一种新的吲哚咔唑类化合物(ZWM233)的体外抗肿瘤作用及机制探讨

目的探讨ZWM233体外对多种肿瘤细胞株的增殖抑制及对K562细胞的凋亡诱导作用。方法采用MTT法检测ZWM233对K562、HL-60、A549、HeLa及HCT-116等10种肿瘤细胞株的增殖抑制作用;流式细胞仪检测对K562细胞周期的影响;AnnexinV/PI双染法考察对K562细胞的凋亡诱导作用;Western blot检测K562细胞中凋亡相关蛋白bax、bcl-2、Caspase-3、Caspase-9及PARP的变化,同时检测蛋白激酶C(PKC)各亚型、GSK-3β、ERK1/2、JNK及其磷酸化水平的变化。结果 ZWM233体外能有效抑制多种肿瘤细胞株的增殖,其中对K562细胞作用明显,IC50为2.81μmol.L-1;流式细胞仪检测K562细胞被明显阻滞在G2/M期,并诱导其凋亡;Western blot结果显示ZWM233作用K562细胞24 h后,可明显下调抗凋亡蛋白bcl-2的表达,引起Caspase-9、Caspase-3及下游底物PARP的剪切,诱导K562细胞凋亡。Western blot检测结果进一步显示药物作用24 h后PKCδ的表达有所降低,其下游分子p-GSK-3β及p-ERK的表达水平降低,而p-JNK蛋白的表达水平升高。结论ZWM233体外能有效抑制K562细胞生长,并通过激活线粒体途径诱导其凋亡,其机制可能是通过下调PKCδ,进一步抑制p-GSK-3β及p-ERK1/2的表达来发挥凋亡诱导作用。     

红杉黄酮通过下调PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖侵袭等干细胞特性

目的：探究红杉黄酮影响胃癌细胞的分子机制。方法：通过梯度浓度红杉黄酮处理胃癌细胞系AGS细胞，再使用PI3K/AKT信号通路激活剂对细胞进行诱导。采用CCK-8检测红杉黄酮对AGS细胞的最佳抑制浓度及时间，使用平板克隆、Transwell、细胞划痕实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭能力变化。Western blot检测PI3K/AKT信号通路关键蛋白p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT。结果：红杉黄酮呈浓度依赖抑制AGS细胞，其半抑制浓度为0.5 mmol/L，最佳处理时间为48 h。红杉黄酮处理AGS细胞后，p-PI3K与p-AKT表达下调，AGS细胞增殖减少，迁移、侵袭能力降低；PI3K/AKT信号通路激活剂处理后，p-PI3K与p-AKT表达被部分逆转，增殖、迁移、侵袭能力降低也得到部分改善。结论：红杉黄酮通过失活PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭等恶性行为。     

PI3K/Akt信号通路在小檗碱联合人参皂苷Rg3诱导鼻咽癌细胞凋亡中的调控作用

目的研究PI3K/Akt信号通路在小檗碱联合人参皂苷Rg3诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用。方法RTCA法检测小檗碱联合人参皂苷Rg3对鼻咽癌CNE2、6-10B细胞增殖的影响;Hoechst 33342染色法、荧光双染流式细胞仪检测药物对CNE2细胞凋亡的影响;Western blot法检测PI3K/Akt信号通路关键蛋白及凋亡相关蛋白表达的变化。结果小檗碱联合人参皂苷Rg3可抑制鼻咽癌CNE2、6-10B细胞的增殖,诱导CNE2细胞的凋亡。与单独用药组相比,联合用药组细胞的PI3K/Akt信号通路关键蛋白PI3K p110α和p-Akt的表达明显下调(P<0.05)。加入PI3K/Akt信号通路的激活剂SC79后,小檗碱联合人参皂苷Rg3抑制CNE2细胞增殖和诱导细胞凋亡的效应降低,p-Akt、Survivin、PCNA及Bcl-2表达量增加,Bax的表达下降。结论小檗碱联合人参皂苷Rg3可通过PI3K/Akt信号通路发挥抑制鼻咽癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

