Vipr2敲除对小鼠视网膜功能的影响

目的: 检测血管活性肠肽受体2(Vipr2)敲除小鼠多巴胺(DA)等神经递质含量和视网膜电生理, 明确Vipr2敲除对视网膜功能的影响。方法: 实验研究。利用RT-PCR检测血管活性肠肽(Vip)、Vipr2在4周龄雄性C57BL/6J小鼠眼球组织中的表达水平。通过CRISPR-Cas9基因编辑技术构建Vipr2敲除(Vipr2-KO)小鼠, 然后在4周龄时检测Vipr2-KO和Vipr2野生型(Vipr2-WT)小鼠视网膜中DA等神经递质含量及视网膜电生理功能。Vipr2-KO小鼠与Vipr2-WT小鼠DA等神经递质含量比较采用独立样本t检验, 而2种小鼠视网膜电生理数据比较采用双因素重复测量方差分析。结果: Vip和Vipr2 mRNA在小鼠视网膜、脉络膜+视网膜色素细胞、角膜和巩膜中均有表达;在虹膜和晶状体中Vipr2呈低表达, 未检测到Vip表达。与Vipr2-WT小鼠相比, Vipr2-KO小鼠表现为近视(t=2.51, P=0.017), 视网膜DA、3, 4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)含量均明显升高(t=3.42, P=0.001;t=2.15, P=...     

豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜、脉络膜多巴胺代谢的变化

目的研究形觉剥夺对豚鼠神经视网膜、视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）／脉络膜复合体多巴胺（dopamine,DA）代谢的影响。方法28日龄豚鼠36只,分为3组：正常对照组、遮盖组、遮盖＋去遮盖组,每组12只。遮盖组用半透明眼罩遮盖豚鼠右眼14d,遮盖＋去遮盖纽在遮盖11d后去遮盖3d。14d后测定角膜曲率半径、眼球屈光度和眼轴长度。处死豚鼠,取眼后极部视网膜、脉络膜组织,用免疫组化染色和Western blotting法检测酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）蛋白在神经视网膜、RPE／脉络膜复合体的表达情况,用高效液相色谱检测神经视网膜、RPE／脉络膜复合体的DA、二羟基苯乙酸（3,4-dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC）的含量。结果TH蛋白阳性表达于视网膜神经节细胞和内核层部分细胞,RPE／脉络膜复合体中表达阴性。遮盖14d后,豚鼠遮盖眼眼轴延长,近视形成,神经视网膜TH蛋白表达量和DA、DOPAC含量降低（P〈0．05）。遮盖＋去遮盖纽的遮盖眼近视程度低于遮盖组．其神经视网膜TH蛋白表达量和DA、DOPAC含量升高（P〈O．05）,但仍低于正常对照组（P〈O．05）。各纽豚鼠RPE／脉络膜复合体的DA、DOPAC含量比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论形觉剥夺能调控豚鼠神经视网膜DA代谢,但不影响RPE／脉络膜复合体的DA代谢。     

多巴胺在近视形成中作用的研究进展

多巴胺（DA）作为视网膜上一种重要的神经递质在近视的发生发展过程中起着重要作用。现主要针对实验近视过程中视网膜DA含量的变化,多巴胺能系统,多巴胺D1、D2受体在近视形成中的作用以及DA和其他近视相关信号分子之间的交互作用等进行探讨。为进一步探索近视形成机制,寻找治疗近视的药物提供思路和方法。     

哌仑西平抑制近视眼机制的研究

目的 观察哌仑西平对实验性近视的抑制作用,初步探讨其作用机制.方法 将出生后48 h内的纯种M99穗麻雄鸡的右眼缝上眼罩进行遮盖,分别在玻璃体内注入500 μg哌仑西平（MD＋P组）及10 μl生理盐水为阴性对照（SS组）,单纯遮盖作为空白对照（MD组）.同时观察单纯注入500 μg哌仑西平（P组）对正常眼（正常组）的影响.4周后进行验光.运用高效液相色谱（HPLC）联合电化学检测（EC）方法分析实验动物视网膜上多巴胺（DA）及其代谢产物多巴克（DOPAC）水平的变化.结果 MD组和正常组屈光度差异有统计学意义（P＜0.01）.MD组与正常组相比,视网膜DA及其代谢产物DOPAC水平明显降低（P＜0.01）,下降率大于40%.MD＋P组视网膜DA和DOPAC水平与正常组相比差异无统计学意义.结论 500 μg哌仑西平能够抑制实验性近视的产生和发展.哌仑西平可能作用于视网膜上毒覃碱受体（M受体）而引起DA改变,进而抑制近视的产生.     

