骨诱导因子mRNA表达与乳腺癌发生和转移的关系

目的:探讨骨诱导因子(OGN)基因mRNA表达与乳腺癌发生、发展及转移的关系.方法:采用实时定量RT-PCR方法检测30例乳腺良性肿瘤、108例乳腺原发癌组织和其中30例的癌旁正常组织、30例的淋巴结转移癌中OGN mRNA的表达状态.并分析乳腺原发癌中OGN mRNA表达水平与临床病理因素的关系.结果:OGN mRNA在乳腺癌旁正常组织、良性肿瘤、原发癌和转移癌的高表达率分别为76.7%、83.3%、44.4%和6.7%,其中在非癌的良性肿瘤与正常组织间无差异,在乳腺原发癌的表达比非癌组织下调(P<0.05),在转移癌的表达比原发癌下调(P<0.001).乳腺原发癌中OGN mRNA表达水平仅与患者年龄相关,而与肿瘤大小、临床分期、组织学分级和淋巴结状态等临床病理因素无关.结论:OGN mRNA低水平状态与乳腺癌的发生和转移相关,有望作为乳腺癌诊断和监测肿瘤进展的分子标志物.     

乳腺癌中RIZ1的表达及其临床意义初探

目的研究RIZ1基因mRNA表达的改变与乳腺癌发生及与患者相关临床和病理特征之间的关系。方法采用半定量RT-PCR方法检测34例乳腺癌标本及相应癌旁组织、15例乳腺良性肿瘤RIZ1基因mRNA的表达状况，并结合相关指标进行分析。结果RIZ1基因mRNA在乳腺癌中的表达明显低于癌旁乳腺组织与乳腺良性肿瘤组织，差异均有显著性（均P〈0．05）。RIZ1基因mRNA在乳腺癌中的表达与年龄、肿瘤TNM分期、淋巴结转移、激素受体（ER）状况无相关关系（均P〉0．05）。结论：RIZ1基因mRNA表达降低可能与乳腺癌的发生相关。     

2型17β羟化类固醇脱氢酶在乳腺癌和癌旁组织中的表达及其与临床特征的关系

目的：探讨2型17β羟化类固醇脱氢酶（2型17β-HSD）在乳腺癌和癌旁非恶性乳腺组织中的表达及其与患者临床特征之间的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测2型17β-HSD在76例(全部为女性)乳腺癌及癌旁非恶性乳腺组织中的表达，分析2型17β-HSD表达与患者年龄、癌组织雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、P185、肿瘤分期、肿物大小以及阳性淋巴结数之间的关系。结果：2型17β-HSD在乳腺癌细胞的细胞浆中有表达，阳性率为5.3%；在癌旁非恶性乳腺组织腺泡上皮细胞以及导管上皮细胞的细胞浆中表达，阳性率为82.9%。乳腺癌细胞表达阳性率与癌旁乳腺组织中上皮细胞表达的阳性率比较差异有显著性(χ²=92.908,P<0.001)。2型17β-HSD在癌旁乳腺组织中的表达与乳腺癌原发肿物的大小（r=－0.341，P<0.05）和肿瘤的分期呈负相关（r=－0.706，P<0.01），与患者年龄呈正相关（r=0.677，P<0.01），而与ER、PR 、P185和阳性淋巴结数之间均无相关性。 在乳腺癌组织中该酶与患者年龄、ER、 PR、P185、肿瘤分期、肿物大小以及阳性淋巴结数量之间均无相关性。结论：2型17β-HSD可调节乳腺局部雌激素水平，与乳腺癌发生及发展有关。     

乳腺癌相关差异表达基因的筛选及分析

目的构建乳腺癌组织与癌旁正常乳腺组织差异表达的cDNA消减文库,筛选乳腺癌相关基因并进行分析。方法应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术对15对乳腺癌组织及正常癌旁乳腺组织进行差异基因的消减,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,采用数字表法随机挑选克隆经PCR鉴定后,对200个阳性克隆插入片段的序列进行测定及同源性分析。结果建立了乳腺癌差异表达片段cDNA消减文库;通过测序和同源性分析,得到173个差异表达基因,其中26个与肿瘤发生发展相关;26个基因中有15个已被文献明确报道在乳腺癌组织或细胞中有差异表达。结论应用SSH技术成功建立了乳腺癌差异表达基因cDNA消减文库,为乳腺癌的发病机制研究及寻找潜在的治疗靶点提供了有力的支持。     

