碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对许旺细胞在小肠粘膜下层细胞粘附活性的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）缓释微球对许旺细胞（SC）在小肠粘膜下层（SIS）上的粘附影响。方法运用双酶两步消化法对SC进行体外分离、培养、纯化,将bFGF-PLGA缓释微球（bFGF-PLGA-MS）与SC及SIS进行体外复合培养,并以游离bFGF组及单纯培养液组进行对比,观察bFGF-PLGA缓释微球对SC在SIS上粘附影响。结果运用双酶两步消化的体外原代培养方法获取的雪旺细胞数量较多,细胞纯度可达90%以上。细胞的体外增殖活性良好,细胞增殖周期约为6～7天,培养后2～7天为对数生长期,第7天后进入生长平台期;bFGF缓释微球能持续地促进雪旺细胞在SIS上的粘附、增殖及迁移;细胞增殖周期缩短,细胞能较稳定地保持着良好的活性;提高了细胞增殖指数,并使SIS上的SC持续保持较高的增殖活性;细胞数量与bFGF含量的相关系数为0.988（P=0.02）,表明两者间有明显正相关关系。结论 bFGF-PLGA微球的药物缓释促进了SC在SIS上持续而稳定的粘附,为以SC复合SIS构建人工神经提供了有利条件。     

碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对雪旺细胞作用的实验研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）缓释微球对雪旺细胞的作用。方法 培养雪旺细胞，将bFGF、bFGF-聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球（PLGA微球）和bFGF-聚乳酸-聚乙二醇共聚物微球（PELA微球）分别加入三个组的雪旺细胞培养液中。用细胞计数法测定雪旺细胞的数量，四甲基偶氮唑盐微量反应比色法（MTT法）测定雪旺细胞的活力，流式细胞仪测定雪旺细胞的细胞周期。结果 培养1、2d时，bFGF组的雪旺细胞计数、活力明显高于PLGA微球组和PELA微球组；培养3、4d时，bFGF组和PLGA微球组的雪旺细胞计数、活力明显高于PELA微球组；培养6、8d时．PLGA微球组的雪旺细胞计数、活力明显高于bFGF组和PELA微球组。流式细胞仪检测结果显示，培养2d后，bFGF组的Gz／M＋S期百分数最高；培养4、8d后，PLGA微球组的G2／M＋S期百分数最高，差异具有统计学意义。结论 游离bFGF对雪旺细胞促分裂增殖作用效应期短，而PLGA微球能在较长时期内促进雪旺细胞的分裂增殖，PELA微球虽然达到了缓释的性能要求，但释放出的bFGF的生物活性受到了破坏。     

复合bFGF缓释微球的制备与性能测定

目的:制备复合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的可降解缓释微球,考察其各项性能,为进一步应用于组织工程奠定基础.方法:采用改良的乳化冷凝法交联制备复合bF-GF的缓释微球,测定微球形态、粒径、载药率和包裹率等,并采用ELISA法考察其体外bFGF的缓释效能.结果:缓释微球平均粒径(12.4±3.6)μm;平均载药率为0.24%,平均包裹率为96.82%.d 1体外释放28.23%,2～5 d时累积释放率达到57.19%,d 7时释放减慢且累计浓度为93.94%.结论:复合bFGF的缓释微球制备工艺简便,性能优良;可在较长时间内持续释放活性bFGF,与组织工程支架的结合应用具有可行性.     

