红景天苷对力达霉素诱导人二倍体成纤维细胞衰老的干预作用

目的:研究红景天苷对力达霉素导致DNA损伤后所诱导的细胞衰老的调节作用。方法:采用MTT法测定药物对人胚肺二倍体成纤维细胞2BS活力的影响;衰老相关的β-半乳糖苷酶染色法观察细胞衰老形态变化;流式细胞术检测细胞周期分布以及γ-H2AX蛋白表达变化;蛋白免疫印迹技术观察p53和p21蛋白表达水平变化。结果:较低浓度(低于0.1 nmol.L-1)力达霉素能够抑制2BS细胞增殖,诱导β-半乳糖苷酶染色率显著升高和G2/M期阻滞,并使DNA损伤相关的γ-H2AX蛋白以及p53和p21蛋白表达升高。红景天苷能够显著干预力达霉素诱导的上述细胞衰老样表型及相关分子信号变化。结论:红景天苷能够抑制基因毒药物所致DNA损伤及其诱导的细胞衰老。     

扇贝多肽对抗UVB辐照所致小鼠胸腺淋巴细胞凋亡的研究

目的研究扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐照损伤小鼠胸腺淋巴细胞的保护作用。方法以UVB辐照制备损伤模型,预先给予PCF,应用透视电镜观察细胞超微结构的变化;免疫细胞化学检测细胞p53,Bcl-2,Bax基因蛋白的表达;原位杂交检测细胞P38mRNA的基因表达。结果UVB辐照引起小鼠胸腺淋巴细胞凋亡,PCF能明显减轻UVB辐射损伤引起的细胞超微结构改变。PCF还能抑制突变型p53蛋白和促凋亡蛋白Bax的表达,增强凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达以及抑制P38 mRNA基因的表达。结论PCF对UVB辐照的体外小鼠胸腺淋巴细胞具有明显的保护作用。     

吴茱萸碱在诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡过程中对SIRT1和p53蛋白的影响

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)在诱导A375-S2细胞凋亡过程中对SIRT1和p53蛋白表达的调控。方法电镜观察吴茱萸碱诱导细胞凋亡过程中细胞形态的变化。Western blot方法分析药物作用后对SIRT1蛋白和p53及其下游p21蛋白表达的影响。结果经15μmol.L-1吴茱萸碱处理24 h的A375-S2细胞表现出典型的凋亡特征,即细胞表面微绒毛消失、胞质空泡化、染色质浓集、边聚。在吴茱萸碱诱导A375-S2细胞凋亡过程中,SIRT1蛋白的表达下降,p53和p-p53的表达有所上升,其下游p21蛋白也被激活。结论在吴茱萸碱诱导的A375-S2细胞凋亡中,p53及其下游p21蛋白被活化,SIRT1蛋白表达被下调。     

八氯腺苷对 A549和 H1299细胞周期的影响及机制探讨

目的：八氯腺苷对肺癌细胞株A549和H1299细胞增殖及细胞周期的影响及其机制探讨。方法 A549和 H1299经10．0μmol/L 八氯腺苷处理后,MTT法检测细胞生长和增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测DNA-PKcs、γ-H2AX、Ku80、Ku70及 Topo Ⅰ的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,用10．0μmol/L八氯腺苷分别处理 A549、H1299细胞24、48、72 h后,A549、H1299细胞生长被抑制;流式细胞分析则显示,A549、H1299细胞G2/M 期细胞数增多;Western blot结果表明,γ-H2AX的表达均增加,DNA-PKcs蛋白的表达均下降,而Ku80、Ku70的表达未见明显变化;经八氯腺苷处理后Topo Ⅰ蛋白在A549细胞中的表达逐渐增加,而在 H1299细胞中的表达却逐渐下降。结论八氯腺苷可抑制A549和 H1299细胞生长,诱导细胞发生G2/M 期阻滞,其机制可能与DNA-PKcs表达下调有关。在A549细胞中Topo Ⅰ可能通过p53依赖途径介导DNA损伤修复,从而引发对细胞的毒性作用;而在p53缺失的H1299细胞中可能是通过其它途径调控细胞周期。     