AKT抑制剂NTQ1062与Olaparib在卵巢癌细胞中的联用研究

目的： 探讨AKT抑制剂NTQ1062和PARP抑制剂Olaparib的对卵巢癌细胞的联用增效可行性及作用机制。方法：研究NTQ1062和Olaparib联用对三种人卵巢癌细胞系（OVCAR-3、TOV-21G、A2780）增殖的影响,并通过Western blot技术检测PI3K/AKT信号通路及同源重组修复、DNA损伤修复相关蛋白的表达,最后使用Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡。结果：实验结果显示,NTQ1062对TOV-21G、A2780细胞株具有较强的增殖抑制作用,对OVCAR-3细胞增殖的抑制作用较弱,并且联合处理会增加三株卵巢癌细胞的增殖抑制作用;Western blot实验中NTQ1062增加卵巢癌细胞中AKT的磷酸化、抑制S6RP的磷酸化、增加γH2AX蛋白表达、降低RAD51蛋白表达,并发现联合处理具有协同作用;进一步研究发现,联合用药会降低TOV-21G细胞中BRCA1蛋白的表达,但对A2780细胞影响不显著;细胞凋亡实验中,NTQ1062增加细胞凋亡群,并且联合处理显著增加了细胞凋亡效果。结论：NTQ1062可抑制OVCAR-3、TOV-21G、A2780细胞增殖,与Olaparib联用具有协同作用,通过抑制PI3K/AKT通路、DNA损伤、减少同源重组修复、降低BRCA1蛋白表达、增加凋亡来发挥作用。本研究可为临床制订AKT抑制剂NTQ1062与PARP抑制剂联合应用于卵巢癌治疗策略提供理论和技术依据。     

二烯丙基二硫通过活性氧介导的JNK信号通路诱导人白血病K562细胞凋亡

目的研究二烯丙基二硫(DADS)诱导人白血病K562细胞凋亡的分子机制。方法应用MTT法检测细胞的活性;用流式细胞术检测细胞凋亡以及细胞内的活性氧(reac-tive oxygen species,ROS)水平;Western blot检测JNK以及磷酸化JNK的活化。结果 DADS能明显抑制K562细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性;5.0 mg.L-1DADS处理K562细胞,细胞内ROS水平在1 h后明显增加,8 h达到高峰,随后又开始下降。随着DADS剂量的增加,JNK的活性明显增强,在DADS处理K562细胞8 h后,磷酸化的JNK达到最高值,而在随后的4 h又明显降低。Sp600125和NAC能明显减少磷酸化JNK的表达和抑制DADS诱导的细胞凋亡。结论 ROS是DADS诱导K562细胞凋亡过程中JNK活化的有效调节剂,DADS通过ROS介导的JNK活化诱导人白血病K562细胞凋亡。     

芹菜素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的　研究芹菜素对子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期的HEC-1-B细胞,加入0、20、40和80 μmol/L的芹菜素,采用CCK-8法检测培养24、48和72 h后细胞的光密度,计算增殖抑制率。流式细胞术检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力变化。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）和磷酸化AKT（p-AKT）的表达水平。结果　20~80 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞的增殖明显受到抑制,细胞凋亡率升高,同时促凋亡蛋白Bax表达增高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降。0、5、10和20 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞侵袭和迁移能力下降。Western blot结果显示,40 μmol/L芹菜素能够下调PI3K/AKT通路蛋白p-PI3K和p-AKT的表达。结论　芹菜素能够抑制HEC-1-B细胞增殖、侵袭、迁移并促进其凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

去甲泽拉木醛通过调控细胞周期和自噬诱导的细胞凋亡抑制K562细胞生长的机制

目的研究去甲泽拉木醛(demethylzeylasteral,ZST93)在体外抑制慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞的增殖作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法以K562细胞为研究对象,采用CCK-8、细胞生长曲线和倒置显微镜检测ZST93对K562细胞增殖抑制作用;细胞转染和Western blot分析细胞自噬;PI染色、Annexin V-FITC/PI和流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果ZST93对K562细胞株的生长呈剂量和时间依赖性的抑制作用,IC₅₀值为2.59μmol·L^-1,使细胞周期阻滞于G₁期。自噬检测中发现ZST93可诱导GFP-LC3积累、LC3-Ⅰ转化为LC3-Ⅱ以及p62表达水平降低。ZST93通过调控自噬激活caspase-8,诱导外部凋亡信号通路,促使caspase-9、caspase-3和PARP剪切而被激活,针对caspase-3的抑制剂Z-DEVD-FMK能够降低ZST93诱导的K562细胞凋亡。结论ZST93可有效抑制K562细胞增殖,促进细胞周期阻滞、细胞凋亡和自噬激活,可能与自噬激活/caspase-8/caspase-3凋亡信号通路有关。     

