不同浓度蛋氨酸脑啡肽对小鼠CD4~+T细胞表面三种阿片受体作用的比较研究

目的:从基因水平探讨不同浓度蛋氨酸脑啡肽(MENK)对小鼠CD4+T细胞表面OGFr mRNA转录的影响。方法:6~8周龄BALB/c雌性小鼠体外不同浓度MENK刺激。采用RT-PCR技术检测OGFrmRNA的表达量,所得不同浓度MENK刺激的OGFrmRNA和β-actin条带密度比值作为相对表达强度,数据采用SPSS17.0软件进行统计分析。结果:10-12mol/ml的MENK体外刺激能显著促进小鼠CD4+T细胞OGFrmRNA表达,P<0.05。结论:适当浓度的MENK体外刺激能促进小鼠CD4+T细胞OGFrmRNA高效表达。     

宫颈癌患者血清叶酸、细胞凋亡信号受体蛋白、辅助性T细胞17表达与人乳头状瘤病毒感染的关系研究

目的 分析宫颈癌患者FA、Fas、Th17表达与HPV感染的关系.方法 将本院2017年1月-2019年9月收治的308例宫颈癌作为观察组,100例健康体检女性作为对照组;检测血清中FA、Fas、Th17水平及阴道组织中HPV水平.结果 HPV感染患者血清中FA及Fas明显低于未感染者,Th17明显高于未感染者,差异均...     

两种方法分离免疫细胞用于高通量测序TCR组库分析的比较

目的 探讨两种方法分离免疫细胞进行高通量T细胞表面的T细胞变体(TCR),组库分析的区别及可行性。方法分别采用免疫磁珠分选纯化CD3阳性T细胞和Ficoll-Paque梯度离心法分离外周血淋巴细胞的方法制备TCR测序所需样品各1例,提取DNA后多重聚合酶链式反应(PCR)扩增CDR3区域,将扩增得到的PCR产物纯化后构建免疫组库,进行高通量测序及生物信息学分析。结果 两种方法获得的免疫细胞提取DNA后均能够满足TCR免疫组库建库需要,高通量测序结果显示互补决定簇3(CDR3)区域长度呈高斯分布,来自健康志愿者的TCR具有丰富多样性,肿瘤患者TCR多样性呈寡克隆分布。结论 纯化的T细胞或者直接分离得到的淋巴细胞均可用于免疫组库构建及后续TCR CDR3受体库高通量测序分析,TCR CDR3多样性可能直接反应机体免疫状态。     

重度苯中毒患者T细胞受体 Vβ亚家族TRECs的分析

目的 检测重度苯中毒患者外周血23个TCR Vβ-Dβ1TRECs的存在情况,进一步了解重度苯中毒患者胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况.方法 分别在5×104和1×104个外周血单个核细胞水平下,采用半巢式对12例重度苯中毒患者和10例正常人的23个TCRVβ-Dβ1TRECs进行扩增.结果 在5×104和1×104细胞水平下,苯中毒组检出各TCRVβ-Dβ1TRECs数均显著低于对照组(P＜0.05).在5×104细胞水平时,对照组检测到23个TCRVβ-Dβ1TRECs,苯中毒组仅检测到17个TCRVβ-Dβ1TRECs,其中12 个TCRVβ-Dβ1TRECs检出率与对照组相比明显降低(P＜0.05).结论 本研究提供了苯中毒患者外周血中各TCRVβ-Dβ1TRECs存在情况.苯中毒患者TCRVβ-Dβ1TRECs检出数量和检出率低于正常人,提示重度苯中毒患者胸腺近期输出功能存在部分缺陷和低下的情况.     