豚鼠近视眼视网膜Müller细胞中TGFβ2、VIP、DA的表达

目的研究转化生长因子β2（TGFβ2）、血管活性肠肽（VIP）和多巴胺（DA）在原代培养的豚鼠近视眼视网膜Müller细胞中的变化。方法眼罩遮盖诱导豚鼠近视眼,酶消化法原代培养其视网膜Müller细胞,GFAP、Vimentin免疫组织化学染色进行细胞鉴定。Westren blotting检测TGFβ2、VIP、酪氨酸羟化酶（TH）蛋白在正常对照眼、自身对照眼和近视眼视网膜Müller细胞中的表达情况。高效液相色谱-电化学法测定视网膜Müller细胞分泌DA的质量浓度变化。结果眼罩遮盖14d后,豚鼠遮盖眼眼轴延长,近视形成。酶消化法成功培养出豚鼠视网膜Müller细胞,95%以上的培养细胞阳性表达GFAP和Vimentin。正常对照眼、自身对照眼和遮盖眼视网膜Müller细胞均阳性表达TGFβ2、VIP、TH蛋白,遮盖眼表达TGFβ2和VIP蛋白上调（P〈0.05）、TH蛋白下调（P〈0.05）。与正常对照眼、自身对照眼比较,遮盖眼视网膜Müller细胞分泌DA减少。结论Müller细胞是视网膜近视信号因子TGFβ2、VIP和DA的一个重要来源。在近视发生过程中Müller细胞可能通过合成、分泌这些近视信号因子,参与近视发生的调控。     

形觉剥夺近视早期雏鸡视网膜细胞凋亡相关研究

目的：观察雏鸡形觉剥夺性近视模型视网膜细胞凋亡相关的代谢变化。方法：实验研究。2021年8 月将48只8日龄白来航鸡随机分为对照组和形觉剥夺组。雏鸡8日龄时，形觉剥夺组分别予以右眼形觉剥夺1周和3周处理，作为形觉剥夺1周组和3周组，对照组不作形觉剥夺处理，与相应的形觉剥夺组培养相同的时间，作为对照1周组和对照3周组。所有组别均通过检影及A超测量雏鸡形觉剥夺前后屈光度、眼轴等数据，形觉剥夺结束后进行雏鸡视网膜电图、彩色立体眼底照相检查，视网膜切片苏木素-伊红（HE）染色以检测雏鸡眼底结构及功能变化，并使用Western blot方法检测雏鸡视网膜中凋亡相关因子bax、bcl-2、caspase-3、caspase-8的表达水平变化，使用透射电子显微镜观察视网膜细胞超微结构的变化。采用独立样本t检验进行数据分析。结果：①形觉剥夺1周（t=3.53， P=0.002）或3周（t=18.21，P<0.001）组雏鸡眼轴增长量均明显大于相应的对照1周组和对照3周组，且形觉剥夺3周组雏鸡眼轴增长量明显大于形觉剥夺1周组（t=5.28，P=0.030）；与各自对照组相比，形觉剥夺1周（t=12.40，P<0.001）或3周（t=12.37，P<0.001）的雏鸡屈光度均向负值方向增大，且形觉剥夺3周雏鸡屈光度明显负于1周雏鸡屈光度（t=2.63，P=0.030）。②在形觉剥夺1周和3周雏鸡中，视网膜电图与对照组相比均未见明显差异（均P>0.05），眼底照相和切片HE染色均未见异常。③形觉剥夺1周和3周后，视网膜bcl-2（t=2.77， P=0.040；t=4.58，P=0.044）表达水平均较相应的对照组下降，bax（t=2.99，P=0.040；t=4.77，P=0.018）、caspase-3（t=3.44，P=0.026；t=3.25，P=0.023）、caspase-8（t=5.82，P=0.028；t=5.38，P=0.013）表达水平均较对照组上升。④对照组和形觉剥夺1周组雏鸡的视网膜细胞中未见明显细胞损伤表现，形觉剥夺3周组视网膜可见细胞质分布不均，染色质固缩，线粒体重度肿胀，嵴消失，空泡变，内质网脱颗粒等现象。结论：形觉剥夺早期雏鸡的眼底尚未出现病理性改变时，凋亡相关因子bax、bcl-2、caspase-3、caspase-8表达量已经发生改变，透射电镜提示视网膜组织发生了细胞凋亡。     

