗原。     

慢性丙型肝炎患者外周血CD5^＋B细胞检测及意义

目的研究慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血CD5 B细胞的水平及其临床意义。方法采用流式细胞术检测CHC患者外周血B细胞表面CD5分子的表达;应用荧光定量PCR检测HCV RNA滴度,并与肝功能指标ALT进行相关性分析。结果CHC患者外周血CD5 B细胞显著增多,达(58.4±9.8)%,显著高于慢性乙型肝炎组(39.8±8.2)%和正常对照组(22.5±5.9)%(P均小于0.01)。其与ALT无显著相关性(r=0.2,P>0.05),而与HCV RNA拷贝数呈显著正相关(r=0.817,P<0.05)。结论CD5 B细胞可能参与HCV感染的慢性化过程。     

丙型肝炎患者T细胞CD28表达的探讨

目的 探讨丙型肝炎病毒携带者外周血T淋巴细胞上的CD28表达在丙型肝炎病毒感染免疫耐受机制中的作用。方法 采用流式细胞技术（FCM）用三色标记法检测40例丙肝患者和30例正常人群外周血T细胞CD28的表达。结果 丙肝患者外周血中CD28^＋CD8^＋的表达显著高于正常健康对照组，CD8^＋，CD28^＋CD8^＋T细胞则显著低于正常健康对照组。结论 CD28对丙肝患者的免疫功能及愈后判断有一定的意义。