低剂量γ射线预照射人鳞癌细胞导致对低剂量顺铂处理的抗性增强

目的 :研究人鳞癌细胞株 SCC- 2 5及其转化的抗顺铂细胞株 SCC- 2 5 / CP对低剂量顺铂的超敏感性及在较高剂量时增强的抗性 ,并检测低剂量γ射线照射 SCC- 2 5细胞前后对顺铂抗性的影响。方法 :1SCC- 2 5和 SCC- 2 5 / CP细胞株在含 10 %胎牛血清和 0 .4μg/ ml皮质醇的达尔伯克氏改良伊格尔培养基( DMEM-高葡萄糖 )中单层培养。 2克隆活性分析 :用 6孔培养板以每孔 180 0个 SCC- 2 5细胞和 10 0 0个 SCC- 2 5 / CP细胞于顺铂处理前培养过夜 ,处理后再培养 5～ 7天 ,计数 >30个细胞的克隆数。 3顺铂处理 :加适当浓度的顺铂于每…     

通过考虑其他死亡模式可能提高微核和细胞凋亡测定与生殖细胞死亡的相关性

目的 :用 10种细胞株评价微核及凋亡细胞和生殖细胞死亡的相关性。方法 :110种细胞株 :单层或悬浮生长 ,每周传代培养 2次。 2照射 :指数生长期细胞培养 2 4h后 ,单次 X线照射 (剂量率 1Gy/ m in) ,各细胞株分别选择不同剂量照射以获得一个可比较的存活水平。 3细胞生存率 :用标准克隆基因细胞生存分析法。 4微核分析 :测定微核形成率。 5细胞凋亡测定 :用光镜检测细胞凋亡率。 6异常细胞测定 :主要检测双核、四核和坏死细胞。 7微核、细胞凋亡和异常细胞 (MAA)分析。 8DNA电泳 :检测细胞凋亡特征性“DNA梯”。结果 :1研究一种死亡模式…     

电离辐射联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对乳腺癌MCF-7细胞株作用的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对人乳腺癌MCF．7细胞株的作用以及与放射治疗联合的可行性。方法1×10^4／ml MCF-7细胞接种至96孔板培养后加入不同浓度的TRAIL、给予不同剂量照射及TRAIL与电离辐射联合，Mrrr法检测细胞抑制率。MCF-7细胞接种至6孔板培养后，分别加入TRAIL（1μg／ml）、给予8Gy照射及TRAIL与8Gy照射联合，流式细胞术检测不同处理组细胞的凋亡率。应用RT-PCR法检测经不同处理后的细胞凋亡相关基因的表达情况。结果TRAIL（1μg／ml）与4、8和12Gy照射联合后对细胞的抑制率明显增加，与单独应用TRAIL及单独照射相比，差异有统计学意义。RT-PCR结果显示Bcl-2、Bcl-Xl基因在TRAIL与8Gy照射联合时表达减弱。结论在体外实验中，乳腺癌MCF-7细胞株对TRAIL不敏感，但TRAIL与电离辐射照射联合后抗肿瘤作用增强，TRAIL可能是一种有临床应用潜能的新型抗肿瘤生物制剂。     

~(60)Coγ射线照射诱导人卵巢癌细胞凋亡及细胞周期的改变

目的　探讨6 0 Coγ射线照射对人卵巢癌细胞株A2 780及其顺铂耐药株A2 780 CP体外生长、凋亡及细胞周期的影响。方法　采用四甲基偶唑蓝 (MTT)比色法分析不同辐照剂量 (1～10Gy)对A2 780及A2 780 CP两种细胞株体外生长的影响 ,用流式细胞术 (FCM)比较两者辐照后凋亡及细胞周期的变化。结果　 (1) 1～ 10Gy6 0 Coγ射线照射引起A2 780细胞株明显的生长抑制和凋亡 ,而A2 780 CP细胞则表现出明显的辐照抗性 .(2 ) 6Gy6 0 Coγ射线照射后 6～ 48hA2 780细胞呈现G1 期细胞阻滞和S期细胞比例下降 ,A2 780 CP细胞则呈G1 期细胞比例减少和S期细胞比例增加。结论卵巢癌耐药细胞具有辐射抗性和特征性的细胞周期变化 ,流式细胞术测定辐照诱导肿瘤细胞凋亡及细胞周期的变化可预测恶性肿瘤细胞的辐射敏感性。     