血管内皮生长因子-A165对形觉剥夺性近视豚鼠巩膜重塑的影响

目的：探讨玻璃体腔内注射血管内皮生长因子-A165(VEGF-A165)对形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠巩膜重塑的影响。方法：健康3周龄三色豚鼠120只随机分为6组，每组20只，其中空白组不做任何干预，FDM组仅建立FDM模型，PBS组建立FDM模型前玻璃体腔内注射PBS缓冲液2.5μL，1ng组、5ng组、10ng组建立FDM模型前玻璃体腔内分别注射VEGF-A165 1、5、10ng。用半透明气球遮盖豚鼠右眼14d建立FDM模型，造模前后测量豚鼠右眼屈光度和眼轴长度，造模14d后采用高效液相色谱法检测视网膜中多巴胺(DA)含量，用RT-PCR、Western blot法检测巩膜中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)、转化生长因子(TGF)-β1、TGF-β2、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达情况。结果：造模前，各组豚鼠右眼屈光度和眼轴长度均无显著差异(P&#x003E;0.05)。造模14d后，与空白组相比，FDM组豚鼠右眼近视度数升高，眼轴增长，视网膜中DA含量减少，巩膜中MMP-2、TGF-β2、α-SMA表达量均增加，TIMP-2、TGF-β1表达量均减少(P&#x003C;0.01)； 与FDM组相比，1ng组、5ng组、10ng组豚鼠右眼近视度数均降低，眼轴增长趋势均减缓，视网膜中DA含量均增加，巩膜中MMP-2、TGF-β2、α-SMA表达量均减少，TIMP-2、TGF-β1表达量均增加(P&#x003C;0.01)，且随着玻璃体腔注射VEGF-A165浓度的升高，豚鼠右眼近视度数逐渐升高，眼轴逐渐延长，视网膜中DA含量逐渐减少，巩膜中MMP-2、TGF-β2、α-SMA表达量均逐渐增加，TIMP-2、TGF-β1表达量均逐渐减少。结论：玻璃体腔内注射VEGF-A165可以增加FDM豚鼠视网膜中DA含量，影响巩膜中MMP-2、TIMP-2、TGF-β1、TGF-β2、α-SMA的表达，抑制巩膜重塑，其中1ng VEGF-A165效果最明显。     

糖尿病小鼠视网膜中JNK3 mRNA表达的动态变化

背景 糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病常见的眼部并发症,其发病机制与多种因素有关,c-jun N末端激酶（JNK）作为一种凋亡基因,在糖尿病的病理过程中发挥着重要作用,其研究已成为近些年的热点之一,而JNK3作为JNK的亚基因之一,在DR中的研究目前较少.目的 定量检测JNK3在糖尿病小鼠视网膜中的表达,探讨JNK3在DR中的作用.方法 选取SPF级6～8周龄C57BL/6雄性小鼠48只,适应性喂养1周后按照随机数字表法分为糖尿病组和正常对照组.30只糖尿病组小鼠用一次性腹腔内注射柠檬酸钠缓冲液溶解的质量分数1％链脲佐菌素（STZ）的方法诱导糖尿病模型,18只对照组小鼠腹腔内注射等容量柠檬酸钠缓冲液.分别于造模后2、4、8周摘除小鼠左眼眼球,提取视网膜组织,采用实时定量PCR法检测JNK3 mRNA在小鼠视网膜中表达的动态变化.结果 造模后2、4、8周,糖尿病组小鼠血糖水平明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（t=-5.675、-5.498、-5.347,P＜0.01）.糖尿病组和正常对照组在造模后不同时间点小鼠视网膜中JNK3 mRNA相对表达量（A值）的差异均有统计学意义（F分组=102.345,P＜0.05;F时间 =131.679,P＜0.05）;其中造模后4周和8周糖尿病组小鼠视网膜中JNK3 mRNA相对表达量分别为3.21±0.14和5.43±0.37,均明显高于正常对照组的2.54 ±0.42和2.26±0.67,差异均有统计学意义（t=4.073、23.399,P＜0.05）;糖尿病组内比较可见,造模后8周小鼠视网膜中JNK3 mRNA相对表达量明显高于2周和4周值,差异均有统计学意义（t=10.756、16.857,P＜0.05）.结论 JNK3在糖尿病小鼠视网膜中表达量上调,其早期表达量随时间延长而增加.JNK3可能参与早期DR的发生和发展.     

