脑缺血过程中B细胞淋巴瘤-2基因家族基因的表达及与细胞死亡的关系

为了了解Ｂ细胞淋巴瘤－２基因（ｂｃｌ－２）家族基因在脑缺血后表达规律及其调节细胞死亡的作用，通过阻塞大鼠双侧颈总动脉和椎动脉建立全脑缺血模型，观察了Ｂａｘ、ｂｃｌ－ｘＬ及ｂｃｌ－２基因表达变化以及与细胞死亡的关系。在缺血再灌流６ｈ，Ｂａｘ免疫染色增加，２４～４８ｈ达到高峰，ｂｃｌ－ｘＬｍＲＮＡ在２４ｈ后表达下降，ｂｃｌ－ｘＬ蛋白在４８ｈ可见明显降低，并且在缺血敏感神经元Ｂａｘ和ｂｃｌ－ｘＬ表达变化显著，与细胞凋亡发生的部位一致，相反，ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ和蛋白表达未见明显变化。提示ｂｃｌ－ｘＬ和Ｂａｘ可能参与脑缺血再灌流中神经细胞死亡的调节，其表达变化与神经元对缺血的敏感性相关     

人肺癌细胞凋亡与p53、bcl-2、Bax的表达

目的：探讨人肺癌组织细胞自发凋亡的发生,ｐ５３基因及凋亡相关基因ｂｃｌ－２、Ｂａｘ在肺癌组织中的表达及与肺癌细胞凋亡和生物学行为的关系。方法：用甲基绿－派诺宁染色检测５０例肺癌组织切片中凋亡细胞,ＬＳＡＢ免疫组化法检测ｐ５３和Ｂａｘ的蛋白表达,原位杂交方法检测ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的表达。结果：１００％小细胞肺癌凋亡发生数１０个／ＨＰＦ,２１％的肺鳞癌和１５％的肺腺癌凋亡发生数〉１０个／ＨＰＦ。ｐ５     

细胞凋亡调控因素有关基因的研究

抑制细胞凋亡的基因主要是Ｂｃｌ－２基因和Ｂｃｌ－２相关基因（Ｂｃｌ－ＸＬ，ＭＣＬ－１），其编码的蛋白质能抑制细胞凋亡和延长细胞寿命，其抑细胞凋亡作用以Ｂｃｌ－２最为重要。促进细胞凋亡基因或因素较多，主要有Ｂｃｌ－２相关基因（Ｂａｘ，Ｂｃｌ－Ｘｓ）、ｐ５３肿瘤抑制基因、ｃ－ｍｙｃ原癌基因、ＴＧＦ－β、Ｆａｓ抗原及其配体，其中Ｂａｘ基因、ｐ５３基因与Ｂｃｌ－２基因在细胞凋亡的调控作用方面密切相关     

54例非霍奇金病Bcl-2、Bax、Fas和Fas-L蛋白表达及其意义

研究凋亡相关蛋白Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、Ｆａｓ和Ｆａｓ－Ｌ在非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义。方法应用免疫组化Ｓ－Ｐ法对５４例ＮＨＬ进行检测。结果：（１）Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、Ｆａｓ和Ｆａｓ－Ｌ阳性率分别为５０％、８３．８％、８８．９％和８８．７％。     

大鼠全脑缺血再灌后海马区bcl—2和Bax表达的检测

目的：检测ｂｃｌ－２和Ｂａｘ在大鼠嵛脑缺血再灌后海马区的表达。方法：用原位杂交组织化学检测ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ,用免疫组织化学检测Ｂａｘ蛋白。结果：ｂｃｌ－２主要在海马ＣＡ３区表达,再灌８小时出现,２４小时阳性达到高峰,７２小时明显下降;Ｂａｘ则主要主要在ＣＡ１区表达,再灌８小时出现,２４小时阳性信号达到高峰,和,ＣＡ１２、ＣＡＳ４、ＤＧ区也有表达,但变化不明显,高倍镜下可见紫蓝色的阳性信号和棕黄色     

胶质瘤bcd—2基因表达水平与其细胞增殖和凋亡关系的研究

目的 探讨胶质瘤细胞ｂｃｌ－２基因表达水平与肿瘤恶性程度、细胞增殖活性及凋亡程度的关系。方法 以６９例不同级别的人胶质瘤组织为研究对象,用原位杂交及免疫组化染色ＡＢＣ法分别检测ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ、ｂｃｌ－２蛋白和增殖细胞核抗原（细胞增殖活性标记物）的表达,并用３’末标记法做原位细胞凋亡检测。结果 ６４例（９２．８％）表达ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ,６０例（８７．０％）表达ｂｃｌ－２蛋白,两者的表达水平呈正     