重度苯中毒患者T细胞受体Vβ亚家族TRECs的分析

目的检测重度苯中毒患者外周血23个TCRVβ-Dβ1TRECs的存在情况,进一步了解重度苯中毒患者胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况。方法分别在5×104和1×104个外周血单个核细胞水平下,采用半巢式对12例重度苯中毒患者和10例正常人的23个TCRVβ-Dβ1TRECs进行扩增。结果在5×104和1×104细胞水平下,苯中毒组检出各TCRVβ-Dβ1TRECs数均显著低于对照组(P<0.05)。在5×104细胞水平时,对照组检测到23个TCRVβ-Dβ1TRECs,苯中毒组仅检测到17个TCRVβ-Dβ1TRECs,其中12个TCRVβ-Dβ1TRECs检出率与对照组相比明显降低(P<0.05)。结论本研究提供了苯中毒患者外周血中各TCRVβ-Dβ1TRECs存在情况。苯中毒患者TCRVβ-Dβ1TRECs检出数量和检出率低于正常人,提示重度苯中毒患者胸腺近期输出功能存在部分缺陷和低下的情况。     

脐血单个核细胞对脑白质损伤低龄大鼠少突胶质细胞及髓鞘碱性蛋白的影响

目的 探讨脐血单个核细胞(umbilical cord blood monocytes,UCBMC)移植对低龄大鼠脑白质损伤(white matter damage,WMD)中少突胶质细胞及髓鞘碱性蛋白表达的影响。方法 将3日龄健康Sprague-Dawley新生大鼠80只随机分为正常对照(control,CON)组、WMD组、WMD+UCBMC组与UCBMC对照组。通过单侧缺血联合缺氧的方法制成WMD模型(每个时间点每组各5只),造模24 h 后,CON组和WMD组经侧脑室注入2 μL PBS,UCBMC 对照组和WMD+UCBMC 组经侧脑室注入3×10⁶UCBMC。移植后24 h、3 d、7 d和14 d,采用2',3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶(CNPase)/活性半胖氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase-3)及髓鞘碱性蛋白(MBP)/4'6-二脒基-2 苯基吲哚(4'6-diamidino-2-phenylindole,DAPI) 免疫荧光双标观察UCBMC移植对纹状体处少突胶质细胞及MBP的变化,并行机制的探讨。结果 移植后24 h、3 d和7 d,WMD组CNPase⁺ Cleaved Caspase-3⁺细胞数均高于CON组、WMD+UCBMC 组与UCBMC 对照组(均P<0.01),且在24 h开始增加,3 d达高峰,7 d有所下降;WMD+UCBMC组CNPase⁺ Cleaved Caspase-3⁺细胞数显著少于WMD组(P<0.01)。移植14 d后,WMD组MBP⁺DAPI⁺细胞数显著少于CON组及UCBMC对照组(P<0.01);WMD+UCBMC组MBP⁺DAPI⁺细胞数显著高于WMD组,仍少于CON组(P<0.01)。结论 UCBMC侧脑室移植可减少脑白质损伤低龄大鼠的少突胶质细胞的凋亡,减少髓鞘的脱失,从而修复损伤的脑白质。     

肺结核患者白细胞介素—2及其受体和T细胞亚群的研究

肺结核患者血清白细胞介素－２活性检测曾有个别报道,结果不一;对患者血清可溶性白细胞介素－２受本（ｓＩＬ－２Ｒ）检测表明,此类患者ｓＩＬ－２Ｒ水平明显升高;对ｍＩＬ－２Ｒ和Ｔ细胞亚群也有少量报道。但系统、综合报道ＩＬ－２活性、ｍＩＬ－２Ｒ、ｓＩＬ－２Ｒ和Ｔ淋巴细胞亚群及其关系文献较少。为此我们检测了１４２例肺结核患者ＩＬ－２活性、ｍＩＬ－２Ｒ表达、ｓＩＬ－２Ｒ水平和Ｔ淋巴细胞亚群的变化,结果报告如下：１　材料和方法１．１　临床资料１．１．１　肺结核组　１９９４年１０月－１９９８年４月住院肺结核患者…     