波长510.6 nm铜蒸气激光诱导兔血管平滑肌细胞凋亡的照射剂量筛选

目的　筛选对离体培养的兔血管平滑肌细胞 (VSMC)能诱导出较高凋亡率的激光照射剂量参数。方法　取离体培养的第 4代兔VSMC ,予波长 5 10 6nm铜蒸气激光照射 ,照射剂量为功率密度 10 0、2 0 0、30 0mW cm2 ,能量密度10 0、15 0、180、2 0 0、2 10、30 0J cm2 。脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL)标记检测各照射剂量组细胞凋亡率。结果　与对照组比较 ,各照射组VSMC凋亡率明显增高 ,达对照组凋亡率的 2 9～ 14 7倍 (P <0 0 5 )。以功率密度 30 0mW cm2照射 6 6 7s照射组之VSMC凋亡率最高 ,达 30 %。结论　以波长 5 10 6nm、功率密度 30 0mW cm2 铜蒸气激光照射兔VSMC 6 6 7s可诱导发生较高的细胞凋亡率     

~(60)Coγ射线诱导食管癌细胞凋亡的研究

笔者在本实验中用不同剂量60 Ｃｏγ射线照射人食管癌细胞系Ｅｃａ 10 9,研究照射前后癌细胞的凋亡率的变化和检测凋亡相关基因ｐ5 3、ｂｃｌ 2和ｂａｘ的表达 ,探讨放射诱导食管癌细胞凋亡的分子机理。一、材料和方法1 细胞培养 :人食管癌细胞系Ｅｃａ 10 9细胞由河南省肿瘤研究所提供。培养液为含 10 %新生牛血清及青霉素 (10 0Ｕ ｍｌ)和链霉素 (10 0 μｇ ｍｌ)的ＲＰＭＩ 16 40。细胞置于 37℃、5 %ＣＯ2 、饱和湿度的培养箱内培养 ,每隔 3ｄ传代 1次。2 照射处理 :在细胞呈指数生长期时 ,随机分为对照组和实验组 ,照射前 2 4ｈ更换培…     

电离辐射剂量率、照后培养时间和生长因子对人外周血淋巴细胞克隆存活和以凋亡为特征的分裂间期细胞死亡的影响

目的 :通过人外周血淋巴细胞凋亡和增殖细胞死亡观察剂量率、照后恒温培养时间和生长因子对电离辐射诱导的分裂间期细胞死亡的作用。方法 :将健康成人静脉血淋巴细胞在 RPMI 16 40培养基中培养 16 d。开始培养 6 d换半液 ,随后每隔 2 d换液 1次 ,经流式细胞仪检测 96 %～ 97%的细胞处于 G0 期。用高剂量率 (HDR,45 Gy/ h)或低剂量率 (L DR,0 .0 2 4Gy/ h)的 1～3Gy1 3 7　 Csγ射线照射 G0 期淋巴细胞。在 3Gy L DR组开始照射的第 1天 ,同时进行 HDR组照射 (HDR1) ,并在 3Gy L DR组结束照射的第 6天进行另一组 HDR照射 (HDR6…     

P糖蛋白抑制X射线诱导凋亡及对线粒体膜电位的影响

目的　观察P糖蛋白 (P gp)对X射线诱导凋亡和线粒体膜电位 (ΔΨm)的影响。方法运用流式细胞仪检测X射线照射后不同时间点细胞凋亡率和ΔΨm的动态变化。结果　P gp功能抑制组细胞在X射线照射后 6、12、2 4h细胞凋亡率分别为 2 5 5 3%± 2 85 % ,30 4 3%± 2 2 1%和39 0 3%± 2 6 0 % ;对照组分别是 16 13%± 1 16 % ,2 1 73%± 1 31%和 2 7 5 3%± 2 5 5 %。抑制组显著高于对照组 (P <0 0 1)。在X射线照射后 6、12、2 4hP gp抑制组和对照组细胞ΔΨm平均荧光强度 (MIF)均较照射前降低 ,但P gp抑制组各时间点ΔΨmMIF值较对照组细胞下降更显著 (P <0 0 1)。结论　P糖蛋白对X射线诱导凋亡具有显著抑制效应 ,其机理可能和其稳定的ΔΨm有关。     