骨形态发生蛋白2聚乳酸缓释微球对兔骨髓间充质干细胞相容性研究

目的：观察重组人骨形态发生蛋白2（rhBMP‐2）聚乳酸（PLA）缓释微球对兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）相容性。方法通过复乳干燥法制备rhBMP‐2‐PLA缓释微球,并与兔BMSCs共培养,采用MTT法检测rhBMP‐2‐PLA缓释微球对细胞的毒性及增殖,并通过倒置显微镜及扫描电镜等评价材料的细胞相容性。结果 rhBM P‐2‐PLA缓释微球各浓度浸提液与BM‐SCs培养得出对细胞无毒性。实验组与对照组4个不同时间细胞增殖光密度（OD）值经重复测量方差分析得出时间之间 OD值比较,差异有统计学意义（P＝0．000）;实验组与对照组 OD值比较差异有统计学意义（P＝0．025）,实验组 OD值高于对照组,时间与组数有显著交互效应,二者变化趋势明显不同（ P＝0．006）。倒置显微镜观察材料组细胞增殖正常,扫描电镜发现接种7 d后细胞周边有rhBMP‐2‐PLA缓释微球,细胞生长良好,增殖分裂活跃。结论 rhBMP‐2‐PLA缓释微球对BMSCs无毒性,具有良好的细胞相容性。     

转化生长因子明胶微球的制备及其对人牙周膜细胞增殖作用的影响

目的：通过转化生长因子（TGF-β1）明胶微球的制备,探讨其用于牙周病治疗的可行性。方法：采用改良的乳化冷凝法制备TGF-β1的明胶缓释微球。体外培养人牙周膜成纤维细胞（hPDLCs）,并将不同浓度（1、5、10mg／m1）的载药明胶微球作用于hPDLCs,用四甲基偶氮唑盐微量反应比色法（MTT法）测定细胞增殖情况。结果：微球大小均匀,分散度好,平均粒径为（10．28±2．24）μm,药物包封率为78．5％,微球中TGF-β1载药量为785ng／g。体外7d内药物累积释放94％,TGF-β1明胶微球可明显促进hPDLCs的生长。结论：TGF-β1明胶微球能较长时间持续释放TGF-β1,促进hPDLCs持续增殖。该种药物剂型有望用于治疗牙周病。     

刍议盐酸四环素缓释微球对大鼠成骨细胞活性的影响

目的：对盐酸四环素缓释微球对大鼠成骨细胞活性影响进行观察、分析。方法：将SD大鼠成骨细胞进行体外分离培养,观察其形态学指标,应用碱性磷酸酶钙-钴法对标本进行染色处理,并观察鉴定标本的细胞生物学特征,分别将盐酸四环素聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球与成骨细胞、盐酸四环素与成骨细胞进行培养,对两组成骨细胞的增殖相关情况进行测定,观察ALP活性及I型胶原表达情况。结果：盐酸四环素聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球可对SD大鼠成骨细胞的增殖现象具有明显促进作用,对ALP表达同样具有积极作用,其有效时间明显高于盐酸四环素组及对照组,对3组成骨细胞I型胶原的表达水平进行测定,结果差异不明显。结论：盐酸四环素聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物缓释微球对成骨细胞的增殖作用及ALP活性具有明显促进作用,在骨创伤进行修复重建治疗中具有一定的临床应用价值。     

bFGF-PLA缓释纳米微球的制备及体外释药的研究

目的制备bFGF-PLA纳米微球,观察其一般特性、载药量和包封率和缓释特性。方法应用超声乳化法制备缓释bFGF-PLA纳米微球,观察其一般特性,采用ELISA方法测定bFGF含量,并模拟体内条件研究bFGF-PLA纳米微球的体外缓释特性。结果纳米微球表面光滑圆整,球体大小均匀,平均粒径为(0.045±0.013)μm,微球包封率和载药量分别为(91.72±1.31)%和〔(27.65±0.44)×10-3〕%。微球体外释药符合Higuichi方程:突释期仅为18.37%,14d后释放度达75.72%。结论bFGF-PLA纳米微球制备工艺效果满意,具有明显的缓释作用。     

bFGF-PLA-Ns对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的观察制备的碱性成纤维生长因子聚乳酸纳米微球缓释系统(bFGF-PLA-Ns)对体外培养的兔成骨细胞的增殖、分化和矿化能力的影响。方法体外培养兔成骨细胞并鉴定,将bFGF-PLA-Ns和第4代成骨细胞一起培养,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞ALP活性,茜素红染色方法观察矿化结节的形成,并与单纯bFGF和空白组的作用进行比较。结果bFGF-PLA-Ns具有良好的生物活性,能显著促进兔成骨细胞的分化和矿化,其效应高于单纯施加bFGF和空白组的效应。结论制备的bFGF-PLA-Ns比单纯的bFGF对体外培养的成骨细胞有更为显著的生物学效应,在骨创伤的治疗中有良好的前景。     