环磷酰胺衍生物SLXM-2对小鼠肝癌H_（22）细胞的DNA损伤作用

化合物SLXM-2是一种环磷酰胺衍生物,前期研究已经证实其具有良好的肿瘤抑制作用,并具有较低的毒副作用。但是其作用机制尤其是对细胞DNA的损伤作用仍不清楚。本研究旨在评价SLXM-2对肝癌H22腹水小鼠的生命延长作用与DNA损伤的关系,并探讨可能的分子机制。实验结果证实,SLXM-2能够显著提高肝癌H22腹水小鼠的生命延长率（P〈0.05）。进一步实验表明,SLXM-2能够造成肝癌H22细胞DNA损伤,显著上调γH2AX（Ser139）,p-Chk1（Ser296）,p-Chk2（Thr68）,p-p53（Ser15）,p-p53（Ser20）和p21的蛋白表达,并显著下调p-ATR（Ser428）和p-ATM（Ser1981）的表达（P〈0.05）。总之,SLXM-2对肝癌H22细胞具有显著的抑制作用,分子机制与其能够造成肿瘤细胞DNA损伤有关。     

3种中药对中波紫外线辐射HaCaT细胞的干预及其机制

目的观察中波紫外线(UVB)辐射后HaCaT细胞光产物胸腺嘧啶二聚体(cyclobutanepyrimidine dimers,CPDs)的生成和清除情况及3种中药活性成分:黄芩(baikal skullcap root,BSR)、川芎(szechwan lovge rhizome,SLR)和表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对该过程的干预情况并探讨上述药物对相关调控分子的作用机制。方法以含10%小牛血清的RMPI1640培养基培养永生化人角质形成细胞株HaCaT细胞,根据实验设计定时定量照射培养细胞并预先或UVB辐射后加入相关药物进行干预处理。免疫组织化学法检测CPDs;RT-PCR法检测受试各组细胞p53和PCNA基因mRNA表达;Western blot法检测受试各组细胞p53和PCNA蛋白表达。结果HaCaT细胞损伤程度随照光剂量加大而加重;30mJ/cm2UVB照射后细胞CPDs生成量在辐射后0.5h左右达到高峰,同时细胞也开始清除CPDs,辐射后4h内清除速率较快,4h后清除速率逐渐降低,照光前加入黄芩溶液,可以减少CPDs生成,照光后即刻加入川芎和EGCG溶液,可加快CPDs清除(P<0.05);UVB照射后可明显增加HaCaT细胞中p53和PCNA mRNA及蛋白表达水平,药物可在不同程度上下调上述基因及蛋白表达。结论UVB辐射对HaCaT细胞的损伤程度呈剂量依赖性并导致DNA损伤而产生光产物CPDs,细胞自身有清除CPDs的能力,所试3种中药均可减少光产物水平;这种光保护作用可能与受试中药影响p53和PCNA基因mR-NA和蛋白表达有关。     

DNA损伤标志物γ-H2AX及其在毒性测试应用中的研究进展

当DNA受到攻击尤其是发生DNA双链断裂(DSB)后,组蛋白H2AX的139位丝氨酸迅速磷酸化,生成磷酸化H2AX即γ-H2AX.γ-H2AX在DSB位点大量聚集并形成焦点,参与DNA的损伤修复,且γ-H2AX焦点数与DSB数量成正比.目前研究表明,γ-H2AX是表征DNA损伤的特异性生物标志物,可作为基因毒性的特异性...     

葛根素通过神经酰胺通路抑制UVB诱导的HaCaT细胞DNA损伤

研究葛根素(puerarin,PUE)对UVB诱导的HaCaT细胞DNA损伤的影响和作用机制。葛根素预处理细胞以30 mJ.cm2 UVB照射,24 h后以彗星电泳实验检测DNA损伤,薄层色谱法和气相色谱法检测神经酰胺,流式细胞术检测细胞内游离钙离子,Western blotting法检测p38蛋白磷酸化水平。结果显示,UVB模型组细胞DNA损伤、细胞内游离钙离子、神经酰胺、磷酸化p38蛋白显著增加;与UVB模型组相比,各葛根素预处理组的DNA损伤、细胞内游离钙离子、神经酰胺、磷酸化p38蛋白均减少。结果表明,葛根素首先抑制神经酰胺蓄积,阻止下游的细胞内钙离子升高和p38 MAPK通路激活,从而减轻UVB诱导的HaCaT细胞DNA损伤。     