人正常细胞和肿瘤细胞的适应性反应及其变化

目的:应用6种人细胞株评价适应性反应(AR)是否可能与辐射敏感性或肿瘤和正常细胞株有关。方法:16种人细胞株分别为成纤维细胞株OMB18和S11358,人乳腺癌细胞株T47D和HTB30及人黑色素瘤细胞株Sk-Mel3和HT144。所有细胞均于25cm2培养瓶中,用DMEM/F-12(50∶50)培养,经流式细胞仪检测细胞处于坪期时用于实验。2分别用0、0.2、0.5、1.0、2.0和4.0Gy诱导剂量照射后6h(T47D细胞株另进行1～24h实验)再用1、2、4、6和8Gy攻击剂量照射,剂量率为142cGy/min,电压250kVp,滤板1.07mmAl,以存活分数来估计AR。结果:1T47D细胞株经50cGy诱导剂量照…     

宫颈癌细胞株和正常间质细胞株受X线照射后的辐射效应

目的用宫颈癌、正常血管内皮和正常成纤维细胞株体外模拟宫颈癌实质和间质组织,研究其受到不同剂量放射线照射后的辐射效应。方法采用宫颈腺癌细胞株HeLa,宫颈鳞癌细胞株SiHa、C33A、Caski,人脐静脉内皮细胞株ECV304,及小鼠成纤维细胞株NIH/3T3细胞,分别用6MV的X线（300cGy/min）照射6和10Gy,24和48h后收集细胞,行PI染色,流式细胞术检测凋亡率和细胞周期变化。结果细胞株受到照射后,C33A凋亡率最高,而SiHa凋亡率最低,其余细胞株（包括ECV304与NIH/3T3细胞）均介于两者之间;各宫颈癌细胞株及NIH/3T3照射10Gy后48h的凋亡率较6Gy稍高（P〉0.05）,而ECV304照射10Gy后48h的凋亡率（13.04%±1.08%）比照射6Gy（6.51%±0.61%）明显升高（P=0.001）;各细胞株受到不同剂量照射后,均表现出明显的G2/M期阻滞,且阻滞细胞百分比随照射剂量增加而增加;受到照射后一般在24-48hG2/M期阻滞细胞百分比最高。结论高剂量照射可以提高血管内皮细胞的凋亡率,并导致剂量依赖性的G2/M期阻滞,为预测宫颈癌的高剂量放疗提供理论依据。     

在抗辐射的人胶质瘤细胞中Fas信号转导通路未受损害

目的:肿瘤细胞对放疗的抗辐射性常与凋亡通路障碍有关。因此,探讨了Fas信号转导通路是否在高度耐受辐射的人胶质细胞瘤中诱导细胞凋亡。方法:1将携带有荧光素酶基因和突变型p53cDNA(在175bp位点)的逆转录病毒载体转染至无p53基因突变的胶质瘤细胞株U-87MG中。培养细胞经剂量率为1.2Gy/min的X射线照射后,加入0.01ng/mlFas单抗和10μg/ml环己酰亚胺(抗真菌药),同时加入IL-1β转化酶(ICE)抑制剂或加入神经酰胺孵育5h。2Fas单抗介导的细胞毒性和凋亡实验。3采用流式细胞仪分析凋亡。结果:1经20Gy照射的U-87MG培养细胞数量没有明显增加,…     

低剂量辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应

目的：研究低剂量辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应。方法：应用原位末端标记（TUNEL）和常规HE染色法分别结合光镜定量地观察75mGyX射线照射诱导小鼠睾丸生精细胞在生精周期中凋亡的适应性反应。结果：当1．0、2．0或3．0Gy（攻击剂量，D2）X射线照射前6h给予75mGy（诱导剂量，D1）预照射时明显减轻D2对睾丸精原细胞和精母细胞的凋亡损伤作用，而对精子细胞影响不明显，当1．0、1．5、2．0、2．5、3．0Gy（D2）X射线照射前3、6、12、24h给予75mGy（D1）预照射时，发现当D2剂量较小（1．0、1．5、2．0Gy）时，精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少出现较早，较明显，而且持续时间较长；反之，当D2剂量较大（2．5和3．0Gy）时，精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少只有照后6h）出现，而且不显著。结论：低剂量电离辐射可以诱导精原细胞和精母细胞凋亡的适应性反应，并与D1和D2间隔时间及D2剂量有关。     