大麻素受体2与子宫颈癌组织内浸润T细胞亚群的关系

目的研究大麻素受体2(cannabinoid receptor 2,CB 2)在人子宫颈癌组织中的表达及其与肿瘤内浸润T细胞亚群,包括FOXP 3+T、CD 4+T、CD 8+T细胞的关系。方法选取2016年德州市中医院病理科保存的人体手术切除标本90例,纳入30例正常人宫颈组织为对照A组、30例人高级别宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ~Ⅲ级组织为对照B组、30例人子宫颈癌组织为观察组。采用免疫组织化学法及实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测CB 2在各组中表达情况,采用间接免疫荧光双标法检测观察组组织内浸润FOXP 3+、CD 4+T、CD 8+T细胞数目。结果 CB 2蛋白及mRNA在3组中均有表达,且在观察组中表达最高、对照B组中次之、对照A组中表达量最低,各组间差异均有统计学意义(P0.05);观察组CB 2蛋白及mRNA的表达均与组织内浸润的CD8+T呈负相关(P0.05)。结论 CB 2在人子宫颈癌组织内存在高表达现象,且与组织内浸润CD 8+T细胞数量减少有一定相关性。     

齿密螺旋体对小鼠T细胞IL-2mRNA表达水平及活性的影响

齿密螺旋体(Treponea denticola T．d)是一种能常在口腔内检出的微生物，T．d常在龈下菌斑定居，可产生一系列破坏性酶和细胞抑制因子破坏牙周组织．因此有些学者认为T．d可能是牙周炎的特定致病因子之一。本研究探讨T．d对小鼠T细胞中IL-2 mRNA表达水平及活性的影响作用．有助于进一步弄清T．d导致牙周炎发生的机理。     

两种T细胞亚群检测方法的比较

目的 :比较流式细胞仪和玫瑰花结法检测T细胞亚群的差异。方法 :用玫瑰花结法检测 2 1例健康人外周血T细胞亚群的变化 ,并与流式细胞仪作比较。结果 :两种检测方法相比 ,无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :玫瑰花结检测T细胞亚群的方法值得临床推广应用。     

MHV-3诱导小鼠暴发性肝炎模型中γδT细胞的抑制性受体表达

目的：通过分析在MHV-3诱导的小鼠暴发性肝炎模型中,小鼠感染病毒前后γδT细胞其抑制性受体NKG2A表达情况,以此探讨爆发性肝炎初期疾病急速恶化的机制。方法：建立MHV-3诱导小鼠暴发性肝炎模型,观察小鼠的死亡率;并检测在不同感染时间点0h、12h、24h、48h时对小鼠肝组织行伊红-苏木精染色（HE染色）,观察肝脏病理学改变,ALT和AST水平。流式细胞学方法,标记γδT细胞,并标记其NKG2A的表达。结果：MHV-3诱导小鼠暴发性肝炎模型中,γδT表面所表达活化性受体NKG2A表达维持低水平。结论：小鼠爆发性肝炎初期,肝脏重要的天然免疫效应细胞γδT细胞细胞表面抑制性受体NKG2A维持低水平表达,提示机体负调控机制缺失,导致γδT细胞可抑制性低下,最终引起免疫失衡。     

HIV-1感染者CD8+T细胞受体基因多样性特点及其与病毒载量的相关性

目的 研究HIV-1感染者CD8+T细胞受体(TCR)基因的多样性变化特征及其与病毒载量的相关性.方法 应用抗CD8单克隆抗体从9份HIV-1感染者和7份HIV-1阴性对照样本外周血单个核细胞中分离CD8+T细胞,提取总RNA,然后采用一步(one step)及巢式(nested)多聚酶链式反应(PCR)的方法对22个T细胞受体Vβ基因家族的瓦补决定区3(CDR3)进行扩增,利用ABI-3700测序仪对扩增的PCR产物进行扣描,定量分析HIV-1感染者TCR CDR3区多样性变化特征及其与病毒载量的相关性.结果 HIV-1感染者和正常人相比较其CD8+T细胞的TCR基因多样性明显减少,部分TCR Vβ基因家族CDR3区的高斯分布破坏;TCR的紊乱与病毒载量呈正相关(r=0.771,P<0.05);HIV-1感染引起患者TCR多样性的改变不仅表现在不同Vβ基因家族上,而且也表现在CDR3长度上,其中感染者VB2、Vβ4、Vβ5、Vβ17、Vβ20、Vβ21、Vβ23及Vβ24基因家族的变化与正常人存在统计学差异.结论 HIV-1感染能引起CD8+T细胞TCR基因多样性的减少及高斯分布的破坏,TCR CDR3区的紊乱与病毒载量呈正相关.     

