突变黑曲霉高产β-葡萄糖苷酶的培养基优化

对实验室筛选出产β- 葡萄糖苷酶的黑曲霉进行辐射诱变处理得到高产酶突变菌株,同时采用单因素和正交实验对黑曲霉产酶培养基进行优化研究.结果表明:经过X射线辐射诱变的黑曲霉产的β- 葡萄糖苷酶活力提高了18.86 U/mL.该菌株最适宜产酶的培养基为(质量分数%): 麸皮与玉米粉(1∶1)1.5、 (NH 4 ) 2 SO 4 0.15、 KH 2 PO 4 0.2、吐温80 0.1,所得酶活力最大可达到59.86 U/mL.     

单宁酶和β-葡萄糖苷酶的共固定化

比较了海藻酸钠和壳聚糖两种栽体及不同固定化方法对单宁酶和β-葡萄糖苷酶的共固定化效果，结果表明以海藻酸钠为载体，采用交联-包埋-交联固定化方法的效果最佳。对共固定化条件进行了优化，可使单宁酶和β-葡萄糖苷酶的活力回收率分别达67．3％和46．0％。     

β-葡萄糖苷酶活性测定方法的研究进展

介绍了葡萄和葡萄酒中β-葡萄糖苷酶的研究概况，理化性质、酶活测定方法，以及不同来源的酶活检测的研究概况，并且经过分析提出以对硝基苯基β-D-葡萄糖苷（pNPG）为底物检测葡萄浆果中的β-葡萄糖苷酶酶活的关键影响因素：粗酶液的制备、酶最适反应温度、最佳反应时间、缓冲液类型和pH及最佳吸收波长。     

β-葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的实验研究

目的观察β-葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷对膀胱癌EJ细胞生长及凋亡的影响,探讨β-葡萄糖苷酶/苦杏仁苷酶解前药系统用于膀胱癌治疗的应用前景。方法用不同浓度的苦杏仁苷与β-葡萄糖苷酶共同作用于膀胱癌EJ细胞株,用MTT法检测细胞的增殖活性,倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率与凋亡周期。结果与单纯用苦杏仁苷作用相比,加入β-葡萄糖苷酶后膀胱癌EJ细胞的增殖明显受限,增值抑制率可以达到前者的8.19倍;倒置显微镜和透射电镜观察到肿瘤细胞呈现凋亡的表现,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率增加、多数肿瘤细胞阻滞于S期,这些改变随着苦杏仁苷浓度的增加而明显增强。结论β-葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷后能够明显抑制EJ细胞的增长,其作用机制可能与将肿瘤细胞阻滞于S期而诱导其凋亡有关;β-葡萄糖苷酶/苦杏仁苷酶解前药系统可能成为治疗膀胱癌的有效策略。     

L-氨基酰化酶产生菌的筛选及其固态发酵工艺

从13株米曲霉菌株中筛选到一株产氨基酰化酶活力较高的米曲霉（Aspergillus oryzae）W0607，以米曲霉w0607为生产菌固态发酵生产氨基酰化酶，较适的培养基组成和培养条件为；麸皮7．0g，豆饼粉3．0g，蛋白胨0．3g，水11mL，PH值6．5，发酵温度28℃，发酵周期约48h．在此条件下，米曲霉W0607的氨基酰化酶产率为400u／g左右．     

产β-葡聚糖酶淀粉液化芽孢杆菌的选育

通过对一株淀粉液化芽孢杆菌进行紫外和^60Co逐级诱变，使该菌株产β-葡聚糖酶酶活从80U／mL提高到105U／mL；对突变株进行多次单菌落分离及传代，对其传代稳定性的研究表明：该菌株产酶性能稳定；在5L发酵罐中突变株的产酶水平比摇瓶要高，可达120U／mL，产酶周期比摇瓶缩短了15h．     

精浆中果糖、α-1,4-葡萄糖苷酶、总唾液酸与精子活力、密度的关系

a－1，4－葡萄糖苷酶可作用于精浆中多糖分子内的。a-，4－葡萄糖苷键，将葡萄糖降解，后者可对精子的代谢和运动供能[1]。此酶由附睾分泌，是附睾的特异性酶和标记酶，因而此负的活性在一定程度上可反映附革的功能状态[2]。唾液酸（SA）糖蛋白为一种带负电荷的多羟基酸性单糖，绝大部分由附睾上皮分泌，与精子在附睾内的成熟有关，精子膜表面唾液酸糖蛋白与受精过程中精卵识别关系重大[2]。为了解附来功能，探讨精子活力、密度与糖浆中果糖、a－1，4-葡萄糖苷酶活力、总唾液酸的关系，我们测定了精子密度、活动力、精浆果糖、a－1，4-葡萄…     