多巴胺D4受体对正常屈光发育及形觉剥夺性近视小鼠的作用

应用多巴胺D4受体（D4R）激动剂PD-168077和拮抗剂L-745870观察D4R在正常屈光发育以及形觉剥夺性近视（FDM）小鼠中的作用。方法：实验研究。将168只4周龄C57BL/6小鼠分为正常屈光发育组和FDM组（单眼剥夺，对侧眼为对照），每组又分为溶剂组和药物组（D4R激动剂PD-168077： 1 mg/kg和10mg/kg；D4R拮抗剂L-745870：1 mg/kg和10 mg/kg），所有动物给予2周的正常视觉环境或持续形觉剥夺及每日腹腔注射溶剂或药物，其中，正常屈光发育组在5周龄时给予视网膜电图（ERG）检测。所有动物均在实验前后测量屈光度、眼轴和角膜前表面曲率半径等生物学参数。采用配对 t检验、单因素方差分析、重复测量方差分析对数据进行分析。结果：D4R激动剂PD-168077不影响正常屈光发育小鼠的屈光发育，而D4R拮抗剂L-745870只有在10 mg/kg时才促进正常小鼠往远视方向漂移（P=0.047），但不影响眼轴等生物学参数。 10 mg/kg PD-168077在刺激强度为-0.699 log cdsm-2 时升高了暗视ERG的OPs振幅（P=0.04），而L-745870对暗视、明视ERG的a波、b波和OPs波振幅均无明显影响。PD-168077促进FDM小鼠的近视进展（P=0.004），并伴随着玻璃体腔深度和眼轴的延长； L-745870可以抑制FDM小鼠的近视进展（P<0.001），同时抑制了玻璃体腔深度和眼轴的延长。前房深度、晶状体厚度、角膜曲率半径等参数不受实验因素的影响。结论：D4R受激动或拮抗对正常屈光发育小鼠的屈光发育无明显作用；但D4R受激动能促进FDM小鼠的近视进展而D4R受拮抗能抑制近视进展，提示D4R受抑制能减缓FDM小鼠的近视进展。     

豚鼠形觉剥夺性近视视网膜中视黄酸转运系统的研究

目的了解视黄醇（RA）转运系统在豚鼠近视发生发展中的作用。方法2周龄英国短毛豚鼠48只,随机分为形觉剥夺组（n=24）和正常对照组（n=24）。形觉剥夺组随机取1只眼,用白色半透明眼罩遮盖形成形觉剥夺,遮盖时间为2周,干预前后均采用睫状肌麻痹后带状光检影法测定其屈光不正状态,用CinescanA/B型超声仪测定玻璃体腔深度和眼轴长度。处死后取视网膜,用HPLC法测定视网膜中的RA水平,Westernblot法定量检测视网膜中视黄酸结合蛋白-Ⅰ（CRABP-Ⅰ）和视黄酸核受体-β（RAR-β）的蛋白水平,并用Real-timePCR法测定其mRNA水平。结果形觉剥夺后模型眼的等效球镜为（-3.82±0.13）D,对照眼为（1.99±0.58）D,差异有统计学意义（t=8.376,P〈0.01）;形觉剥夺组眼轴长度为（8.346±0.047）mm,对照组眼轴长度为（7.888±0.042）mm,差异有统计学意义（t=3.343,P〈0.05）。形觉剥夺组视网膜RA水平较对照组高,差异有统计学意义（t=4.934,P〈0.01）;模型眼视网膜中CRABP-Ⅰ和RAR-β的含量较对照组均提高（P〈0.05）。结论豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜中RA转运系统水平显著上升,RA可能是近视发展的信使。     

Retinal Dopamine D2 Receptors Participate in the Development of Myopia in Mice

PurposeTo learn more about the locations of dopamine D2 receptors (D2Rs) that regulate form-deprivation myopia (FDM), using different transgenic mouse models.MethodsOne eye of D2R-knockout (KO) mice and wild-type littermates was subjected to four weeks of monocular FDM, whereas the fellow eye served as control. Mice in both groups received daily intraperitoneal injections of either the D2R antagonist sulpiride (8 µg/g) or vehicle alone. FDM was also induced in retina- (Six3^creD2R^fl/fl) or fibroblast-specific (S100a4^creD2R^fl/fl) D2R-KO mice. A subset of retina-specific D2R-KO mice and D2R^fl/fl littermates were also given sulpiride or vehicle injections. Refraction was measured with an eccentric infrared photorefractor, and other biometric parameters were measured by optical coherence tomography (n ≈ 20 for each group).ResultsFDM development was attenuated in wild-type littermates treated with sulpiride. However, this inhibitory effect disappeared in the D2R-KO mice, suggesting that antagonizing D2Rs suppressed myopia development. Similarly, the development of myopia was partially inhibited by retina-specific (deletion efficiency: 94.7%) but not fibroblast-specific (66.9%) D2R-KO. The sulpiride-mediated inhibitory effects on FDM also disappeared with retinal D2R-KO, suggesting that antagonizing D2Rs outside the retina may not attenuate myopia. Changes in axial length were less marked than changes in refraction, but in general the two were correlated.ConclusionsThis study demonstrates that D2Rs located in the retina participate in dopaminergic regulation of FDM in mice. These findings provide an important and fundamental basis for further exploring the retinal mechanism(s) involved in dopamine signaling and myopia development.     