汽车尾气处理花粉对哮喘小鼠辅助性T细胞17/调节性T细胞的影响

目的探讨汽车尾气污染艾蒿花粉,对哮喘小鼠辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)比例失衡的影响。方法选择60只6~8周龄的雄性BALB/c小鼠为研究对象。采用随机数字表方法,将60只受试小鼠随机分为A~D与对照组,共计5组,每组均为12只。A组变应原和激发物均为艾蒿花粉提取液;B组变应原为艾蒿花粉提取液,激发物为汽车尾气污染艾蒿花粉提取液;C组变应原为汽车尾气污染艾蒿花粉提取液,激发物为艾蒿花粉提取液;D组变应原和激发物均为汽车尾气污染艾蒿花粉提取液;对照组变应原和激发物均为磷酸缓冲液(PBS)。收集这5组受试小鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液(BALF)和脾脏标本分别进行:1HE染色、高倍镜下观察各组小鼠肺组织病理学改变;2统计学比较各组小鼠BALF中IL-17A、-10含量及细胞计数、分类的差异;3统计学比较各组小鼠脾脏单个核细胞中Th17及Treg占CD4+T细胞比例,以及Th17/Treg比值的差异。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。结果 1A~D组哮喘小鼠均存在不同程度小支气管管腔收缩及周围组织炎性细胞浸润,以D组程度最严重。2A~D组哮喘小鼠BALF中,IL-17A含量均分别较对照组高,而IL-10含量均分别较对照组低,且差异均有统计学意义(P0.01)。A~C组哮喘小鼠BALF中,IL-17A含量均分别较D组低,而IL-10含量均分别较D组高,且差异均有统计学意义(P0.05)。A~D组小鼠BALF中,细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)、中性粒细胞(NEU)分类计数,均分别较对照组高;A~C组BALF中EOS及NEU分类计数均分别较D组低,且差异均有统计学意义(P0.05)。3A~D组小鼠脾脏单个核细胞中,Th17细胞占CD4+T细胞比例及Th17/Treg均分别较对照组高,而Treg细胞占CD4+T细胞比例均分别较对照组低,且差异均有统计学意义(P0.01);其中D组小鼠脾脏单个核细胞中Th17/Treg较A组高,且差异有统计学意义(P0.05)。结论汽车尾气污染花粉诱发的哮喘,其细胞免疫失衡更明显,释放更多炎性介质,导致更严重的气道炎症反应。     

小鼠骨髓间充质干细胞调节T细胞亚群表达趋化因子受体的研究

目的：研究小鼠T淋巴细胞亚群受骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）调控表达趋化因子受体的变化。方法：小鼠骨髓细胞悬液进行贴壁培养法分离出骨髓间充质干细胞,经培养扩增后按不同比例（10%及1%）与经过植物血凝素（PHA）刺激的小鼠淋巴细胞混合培养,流式细胞术检测趋化因子受体CXCR3,CCR5,CCR7在不同T细胞亚群中表达的变化。结果：在CD3＋CD8＋亚群中,添加了骨髓间充质干细胞的两个培养组均较对照组增高表达CXCR3及CCR7（P〈0.05）,而CCR5仅在10%MSC的高浓度组较对照组有增高表达。在CD3＋CD4＋亚群中,CXCR3的表达在10%MSC组、1%MSC组及对照组表达差异均无统计学意义（P〉0.05）;CCR5及CCR7在添加了骨髓间充质干细胞的两个培养组均较对照组增高表达,且在该两种骨髓间充质干细胞浓度梯度中呈剂量依赖性。结论：骨髓间充质干细胞在与淋巴细胞呈一定的细胞比例共培养时能不同程度上调T淋巴细胞及亚群表达趋化因子受体CXCR3、CCR5、CCR7,提示骨髓间充质干细胞可提高T淋巴细胞亚群的趋化能力。     

