虎杖苷相关AMPK信号通路对非酒精性脂肪肝病小鼠肝脏脂质沉积的作用研究

目的　探讨虎杖苷（PD）相关单磷酸腺苷激活蛋白激酶（AMPK）信号通路对非酒精性脂肪肝病（NAFLD）小鼠肝脏脂质沉积的作用。方法　2021年1月至6月，采用高脂高糖喂养将SPF级昆明雄性小鼠（4～6周龄，15～19 g）构建NAFLD小鼠模型，并以常规饲养作为对照（NC组），将小鼠模型分为高剂量组（HFD+200PD组）［200 mg/（kg·d）］、中剂量组（HFD+100PD组）［100 mg/（kg·d）］、低剂量组（HFD+50PD组）［50 mg/（kg·d）］和模型组。模型组和NC组均采用等剂量生理盐水进行灌胃，均连续给药4周。采用苏木素-伊红染色法检测肝脏形态变化；采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测SREBP-1c、ACC、FAS、Akt的mRNA相对表达水平；采用蛋白质印迹法检测P-AMPK、AMPK蛋白相对表达水平；并常规检查总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）的表达水平。结果　HFD+200PD组P-AMPK、AMPK蛋白相对表达量显著高于HFD+100PD组、HFD+50PD组和模型组［（0.89±0.02）比（0.78±0.02）、（0.68±0.03）、（0.53±0.12）和（0.84±0.02）比（0.67±0.03）、（0.58±0.04）、（0.47±0.06），均P<0.05］，且HFD+100PD组显著高于HFD+50PD和模型组，但4组均显著低于NC组（均P<0.05）。HFD+200PD组SREBP-1c、ACC、FAS mRNA相对表达量显著低于HFD+100PD组、HFD+50PD组和模型组，而Akt mRNA显著高于HFD+100PD组、HFD+50PD组和模型组（均P<0.05）。HFD+200PD组TC、TG和LDL-C表达量显著低于HFD+100PD组、HFD+50PD组和模型组（均P<0.05），且HFD+100PD组显著低于HFD+50PD组和模型组，但4组均显著高于NC组（均P<0.05）。结论　PD可通过调控AMPK信号通路和抑制脂肪合成相关基因的表达改善NAFLD小鼠肝脏脂质沉积情况。     

白藜芦醇通过诱导自噬减少肥胖小鼠骨骼肌组织GDF8表达的研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,RES)通过诱导自噬减少肥胖小鼠骨骼肌组织中GDF8的表达。方法将8周龄C57BL/6雄性(♂)小鼠随机分为标准饮食组(SCD)、标准饮食+白藜芦醇组(SCD+RES)、高脂组(HFD)及高脂+白藜芦醇组(HFD+RES),白藜芦醇(400 mg·kg^-1·d^-1)胃饲,共持续20周。分析血脂指标和骨骼肌组织的形态学变化,免疫组化、RT-PCR和Western blot检测SIRT1、LC3、p62、GDF8的定位和表达。结果HFD组小鼠体质量、血脂指标TC、TG、LDL-C水平升高,HDL-C水平明显降低;骨骼肌纤维间出现脂肪沉积;SIRT1、LC3表达量明显减少,GDF8、p62的表达增加,且均定位于胞质;SIRT1、LC3的表达明显降低。与HFD小鼠相比,HFD+RES组小鼠体质量、血脂指标明显下降,HDL-C水平升高,骨骼肌中的脂质沉积明显减少,SIRT1、LC3的表达水平增高,GDF8、p62的表达水平明显降低。结论白藜芦醇有降低骨骼肌GDF8表达的效应,其机制可能与其激活SIRT1进而增加自噬、促进GDF8的降解有关。     

