维生素A和4HPR对Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究维生素A、N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺(4HPR)对Hela细胞增殖与凋亡的影响.方法 通过集落形成试验和裸鼠致瘤试验观察维生素A和4HPR对Hela细胞增殖的影响;通过电子显微镜及细胞DNA琼脂糖凝胶电泳法观察维生素A和4HPR对Hela细胞凋亡形态的影响及生物化学特征.结果 维生素A和4HPR对Hela细胞集落形成有明显抑制作用,并可抑制Hela细胞对裸鼠的致瘤作用(P<0.01);维生素A的抑瘤作用强于4HPR(P<0.01);电镜下可见细胞固缩,核膜扭曲,核染色体聚集成块并靠近核膜等凋亡细胞特征;细胞DNA被降解,在琼脂糖凝胶电泳中呈现典型的"阶梯状"图谱.结论 维生素 A和4HPR可抑制Hela细胞增殖,诱导Hela细胞凋亡.     

DJ-1通过调控Fra-1信号通路对宫颈癌细胞能量代谢的影响

目的 探究DJ-1通过调控FOS样抗原(Fra)-1信号通路对宫颈癌细胞能量代谢的影响。方法 将Hela细胞转染siRNA DJ-1和siRNA NC,实验共分为3组,正常对照组(Normal组)、阴性对照组(siRNA NC组)和阳性转染组(siRNA DJ-1组)。Western印迹检测3组细胞中DJ-1蛋白和Fra-1蛋白表达;双荧光素酶实验检测Fra-1是DJ-1的靶基因;分别比较3组细胞的线粒体膜电位变化、活性氧含量、葡糖糖吸收水平、乳酸生成量和ATP含量。结果 和Normal组、siRNA NC组相比,siRNA DJ-1组细胞中DJ-1和Fra-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。Normal组和siRNA NC组细胞红/绿荧光强度的比值分别为(0.37±0.04)和(0.38±0.03),两组比较无显著差异(P>0.05);和Normal组相比,转染后的siRNA DJ-1组细胞线粒体膜电位的红/绿荧光强度的比值显著升高(P<0.05)。Normal组和siRNA NC组细胞内活性氧荧光强度无显著差异(P>0.05);和Normal组相比,siR...     

人牙周膜干细胞条件培养液对MC3 T3-E1细胞形态及增殖特性的影响

目的 研究人牙周膜干细胞(hPDLSCs)-条件培养液(CM)对MC3T3-E1细胞形态及增殖特性的影响.方法 从健康前磨牙及第三磨牙的牙周膜(牙周韧带)组织分离hPDLSCs并进行培养,采用免疫荧光法检测所得细胞中波形丝蛋白(vimentin)、角蛋白(PCK)及早期间充质干细胞标志物STRO-1的表达,鉴定细胞来源...     

人宫颈癌基因反义核酸抑制肝癌细胞生长作用的实验研究

目的探讨针对人宫颈癌基因(HCCR)反义核苷酸影响肝癌细胞增殖、凋亡的作用。方法构建pcD-NA3.1-HCCR反义真核表达质粒,转染HepG2细胞,实时定量PCR检测HCCR mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白表达水平,流式细胞仪观察HepG2细胞凋亡和细胞周期的变化,MTT法检测细胞的增殖活性。结果HCCR反义核酸可有效抑制HepG2细胞HCCR的表达,与转染前相比,转染后24小时HCCR mRNA水平下降到16%,其蛋白表达水平在24小时也明显降低。对细胞的增殖与凋亡活性检测显示:转染HCCR反义质粒后,HepG2细胞增殖受到抑制,转染后24小时抑制率为47.62%(P<0.05),细胞凋亡率为14.34%±0.91%,较对照组明显增多(t=21.799,P<0.05),细胞分裂多停止在G0G1期。结论HCCR反义核酸可以抑制HepG2细胞中HCCR的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞停滞于G1期。HCCR反义核酸用于肝癌细胞的基因治疗具有一定的潜在意义。     