CD52单抗通过清除活化T细胞对IL-10基因敲除小鼠结肠炎的干预作用

目的:观察CD52单抗对IL-10基因敲除小鼠结肠炎的干预作用并探究其干预作用的可能机制。方法:给予CD52单抗治疗后,计算疾病活动度指数,检测结肠病理学评分,外周血、脾脏及结肠固有层单个核细胞中T淋巴细胞的清除情况,结肠组织炎性因子水平及相关细胞因子的m RNA转录水平的变化。结果:CD52单抗能有效降低疾病活动度评分、结肠病理学评分,能显著地清除模型小鼠外周血、脾脏及结肠固有层单个核细胞中CD3+T细胞,明显降低结肠组织中IFN-γ、IL-17的表达水平,同时增加了IL-5和IL-13的表达,并相应下调TNF-α、IFN-γ、IL-17和IL-6及炎症调控因子IL-12和IL-23的m RNA表达水平。结论:抗CD52单抗能有效地治疗IL-10基因敲除小鼠的结肠炎,其干预效果与活化T细胞的直接清除相关,此外,其对IL-12/23通路的下调及Th2反应的诱导作用亦可能与干预作用相关。     

卫生部关于增补结核感染T细胞检测（免疫斑点法）和EB病毒Rta蛋白抗体IgG检测两项临床检验项目的通知

各省、自治区、直辖市卫生厅局,新疆生产建设兵团卫生局：为加强医疗机构临床实验室管理,提高临床检验水平,保障医疗质量和医疗安全,我部于2007年印发了《医疗机构临床检验项目目录》（卫医政发[2007]180号）。根据临床工作实际需求,经专家论证,决定增补结核感染T细胞检测（免疫斑点法）和EB病毒Rta蛋白抗体IgG检测两...     

母婴交换小鼠模型的孕期雌鼠血浆中存在胎儿脱细胞DNA

胎儿脱细胞DNA（fDNA）可在人类妊娠期血浆中检测到。并在临产后迅速清除。研究观察能否在小鼠模型的血浆中检测到fDNA．并比较妊娠期母体和胎儿的fDNA是否同源。动物为高绿色荧光蛋白（GFP）的转基因小鼠。将小鼠分为4组。组1：8周大的C57BL／6J处女雌鼠与同源GFP＋的雄鼠交配。     

麻杏石甘汤及其加味对A型流感病毒感染小鼠T细胞亚群的影响

目的研究麻杏石甘汤及其加味对A型流感病毒感染小鼠T细胞亚群的影响。方法用甲型流感病毒鼠肺适应株经鼻腔接种小鼠,建立感染模型。实验设10倍麻杏石甘汤组、5倍麻杏石甘汤组、感染模型组、正常对照组。正常对照组、感染模型组灌胃给生理盐水,其它各组灌胃给相应浓度的药物,1次/d,0.4 ml/次,连续8 d。最后一次给药后禁水、禁食8 h,取标本进行T细胞亚群百分率的检测。结果10倍麻杏石甘汤加味方组CD3 、CD4 T细胞亚群百分率、CD4 /CD8 比值显著高于感染模型组(P<0.05),CD8 T细胞亚群百分率显著低于感染模型组(P<0.05)。10倍麻杏石甘汤组、5倍麻杏石甘汤加味方组CD8 T细胞亚群百分率显著低于感染模型组(P<0.05)。结论10倍临床最大用量的麻杏石甘汤和5倍临床最大用量的麻杏石甘汤加味方能明显调整流感病毒感染小鼠T细胞亚群的百分率。