二氢杨梅素经激活AMPK-PGC1α-Sirt1信号通路促进高脂饮食诱导的肥胖小鼠肩胛下脂肪组织棕色化

目的观察二氢杨梅素(DHM)对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肩胛下脂肪组织棕色化的影响,并阐明其机制。方法 C57bl/6j小鼠采用普通饲料和高脂饲料喂养,同时分别用或不用低剂量(125 mg·kg~(-1)·d~(-1))或高剂量(250 mg·kg~(-1)·d~(-1))的DHM处理16W。实验期间每4周测一次小鼠体质量,16周后小鼠空腹过夜测空腹血糖,接着处死小鼠,测量体长后算出Lee’s指数,随后取肩胛下脂肪组织,一部分HE染色观察脂肪细胞形态,另一部分通过实时定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测肩胛下脂肪组织:解偶联蛋白1(UCP1)、锌指转录因子PR结构域包含子16 (Prdm16)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、过氧化物酶体增殖激活受体γ辅助激活因子α(PGC1α)和沉默信息调节因子1(Sirt1)的基因和蛋白表达。结果与正常对照组(ND组)相比,高脂饮食组(HFD组)小鼠体质量明显增加,说明肥胖小鼠模型复制成功;此外,HFD组小鼠血糖、Lee’s指数和肩胛下脂肪组织脂肪细胞直径增加,UCP1、Prdm16、AMPK、PGC1α和Sirt1基因和蛋白表达降低; DHM可逆转HFD小鼠上述指标的改变,但DHM不影响正常小鼠这些指标。结论二氢杨梅素可能经激活AMPKPGC1α-Sirt1信号通路促进高脂饮食诱导的肥胖小鼠肩胛下脂肪组织棕色化。     

双酚 A对成年 C57BL/6J小鼠糖、脂代谢的影响

目的：研究双酚A（BPA）长期暴露对C57BL/6J小鼠血糖、血脂的影响。方法：8周龄雄性小鼠随机分为正常对照组、溶剂对照组、低剂量BPA组、高剂量BPA组,分别给予蒸馏水、玉米油、0.5mg·kg^-1·d^-1和50mg·kg^-1·d^-1BPA,90d后,进行口服糖耐量（OGTT）测定,血TC、TG、HDL-C、LDL-C含量测定,肝脏病理切片及肝脏脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、硬脂酰CoA脱饱和酶1（SCD1）和葡萄糖激酶（GCK）表达水平的测定。结果：与正常对照组和溶剂对照组相比,低剂量BPA组小鼠糖耐量存在明显异常（P〈0.05）;血脂各指标出现异常,血TC、TG、LDL-C升高,HDL-C下降（P均〈0.05）;高剂量BPA组TC、TG和HDL-C水平差异无统计学意义（P均〉0.05）,而LDL-C水平升高（P〈0.05）。低剂量BPA组肝脏FAS、ACC、SCD1、GCK蛋白表达升高,肝脏出现明显的脂质沉积;而高剂量BPA组仅ACC和GCK蛋白水平表达略有升高,其余蛋白无明显变化。结论：长期低剂量BPA接触会引起机体糖、脂代谢紊乱。     

人参皂苷Compound K通过AMPK及SREBP1途径改善非酒精性脂肪肝的机制研究

目的：研究人参皂苷Compound K（CK）对非酒精性脂肪肝的改善作用及其与腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）及固醇调节元件结合蛋白（SREBP1）信号转导通路的关系。方法：采用高脂饲料喂养C57BL/6J雄性小鼠9周,建立非酒精性脂肪肝动物模型;9周后随机分为5组,正常饲料组（RD）,高脂饲料组（HFD）,给药组（HFD+CK 3,9,27 mg·kg^-1）,每天灌胃给药1次,每周测2次体质量,连续11周。实验结束后,分别称量小鼠体质量和肝质量;检测三酰甘油（TG）、胆固醇（cholesterol）、非游离脂肪酸（NEFA）、谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）水平。苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏病理变化,Western blot法检测AMPK和乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的磷酸化表达,PCR法检测脂肪合成转录因子SREBP1及其靶基因（FAS、SCD1）的基因表达。结果：治疗11周后,与RD组比较, HFD组小鼠肝质量及肝质量与体质量的比值显著增加（P<0.001,P<0.05）,HE染色显示HFD组较RD组肝细胞明显增大且伴有大泡性脂肪变,说明高脂饲料诱导非酒精性脂肪肝模型的建立。与HFD组比较,给药组小鼠体质量、肝质量显著降低（P<0.05）,血脂（TG、CHO、NEFA）和肝功（sAST和sALT）指标也显著降低（P<0.05,P<0.01,P<0.001）;HE染色也说明给药组能够明显改善肝脏病理状态,从而改善肝细胞脂肪变性;Western blot结果显示HFD组较RD组,AMPK和ACC磷酸化均被抑制,给药组较HFD组,AMPK和ACC均被磷酸化,且随药物浓度的增加,磷酸化越明显;PCR法结果显示HFD较RD组,脂肪合成转录因子SREBP1及其靶基因表达显著增强,而在给药组上述基因表达均显著被抑制。结论：CK对非酒精性脂肪肝具有改善作用,其机制之一可能是通过激活AMPK和ACC的磷酸化、抑制脂肪合成转录因子SREBP1及其靶基因的表达来实现的。     