莪术醇通过调控PI3K/AKT通路促进人肝癌HepG2细胞凋亡

目的探讨莪术醇促进人肝癌HepG2细胞凋亡的作用是否与PI3K/AKT通路有关。方法采用MTT法检测不同浓度(0、10、25、50、100μmol·L~(-1))莪术醇干预HepG2细胞24、48 h的增殖抑制率,Hoechst 33258染色法观察细胞核凋亡形态,Western blot法检测不同浓度莪术醇及PI3K/AKT通路阻断剂LY294002对HepG2细胞p-PI3K、p-AKT、Caspase-3蛋白表达的影响。结果莪术醇对HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,呈浓度依赖性,但干预48 h对比24 h差异无统计学意义;Hoechst 33258染色发现,莪术醇干预后,同一视野下细胞数目明显减少,细胞透亮,部分细胞核碎裂,核固缩,呈现典型的凋亡形态学特征;Western blot结果显示,莪术醇能显著降低细胞p-PI3K、p-AKT蛋白的表达,上调凋亡执行蛋白Caspase-3的表达,与LY294002联用后表现出良好的协同作用,对各蛋白表达的调控较单独用药更加明显。结论莪术醇能通过抑制PI3K/AKT通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。     

金雀异黄素对CIA大鼠成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡及其机制的研究

目的研究金雀异黄素(Genistein,Gen)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)动物模型CIA大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖、凋亡及其PI3K/AKT信号转导通路的影响。方法采用0、50、100、200μmol.L-1的Gen处理FLS 24、48、72 h,采用MTT法检测Gen对FLS增殖的影响;免疫印迹(Western blot)法检测Gen对CIA大鼠FLS凋亡蛋白bcl-2、bax表达的影响;West-ern blot法检测不同浓度的Gen处理后的CIA大鼠FLS中AKT和p-AKT表达情况。结果 50、100、200μmol.L-1的Gen均能抑制CIA大鼠FLS的增殖,且能够调节CIA大鼠FLS凋亡蛋白的表达,呈剂量依赖性关系;Gen对细胞中AKT蛋白表达无影响,不同浓度的Gen作用于FLS 72 h后p-AKT表达均有降低(P<0.05)且随Gen浓度的增加p-AKT表达逐渐降低。结论 Gen能够调节CIA大鼠FLS增殖与凋亡的平衡,其作用机制可能与下调PI3K/AKT信号传导通路的酪氨酸激酶,抑制AKT的磷酸化有关。     

Rac2在二烯丙基二硫诱导人白血病K562细胞凋亡中的作用

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病K562细胞凋亡的分子机制。方法 Real-time PCR检测Rac2基因mRNA水平;Western blot检测Rac2、JNK、p38等蛋白的表达;基因沉默Rac2蛋白的表达;流式细胞术检测凋亡细胞百分率以及细胞内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;琼脂糖凝胶电泳检测晚期凋亡。结果随着DADS质量浓度的增加,Rac2基因mRNA水平明显上调(P<0.05)。与未干扰组相比,siRac2RNA组凋亡率明显降低(P<0.05)。Rac2siRNA干扰的DADS诱导的K562细胞并未出现梯状条带。与未干扰组相比,siRac2RNA组在5.0,10.0和15.0mg·L-1 DADS作用于K562细胞8h后,荧光强度显著降低(P<0.05)。Western blot分析结果显示:与对照组相比,10.0和15.0mg·L-1 DADS作用于K562细胞24h后,蛋白Rac2的表达水平明显上调(P<0.05);用siRNA抑制Rac2蛋白的表达后,JNK1的表达显著降低,p38和磷酸化的p38的表达在Rac2干扰前后没有明显变化。结论 Rac2与DADS诱导K562细胞凋亡、活性氧的产生密切相关。活化的Rac2选择性地激活JNK信号通路而不是p38信号通路导致细胞凋亡。     