β-葡萄糖醛酸苷酶基因转染人膀胱癌细胞的生物学观察

β 葡萄糖醛酸苷酶 (β ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ,βＧ)是一种酸性水解酶 ,参与机体的生理、病理及药物代谢等过程 ,能特异性水解葡萄糖醛酸苷的糖苷键 ,释放出葡萄糖醛酸和配基。以往关于 βＧ的研究多集中在抗体导向酶 前体药疗法的应用研究方面[1,2 ] ,近来有将 βＧ基因引入肿瘤基因治疗系统的报道[3] 。我们尝试将βＧ基因导入靶细胞 ,并对转染的人膀胱癌细胞进行观察 ,现报告如下。材料与方法　利用克隆载体ｐＧＥＭ4 βＧ(其ＥｃｏＲＩ位点插入 2 .2ｋｂ的人 βＧ ｃＤＮＡ片段 )和真核表达载体ｐｃＤ ＮＡ3 .1,应用基因操作技术…     

有机相酶促合成N-月桂酰-β-氨基丙腈

以月桂酸甲酯和β－氨基丙腈为原料，在有机相中经脂肪酶催化合成N－月桂酰-β-氨基丙腈（LAP）。在比较所用脂肪酶的催化活性的基础上，详细探讨了固定化脂肪酶Candida antarctica（南极洲假丝酵母）CAL－2催化该反应的影响因素。经筛选，适宜的反应条件为：70℃，n（β－氨基丙腈）：n（月桂酸甲酯）＝1：1，底物质量浓度为35g/L，加酶量为200U/g(以氨基丙腈的质量计），反应体系初始加水量为3％腈重。在此实验条件下反应24h后，β－氨基丙腈的最高转化率为96.8%。     

黑曲霉产α-转移葡萄糖苷酶固态发酵条件优化

摘要：对产α-转移葡萄糖苷酶的黑曲霉U菌株固态发酵条件进行了优化．结果表明：麸皮和水的质量比为1：1较好，35℃培养48h时产酶量及酶活较高；U菌株生长的最适pH值为6．0；麸皮中的碳源和氮源可以满足该菌株产酶的需要，可以不外加碳源和氮源．     

氮离子束诱变提高黄嘌呤氧化酶产生菌产酶能力

通过氮离子束诱变节杆菌(Arthrobacter sp.g-1984)筛选到黄嘌呤氧化酶高产菌株X7,产酶活力为24.49 U/g,是出发株产酶活力(8.81 U/g)的2.78倍,经发酵条件优化后,产酶活力达到36.67 U/g,是出发菌株产酶活力的4.16倍,产酶高峰缩短了21 h.对细菌黄嘌呤氧化酶酶学性质进行了初步研究,其最适反应条件为37℃、pH 6.5、Fe2 对酶活力有较强的抑制作用,EDTA对酶活力有明显的激活作用.     

β-葡萄糖醛酸酶前药对βG基因转染人胆管癌细胞的作用

目的　探讨βG基因/β-葡萄糖醛酸苷酶(β-G)前体药系统对人胆管癌细胞株QBC939的抑制作用。方法　构建真核表达的逆转录病毒载体pDOR-βG,利用阳离子脂质体将其转入人胆管癌细胞株QBC939,检测其表达及β-G前体药对转基因细胞的增殖阻断作用。结果　经G418筛选后的阳性细胞克隆,为高表达βG的胆管癌模型。免疫组织化学、免疫荧光、原位杂交等证实了pDOR-βG在转基因细胞中的表达;四唑蓝（MTT）比色试验测定β-G前体药对QBC939-pDOR-βG细胞有显著的抑制增殖作用,β-G前体药浓度为0.292g/L时,其抑制率为67.6%。QBC939-βG组与对照组比较差异有非常显著性（P＜0.01）。结论　βG基因/β-G前体药系统是一种新的自杀基因系统,可作为胆道肿瘤基因治疗的一种新方法。     

果胶酶产生菌的选育

本试验筛选到一株适于使苹果汁澄清的果胶酶产生黑曲菌No.07,应用物理因素及化学因素对No.07进行处理,从白色突变菌落中获得一高产株CL—8501,对CL—8501的培养基及发酵条件进行了优化,在优化的培养基及较适条件下,CL—8501产酶达631.6单位/毫升,产量此出发株No.07提高约105倍。     

产纤溶酶米曲霉的筛选及诱变育种

利用自己设计的筛选方法，从不同的酿造曲样中筛选出1株产纤溶酶酶活较高的米曲霉菌株SA-6，其产纤溶酶酶活为25U／mL。SA-6经过紫外线、^60Co和亚硝基胍诱变，筛选得到突变株NA-25，其产酶酶活为63U／mL，是出发菌株SA-6的2．52倍。突变株NA-25的发酵性状改变，其产纤溶酶的高峰比出发菌株迟了约10h。     