阿司匹林对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用

目的 探讨阿司匹林对宫颈癌Hela细胞增殖的影响.方法 体外培养Hela细胞,分别以不同浓度阿司匹林干预.应用Giemsa染色观察细胞形态学的改变;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder现象;采用MTT法测定细胞增殖抑制率.结果 Giemsa染色后可见阿司匹林组细胞体积缩小,凋亡小体形成,且随着浓度增加,凋亡率也增加;不同浓度阿司匹林作用Hela细胞48 h后,提取DNA电泳,可见明显的DNA裂解带;MTT结果显示,在1.0～10.0 mmol/L浓度区间内,随浓度增加和时间的延长,阿司匹林对细胞的抑制率逐渐增加.结论 阿司匹林在体外可抑制人宫颈癌Hela细胞增殖,其机制可能为抑制肿瘤细胞DNA合成有关.     

lncRNA SNHG4/miR-152-3p对HepG2细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG4调控miR-152-3p对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响。方法:qRT-PCR检测肝癌细胞(HepG2、SNU-398、Hep3B)及永生化正常肝细胞THLE-2中SNHG4和miR-152-3p表达水平。将HepG2细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG4组(转染si-SNHG4)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-152-3p组(转染miR-152-3p)、si-SNHG4+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG4与anti-miR-NC)、si-SNHG4+anti-miR-152-3p组(共转染si-SNHG4与anti-miR-152-3p)。qRT-PCR检测SNHG4和miR-152-3p表达水平；CCK8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western Blot法检测PCNA、Bcl-2、Bax蛋白表达；ELISA法检测TNF-α、IL-6表达水平；双荧光素酶报告实验验证SNHG4和miR-152-3p靶向关系。结果:与永生化正常肝细胞THLE-2比较，肝癌细胞HepG2、S...     

阿司匹林对宫颈癌Hela细胞凋亡及增殖的影响

目的研究阿司匹林对宫颈癌Hela细胞的增殖和凋亡的影响。方法不同浓度的阿司匹林(1.0、5.0、10.0 mmol/L)处理细胞48 h后,显微镜下观察细胞生长状况,采用水溶性四氯唑(WST)-1法检测细胞增殖情况;Hochest 33258染色、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western印迹法检测凋亡相关蛋白。结果阿司匹林能够抑制Hela细胞增殖,诱导细胞凋亡,处理浓度在1 mmol/L时,细胞生长变慢;处理浓度达到5 mmol/L时,大量细胞凋亡;阿司匹林浓度高于5 mmol/L时,Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显增加。结论阿司匹林在体外实验条件下可抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导其发生凋亡。     

黄芪总皂苷调控LKB1/AMPK信号通路对人乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期的影响及机制

目的 基于肝激酶(LK)B1/磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路探讨黄芪总皂苷对人类乳腺癌细胞增殖、凋亡及周期的影响及作用机制。方法 以人乳腺癌细胞ZR-75-1为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法观察人乳腺癌细胞ZR-75-1增殖活力变化;苏木素-伊红(HE)染色观察人乳腺癌细胞ZR-75-1形态变化;流式术检测人乳腺癌细胞ZR-75-1凋亡率及细胞周期变化;RT-聚合酶链反应(PCR)检测人乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK mRNA水平;Western印迹检测人乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK蛋白表达。结果 乳腺癌细胞ZR-75-1的增殖受到黄芪总皂苷的影响,随黄芪总皂苷剂量(0、50、100、150 mg/μl)攀升,癌细胞增殖抑制率逐渐强,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌细胞ZR-75-1的凋亡受到黄芪总皂苷影响,黄芪总皂苷剂量越大,乳腺癌细胞ZR-75-1的凋亡率越高,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌细胞ZR-75-1的细胞周期,随黄芪总皂苷剂量攀升,G0/G1期细胞比例明显增加,S期、G2期明显降低。受黄芪总皂苷影响...     