负透镜诱导型近视豚鼠视网膜中谷氨酸及其受体的表达

目的　观察谷氨酸及其离子型受体Ｎ-甲基-Ｄ-天冬氨酸受体（Ｎ-ｍｅｔｈｙｌ-Ｄ-ａｓｐａｒｔａｔｅｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＮＭＤＡＲ）功能亚单位ＮＲ２Ａ在近视豚鼠视网膜上的动态表达,探讨其在近视发病过程中的作用。方法　选取３周龄健康三色短毛豚鼠１２０只,采用随机数字表法分为０周正常组、２周正常组、２周近视组、４周正常组、４周近视组,每组２４只;正常组不作任何干预,近视组右眼均戴－１０Ｄ透镜,左眼不戴镜作为对照。入组前与处死前均进行屈光度及眼轴长度检测,腹腔注射过量水合氯醛处死,并分离视网膜,采用高效液相色谱分析检测视网膜中谷氨酸的含量变化,实时荧光定量ＰＣＲ以及ＥＬＩＳＡ分别检测豚鼠视网膜中ＮＲ２ＡｍＲＮＡ及其蛋白水平的表达变化。结果　造模前各组屈光度及眼轴长度差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。造模后各组与造模前比较,眼轴长度及屈光度差异均有统计学意义（２周正常组Ｐ＜０．０５,２周近视组Ｐ＜０．００５,４周正常组Ｐ＜０．０１,４周近视组Ｐ＜０．００１）。造模后,正常组间眼轴长度和屈光度比较差异均有统计学意义（Ｆ＝２０．３２,Ｐ＜０．０１;Ｆ＝１９９．６５,Ｐ＜０．０１）;２周近视组与４周近视组比较,右眼眼轴长度和屈光度差异均有统计学意义（Ｆ＝７８．９６,Ｐ＜０．００１;Ｆ＝２５２．１０,Ｐ＜０．００１）,左眼眼轴长度和屈光度差异均无统计学意义（Ｆ＝１３．６６,Ｐ＞０．０５;Ｆ＝２１．２０,Ｐ＞０．０５）;２周近视组与４周近视组右眼分别与相应的左眼比较,眼轴长度差异均有统计学意义（２周近视组:ｔ＝９．５１５,Ｐ＜０．００５;４周近视组:ｔ＝９．４４９,Ｐ＜０．００１）,屈光度差异同样均有统计学意义（２周近视组:ｔ＝８．８９７,Ｐ＜０．００１;４周近视组:ｔ＝１７．２３５,Ｐ＜０．００１）。视网膜中谷氨酸含量正常组之间差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）;造模后２周近视组与４周近视组比较,右眼视网膜中谷氨酸含量逐渐增加,差异有统计学意义（ｔ＝３６．２３０,Ｐ＜０．０１）。造模后２周近视组较２周正常组右眼谷氨酸含量增加,差异有统计学意义（ｔ＝－２３．２４０,Ｐ＜０．０５）;同样４周近视组较４周正常组右眼谷氨酸含量亦增加,差异亦有统计学意义（ｔ＝－５３．６９０,Ｐ＜０．０１）。视网膜中ＮＲ２ＡｍＲＮＡ的表达量,正常组之间差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。造模后４周近视组与２周近视组比较,右眼视网膜ＮＲ２ＡｍＲＮＡ表达量明显上调,差异有统计学意义（ｔ＝５５．６６０,Ｐ＜０．００１）;２周近视组与２周正常组右眼比较表达量增加,差异有统计学意义（ｔ＝－１５．０８６,Ｐ＜０．００５）,同样４周近视组与４周正常组右眼比较差异亦有统计学意义（ｔ＝－４３．２７６,Ｐ＜０．００１）。正常组之间视网膜中ＮＲ２Ａ蛋白表达量,差异无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。４周近视组与２周近视组比较,右眼视网膜ＮＲ２Ａ蛋白表达量明显上调,差异有统计学意义（ｔ＝４３．２１０,Ｐ＜０．００５）;２周近视组与２周正常组右眼比较ＮＲ２Ａ蛋白表达量增加,差异有统计学意义（ｔ＝－２．３６５,Ｐ＜０．０５）,同样４周近视组与４周正常组右眼比较差异亦有统计学意义（ｔ＝－５．５１８,Ｐ＜０．０１）。结论负透镜诱导型近视豚鼠视网膜中谷氨酸及其ＮＭＤＡＲ受体亚单位ＮＲ２Ａ在透镜诱导眼中表达上调,并随透镜诱导时间的延长和近视程度的加深而增加。     