TM4SF1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨四次跨膜蛋白1（TM4SF1）在乳腺癌组织中的表达情况,阐明其临床意义并初步探索其相关分子生物学机制。方法：收集190例人乳腺癌组织、110例癌旁组织和110例正常乳腺组织。免疫组织化学法检测乳腺癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织中TM4SF1的表达,Western blotting法检测乳腺癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织中TM4SF1的表达水平,RT-PCR法检测乳腺癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织中TM4SF1mRNA的表达水平,检测不同临床病理特征乳腺癌患者乳腺癌组织中TM4SF1阳性表达率。结果：乳腺癌组织中TM4SF1阳性表达率高于癌旁组织和正常乳腺组织（P < 0.05）,癌旁组织与正常乳腺组织中TM4SF1的阳性表达率比较差异无统计学意义（P=0.531）;TM4SF1表达与患者年龄无明显关联,与肿块大小、分化程度、淋巴结转移和肿瘤分期有密切关联（P < 0.05）;基底样型乳腺癌组织中TM4SF1阳性表达率高于其他3种病理类型（P < 0.05）。Western blotting法检测,乳腺癌组织中TM4SF1表达水平高于癌旁组织和正常乳腺组织（P < 0.05）,癌旁组织与正常乳腺组织中TM4SF1表达水平比较差异无统计学意义（P > 0.05）。RT-PCR检测,乳腺癌组织中TM4SF1mRNA表达水平高于癌旁组织和正常乳腺组织（P < 0.01）;癌旁组织与正常乳腺组织中TM4SF1mRNA的表达水平比较差异无统计学意义（P > 0.05）。结论：TM4SF1在乳腺癌组织中呈高表达,TM4SF1可能通过多种机制影响乳腺癌的发生发展及远处转移,提示TM4SF1可能成为乳腺癌治疗潜在的靶点。     

乳腺浸润性导管癌中CDH1基因甲基化状态及其临床意义

目的 探讨CDH1启动子基因甲基化在乳腺浸润性导管癌中的意义.方法 采用甲基特异性PCR和免疫组织化学染色方法分别检测乳腺癌组织、癌旁组织和乳腺正常组织中CDH1基因启动子甲基化状况及上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达情况.收集相关临床病理资料(遗传背景、年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移情况、肿瘤细胞分级、临床分期和分子亚型),分析CDH1基因甲基化在乳腺癌中的意义.结果 250例乳腺癌患者共发现113例CDH1基因启动子甲基化,甲基化率为45.20％,CDH1基因启动子甲基化组和非甲基化组相比E-cadherin蛋白表达水平明显减低,差异有统计学意义(x2 =21.360,P＜0.01).单因素分析结果显示,CDH1基因甲基化组和非甲基化组在腋窝淋巴结转移(x2=19.086,P＜0.01)、肿瘤组织学分级(x2=8.487,P=0.014)、人表皮生长因子受体2(CerbB-2)表达(x2=9.475,P=0.002)和分子分型(x2 =25.482,P＜0.01)比较,差异有统计学意义.COX回归分析显示,CDH1基因启动子甲基化和非甲基化组5年生存率比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CDH1基因启动子甲基化引起基因mRNA表达下降,CDH1基因甲基化与乳腺癌的腋窝淋巴结转移相关,提示CDH1基因启动子甲基化在乳腺癌疾病进程中发挥了一定作用.     