DPC4基因对人胰腺癌细胞JF305增殖的影响

目的研究肿瘤抑制基因DPC4(deleted in pancreatic carcinoma)对人胰腺癌细胞系JF305增殖能力的影响。方法将携带DPC4基因的真核表达载体转入JF305细胞内,经G418筛选获得DPC4稳定表达细胞株,免疫细胞化学和RT-PCR法检测转染前后细胞内DPC4的表达。用MTT法、细胞计数法和流式细胞仪测定细胞生长曲线、细胞周期、细胞贴壁率和细胞克隆形成率。比较转染前后细胞增殖能力的变化。结果未转染及转染空质粒的JF305细胞无DPC4的表达,转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞可检测到DPC4的表达,且其细胞增殖能力较前明显下降(P<0．001),细胞倍增时间显著延长(由11．8d延长至18d),细胞贴壁率和克隆形成率均明显下降(P<0．0001),G_1期细胞所占比例明显增加(P<0．0001),G_2／M期细胞所占比例明显下降(P<0．0001)。结论无DPC4表达的胰腺癌细胞株JF305可转基因获得DPC4稳定表达,DPC4转基因后可抑制其增殖能力,细胞G_1期延长,G_2／M期缩短。DPC4有望成为胰腺癌基因治疗新的候选基因。     

上调miR-181a-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡能力的影响及相关机制

目的 研究上调微小RNA(miR)-181a-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡能力的影响及相关机制。方法 宫颈癌细胞株经过培养、转染后,分为miR-181a-5p上调组、miR-181a-5p下调组、宫颈癌组,miR-181a-5p及细胞增殖相关基因的表达采用荧光定量-聚合酶链反应(PCR)进行检测,观察3组细胞增殖、凋亡能力,凋亡相关蛋白表达及信号通路相关蛋白表达采用Western印迹进行检测。结果 miR-181a-5p上调组miR-181a-5p、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关蛋白(Bax)表达明显高于宫颈癌组和miR-181a-5p下调组,增殖细胞核抗原(PCNA)、肿瘤增殖抗原(Ki)67、Bcl-2、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)表达明显低于宫颈癌组和miR-181a-5p下调组(P<0.05);miR-181a-5p下调组miR-181a-5p、Caspase-3、Bax表达明显低于宫颈癌组,PCNA、Ki67、Bcl-2、PI3K、Akt表达明显高于宫颈癌组(P<0.05)。在24、48、72...     

蛋白酶体β亚基4型对人肝癌SMMC7721细胞增殖存活的影响

目的旨在探讨蛋白酶体β亚基4型(PSMB4)对人肝癌SMMC7721细胞增殖存活的影响及其可能的机制。方法利用特异性短发夹RNA(shRNA)技术构建干扰PSMB4表达的SMMC7721实验组细胞;运用MTT、克隆形成实验检测细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western Blot检测相关蛋白的表达变化。计量资料两组间比较采用独立样本t检验。结果成功构建了干扰PSMB4表达的SMMC7721实验组细胞(shRNA1:t=22.67,P<0.0001;shRNA2;t=30.88,P<0.0001;shRNA3:t=67.82,P<0.0001)。MTT实验显示第4天(0.4770±0.0135 vs 0.3237±0.0127,t=8.286,P=0.0012)、第5天(0.5893±0.0088 vs 0.3847±0.0090,t=16.220,P<0.0001)实验组细胞OD490值显著低于对照组。克隆形成实验显示细胞集落数显著减少。流式细胞术显示实验组细胞的早期凋亡率[(5.5570±0.2589)%vs(3.8870±0.3324)%,t=3.964,P=0.0166]、晚期凋亡率[(12.6300±0.4198)%vs(5.3100±0.3062)%,t=14.080,P=0.0001]及总凋亡率[(18.1800±0.6785)%vs(9.1970±0.6313)%,t=9.967,P=0.0006]均明显高于对照组,且干扰PSMB4表达的实验组细胞中核因子-κB亚基p65蛋白表达降低(0.8015±0.0120 vs 0.2841±0.0110,t=31.830,P<0.0001),核因子-κB抑制蛋白α表达增加(0.4816±0.0112 vs 0.6583±0.0142,t=9.774,P=0.0006)。结论干扰PSMB4表达可能通过抑制NF-κB信号通路,从而导致肝癌SMMC7721细胞的增殖存活能力下降。     

SOX10对胶质瘤细胞增殖及去分化的影响

目的探讨SOX10过表达对胶质瘤细胞增殖和去分化的影响。方法胶质瘤细胞株U87转染SOX10腺病毒48 h后收集细胞进行MTT、流式细胞术、Western blot和Q-RT-PCR。结果 U87细胞感染SOX10过表达腺病毒后细胞的增殖受抑制,DNA合成减少,S期细胞数减少,干细胞标志CD133上调。结论 SOX10可能在胶质瘤细胞的去分化中起重要作用。     