小檗碱通过破坏线粒体功能选择性诱导淋巴瘤细胞的凋亡

目的研究小檗碱(BBR)对T淋巴瘤细胞凋亡的影响及机制。方法正常T淋巴细胞、T淋巴瘤细胞、Jurkat细胞用BBR 0,10,20和40μmol·L^-1处理24 h,多柔比星(Dox)40μmol·L^-1为阳性对照;Jurkat p0细胞用BBR 0和40μmol·L^-1处理24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率,Seahorse XF24细胞代谢分析仪和H2DCFDA活性氧探针检测细胞氧消耗率(OCR)和活性氧(ROS)水平。CellTiter-Glo发光法细胞活力检测试剂盒检测细胞ATP水平,试剂盒测线粒体呼吸链复合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅳ和Ⅴ的活性。Western印迹法检测细胞内胱天蛋白酶3、Bcl-2、Bax、NF-κB抑制蛋白激酶α/β(IKKα/β)、磷酸化IKKα/β(p-IKKα/β)、NF-κB抑制因子α(IκBα)、p-IκBα和P65蛋白表达水平。结果BBR 40 mmol·L^-1明显增加T淋巴瘤细胞和Jurkat细胞凋亡率(P<0.01),胱天蛋白酶3和Bax蛋白表达水平显著上调(P<0.01),Bcl-2表达显著下调(P<0.01),但对正常T淋巴细胞的凋亡并无影响;BBR 40 mmol·L^-1明显降低Jurkat细胞的OCR及线粒体呼吸链复合物Ⅰ活性(P<0.01),增加ROS水平(P<0.01),降低ATP水平(P<0.01),但不影响线粒体缺陷型淋巴瘤Jurkat p0细胞呼吸链和凋亡;BBR 40μmol·L-1明显下调Jurkat细胞中NF-κB通路相关蛋白p-IKKα/β/IKKα/β、p-IκBα/IκBβ和核内P65表达(P<0.01)。结论BBR通过破坏线粒体功能选择性诱导淋巴瘤T细胞的凋亡,可能与抑制NF-κB通路有关。     

五灵胶囊有效成分对脂多糖诱导大鼠枯否细胞核因子的影响

目的观察五灵胶囊中有效成分对脂多糖（LPS）诱导大鼠枯否细胞核因子（NF-κB）的调节作用。方法分离大鼠肝细胞和枯否细胞,60μg·L~（-1）LPS诱导枯否细胞分泌促炎因子及NO。采用^125Ⅰ放射免疫测定法测定TNFα、IL-6、IL-8水平,比色法测定NO生成量,Western blot法检测ERK、p-ERK、NF-κB P50、NF-κB P65、p-NF-κB P65、IκB、p-IκB、IKK、P38、p-P38、CD14、Stat3蛋白的变化。结果五灵胶囊中的有效成分可显著抑制LPS诱导枯否细胞分泌TNF-α、IL-6、IL-8、NO的生成量。结论五灵胶囊有效成分能抑制枯否细胞释放促炎因子,是其治疗慢性肝炎的作用机制之一。     

姜黄素对亚急性肝内胆汁淤积大鼠肠内菌群变化的影响及其机制研究

目的： 研究姜黄素对亚急性肝内胆汁淤积（intrahepatic cholestasis,IHC）大鼠肠内菌群变化的影响,并分析相关机制。方法： 38只IHC大鼠随机分为模型组（9只）、姜黄素低剂量组（9只）、姜黄素高剂量组（10只）、阳性药物组（10只）,9只健康大鼠设置为对照组。姜黄素低、高剂量组姜黄素200、400 mg·kg^-1灌胃;阳性药物组熊去氧胆酸60 mg·kg^-1灌胃;对照组与疾病组等量生理盐水灌胃。均为每天一次;干预14 d。检测肝功能指标、胆红素代谢指标、炎症指标;qRT-PCR反应定量检测肠内菌群;Western blot检测肝组织核转录因子-κB（NF-κB）p65、p-NF-κB p65、核因子抑制蛋白（IκBα）、p-IκBα蛋白相对表达量。结果： 与疾病组比较,姜黄素低、高剂量组、阳性药物组碱性磷酸酶（ALP）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、总胆汁酸（TBA）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）均降低,白介素-10（IL-10）均升高,乳酸杆菌、双歧杆菌均增加,大肠杆菌均减少（P<0.05）;与姜黄素低剂量组比较,姜黄素高剂量组、阳性药物组ALP、ALT、AST、GGT、TBIL、DBIL、TBA、IL-1β、IL-6、TGF-β₁均降低,IL-10均升高,乳酸杆菌、双歧杆菌均增加,大肠杆菌均减少（P<0.05）。与疾病组比较,姜黄素低、高剂量组、阳性药物组p-NF-κB p65/NF-κB p65,p-IκBα/IκBα均降低（P<0.05）;与姜黄素低剂量组比较,姜黄素高剂量组、阳性药物组p-NF-κB p65/NF-κB p65,p-IκBα/IκBα均降低（P<0.05）。结论： 姜黄素可改善亚急性IHC模型大鼠肝功能、胆红素代谢、肠道菌群,减轻炎症反应及肝脏组织病理变化,且具有剂量依赖性,推测其作用机制与抑制NF-κB信号通路有关。     