VEGF在乳腺癌、癌旁组织中表达及意义

目的：本研究旨在检测血管内皮生长因子（VEGF）在乳腺癌组织，癌旁近端非癌组织，癌旁远端正常组织中表达的差异及其意义。方法：采用免疫组化法（IHG）检测40例乳腺癌组织、癌旁近端（2CM）非癌组织，癌旁远端（〉5CM）正常组织中VEGF的表达情况。结果：IHC结果显示VEGF蛋白在癌旁远端正常组织、癌旁近端非癌组织及乳腺癌的表达依次递增。结论：VEGF通过参与肿瘤血管生成与肿瘤的侵袭与转移相关。     

P27在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的　研究 P2 7在乳腺癌中的表达及临床意义。方法　应用免疫组化 S- P法对 5 0例乳腺癌组织、4 5例癌旁正常乳腺组织、5 0例良性乳腺组织 P2 7的表达进行检测。结果　 P2 7蛋白在乳腺癌组织、癌旁正常乳腺组织、良性乳腺组织阳性表达率分析为 5 4 %、6 0 %和 76 % ,P2 7蛋白在乳腺癌组织中表达与其在良性乳腺组织中表达相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,与其乳腺癌癌旁组织相比无统计学差异 ;P2 7蛋白在乳腺癌组织中表达与腋淋巴结状态及临床分期相关 ,而与年龄、肿瘤大小、ER和PR的表达无关。结论　 P2 7可能与乳腺癌发生、发展及腋淋巴结转移有关 ,P2 7蛋白的表达对判断乳腺癌临床进展有一定的参考价值。     

乳腺癌组织中E-选择素及其配体的表达及临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中E-选择素(E-selectin)及其配体sLe-X(SialylLewis-X)的表达状况及其与肿瘤分化、转移及预后的关系。方法:采用免疫组化技术检测56例乳腺癌及癌旁组织中E-Selectin和sLe-X的表达,分析其表达水平与淋巴转移及临床病理特征之间的关系。20例乳腺纤维瘤标本为对照。结果:E-选择素和sLe-X在乳腺癌组织、癌旁组织、乳腺纤维瘤中阳性表达率分别为82.14%(46/56)、67.86%(38/56)、15.00%(3/20);73.21%(41/56)、58.93%(33/56)、30.00%(6/20)。E-选择素及sLe-X在乳腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织及乳腺纤维癌中的表达(P<0.01);有淋巴结转移的乳腺癌组织sLe-X的表达高于无转移组(P<0.01),而E-Selectin在两组间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。乳癌组织中E-选择素的表达与ER特征(P=0.001)、肿瘤分期(P=0.026)、肿瘤分化程度(P=0.013)、肿瘤直径(P=0.01)明显相关。单因素分析显示E-选择素表达状态与生存率相关(P=0.027)。结论:E-选择素和SLe-X协同介导了乳腺癌的发生发展及淋巴结转移。E-选择素可能是预测乳腺癌转移和预后的分子标志。     

应用二维电泳和质谱技术筛选乳腺癌相关差异表达蛋白质的初步研究

目的:通过分离并鉴定乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断的乳腺癌肿瘤标志物.方法:提取人乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择在乳腺癌组织中明显差异表达的蛋白点,行质谱分析.结果:获得了分辨率和重复性均很好的凝胶蛋白图谱.对筛选出的在乳腺癌组织中明显差异表达的20个蛋白点,共有13个蛋白点被成功鉴定,其中在乳腺癌组织巾高表达的为8个,低表达的为5个.结论:乳腺癌组织相对于癌旁、正常乳腺组织蛋白存在明显的差异,过蛋白质组学方法筛选并鉴定出的这些蛋白质可能成为用于早期诊断和评价预后的乳腺癌标志物.     

IDENTIFICATION OF DIFFERENTIAL GENES IN OVARIAN CANCER USING REPRESENTATIONAL DIFFERENCE ANALYSIS OF cDNA

Objoctive To identify differential genes between normal ovarian epithelium tissue and ovarian epithelial cancer using representational difference analysis of cDNA （cDNA-RDA）. Methods cDNA-RDA was performed to identify the differentially expressed sequences between cDNAs from cancer tissue and cDNAs from normal ovarian tissue in the same patient who was in the early stage of ovarian serous cystadenocarcinoma. These differentially expressed fragments were cloned and analyzed, then sequenced and compared with known genes. Results Three differentially cxpressed cDNA fragments were isolated using cDNA from normal ovarian tissue as tester and cDNA from cancer tissue as driver amplicon by cDNA-RDA. DP Ⅲ- 1 and DP Ⅲ-2 cDNA clone showed significant homology to the cDNA of alpha actin gene; DPⅢ-3 cDNA clone showed significant homology to the cDNA oftransgelin gene. Conclusion cDNA-RDA can bc used to sensitively identify the differentially expressed genes in ovarian serous cystadenocarcinoma. Ovarian serous cystadenocarcinoma involves alteration of multiple genes.     