胰腺癌细胞TM4SF1的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 检测5株人胰腺癌细胞株中TM4SF1 mRNA的表达,探讨TM4SF1基因对癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法 采用实时PCR方法检测人胰腺癌细胞株MPanc96、MiaPaCa-2、HPAC、PANC1、AsPC-1的TM4SF1 mRNA表达,并与人正常胰腺导管上皮细胞（HPDE）的TM4SF1mRNA表达进行比较.应用RNA干扰方法将靶向TM4SF1的siRNA及阴性对照siRNA瞬时转染MPanc96、MiaPaCa-2细胞.采用MTS法检测转染细胞的增殖能力,Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力.结果 胰腺癌细胞株MPanc96、MiaPaCa-2、PANC1、AsPC-1、HPAC的TM4SF1 mRNA相对表达量分别为1.205±0.073、1.096±0.260、1.382±0.075、1.374±0.363、0.744±0.096,均显著高于HPDE的0.020±0.003（F =22.26,P＜0.01）.与转染阴性对照siRNA的细胞比较,TM4SF1基因表达沉默的MPanc96、MiaPaCa-2细胞的增殖无显著变化,但细胞的迁移力分别降低（62.5±7.6）％、（72.8±4.0）％,侵袭能力分别下降（69.5±5.7）％、（78.6±6.3）％.结论 TM4SF1在人胰腺癌细胞中高表达,并增强胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力.     

Effect of the interaction between fibronectin and VLA-4 on the proliferation of human B cells, especially a novel human B-cell line, OPM-3

Very late antigen (VLA)-4 integrin has been suggested to play an important role in haemopoiesis. However, little is known concerning the roles of the fibronectin (FN)/VLA-4 interaction in the proliferation of human B cells. In this study we investigated the effect of immobilized FN on the proliferation of various B-cell lines, including a newly-established B-cell line, OPM-3, and human tonsillar B cells, that primarily express VLA-4 but not VLA-5. Immobilized FN significantly promoted the proliferation of OPM-3 cells and normal B cells via VLA-4. The cross-linking of β1 integrins of OPM-3 cells resulted in the phosphorylation of the focal adhesion kinase (FAK) associated 90 kD protein, an increase in FAK-associated kinase activity, and the phosphorylation of Raf-1. Furthermore, the MEK1 inhibitor, PD98059, inhibited the FN-promoted proliferation of OPM-3 cells. These results demonstrate that the FN/VLA-4 interaction transmits the growth signal(s) which may be mediated by Ras pathway in OPM-3 cells, and suggest that OPM-3 cells may be of great value in studying the roles of the FN/VLA-4 interaction in human B-cell growth.     

CD4+CD25+调节性T细胞对人外周血内皮祖细胞增殖、迁移、黏附的影响

目的:研究CD4+CD25+调节性T细胞对体外培养的人外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移、黏附的影响。方法:密度梯度离心法分离培养人外周血单个核细胞,经FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色鉴定为正在分化的EPCs。进一步采用流式细胞仪检测其表面标志CD34、CD133。磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25+调节性T细胞及CD4+CD25-T细胞。将EPCs分别与CD4+CD25+调节性T细胞或CD4+CD25-T细胞共培养36h。采用MTT比色法、transwell小室、细胞计数法观察EPCs增殖、迁移、黏附能力。结果:与对照组和CD4+CD25-T细胞相比,与CD4+CD25+调节性T细胞共培养EPCs增殖、迁移、黏附能力显著增强,且呈浓度依赖性增强。结论:CD4+CD25+调节性T细胞可显著促进EPCs增殖、迁移、黏附能力,此作用可能是其抗AS作用机制之一。     