氧化苦参碱对高脂诱导胰岛素抵抗ApoE~(-/-)小鼠肝脏脂代谢相关基因的影响

目的探讨氧化苦参碱对高脂诱导胰岛素抵抗Apo E~(-/-)小鼠肝脂代谢相关基因的影响。方法 17只♂C57BL/6J小鼠作为对照组,给予正常饮食;68只♂Apo E~(-/-)小鼠,给予高脂饮食,饲养16周后,将小鼠分为模型组、氧化苦参碱低、中、高剂量组。给药8周,测定小鼠体重和一般生化指标。荧光定量PCR和Western blot方法检测肝组织LPL、FAT/CD36、CPT1、UCP2、SREBP-1c、FAS、ACC m RNA和蛋白表达水平。结果氧化苦参碱能不同程度的降低体重、FBG、TC、TG、FFA、FINS、HOMA-IR,升高GIR,改善胰岛素的抵抗。同时降低了LPL、FAT/CD36、UCP2、SREBP-1c、FAS、ACC m RNA和蛋白的表达水平,升高了CPT1表达水平。结论氧化苦参碱能够通过脂转运、氧化、合成3个环节较全面的调节肝脂质代谢,改善高脂诱导的Apo E~(-/-)小鼠的胰岛素抵抗。     

氢杨梅素改善高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏脂肪沉积及机制（英文）

有文献报道, SIRT1-AMPK信号通路可能在DHM改善肝脏细胞甘油三酯蓄积、胰岛素抵抗等作用中发挥作用。为此,本课题拟进一步观察DHM对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏脂肪沉积的影响,并探讨其可能机制。C57BL/6J小鼠采用普通饲料和高脂饲料喂养,同时分别用或不用低剂量(125 mg/kg)或高剂量(250 mg/kg)的DHM处理16周。实验期间,每两周检测体重一次。16周后,眼眶静脉取血并处死动物,同时取肩胛下、附睾与腹股沟的脂肪并用电子秤进行称重,并记录脂肪重量。全自动生化分析仪检测:血清甘油三酯(triglyceride,TG)、血清总胆固醇(totalcholesterol,TC)、血清高密度脂蛋白(high-densitylipoprotein,HDL)、血清低密度脂蛋白(low-densitylipoprotein,LDL)。取肝脏甲醛固定、HE和油红O染色检测肝脏脂肪沉积情况;比色法检测肝脏MDA和SOD含量; Realtime PCR检测相关指标的基因表达:IL-6、IL-8、TNF-α、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-Co A carboxylase, ACC)、固...     