红细胞生成素对体外培养许旺细胞增殖周期及其分泌神经营养因子的影响

目的观察促红细胞生成素（EPO）对体外培养许旺细胞（SCs）增殖周期及其分泌神经生长因子（NGF）和睫状神经生长因子（CNTF）的影响,探讨EPO促进周围神经再生的机制。方法对成年新西兰兔的坐骨神经进行结扎预变性,1周后取预变性的坐骨神经,剥净神经外膜,用植块法、差速贴壁法培养纯化许旺细胞,向培养基中加入不同剂量的EPO,通过流式细胞术检测细胞增殖周期分布,应用ELISA测定培养上清液中的NGF和CNTF水平。结果与对照组相比,实验组许旺细胞处于S期数量（S％）和增殖指数PrI值[（S＋G2M）％]都有明显升高,培养上清液中的NGF和CNTF水平明显增高。结论EPO可提高体外培养许旺细胞的增殖活性,并且能提高许旺细胞分泌神经营养因子的水平,这可能是其促进周围神经再生的作用机制之一。     

三氧化二砷白蛋白微球的理化特性及抗肿瘤活性检测

目的：制备三氧化二砷（As2O3）白蛋白微球并鉴定其理化特性及抗肿瘤活性。方法：通过乳化热固化法制备（As2O3）白蛋白微球,应用电镜、微球稳定性实验及体外动力缓释实验等测定其理化特性和释放特性,并以MTT法测定缓释液对骨肉瘤细胞株U-2OS、人肺癌细胞株（SPC-A-1）增殖的抑制能力。结果：As2O3微球粒径集中在56.4～256.7μm。平均（156±3.56）μm。微球含量为（55.22±11.19）％。As2O3微球半数释放时间为23.34h。As2O3微球缓释液表现出对U-2OS及SPC-A-1较强的抑瘤活性。结论：经检测乳化热固化法制备出的As2O3白蛋白徽球,具有较好的理化、缓释特性及抑瘤能力。     

丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石骨组织工程支架材料的体外细胞毒性评价

目的 探讨丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石生物支架与兔骨髓间充质干细胞的体外细胞毒性.方法 采用丝素蛋白/壳聚糖/纳米羟基磷灰石构建的生物支架与兔骨髓间充质干细胞体外共培养,用材料的细胞毒性、细胞黏附率、细胞增殖活力指标以MTT法、倒置显微镜及电镜观察来评价.结果 细胞在支架材料上黏附、生长良好,分裂增殖活跃,细胞毒性检测CTG均为0级,实验组与时照组细胞黏附率比较无统计学差异（P＞0.05）,实验组与对照组细胞增殖活力随着时间增加,细胞在支架增殖速度增快.第1、3、5、7天实验组与对照组比较有统计学差异（P＜0.05）.扫描电镜观察发现细胞培养7天后生长良好,分裂正常,与支架材料黏附紧密.结论 支架材料对细胞无毒性,具有很好的细胞相容性.     