精浆内脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶与α-葡萄糖苷酶的相关性研究

目的分析脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶(L-PGDS)与精浆其他参数之间的关系,探讨L-PGDS在男性生殖系统中的作用。方法分析92份精液中的精子密度、精子活力、L-PGDS浓度、酸性磷酸酶活力以及α-葡萄糖苷酶活力。依据精子密度,将标本分为3组:正常组(精子密度>20×106/ml)、寡精子组(精子密度<20×106/ml)及无精子组(精子密度为0)。彩色精子质量分析系统测定精子密度及活力,双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测精浆内的L-PGDS浓度,分光光度计测定α-葡萄糖苷酶活力。结果正常组、寡精子组以及无精子组患者精浆L-PGDS浓度依次降低,差异显著(P<0.001)。L-PGDS的浓度与α-葡萄糖苷酶、精子密度及精子活力呈正相关,相关系数(r)分别为0.426、0.813和0.380。结论精浆L-PGDS浓度可作为少精子症的辅助诊断指标。     

抗-CEA单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物特异性激活苦杏仁苷对LoVo细胞的细胞毒作用研究

目的探讨一种新的前药——苦杏仁苷在抗体导向酶解前药疗法中对人大肠癌细胞株LoVo的特异性杀伤作用。方法利用苦杏仁苷作前药，台盼蓝拒染法体外观察抗一CEA单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物对苦杏仁苷的特异性激活以圾对LoVo细胞的靶向细胞毒作用。结果苦杏仁苷毒性低，而被抗-CEA单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物作用后，细胞毒性增加约40倍，对表达CEA的LoVo细胞具有靶向细胞毒作用；将LoVo细胞与MCF-7细胞以不同比例同培养发现，此细胞毒作用具有细胞选择性，细胞存活率随LoVo细胞比例的增加而降低。结论抗-CEA单抗-β-葡萄糖苷酶偶联物能特异性激活苦杏仁苷，对LoVo细胞产生靶向杀伤作用，有可能成为一种新的肿瘤治疗方法，降低化疗的毒、副作用。     

新型果蔬加工用酶--粥化酶

以黑曲霉菌株A.niger103为出发株,通过紫外、亚硝基胍等诱变剂进行反复诱变处理,得到一株高产菌株A.niger537,果胶酶酶活提高了130%,同时测定了其纤维素酶、木聚糖酶、蛋白酶及淀粉酶的酶活,分别达到4.76,176.82,832.4,105.73 U/mL.并通过单因素试验研究了营养条件对改变各酶产酶量及其酶系组成的影响.     

用精浆中性α-1,4-葡萄糖苷酶测定对无精子症病因的初步分析

目的：期望建立判断无精子症病因的诊断系统及诊断流程模型。方法：采用自制试剂盒对22例已知血清FSH水平的无精子症病人进行了糖浆中性α-1.4-葡萄糖苷酶活性测定。结果：与正常值（30.72±4.31U／Lx±2s）比较，无精子症病人的精浆酶活性显著减少（10.82±2.79U／L，x±2s），其中低于17U／L者有17例，占试验组总数的77％，揭示在无精子症中附睾功能损害或输精管道梗阻病变相当广泛、血清FSH测定表明.41％的病人可能有睾丸生精功能障碍、附睾特异性酶和激素测定结果的双向分类分析发现，以上指标均为正常或均为异常者各有2例和6例，分别占9％和27％.证实了无精子症病因的离散性、结论：根据初步的分析结果，提出了包括激素-酶-病理学检查手段在内的判断无精子症病因的诊断系统的构想。     

β-葡萄糖醛酸苷酶基因对人膀胱癌T24细胞的转染及表达

目的：探讨β-葡萄糖醛酸苷酶（βG）基因对人膀胱癌T24细胞的转染及表达的可行性。方法：采用基因工程技术构建带βG基因的真核表达载体，利用脂质体介导法在体外将βG基因导入人膀胱癌T24细胞，利用mRNA打点杂交、原位杂交、免疫组织化学、Western bloting 方法检测βG基因的转录和表达情况。结果：成功克隆出含人βG基因全长的真核表达载体pcDNA3.1-βG，以阳离子脂质体LipofectAMINE为载体将βG基因转染T24细胞后，经400mg/L的G418筛选后可形成抗性克隆；βG基因打点杂交和原位杂交结果显示转基因细胞中有βGmRNA的高表达；免疫组织化学和Western bloting证实转基因细胞中有βG蛋白的强阳性高表达。结论：βG基因可被成功转染入人膀胱癌细胞并能有效表达。