雌三醇对MG-63细胞增殖和分化的影响

目的 研究雌三醇（Estri01）对成骨肉瘤样细胞株MG-63的作用，并与雌二醇（17-β—estradiol）对MC-63细胞的作用进行比较，从而探讨雌三醇防治骨质疏松的作用机制。方法 用雌三醇或雌二醇处理成骨样细胞株MC-63，^3H掺入法（3H—TdR）测定细胞的增殖，通过测定细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性的变化和细胞分泌的骨钙素（osteocalcin）水平的变化来分析细胞功能。结果 以浓度为0mol／L的雌三醇为对照，10^-10、10、10^～8、10^-7、10^-6mol／L雌三醇分别增加MG-63细胞增殖达0．00％、18．10％、31．62％、23．81％、14．86％；以浓度为0mol／L的雌二醇为对照，10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-8mol／L雌二醇分别增加MG-63细胞增殖达16．95％、30．86％、62．48％、28．19％、24．76％。雌二醇促进MC-63细胞增殖的作用比雌三醇的作用强。不同浓度（10^-10～10^-6mol／L）的雌三醇或雌二醇对MG-63细胞内ALP活性及骨钙素分泌量均无显著影响。Western杂交法检测到雌激素受体α和β在MG-63细胞中均有表达，雌激素受体的拮抗剂ICI 182780可以消除雌二醇和雌三醇对MG-63细胞增殖的促进作用。结论雌三醇可以促进MG-63细胞的增殖，但对分化无影响；雌三醇对MG-63细胞增殖的促进作用由雌激素受体介导。     

盐酸肾上腺素对白血病细胞株K562增殖及分化的影响

目的探讨盐酸肾上腺素在白血病发生、发展中的作用。方法采用MTT法集落培养实验观察盐酸肾上腺素对白血病细胞株K562细胞增殖的影响;采用Gimesa染色观察细胞形态学变化,采用流式细胞术检测CD71分化抗原表达。结果盐酸肾上腺素可明显降低K562细胞增殖、集落生长,并呈浓度依赖性;在形态上可诱导细胞趋向红系分化,同时上调K562细胞膜CD71分化抗原的表达。结论盐酸肾上腺素在白血病发生、发展中起重要作用,其机制为抑制K562细胞增殖和诱导其分化。     

TM7SF4对人甲状腺乳头状癌细胞IHH-4增殖、凋亡和侵袭的作用研究

目的 探讨树突表达特异性7跨膜蛋白(TM7SF4)的低表达对人甲状腺乳头状癌细胞IHH-4增殖、凋亡和侵袭的作用及其相关机制.方法 选取甲状腺乳头状癌患者的手术标本(癌组织及癌旁组织)及甲状腺乳头状癌细胞系IHH-4为对象.qRT-PCR法检测病理组织和细胞系IHH-4中TM7SF4的mRNA表达量.分别用MTT法、流式细胞分析和Transwell法检测TM7SF4表达量对IHH-4细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.Western印迹检测IHH-4细胞中磷酸化与非磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕酶素靶蛋白(mTOR)的表达.结果 与癌旁组织相比,甲状腺癌组织中TM7SF4的mRNA表达水平显著升高(t=52.31,P＜0.05).与正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1相比,IHH-4细胞系中TM7SF4的表达水平也显著上升(t=34.35,P＜0.05).与对照组细胞相比,沉默TM7SF4的表达后,可诱导IHH-4细胞凋亡,而细胞增殖和侵袭能力受到显著抑制(F=8.32,7.55,846.40;P均＜0.05).此外,沉默TM7SF4的表达后可显著降低磷酸化PI3K、磷酸化Akt、磷酸化mTORmRNA及蛋白的表达(F=1014.88,1121.29,985.22,720.14,854.63,4 563.12;P均＜0.05).结论 低表达的TM7SF4可能通过下调PI3K/Akt/mTOR通路而抑制IHH-4细胞增殖、诱导凋亡并抑制侵袭.     

神经生长因子对人巩膜成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响

目的探索神经生长因子（NGF）对培养的人巩膜成纤维细胞（HSF）生长及胶原蛋白合成的影响。方法采用MTT比色法和流式细胞仪（FCM）分析技术，观察不同质量浓度NGF（10、25、50、100、200ng／ml）对HSF增殖和细胞生长周期的影响，氯胺T法检测胶原蛋白。结果NGF能促进HSF增殖，呈剂量依赖性，质量浓度为100ng／ml时作用最明显。NGF作用后，HSF的G0～G1期百分比降低，而S期百分比显著升高，增殖指数增高。NGF对HSF的胶原合成具有明显的促进作用，并呈剂量依赖性。结论外源性NGF可以促进体外培养的HSF增殖及胶原合成。