转染VEGF165的鼠膀胱平滑肌细胞种植小肠粘膜下层在大鼠膀胱重建中的应用

目的：了解转染VEGF165的鼠膀胱平滑肌细胞种植小肠粘膜下层在大鼠膀胱重建中的促血管生成作用.方法：将种植了转染VEGF的膀胱平滑肌细胞的小肠粘膜下层（SIS）体外培养后移植至大鼠体内,并以膀胱缺损自然愈合和单纯植入SIS为对照进行观察,于术后10wk内每隔2wk取标本进行组织学和免疫组化检测CD34和VEGFR2的表达,观察支架植入物的组织生长和修复情况.结果：膀胱缺损自然愈合组的大鼠术后1wk时膀胱缺损区已有膀胱移行上皮形成,第2周时新生的膀胱粘膜已覆盖缺损区.在植入SIS的两组动物中,术后1wk时炎性细胞浸润明显,可见膀胱移行上皮形成;术后2wk时炎性细胞减少,单纯SIS植入组和转染VEGF组均可见完整的上皮形成,两组未见明显的差异;此时已有新生毛细血管,VEGF受体的表达呈阳性,且转染VEGF组中新生毛细血管数量和VEGF受体的阳性表达细胞数高于单纯SIS植入组（P〈0.05）;术后4wk时新生毛细血管形成较第2周时明显增多（P〈0.05）,但两组间新生毛细血管数和VEGF受体表达阳性细胞数未见显著性差异,同时两组可见少量平滑肌纤维形成;术后6wk以后平滑肌形成逐渐增多,到第10周时可见明显的平滑肌束,两组间新生毛细血管数和VEGF受体表达阳性细胞数未见显著性差异.结论：转染VEGF165的鼠膀胱平滑肌细胞种植小肠粘膜下层在大鼠膀胱重建4wk内有促血管生成作用,6wk后两组新生毛细血管数和VEGF受体表达阳性细胞数未见显著性差异.     

改性聚乳酸与Schwann细胞的生物相容性研究

目的:对不同的改性聚乳酸材料进行Schwann细胞(SC)生物相容性观察。方法:采用细胞增殖度法,观察不同材料浸提液对SC增殖影响,进行毒性评级;采用相差显微镜、扫描电镜、荧光分光光度法观察细胞形态以及黏附情况。结果:除2#材料(PLA-g-HEMH)的高浓度浸提液毒级为2级外,其余毒级均为0~1级,细胞生长良好,其黏附性较未改性聚乳酸高,但所有材料SC的黏附性仍低于培养板(P<0.01)。结论:改性后的材料细胞生物相容性良好,其表面亲水性增加,但2#材料可能在改性过程中表面酸度增加,在处理上有必要改进。     

阳离子脂质体介导神经营养因子-3在大鼠雪旺细胞中的表达

目的观察阳离子脂质体转染神经营养因子-3（Neurotrophin-3,NT-3）基因在大鼠雪旺细胞（schwann cell,SC）的表达和提高SC细胞分泌NT-3的能力。方法采用阳离子脂质体介入法,将脂质体转染酶介导的NT-3转染至SC细胞,以转染后及未转染作为实验组和对照组,于转染后1、2、4、8周用ELISA双抗体夹心法测定NT-3蛋白的表达,采用DNA酶切鉴定转染后NT-3的DNA,免疫组化S-100染色法检测转染前后SC纯度。电镜下观察转染后SC细胞结构。结果转染后2、4、8周NT-3蛋白表达量与转染前比较差异有统计学意义（P〈0.05）。转染后NT-3的DNA酶切鉴定结果与NT-3基因片段相符。转染前后SC纯度分别为（94.1±2.3）%及（95.8±2.1）%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 NT-3基因可转染培养的SC并高效表达。SC作为受体细胞易于获取并能在体外大量培养繁殖,能较长时间稳定大量表达所携带基因而不衰减。     