白藜芦醇通过诱导自噬减少肥胖小鼠骨骼肌组织GDF8表达的研究

目的研究白藜芦醇通过诱导自噬减少肥胖小鼠骨骼肌组织中GDF8的表达。方法将8周龄C57BL/6雄性(♂)小鼠随机分为标准饮食组(SCD)、标准饮食+白藜芦醇组(SCD+RES)、高脂组(HFD)及高脂+白藜芦醇组(HFD+RES),白藜芦醇(400 mg·kg~(-1)·d~(-1))胃饲共持续20周。分析血脂指标和骨骼肌组织的形态变化,免疫组化、RT-PCR和Western印迹检测SIRT1,LC3,p62和GDF8的定位和表达。结果 HFD组小鼠体质量、血脂指标TC、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平明显降低;骨骼肌纤维间出现脂肪沉积;SIRT1和LC3表达明显减少,GDF8和p62的表达增加,且均定位于胞浆;SIRT1,LC3的表达明显降低。与HFD小鼠相比,HFD+RES组小鼠体质量和血脂指标明显下降,HDL-C水平显著升高,骨骼肌中的脂质沉积明显减少,SIRT1和LC3的表达水平增高,GDF8和p62的表达水平明显降低。结论白藜芦醇有降低骨骼肌GDF8表达的效应,其机制可能与其激活SIRT1进而增加自噬、促进GDF8的降解有关。     

穿心莲酸对高脂饲料喂养C57BL/6及NLRP3基因敲除小鼠脂质及炎症水平的影响

目的研究穿心莲酸对高脂饲料喂养C57BL/6及NLRP3基因敲除小鼠脂质及炎症水平及其相关蛋白的影响。方法将18只C57BL/6小鼠和18只NLRP3基因敲除小鼠分别随机分为3组,每组6只,雌雄各半。分别为对照组(Control)、模型组(HFD)、穿心莲酸(ANDA,12.5 mg·kg-1)组。对照组小鼠给予维持饲料,其余小鼠每笼每天给予20 g高脂饲料喂养(high fat diet,HFD),连续8周。第5周起,ANDA组连续灌胃给药4周,其他组小鼠灌胃给予蒸馏水,每天1次。收集血样及肝脏,测定血清中TC、TG、HDL-c、LDL-c及IL-1β水平;Western Blot测定肝脏中caspase-1、IL-1β、CYP7A1及LXRα的蛋白表达水平。结果给予高脂饲料喂养后,WT小鼠和NLRP3-/-小鼠血清TC、TG、LDL-c水平均较对照组显著升高、HDL-c水平显著下降(P<0.01);与对应模型组相比较,穿心莲酸均能降低高脂饲料喂养的WT小鼠和NLRP3-/-模型小鼠血清TC、TG、LDL-C含量,提高HDL-c含量(P<0.01或P<0.05)。穿...     

荷叶碱防治小鼠高脂血症作用及其机制

目的研究荷叶碱对饮食诱导的高脂血症小鼠的影响并了解其降脂机制。方法将小鼠根据饲料分为3组:正常对照组(n=10)、模型对照组(n=10)、干预组(n=10)。正常对照组采取普通饮食(ANI-76A饲料:12.4%脂肪,68.8%碳水化合物,18.8%蛋白质);模型对照组采用高脂饮食诱导(高脂饲料:37.1%脂肪,42.4%碳水化合物,20.5%蛋白质);干预组在高脂饲料基础上添加了0.5%荷叶碱。小鼠自由食用,共10周。比较3组小鼠体质量、血脂、脂代谢关键酶、肝脏氧化应激的变化并研究脂质代谢通路。结果高脂饮食成功诱导出高脂血症模型小鼠:肥胖、血脂增高(P<0.05)。干预组与模型对照组比较:小鼠体质量降低[(33.97±3.46)g比(27.62±2.87)g],血脂降低[(2.73±0.26)g比(1.91±0.21)g],均P<0.05,但不能改善其高甘油三酯血症(P>0.05);肝脂酶活性[(4.15±1.26)U·m L-1比(9.01±1.34)U·m L-1]及脂蛋白脂酶活性提高[(8.12±3.07)U·m L-1比(13.48±3.75)U·m L-1],且降低了肝脏氧化应激(P<0.05)。高脂饮食诱导脂质合成基因SREBP-1c、FAS、SCD-1及PPARγmRNA显著上调(P<0.05),而使脂质氧化代谢基因PPARα、CPT-1a mRNA下调(P<0.05),干预组则逆转了这些变化(P<0.05)。结论荷叶碱能改善小鼠高脂血症,且可能与增加脂酶活性、减少氧化应激及调控脂质合成与氧化代谢相关。     