Local patterns of image degradation differentially affect refraction and eye shape in chick

PURPOSE: To evaluate visual blur as a mechanism for modulating eye shape. METHODS: Chicks wore a unilateral full goggle or one of several goggles modified with apertures. After 2 weeks, eyes were measured with refractometry, ultrasound, and calipers, and three retinal regions were assayed for dopamine and DOPAC (3,4-dihydroxyphenylacetic acid). RESULTS: Goggled eyes were diffusely enlarged or enlarged predominantly along the axial dimension, depending on the goggle. Myopia developed under goggle types inducing primarily axial growth and under some of the goggles inducing diffuse eye expansion. Enlarged eyes remained emmetropic beneath other goggles that caused diffuse eye expansion. Reductions in retinal dopamine and DOPAC were proportional to the eye growth and refraction effects. CONCLUSIONS: Localized image degradation can cause myopia with predominantly axial expansion, myopia with more diffuse vitreous chamber expansion, or eye expansion without myopia. Robust expansion of the equatorial diameter alone was not observed. The associated alterations in retinal dopamine metabolism are consistent with a hypothesized role of dopaminergic amacrine cells in the visual regulation of eye growth. Besides refraction and overall size, visual blur can affect eye shape; but the goggle responses do not correspond to a simple summation of blur signals across the retina. Therefore, other mechanisms seemingly are needed to account for the full range of refractions and ocular shapes seen in chicks and, by analogy, in humans.     

重组人胰岛素样生长因子2对豚鼠眼球发育的调控作用及其与形觉剥夺的关系

目的 对豚鼠非遮盖眼和形觉剥夺性近视（form- deprivation myopia,FDM）眼玻璃体腔注射重组人胰岛素样生长因子2（recombinant human insulin-like growth factor,rhIGF-2）,观察rhIGF-2对两组豚鼠眼屈光度、眼轴长度及视网膜－脉络膜内源性IGF-2 表达水平的影响,探讨rhIGF-2对豚鼠眼球发育的调控作用以及该调控作用与形觉剥夺的关系。方法 选取3周龄的三色豚鼠80只,随机均分为2组。A组为非遮盖组,分为A1～A5组,每组8只：A1组为空白对照组;A2组为阴性对照组,单眼玻璃体腔注射20 ul牛血清白蛋白;A3～A5组为rhIGF-2注射组,注射量分别为1 ng、10 ng、100 ng（20 ul）。B组为单眼遮盖组,分为B1～B5组,各组遮盖眼处理同A1～A5组。实验第14天测量遮盖眼屈光度和眼轴长度,检测视网膜－脉络膜IGF-2 的表达水平。结果 非遮盖组中,rhIGF-2注射组（A3、A4、A5组）的屈光度、眼轴长度与对照组（A1、A2组）之间差异无统计学意义（P〉0.05）; 但A4、A5组的IGF-2 水平明显低于对照组（P=0.000）,A3组与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）;A3、A4、A5组内源性IGF-2表达水平与rhIGF-2注射量呈负相关（r=-0.940,P=0.000）。单眼遮盖组中,B4、B5组与对照组（B1、B2组）相比,近视屈光度增加,眼轴延长,内源性IGF-2表达水平下降（P=0.000）,而B3组与对照组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;B3、B4、B5组的屈光度及内源性IGF-2 表达水平与rhIGF-2注射量呈负相关（r=-0.832,-0.858,P=0.000）,眼轴长度与rhIGF-2注射量呈正相关（r=0.863,P=0.000）。结论 rhIGF-2玻璃体腔注射对豚鼠非遮盖眼的屈光度和眼轴长度无影响,但可使形觉剥夺眼近视屈光度增加,眼轴延长,其效应呈浓度依赖性。rhIGF-2可下调豚鼠眼视网膜－脉络膜内源性IGF-2的表达,效应呈浓度依赖性。提示rhIGF-2在形觉剥夺存在的条件下?     