辛伐他汀治疗激素性股骨头坏死患者的效果观察及对循环内皮祖细胞功能的影响

目的探讨辛伐他汀治疗激素性股骨头坏死的临床疗效及其对循环内皮祖细胞功能的影响。方法选择华北油田总医院骨科2010年2月～2012年10月诊治的激素性股骨头坏死患者24例,随机分为治疗组及对照组,每组各12例,同时设立12例正常组。所有患者均予常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用辛伐他汀治疗。采用Harris评分对其临床疗效进行评估,同时对各组患者治疗前后循环内皮祖细胞的体外增殖、黏附、迁移能力进行检测。结果治疗组及对照组循环内皮祖细胞的体外增殖能力[（0.52±0.14）和（0.53±0.17）]、黏附能力[（5.93±1.67）个/HPF和（5.67±1.58）个/HPF]、迁移能力[（6.28±1.53）个/HPF和（6.64±1.75）个/HPF]均较正常组[（0.76±0.13）、（13.42±3.15）个/HPF、（13.62±3.73）个/HPF]显著下调,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。治疗组经辛伐他汀治疗12周后其循环内皮祖细胞的体外增殖能力（0.72±0.15）、黏附能力[（11.93±3.45）个/HPF]、迁移能力[（10.56±3.09）个/HPF]较对照组[（0.62±0.11）、（8.51±3.63）个/HPF、（7.48±3.13）个/HPF]显著上调,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）;同时治疗组Harris评分[（93.47±4.06）分]也明显高于对照组[（87.63±3.59）分],差异有统计学意义（P〈0.05）。结论辛伐他汀能够通过显著改善激素性股骨头坏死患者循环内皮祖细胞的功能状态,从而实现对该疾病的有效治疗。     

低氧对鼠雪旺氏细胞增殖的影响

目的观察低氧对鼠雪旺氏细胞体外增殖的影响,为雪旺氏细胞扩增培养探索新方法。方法原代分离培养雪旺氏细胞并鉴定,将培养至第三代的细胞分为3组,分别为对照组,10%02组和3%O2组。对各组细胞记数;测定培养液中氧含量和乳酸浓度及各组细胞的增殖指数。结果随着环境氧浓度的下降,细胞培养液中的氧含量也逐渐下降（P〈0.05）,而乳酸浓度逐渐升高（P〈0.05）。低氧组雪旺氏细胞数目比常氧组明显增加,尤以10%O2组更为明显（P〈0.05）,3%O2组在低氧1d和2d时增殖指数低于常氧组,低氧4时,增殖指数增加;而10%O2组增殖指数一直高于常氧组（P〈0.05）。结论轻中度低氧有利于鼠雪旺氏细胞的体外增殖。     

人脐带间充质干细胞源胞外囊泡促进施万细胞增殖和迁移

目的: 探讨人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs）源胞外囊泡（extracellular vesicles,EVs）对施万细胞增殖和迁移的影响。方法: 应用高速离心法从hUCMSCs上清液中分离和纯化EVs（hUCMSC-EVs）,透射电镜观察EVs形态特征;蛋白质印迹法检测EVs标志性蛋白CD63和CD9的表达;通过CCK-8和Transwell小室实验检测不同浓度的hUCMSC-EVs对施万细胞增殖和迁移能力的影响;共聚焦显微镜观察原代施万细胞对EVs的内吞。结果： hUCMSC-EVs呈圆形或椭圆形,且表达特异性分子标志物CD9和CD63;与对照组相比,hUCMSC-EVs显著促进施万细胞增殖和迁移（P均<0.05）;hUCMSC EVs与施万细胞孵育后细胞膜融合。结论： hUCMSC-EVs可显著促进施万细胞的增殖和迁移且呈浓度依赖。     

激活态雪旺细胞体外培养与纯化的新方法

目的：探求一种快速培养高纯度激活态雪旺细胞的新方法。方法：wistar大鼠坐骨神经体内切断后7d,取预变性坐骨神经,综合运用混合酶消化、三次组织块移植法,原代提取雪旺细胞,低酶双差速纯化雪旺细胞,不做任何处理的坐骨神经作为对照组。结果：此法培养的雪旺细胞纯度为97．8％左右,细胞增殖能力是未做预变性组的5倍。结论：体内预变性、体外两步酶消化-三次组织块移植结合低酶双差速纯化是一种简便、快速的原代培养、纯化雪旺细胞的方法。