干扰素γ对肺腺癌细胞株中CDA1表达的影响

目的 观察加人干扰素γ(IFN-γ)前后细胞自身分化抗原1(CDA1)在肺腺癌细胞株SPC-A1中的表达,探讨CDA1与p53、p21、周期素D1在SPC-A1中的表达的相关性.方法 运用RT-PCR及蛋白印迹法检测加入IFN-γ前和1 h及24 h后CDA1、p53、p21、周期素D1 mRNA及蛋白质的表达.结果 肺腺癌细胞株SPC-A1中加入IFN-γ 1 h后,CDA1 mRNA及蛋白的表达均增多,周期素D1 mRNA的表达出现减少,而p53、p21的表达无明显改变;24 h后,CDA1 mRNA及蛋白的表达进一步增加,p53、p21的表达明显增加,而周期素D1 mRNA及蛋白水平显著减少.结论 CDA1是p53的上游基因,可能有抑癌基因的作用,对p35、p21及周期素D1的表达有调控作用.     

一枝黄花提取物下调cyclinA1/CDK2通路抑制肝癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的 研究一枝黄花总皂苷与总黄酮（SDSF）对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法 体外培养HepG2细胞，给予不同浓度（0、10、20、40μg·mL-1）SDSF处理24 h后，采用MTT法、克隆形成实验检测细胞的增殖活力；流式细胞术检测细胞周期；划痕实验、transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭能力；q RT-PCR法、Western blotting法检测细胞周期蛋白（cyclin）A1、周期蛋白依赖性激酶（CDK）2、γ-H2AX、p-p53、基质金属蛋白酶（MMP）-2与MMP-9的水平变化。结果 与0μg·mL-1 SDSF组相比，SDSF呈剂量依赖性趋势地抑制HepG2细胞增殖活力，将HepG2细胞周期阻滞于S期，以及显著抑制HepG2细胞的迁移与侵袭能力（P <0.01）。SDSF还可显著降低细胞内cyclinA1、CDK2、MMP-2、MMP-9蛋白表达，增加γ-H2AX、p-p53蛋白表达（P <0.05）。结论 SDSF能显著抑制HepG2细胞的增殖与侵袭转移，其机制可能与下调cyclinA1、CDK2、MMP-2、MMP-9水...     

百里醌对人胶质瘤细胞凋亡的作用及其机制研究

目的 分析百里醌对胶质瘤U87细胞生长抑制和凋亡诱导的功能.方法 体外胶质瘤细胞株U87以及人星形胶质细胞株NHA中添加不同浓度百里醌后,CCK-8法检测细胞活力;克隆形成实验观察U87细胞形成细胞克隆的能力;流式细胞术检测细胞周期和ROS含量;Hoechst染色法和流式细胞术测定细胞凋亡;流式细胞术(JC-1荧光染色...     

p38MAPK介导的Fas/FasL凋亡通路在缺血性脑损伤中的作用研究

目的探讨p38MAPK介导的Fas/FasL凋亡通路在大鼠缺血性脑损伤中的作用。方法①制作大鼠全脑缺血模型,免疫印迹法检测假手术组、脑缺血复灌6 h、12 h、1 d、3 d组p-p38MAPK、p38MAPK蛋白表达。②免疫印迹法检测假手术组、缺血复灌组、溶剂对照组和SB203580组p-p38MAPK、p38MAPK、FasL、Fas和Caspase-3蛋白表达。结果①与假手术组相比,脑缺血再灌注6 h、12 h、1 d、3 d组p-p38MAPK蛋白表达水平逐渐升高,于1 d达高峰(P均<0.05)。②与缺血复灌组和溶剂对照组相比,SB203580组p-p38MAPK、FasL和Caspase-3表达水平显著降低(P均<0.05)。结论 p38MAPK介导的Fas/FasL凋亡通路在缺血性脑损伤中发挥了重要作用。     