放射线诱导RSV转化神经细胞凋亡的研究

本文首次尝试以凋亡为指标研究ＲＳＶ (Ｒｏｕｓｓａｒｃｏｍａｖｉｒｕｓ)转化的大鼠神经细胞Ｒ2的放射效应特点 ,现报告如下。一、材料和方法1 细胞培养方法 :Ｒ2细胞系为中国医学科学院基础所提供。使用ＤＭＥＭ培养基 ,其中含有 10 %的小牛血清 ,每毫升各 10 0单位的青、链霉素及 15ｍｇ %的谷氨酰胺。于 5 %ＣＯ2 (ｖ/ｖ)空气的培养箱中密闭培养 ,0 2 5 %胰酶消化传代。照射时选择处于指数增殖期的细胞 (换液后 2 4ｈ)。2 Ｘ射线照射 :使用Ｖａｒｉａｎ直线加速器产生的 6ＭｅＶＸ射线进行照射 ,剂量率为 2 5 0ｃＧｙ/ｍｉｎ ,源皮距…     

60Co γ辐射诱导下IL-6对人多发性骨髓瘤细胞株凋亡效应的实验研究

目的　研究白介素 6 (IL 6 )在6 0 Coγ辐射诱导人多发性骨髓瘤细胞株XG 6、XG 7凋亡效应中的作用及其可能的分子生物学机理。方法　运用流式细胞仪技术 (FACS)、DNA片段释放法和RT PCR ,观察了IL 6对细胞株XG 6、XG 7中Bcl xL、BaxmRNA相对表达的影响及其与辐照诱导的细胞凋亡率的相关性。结果　IL 6存在时 ,XG 6、XG 7细胞的Bcl xL、BaxmRNA表达在辐照后迅速上升 ,4h达最高峰后逐渐下降 ,2 4～ 48h恢复到照射前水平 ;不加IL 6的XG 6、XG 7细胞的Bcl xL的表达在同样实验条件未检测到 ,而这 2株细胞BaxmRNA的表达在照射后不同时间均低于相应的加IL 6组 ,但尚有明显的表达。对不加IL 6的细胞组 ,辐照后不同时间的凋亡率明显高于相应的加IL 6组 (P <0 0 5 )。结论　IL 6可通过调节Bcl xL、Bax的表达及改变BcL xL Bax二者比率 ,保护辐照诱导XG 6、XG 7的细胞凋亡。     

103Pd对平滑肌细胞凋亡的影响

目的　探讨1 0 3Pd低能γ射线对体外培养血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡的作用。方法　体外猪VSMC原代、传代培养 ,不同剂量1 0 3Pd照射 2 4h后 ,分别用伊红染色测定细胞活力 ,以四唑盐(MTT)测定细胞增殖力 ,以流式细胞仪测定细胞周期阻滞情况及凋亡率 ,凋亡细胞DNA断裂末端标记 (TUNEL)法测定细胞凋亡 ,放射免疫分析法测定 6酮 前列腺素 (6 K PGF1α)、血栓素 (TXB2 )及血管紧张素Ⅱ (AⅡ )。结果　不同剂量1 0 3Pd照射 2 4h后 ,可见随剂量增加 ,培养液中悬浮死细胞增多 ;伊红染色细胞总数降低 ,死亡率上升 ,呈剂量依赖关系 ;MTT测定示各照射组VSMCA570nm 值均降低 ;流式细胞仪测定示受照射细胞大部分停留于G0 G1 期 ,而对照组进入S期 ,并可见亚二倍体峰 ;TUNEL法测定可见照射组阳性细胞中核固缩和核碎裂 ;细胞培养液中 6 K PGF1α TXB2 比值明显增加 ,并呈剂量依赖性 (P <0 .0 5 )。 5 .5 5～ 9.2 5MBq范围内 ,VSMC增殖明显受抑制 ,而凋亡细胞增加。 2 2 .2MBq1 0 3Pd照射 2 4h后 ,会导致细胞死亡。结论　低剂量1 0 3Pd可用于内照射治疗血管损伤后再狭窄。     

MAPK信号转导途径参与bFGF抑制辐射诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的作用

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对辐射诱导的血管内皮细胞凋亡的作用及其信号转导途径。方法　以6 0 Coγ射线照射建立原代分离培养的人脐带静脉内皮细胞凋亡模型 ,以流式细胞术 (Annexin V FITC +PI标记 )评价细胞凋亡率。观察不同浓度的bFGF和MEK的抑制剂U0 12 6对细胞凋亡的影响。结果　bFGF对辐射诱导的脐静脉内皮细胞凋亡有明显的抑制作用 ,细胞凋亡率可从 (35 2 2± 5 5 ) %降至 (11 6 7± 3 8) % ,而U0 12 6可部分阻断bFGF的抗凋亡作用 ,细胞凋亡率由 (10 5 9± 1 6 ) %升至 (17 96± 1 4 ) %。结论　bFGF可能通过MAPK信号转导途径抑制辐射诱导的脐静脉内皮细胞凋亡。     