脑胶质瘤差异表达基因的微矩阵研究

目的 用生物芯片筛选胶质母细胞瘤相关基因。方法 采用一种由包括胶质瘤cDNA文库构建的14 000个基因片段的生物芯片来杂交筛选胶质母细胞瘤的基因并分析其表达谱的变化。结果 经过杂交筛选并与正常脑组织比较,94个基因差异表达超过3倍,298个基因片段超过2倍。一些胶质瘤中上调基因在正常脑组织中几乎没有表达。几个与胶质瘤发生发展相关的新基因被证实。结论 生物芯片结合相关的cDNA文库对大规模快速筛选胶质瘤及其他肿瘤的治疗靶基因具有实际意义。     

基因表达谱芯片检测肺鳞癌与正常肺组织差异表达的基因

目的：用基因芯片技术探讨肺鳞癌异常基因的表达。方法：提取肺鳞癌组织及正常肺组织的RNA,分别用Cy5-dCTP或Cy3-dCTP标记,再与4096点基因芯片杂交,筛选肺鳞癌组织和正常肺组织表达差异的基因。结果：肺鳞癌组织与正常肺组织表达差异基因225条,其中癌组织中上调基因为116条．下调基因109条;差异极显著性基因37条,表达上调24条,下调13条。结论：多基因参与肺鳞癌发病,基因芯片技术是肺癌基因筛选的有效方法。     

脑胶质瘤患者全长新基因的获得及初步研究

目的 探讨基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因,并对其中一条基因进行初步研究。方法 抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机观察两者表达谱的差异情况,对507E08克隆子进行了Northern印迹、原位杂交、生物信息学分析和染色体定位。结果 通过4次基因芯片筛选,获得15条与胶质瘤相关的新基因,经Northern印迹证实507E08基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达。原位杂交得到相同的结果。BLASTn和BLASTx分析显示,507E08基因为全长新基因,长度为2002bp,共编码203个氨基酸。本基因命名为人核糖体蛋白L14．22。该基因定位于14号染色体上D14S1066和D14S265Marker之间。结论 用基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因,具有样品用量少,高质量,高速度,高敏感等特性。507E08基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。     

子宫肌瘤致病相关基因的筛选与克隆

【目的】 研究子宫肌瘤与正常子宫肌组织中的基因表达差异,筛选及克隆子宫肌瘤的致病相关基因。【方法】 应用荧光标记的mRNA差异显示技术,比较11例子宫肌瘤及其正常子宫肌组织基因表达的差异,对获得差异片段进行克隆、测序及同源性分析,并对其中5条差异片段在子宫肌瘤及正常子宫肌组织中的表达情况进行RT-PCR分析。【结果】 差异片段NO.3,5,11,12在子宫肌瘤正常及异常组织中的表达均存在差异。其中NO.3差异片段在8例子宫肌瘤组织中有表达,而相应的正常组织中仅2例有表达。NO.5,11,12差异片段在子宫肌瘤中的表达水平高于正常子宫肌组织中的表达水平。【结论】 在子宫肌瘤的发生和发展过程中存在多个基因的表达异常,其中ulap8基因有可能在子宫肌瘤组织中呈特异性的表达,ulap14,ulap25,ulap26基因在子宫肌瘤组织中存在表达差异,推测这些基因有可能与子宫肌瘤的发病有关。     

基因表达谱芯片在小鼠乳腺癌组织中基因差异性表达

目的：在TA2小鼠自发乳腺癌肺转移BCML模型上，采用了基因芯片技术，比较TA2小鼠低转移MA737模型与高转移BCML模型基因表达的差异。以期从基因水平上揭示乳腺癌的转移机制并为进一步寻找其新的防治手段打下基础。方法：采用上海联合基因公司提供的含2048个小鼠cDNA的C57BL-6的基因芯片，研究对象为TA2小鼠自发乳腺癌肺转移BCML模型。同时设TA2小鼠自发乳腺癌MA737模型为实验对照组。结果：筛选出包括与DNA结合，转录和转录因子，蛋白翻译，细胞周期，转移等相关的表达差异有基因共457个，其中210个表达上调，247个表达下调。结论：乳腺癌在转移过程中存在许多基因表达调控的改变，对于相关基因的研究有助于认识乳腺癌转移的分子机制。为进一步探讨乳腺癌的预防提供新的思路与实验依据。     