法舒地尔抗动脉粥样硬化作用及其机制

目的观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对于载脂蛋白E基因敲除（apoE-KO）小鼠动脉粥样硬化（AS）不同时期的作用。方法实验包括两个治疗时间点：小鼠高脂饲料喂养同时或12周后给予法舒地尔（30mg·kg^-1·d^-1,100mg·kg^-1·d^-1）药物干预,药物溶于饮用水中,每个时间点设立无药物干预的小鼠为对照组（每组n=10）。采用病理学和显微超声（UBM）方法检查小鼠血管形态。结果实验结束时各组小鼠的体质量、血压、血脂无明显差异。UBM和组织学检查显示与对照组相比,法舒地尔可显著减少小鼠头臂干动脉早期AS斑块大小（P〈0．05）。而在延迟干预实验中,仅高剂量的法舒地尔（100mg·kg^-1·d^-1）可抑制斑块的进展,并且显示出更强地抑制斑块处巨噬细胞聚集的作用（似对照组,P〈0．05）。法舒地尔治疗（30mg·kg^-1·d^-1,100mg·kg^-1·d^-1）可减少小鼠胸主动脉组织原位活性氧（ROS）的产量（所有P均〈0．01）,而高剂量组（100mg·kg^-1·d^-1）小鼠胸主动脉的超氧阴离子含量低于对照组（P=0．07）。结论本实验运用新的显微超声方法发现阻断Rho激酶可抑制apoE-KO小鼠头臂干动脉AS的形成和进展,其作用独立于血压和血脂水平,可能与法舒地尔抗氧化应激和减少损伤处巨噬细胞聚集的作用有关。     

金线莲甲醇提取物降脂作用研究

目的研究金线莲甲醇提取物对高血脂大鼠血脂及肝酯水平的影响。方法采用高脂饲料喂养致大鼠高脂血症模型,给予不同剂量的金线莲甲醇提取物给药后治疗,实验设正常组,模型组,辛伐他汀组,非诺贝特组和金线莲总膏高、中、低剂量(1 000、500、250 mg·kg-1)组,分别测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和肝脏组织匀浆中TC和TG的含量,并做肝脏病理学观察。结果金线莲总膏500、1 000 mg·kg-1剂量组可明显降低大鼠血清TC、TG和LDL-C的水平,并能显著提高血清HDL-C含量,其中高剂量组效果最好。另外高剂量组可显著降低肝脏TC和TG的水平。结论金线莲甲醇提取物在高血脂大鼠模型中具有显著地降血脂和肝脂作用。     

红芪多糖对ob/ob小鼠肝脂质合成影响

目的 研究红芪多糖(HPS)对ob/ob小鼠肝组织固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)和肝脂质从头合成相关蛋白的影响.方法 按照体重将ob/ob雄性小鼠随机分为5组:模型组、阳性药对照组和高、中、低3个剂量实验组,每组10只;将同品系正常C57BL/6野生型雄性小鼠10只作为正常组.阳性药对照组灌胃硫辛酸30 mg...     

Effects of pine needle extract on differentiation of 3T3-L1 preadipocytes and obesity in high-fat diet fed rats

The present study examined the anti-obesity effects of pine needle extract (PNE) in 3T3-L1 preadipocytes and in vivo studies. PNE treatment suppressed both glycerol-3-phosphate dehydrogenase activity and expression of peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) gamma in cultured 3T3-L1 adipocytes. To investigate the effect of PNE on obesity in rats fed high-fat diet, four types of diet, which included a normal diet (ND), high-fat diet (HFD), ND+PNE, and HFD+PNE diets, were fed to the rats ad libitum for 6 weeks. The PNE supplement significantly decreased body weight gain and visceral fat mass compared to the HFD group. The total cholesterol, TG, and leptin levels in the plasma were significantly reduced by PNE supplementation compared with those of the HFD group. Histological findings in liver tissue showed that PNE supplementation alleviated steatosis induced by HFD. In conclusion, PNE treatment suppressed differentiation of 3T-L1 adipocytes, in part by down-regulating expression of PPAPgamma mRNA, and reduced adipose tissue mass, hyperlipidemia, and hepatic steatosis in obese rats fed HFD. Therefore, pine needle water extract may be considered for use in therapy to control obesity.     