抑制单胺囊泡转运体功能在豚鼠屈光发育及形觉剥夺性近视中的作用

目的：通过球旁注射单胺囊泡转运体2（VMAT2）非竞争性抑制剂丁苯那嗪（TBZ）探讨胞外多巴胺水平下调对三色豚鼠屈光发育以及近视的影响。方法：实验研究。152只正常3周龄豚鼠，随机分为正常视觉环境（NV）组和形觉剥夺（FD，右眼单眼剥夺）组。NV组又随机分为空白对照组（NC，n=18），溶剂对照组[注射二甲基亚枫（DMSO），NV+DMSO，n=18）]，低剂量TBZ组（NV+30 ng，n=22），高剂量TBZ组（NV+300 ng，n=20）。FD组又随机分成单纯FD组（FD，n=17），FD+溶剂对照组（FD+DMSO，n=18），FD+低剂量TBZ组（FD+30 ng，n=21），FD+高剂量TBZ组（FD+300 ng，n=18）。溶剂注射组和TBZ给药组每天右眼球旁注射0.1%DMSO或者相应剂量TBZ 100 µl。实验前、实验后2周和4周分别检测屈光度和眼轴相关参数。实验4周后采用过量10%水合氯醛处死豚鼠，免疫荧光染色检测多巴胺受体下游信号分子p-CREB的变化。数据采用独立样本t检验、单因素方差分析进行分析。结果：在正常视觉环境下，TBZ注射2周可诱导豚鼠产生近视，NV+DMSO、NV+30 ng和NV+300 ng组双眼屈光度差值（右眼-左眼）分别为（0.04±0.31）D、 （-0.90±0.84）D和（-0.75±0.66）D（F=11.133，P < 0.001），同时伴玻璃体腔深度加深，3组双眼玻璃体腔深度差值分别为（-0.01±0.03）mm、 （0.02±0.03）mm和（0.02±0.04）mm（F=6.001，P=0.004）。注射TBZ 4周豚鼠的近视量没有进一步加深，3组豚鼠双眼屈光度的差值分别为（-0.06±0.41）D、 （-1.14±1.61）D和（-0.84±1.41）D（F=3.569， P=0.035）。正常屈光发育的豚鼠注射TBZ 4周后，神经节细胞层和内核层的p-CREB表达下调（t=4.825，P=0.003；t=8.109，P < 0.001）。TBZ注射对FD豚鼠2周和4周时的屈光和眼轴都没有影响。结论：通过TBZ抑制单胺囊泡转运体功能可诱导正常豚鼠出现近视，但对形觉剥夺性近视没有显著影响。单胺囊泡转运体功能受抑制可能通过使单胺类递质的释放减少，引起相应递质，特别是多巴胺水平的降低进而诱导出近视。     

The Role of Dopamine in Emmetropization Modulated by Wavelength and Temporal Frequency in Guinea Pigs

PurposeWavelength and temporal frequency have been found to influence refractive development. This study investigated whether retinal dopamine (DA) plays a role in these processes.MethodsGuinea pigs were randomly divided into nine groups that received different lighting conditions for 4 weeks, as follows: white, green, or blue light at 0, 0.5, or 20.0 Hz. Refractions and axial lengths were measured using streak retinoscopy and A-scan ultrasound imaging. DA and its metabolites were measured by high-pressure liquid chromatography-electrochemical detection.ResultsAt 0 Hz, green and blue light produced myopic and hyperopic shifts compared with that of white light. At 0.5 Hz, no significant changes were observed compared with those of green or blue light at 0 Hz, whereas white light at 0.5 Hz induced a myopic shift compared with white light at 0 or 20 Hz. At 20 Hz, green and blue light acted like white light. Among all levels of DA and its metabolites, only vitreous 3, 4-dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC) levels and retinal DOPAC/DA ratios were dependent on wavelength, frequency, and their interaction. Specifically, retinal DOPAC/DA ratios were positively correlated with refractions in white and green light conditions. However, blue light (0, 0.5, and 20.0 Hz) produced hyperopic shifts but decreased vitreous DOPAC levels and retinal DOPAC/DA ratios.ConclusionsThe retinal DOPAC/DA ratio, indicating the metabolic efficiency of DA, is correlated with ocular growth. It may underlie myopic shifts from light exposure with a long wavelength and low temporal frequency. However, different biochemical pathways may contribute to the hyperopic shifts from short wavelength light.     

中学生近视周边部眼底退行性病变的流行病学特征

目的 了解中学生近视眼合并周边部眼底退行性病变的患病特点及其影响因素.方法 采取群体抽样的原则对豫东平原地区的五县市五所重点中学在校学生进行眼底流行病学调查,对其双眼屈光状况,视力及矫正视力,以及眼底病变等进行统计分析.结果 (1)共检出近视眼者3465人(72.6%),其中合并有各种周边部眼底退行性病变者488人,患病率为14.08%.(2)近视者中4.01%患有视网膜格子样变性,6.03%患霜样变性,3.2%患囊样变性,0.63%有裂孔.(3)低度近视者周边部眼底病变患病率为8.97%,中度近视者为20.09%,高度近视者为28.0%(x2=128,P<0.001).(4)自述有症状合并有周边部眼底退行性病变者的患病率为19.07%;无自觉症状者则为10.68%,(x2=47,P<0.001).(5)学生为城镇居民者合并患有周边部眼底退行性病变者的患病率为15.44%;为乡村居民者则为13.06%,(x2=2.3,P>0.05).结论 在校高中学生近视眼的发生率为72.6%.近视眼合并有周边部眼底退行性病变的患病率为14.08%,其患病率与近视程度和有无自觉症状相关.     