乳腺癌lncRNAs表达谱的检测

目的 初步探讨人乳腺癌lncRNAs基因表达谱的筛选。方法 在EBI数据库中的Array Express子数据库选取两组代表乳腺癌基因表达的基因芯片数据,从一组数据下载原始CEL数据文件,运用RMA(RobustMultichip Average)方法对原始CEL文件进行标准化及背景校正。得到乳腺癌与癌旁组织中的探针表达谱矩阵,将其与NetAffx 注释文件结合。提取出RefSeq转录本 ID和(或)Ensembl基因ID的探针集。对于Refseq ID的探针集,只保留那些NR者(代表非编码RNA)。对于Ensembl 基因 ID的探针集,只保留注释为LncRNA,加工过的 转录本或“misc_RNA”。对上述步骤得到的数据进行过滤,得到存在差异表达的lncRNA数量,将这一结果在另一组乳腺癌芯片数据中进行验证。结果 共筛选出表达差异显著且方向一致的18个LncRNA,其中2种LncRNAs表达明显上调,16种LncRNAs表达明显下调。 结论 筛选出与乳腺癌相关的差异表达lncRNAs,为进一步研究其在乳腺癌中的作用奠定基础。     

胃癌及其癌前病变相关基因差异表达的研究

目的 探讨与人胃癌发生密切相关的基因片段。方法 本研究应用荧光mRNA差异显示技术分析胃癌（3例）、胃癌前病变（3例）和正常胃黏膜（3例），鉴别并分离差异表达的基因片段，进行PCR再扩增。将扩增的cDNA片段克隆后进行测序，测序结果提交GenBank，经BLAST软件检索进行同源性分析。应用生物信息学技术确定基因在染色体中的定位。结果 发现1个差异表达的cDNA片段，在胃癌组织和癌前病变中高表达，初一步定位于17号染色体，在GenBank数据库中与RP11-25705克隆高度同源，但其具体功能目前尚不清楚。结论 本研究发现的1个基因片段在胃癌组织和癌前病变中高表达，可能参与了胃癌的发病过程。     

肺癌诊断基因的初步筛选

目的 筛选肺癌细胞恶性转化不同时期差异表达的基因，以期用于肺癌的诊断。方法 应用抑制消减杂交技术(SSH)、测序、cDNA芯片(cDNA Miemarray)、northern blot。结果 利用SSH建立了永生化人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化不同时期差异表达基因的cDNA文库，其中，A消减文库(BEP2D细胞的cDNA为tester，α粒子照射BEP2D细胞后35代恶性转化细胞R15Hp35的cDNA为driver)有416个克隆，B消减文库(α粒子照射BEP2D细胞后20代转化细胞R15Hp20的cDNA为tester，BEP2D和R15Hp35细胞的cDNA混合后为driver)有301个克隆，C消减文库(R15Hp35细胞的cDNA为tester，BEP2D细胞的eDNA为driver)有586个克隆。对文库中107个克隆单向测序发现：19个克隆在GenBank中没有查到对应的同源序列，其它88个克隆共代表了76个不同的已知基因。然后，将3个文库中全部克隆的cDNA制作成cDNA芯片，用该芯片筛选了15例肺癌组织、5例肺癌旁组织和其他8种癌组织(肝癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、白血病、子宫内膜癌、脑神经角质瘤和结肠癌)中mRNA的表达差异。结果，获得肺癌组织高于肺癌旁组织表达的eDNA26个，肺癌旁组织高于肺癌组织表达的31个，2者高于其他8种癌组织的分别为：肺癌旁组织中63个，肺癌组织中87个。将这208个具较大差异表达的基因重新制作成cDNA芯片，再选用临床上同一鳞癌病人鳞癌和鳞癌癌旁组织各1例与该芯片杂交，发现这些筛选出的基因的确在癌组织和癌旁组织中存在较大差异。结论 这些初步筛选出的差异表达基因有望成为肺癌诊断的侯选基因。