五灵胶囊中部分化学成分对脂多糖诱导枯否细胞释放炎症因子的影响

目的观察五灵胶囊（Wuling capsules,WL）中部分化学成分对脂多糖（lipopolysaccharider,LPS）诱导大鼠原代枯否细胞（Kupffer cell,KC）表达ERK（extracellular signal-regulated kinase）和核因子（nuclear factor-kappa B,NF-κB）调节炎症因子和介质的作用。方法分离大鼠KC,采用60μg L 1 LPS诱导KC分泌炎症因子及NOS,ELISA测定TNF-α、IL-6、IL-8,比色法测定NOS,Western blot检测全蛋白ERK、p-ERK、NF-κBp50、NF-κBp65、p-NF-κBp65、p-IκK、p-IκB及核、浆蛋白NF-κBp65、p-NF-κBp65的变化。结果 WL明显下调LPS活化KC表达p-ERK、p-NF-κBp65、p-IκK、p-IκB蛋白,模拟WL混合成分（Mix）及6单体成分明显下调LPS活化KC表达p-ERK和p-NF-κBp65信号通路蛋白。各受试药物组均能降低核内p-NF-κBp65表达,减少p-NF-κBp65入核抑制炎性基因转录,降低活化KC过量分泌TNF-α、IL-6、IL-8和NOS。结论 WL中五味子醇甲、五味子乙素、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、柴胡皂苷D是干预LPS诱导KC表达ERK、NF-κB信号通路蛋白,抑制炎性因子与介质基因转录而减少TNF-α、IL-6、IL-8和NOS分泌的有效成分。     

Exendin-4 exhibits a tumour suppressor effect in SKOVR-3 and OVACR-3 ovarian cancer cells lines by the activation of SIRT1 and inhibition of NF-κB

This study investigated if EX-527 has an anti-tumour effect in SKOV-3 and OVCAR-3 ovarian cancer (OC) cell lines and if this effect involves the SIRT1/NF-κB axis. Cells were cultured in the presence or absence of EX-527, a selective SIRT-1 inhibitor. Exendin-4 significantly induced cell death in both cell lines and inhibited cell migration and invasion. Also, it decreased protein levels of Bcl-2, MMP-9, and ICAM-1 and increased those of Bax, cyclin D1 and cleaved caspase-3. Mechanistically, Exendin-4 increased the activity and nuclear accumulation of SIRT1 and decreased nuclear levels of NF-κB p65; acetylated levels of NF-κB p65, and cytoplasmic levels of p-IKKα and p-IκBα. EX-527 partially ameliorated the effect of Exendin-4 on cell death, migration, and invasion, as well as on the expression of Bcl-2, MMP-9, Bax, cleaved caspase-3 and ICAM-1. In addition, EX-527 did not affect the levels of nuclear p65 and p-p65 (Ser536); p-IκBα (Ser32) and p-IKKαβ. In conclusion, Exendin-4 can suppress OC by inhibiting NF-kB through SIRT1 dependent and independent mechanisms.     