Myeloid-specific SIRT1 Deletion Aggravates Hepatic Inflammation and Steatosis in High-fat Diet-fed Mice

Sirtuin 1 (SIRT1) is a mammalian NAD⁺-dependent protein deacetylase that regulates cellular metabolism and inflammatory response. The organ-specific deletion of SIRT1 induces local inflammation and insulin resistance in dietary and genetic obesity. Macrophage-mediated inflammation contributes to insulin resistance and metabolic syndrome, however, the macrophage-specific SIRT1 function in the context of obesity is largely unknown. C57/BL6 wild type (WT) or myeloid-specific SIRT1 knockout (KO) mice were fed a high-fat diet (HFD) or normal diet (ND) for 12 weeks. Metabolic parameters and markers of hepatic steatosis and inflammation in liver were compared in WT and KO mice. SIRT1 deletion enhanced HFD-induced changes on body and liver weight gain, and increased glucose and insulin resistance. In liver, SIRT1 deletion increased the acetylation, and enhanced HFD-induced nuclear translocation of nuclear factor kappa B (NF-κB), hepatic inflammation and macrophage infiltration. HFD-fed KO mice showed severe hepatic steatosis by activating lipogenic pathway through sterol regulatory element-binding protein 1 (SREBP-1), and hepatic fibrogenesis, as indicated by induction of connective tissue growth factor (CTGF), alpha-smooth muscle actin (α-SMA), and collagen secretion. Myeloid-specific deletion of SIRT1 stimulates obesity-induced inflammation and increases the risk of hepatic fibrosis. Targeted induction of macrophage SIRT1 may be a good therapy for alleviating inflammation-associated metabolic syndrome.     

Improvement of lipid metabolic profile by natural piperine in high-fat diet-fed mice

OBJECTIVE To investigate whether piperine exerts the lipid-lowing effect by facilitating reverse cholesterol transport(RCT) that is a pivotal pathway involved in the transport of excess cholesterol from peripheral tissues to the liver for excretion in the bile and eventually the feces.METHODS HepG2 cells were exposed to 0.6 mmol·L~(-1) FFA(palmitic acid/oleic acid, 1:2) for 24 h for induction of steatosis before treated with or without piperine for an additional 24 h. Atorvastatin was used as apositive control.Intracellular lipid deposition was analyzed by Oil Red O staining. Male ICR mice were randomly divided into 4 groups(n=15 each group): normal diet(ND) group, high-fat diet(HFD) group, ND-piperine group, HFD-piperine group. Piperine(25 mg · kg-1) was administered by gavage for 8 weeks. Then levels of triglyceride(TG),total cholesterol(TC), high-density lipoprotein cholesterol(HDL-C) and low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C)in the serum were determined using their test kits, respectively. Hematoxylin and eosin(H&E) staining was conducted to evaluate intrahepatic lipid accumulation. Western blotting and quantitative real time polymerase chain reaction(q RT-PCR) were performed to assess the expression of proteins and m RNAs correlated with RCT in the liver and small intestine, including ATP-binding cassette transporter A1(ABCA1), scavenger receptor class B type 1(SR-B1),ABCG1, ABCG5, ABCG8 and Niemann-Pick type C1 Like 1(NPC1 L1). RESULTS Piperine markedly attenuated hepatic lipid deposition caused by FFA treatment in Hep G2 cells. Intragastric administration of piperine significantly reduced the plasma TG, TC and LDL-C, and slightly increased HDL-C(nostatistical significance) in HFD-fed mice. H&E staining revealed that piperine significantly decreased hepatic lipid accumulation compared with HFD group. In the liver, expression of SR-B1 was significantly increased in HFD-piperine group compared with the HFD group. In the small intestine, piperine treatment significantly increased ABCG8 m RNA and protein expression in HFD-fed mice, but had no effect on other gene expressions. CONCLUSION Natural piperine improves lipid metabolic profile in HFD-fed mice by increasing expressions of SR-B1 in liver and ABCG8 in the small intestine.