大鼠脊髓照射后细胞凋亡及其与细胞增殖的关系

目的:评价大鼠脊髓照射后少突神经胶质细胞凋亡与细胞增殖的关系。方法:选择9～10周龄Fisher雌性大鼠,用氟烷吸入法麻醉,对2cm脊髓胸2～腰2(C2～T2)段行X射线照射。用2、8和22Gy单次剂量或2、8和22Gy初次剂量照射后1～63天间再次给予8Gy照射。大鼠在单次剂量22Gy照射前30分钟和照射后2小时给予腹腔注射环己酰亚胺(2mg/kg),以延迟细胞凋亡的出现。在不同剂量照射后0、4、8、12或24小时杀鼠,心脏用10%福尔马林灌注10分钟,取C2～T2段中部,石蜡包埋,染色,计算细胞凋亡指数和总凋亡产量(TAY,为照射后24小时内总凋亡细胞的百分数)。细胞增殖…     

体外雌激素代谢物2-甲氧雌二醇增强辐射效应

目的 :2 -甲氧雌二醇 (2 - ME)是一种内源性雌二醇代谢物 ,具有破坏微管、抑制小鼠肿瘤和血管生成功能。由于某些微管抑制剂可改变辐射敏感性 ,因而对 2 - ME在体外作为辐射增强剂进行评价。方法 :1选用 H46 0人肺癌细胞株、MCF- 7乳房癌细胞株和 4种小鼠 SCID免疫缺陷细胞株 (SCID、CB- 17、10 0 E和5 0 D)。 2细胞贴壁后 ,加 2 - ME或β-雌二醇培养 2 4h,6 0 Coγ射线照射 (2～ 5 Gy,1.18Gy/ min) ,再培养 7～ 10 d,观察其克隆的存活率。 3分裂剂量恢复 ,即细胞分 2次照射 ,每次3Gy,照后观察其克隆细胞亚致死性损伤 (SL D)的…     

125I粒子持续照射对Sw1990及Panc-1细胞生物学效应的影响

目的采用125I粒子对胰腺癌细胞Sw1990及Panc-1行体外持续照射,研究其生物学效应,探讨连续照射对胰腺癌细胞增殖、DNA合成、细胞周期及凋亡的影响,并为胰腺癌放射实验细胞的选择提供参考。方法将胰腺癌细胞Sw1990及Panc-1体外培养至对数生长期,行125I粒子持续照射,在初始剂量率为12.13 cGy/h时,分别给予总剂量为0、2、4、6、8 Gy的照射,采用克隆形成实验检测照射后细胞的增殖能力,绘制生存曲线,计算细胞存活率(SF2),检测细胞凋亡率和细胞周期,以及3H-TDR掺入实验探究照射后细胞DNA合成情况。结果经过拟合,计算出Sw1990和Panc-1细胞的SF2值分别为0.766±0.063和0.729±0.045,随着照射剂量增高,两种细胞凋亡率也逐渐升高,Panc-1细胞的最大凋亡率出现在6 Gy,Sw1990出现在8 Gy。G2/M期阻滞分数均逐渐升高,3H-TDR掺入放射量逐渐降低。结论125I持续照射胰腺癌细胞时,细胞凋亡及G2/M期阻滞是抑制细胞增殖的主要原因,在剂量为0、2、4、6、8 Gy时,Sw1990及Panc-1细胞生物学效应差异无统计学意义。     

60Co γ射线对肝癌细胞株HepG2增殖和细胞周期的影响

目的观察^60Coγ射线对肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡和细胞周期的影响，并探讨γ射线对细胞周期改变与p27^kip1蛋白表达和分布之间的关系。方法以不同剂量的γ射线照射培养的HepG2细胞，观察细胞形态和生长曲线变化，同时应用流式细胞计数仪观察细胞周期和凋亡的改变，并应用免疫荧光方法观察p27^dip1蛋白的表达和分布改变。结果^60Coγ射线照射细胞引起HepG2细胞株剂量依赖性的生长抑制和凋亡增加。^60Coγ射线可引起细胞G2／M期阻滞，同时p27^kip1表达明显抑制，并主要分布于细胞浆。结论^60Coγ射线所导致的肝癌细胞株HepG2细胞的G2／M阻滞可能与细胞内D27^kip1“pl的表达抑制和细胞浆的分布比例增加有关。