Dioscin reduces lipopolysaccharide-induced inflammatory liver injury via regulating TLR4/MyD88 signal pathway

We previously reported the effects of dioscin against carbon tetrachloride-, acetaminophen- and alcohol-induced acute liver damage. However, its effect on lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammatory liver injury remains unknown. In the present work, liver injury in mice and rats was induced by LPS, and dioscin was intragastrically administered for 7 days. In vitro, the AML-12 cells and HepG-2 cells were treated with LPS after dioscin treatment. The results showed that dioscin not only markedly reduced serum ALT, AST levels and relative liver weights, but also restored cell injury caused by LPS. In mechanism study, dioscin significantly attenuated inflammation through down-regulating the levels of toll-like receptor (TLR) 4, myeloid differentiation factor 88 (MyD88), interleukin-1 receptor-associated kinase 1 (IRAK1), tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 (TRAF6), phosphorylated inhibitor of nuclear factor κB kinase (p-IKK), phosphorylated inhibitor of nuclear factor κB alpha (p-IκBα), phosphorylated nuclear factor κB p65 (p-NF-κB p65), high-mobility group protein 1 (HMGB-1), interleukin (IL)-1, IL-6 and tumor necrosis factor-α (TNF-α). TLR4 overexpression was also decreased by dioscin, leading to the markedly decreased levels of MyD88, IRAK1, TRAF6, p-IKK, p-IκBα, p-NF-κB p65 and HMGB-1. Suppression of MyD88 by ST2825 eliminated the inhibitory effects of dioscin on the levels of IRAK1, TRAF6, p-IKK, p-IκBα, p-NF-κB p65, HMGB-1, IL-1β, IL-6 and TNF-α. Our results suggested that dioscin exhibited protective effect against LPS-induced liver injury via altering TLR4/MyD88 pathway, which should be developed as one potent candidate for the treatment of acute inflammatory liver injury in the future.     

PCSK9抑制剂在ox-LDL诱导HUVECs损伤中的保护作用研究

目的探讨人类枯草溶菌素转化酶9(PCSK9)抑制剂对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)导致的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护机制。方法对数生长期HUVECs细胞分为Control组(正常培养),ox-LDL组(50 mg/Lox-LDL诱导24 h),低、中、高剂量PCSK9抑制剂组(分别用5、10、20μmol/L PCSK9抑制剂预处理24 h,再加入50 mg/Lox-LDL诱导24 h)。采用CCK-8法检测各组细胞活性并计算细胞存活率,实时荧光定量PCR(q PCR)和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞或细胞培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-6和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1的转录和分泌水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase-3)和核因子(NF)-κB通路相关蛋白的表达水平。结果与Control组比较,ox-LDL组细胞存活率下降,TNF-α、IL-6和MCP-1转录及分泌水平升高,细胞凋亡率升高,促凋亡蛋白Bax、Cleaved-Caspas...     

细粒棘球蚴囊液通过Toll样受体2调节细胞因子分泌的研究

目的 探讨细粒棘球蚴囊液(EgCF)是否通过刺激巨噬细胞高表达Toll样受体2(TLR2),进而调节细胞因子的表达.方法 培养获得腹腔巨噬细胞,用EgCF刺激小鼠腹腔巨噬细胞,用实时荧光聚合酶链反应检测不同时间点TLR2 mRNA的表达水平,用Western Blot法检测刺激不同时间TLR2信号通路中磷酸化的P38丝...     

熵权法结合星点设计-效应面法优化祛湿清肺方提取工艺及体外抗炎活性评价

目的:优化祛湿清肺方提取工艺,并对祛湿清肺方提取液进行体外抗炎活性评价。方法:以绿原酸、虎杖苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、汉黄芩素、大黄素成分含量及得膏率为指标,加水量及提取时间为考察因素,采用熵权法结合星点设计-效应面法对祛湿清肺方提取工艺进行优化。以脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞(RAW_264.7)为炎症模型,酶联免疫吸附法测定白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、一氧化氮(NO)的含量,蛋白质印迹法检测磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶(phosphorylated inhibitor of NF-κB kinase,p-IKK)、磷酸化NF-κB p65(phosphorylated NF-κB p65,p-NF-κB p65)、NF-κB抑制蛋白α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)蛋白表达水平变化,评价祛湿清肺方提取液抗炎活性。结果:星点设计-效应面法优化所得的最佳提取工艺为加水量13倍,提取2次,每次提取时间105 min。祛湿清肺方提取液能降低IL-6、IL-1β、TNF-α、NO的含量,抑制p-IKK、p-NF-κB p65蛋白表达,促进IκBα蛋白表达,具有较好的体外抗炎活性。结论:熵权法结合星点设计-效应面法优选的祛湿清肺方提取工艺稳定可行,所得提取液具有较好的抗炎活性,为祛湿清肺方开发和现代化研究提供参考奠定基础。