角膜生物力学及校正眼压与青少年屈光状态的相关性

目的：探讨7～18岁青少年角膜生物力学及校正眼压与屈光状态的内在关系。方法：横断面研究。 选择2017年11月至2018年2月于中山大学中山眼科中心屈光门诊就诊的中国青少年325例,年龄7～18 岁,等效球镜度（SE）-10.25～+16.50 D。采用IOLMaster测量眼轴长度（AL）,Corvis ST测量角膜生 物力学参数及生物力学校正眼压（bIOP）,Pentacam测量眼前节生物学参数。按照右眼SE将受检者 分为高度近视、中低度近视、正视和远视组。采用Pearson或Spearman相关分析SE与角膜生物力学 参数的相关性。用协方差分析比较4组的角膜生物力学参数差异,用方差分析比较4组间的bIOP差异。 结果：SE越偏向近视,第二次压平速率（VA2,r=0.180,P=0.001）越快,峰值距离（PD,r=-0.273, P<0.001）和形变幅度（DA,r=-0.167,P=0.002）越大。AL越长,PD（r=0.355,P<0.001）越大,VA2 （r=-0.138,P=0.021）越快。4组间PD（F=9.372,P<0.001）、DA（F=4.425,P=0.005）和VA2（F=4.961, P=0.002）的总体差异有统计学意义,进一步比较发现,PD、DA和VA2绝对值在高度近视、中低度 近视、正视、远视组间依次下降,差异均有统计学意义（均P<0.05）。高度近视组（102.04±19.59）和 中低度近视组（98.95±16.62）的角膜硬度参数（SP-A1）差异无统计学意义,但中低度近视组比正视 组（107.49±18.66,P=0.010）和远视组（108.98±20.20,P=0.004）的SP-A1低,差异有统计学意义。 眼压（IOP）和bIOP均与SE无相关性。结论：7～18岁青少年SE越偏向近视,角膜硬度越低。无论是 否校正角膜生物力学因素的影响,眼压均与屈光度无关。     

玻璃体腔注射N-甲基-D-天冬氨酸受体的反义寡核苷酸对近视的影响

目的 建立豚鼠形觉剥夺性近视动物模型,玻璃体腔内注射不同浓度的N-甲基-D-天冬氨酸受体1（NMDAR1）反义寡核苷酸（ASON）,观察NMDAR1 ASON对豚鼠近视的调节,探讨其在近视发病机制中的作用.方法 实验研究.3周龄三色豚鼠随机分为6组：A组（正常对照,10只）、B组（右眼遮盖3周,10只）、C1组（右眼遮盖3周＋玻璃体腔注射100 ng NMDAR1正义寡核苷酸）、C2组（右眼遮盖3周＋玻璃体腔注射生理盐水）、C3组（右眼遮盖3周＋玻璃体腔注射10 ng NMDAR1 ASON）、C4组（右眼遮盖3周＋玻璃体腔注射100 ng NMDAR1 ASON）.C1～C4组在遮盖2周时予以玻璃体腔注药1周.实验前及实验3周时对各组进行视网膜检影和A超测眼轴,免疫组化法测NMDAR1的蛋白表达变化,RT-PCR定量检测NMDAR1的mRNA含量变化.各组测量值之间的差异采用one-way ANOVA检验,将各组测量值与NMDAR1 ASON注射浓度进行二元线性相关分析.结果 A、B、C1～C4组之间屈光度、眼轴长度、NMDAR1蛋白表达及mRNA含量差异有统计学意义（F=55.247、142.213、43.215、592.435,P＜0.05）.B组及所有C组右眼呈近视状态,眼轴较自身对侧眼长.B组与C1、C2组遮盖眼屈光状态及眼轴、NMDAR1的蛋白表达及mRNA含量变化表达差异无统计学意义.C2、C3、C4组遮盖眼依次近视屈光度数下降,眼轴延长减慢,NMDAR1的蛋白含量和mRNA含量下调.屈光度与注射浓度呈正相关（r=-0.695,P＜0.05）,眼轴长度、NMDAR1蛋白表达、NMDAR1 mRNA表达与其呈负相关（r=-0.731、-0.625、-0.821,P＜0.05）.结论 形觉剥夺可明显上调豚鼠视网膜NMDAR1的蛋白及mRNA的表达,NMDAR1 ASON玻璃体腔注射能通过下调NMDAR1的蛋白含量及mRNA表达,来减缓近视的进展.