Melatonin Induces Apoptotic Cell Death via p53 in LNCaP Cells

In this study, we examined whether melatonin promotes apoptotic cell death via p53 in prostate LNCaP cells. Melatonin treatment significantly curtailed the growth of LNCaP cells in a dose- and time-dependent manner. Melatonin treatment (0 to 3 mM) induced the fragmentation of poly(ADP-ribose) polymerase (PARP) and activation of caspase-3, caspase-8, and caspase-9. Moreover, melatonin markedly activated Bax expression and decreased Bcl-2 expression in dose increments. To investigate p53 and p21 expression, LNCaP cells were treated with 0 to 3 mM melatonin. Melatonin increased the expressions of p53, p21, and p27. Treatment with mitogen-activated protein kinase (MAPK) inhibitors, PD98059 (ERK inhibitor), SP600125 (JNK inhibitor) and SB202190 (p38 inhibitor), confirmed that the melatonin-induced apoptosis was p21-dependent, but ERK-independent. With the co-treatment of PD98059 and melatonin, the expression of p-p53, p21, and MDM2 did not decrease. These effects were opposite to the expression of p-p53, p21, and MDM2 observed with SP600125 and SB202190 treatments. Together, these results suggest that p53-dependent induction of JNK/p38 MAPK directly participates in apoptosis induced by melatonin.     

Induction of cell cycle arrest by GL331 via triggering an ATM-dependent DNA damage response in HepG2 cells

GL331, a topoisomerase II inhibitor, has been found to trigger DNA damage response (DDR) to induce cell cycle arrest. However, the underlying mechanism has not yet been fully understood. This study investigated the molecular mechanism involved in the GL331-induced cell cycle arrest via DDR in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells. As a result, GL331 could induce S arrest and up-regulate the phosphorylation of the histone H2AX variant (γ-H2AX). Ataxia telangiectasia mutated protein kinase (ATM) was activated by GL331 through its autophosphorylation at Ser1981, which led to the activation of DNA damage signaling pathways including p53/p21 and Chk2/Cdc25A cascades. The DNA damage cascades triggered by GL331 finally induced the inactivation of cyclin A/Cdk2 complexes to some extent. These phenomena could be reversed by ATM siRNA, followed by a partial disruption of S arrest. The present results suggested that the S arrest induced by GL331 via DDR was in an ATM-dependent manner to some degree.     

Ultravlolet-B induced expression of hypoxia-inducible factor 1α, transferrin receptor through EGFR/PI3K/AKT/DEC1 pathway

The aim of this research was to explore the effects and signaling pathway of ultraviolet-B (UVB) irradiation on the expression of hypoxia-inducible factor 1α (HIF-1α) and transferrin receptor (TfR). HIF-1α protein was measured by Western blot method. Expressions of epidermal growth factor receptor (EGFR), phosphor-EGF-R and TfR after UVB irradiation were determined with flow cytometry. After UVB irradiation, mRNA levels of HIF-1α and TfR were detected by real time-PCR. Results showed that compared with control groups, UVB was able to induce HIF1α and TfR protein expression in a dose-and time-dependent manner in HaCat cells (P < 0.05). TfR mRNA was expressed in a dose-dependent manner and reached a peak at the 8th hour in HaCat cells (P < 0.05) whereas HIF-1α mRNA expression was not affected by UVB treatment (P>0.05). The EGFR/PI3K/AKT signaling pathway was required for the induction of HIF-1α and TfR expression induced by UVB. UVB induced activation of EGFR in HaCat cells and EGFR regulated expression of TfR and HIF-1α. EGFR (−/−) MEF did not increase the HIF1 expression following UVB irradiation (P>0.05). In contrast, EGFR (+/+) MEF strongly enhanced HIF1α expression after UVB irradiation (P < 0.05). PD153035, a selective inhibitor of EGFR tyrosine kinase, inhibited the TfR protein expression in UVB-treated cells in a dose-dependent manner (P < 0.05). PI3K inhibitors, LY294002 and wortmannin, inhibited HIF-1α and TfR expressions induced by UVB (P < 0.05). The DEC1 (−/−) HaCat cells did not increase their TfR and HIF-1α expressions following UVB irradiation (P>0.05). In contrast, DEC1 (+/+) HaCat cells strongly enhanced TfR and HIF-1α protein expression after UVB irradiation (P < 0.05). We conclude that UVB induces TfR and HIF-1α expressions via EGFR/PI3K/AKT/DEC1 signaling pathway.