凋亡相关基因产物Fas抗原及bcl-2蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达

目的：了解Ｆａｓ 抗原及ｂｃｌ２ 蛋白在甲状腺肿瘤组织中表达的意义。方法：用流式细胞技术对１４ 例乳头状甲状腺癌,１６例甲状腺腺瘤及３２ 例结节性甲状腺肿组织中Ｆａｓ 抗原和ｂｃｌ２ 蛋白的表达进行检测。结果：上述３ 组织中均测到Ｆａｓ 抗原和ｂｃｌ２ 蛋白。３ 种组织中Ｆａｓ 抗原和ｂｃｌ２ 蛋白表达没有统计学差异（Ｆ＝２．７８,Ｐ＞０．０５;Ｆ＝２．５６,Ｐ＞０．０５）。乳头状甲状腺癌组织Ｆａｓ 抗原表达与ｂｃｌ２ 蛋白表达有明显相关性（ｒ＝０．６４６,Ｐ＜０．０５）,其他两种组织中Ｆａｓ 抗原与ｂｃｌ２ 表达均无相关性（ Ｐ＞０－０５）。结论：上述３ 种组织中均有Ｆａｓ 抗原和ｂｃｌ２ 蛋白的表达,均参与了甲状腺肿瘤组织中细胞凋亡的调节。细胞凋亡异常与乳头状甲状腺癌的发生有密切关系。     

bcl—2基因在小鼠睾丸及试验隐睾中表达的研究

目的 研究ｂｃｌ－２基因在正常小鼠睾丈中的定位表达及试验隐睾所导致的改变。方法 以Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ印迹法从蛋白水平检测ｂｃｌ－２基因在正常小鼠睾及及试验隐睾中的表达、变化;地高辛标记ｂｃｌ－２基因ｃＤＮＡ探针,石蜡组织切片原位杂交技术,从ｍＲＮＡ水平检测ｂｃｌ－２基因在小鼠精上皮中的定位及试验隐睾所导致的改变。结果 ｂｃｌ－２蛋白在正常小鼠睾丸中有较丰富的表达,试验隐睾导致其表达明显降低;ｂｃｌ－２基因在生精细胞中有较高水平的ｍＲＮＡ转录,表达细胞主要为各级生精细胞,支持细胞和间质细胞未见表达,隐睾术后仍然保持较高水平的ｍＲＮＡ转录。结论 ｂｃｌ－２蛋白可能在生精细胞主动退化的调节中起着重要作用。     

慢性缺氧对大鼠肺内细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

目的：探讨慢性缺氧性肺动脉高压肺血管结构改建（ｐｕｌｍｏｎａｒｙｖａｓｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ，ＰＶＳＲ）的细胞及分子机制。方法：大鼠慢性缺氧模型复制，免疫组化及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测大鼠肺内ｃ－ｍｙｃ及ｂｃｌ－２两基因蛋白及ｍＲＮＡ的表达，免疫组化及原位缺口末端标记法检测大鼠肺内增殖相关抗原Ｋｉ－６７及凋亡细胞。结果：正常及慢性缺氧大鼠肺内均检出一定比率的增殖或凋亡细胞，缺氧１、２周大鼠肺内细胞增殖／凋亡比值比对照组分别增高约３、３５倍。与细胞增殖、凋亡密切相关的ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达在缺氧１周大鼠肺内显著增高，在缺氧２周更显著。结论：细胞增殖、凋亡机制共同参与了慢性缺氧性肺动脉高压时ＰＶＳＲ的调节。     

反义bcl—2寡脱氧核苷酸对U937细胞增殖和存活能力的影响

本实验观察了与人类ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ翻译起始部位相互补的硫代反义ｂｃｌ－２寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ｏＯＤＮ）对Ｕ９３７细胞增殖和存活能力的影响，结果表明：一定浓度的ＡＳ－ｓＯＤＮ可明显抑制细胞Ｂｃｌ－２蛋白的表达，但对细胞增殖和存活能力无明显影响。这一研究结果为在不同表达ｂｃｌ－２的肿瘤细胞中探讨ｂｃｌ－２反义核酸作用的普遍性和正确评价其作用地位积累了资料。     

凋亡相关基因产物Fas抗原及bcl—2蛋白在甲状腺肿瘤组织中？…

目的：了解Ｆａｓ抗原及ｂｃｌ－２蛋白在甲状腺肿瘤组织中表达的意义。方法：用流式细胞技术对１４例乳头状甲状腺癌,１６例甲状腺瘤及３２例结节性甲腺肿组织中Ｆａｓ抗原和ｂｃｌ－２蛋白的表达进行检测。结果：上述３组织中均测到Ｆａｓ抗原和ｂｃｌ－２蛋白表达没有统计学差异（Ｆ＝２．７８,Ｐ〉０．０５;Ｆ＝２．５６,Ｐ〉０．０５）。乳头状甲状腺癌组织Ｆａｓ抗原表达与ｂｃｌ－２蛋白表达有明显相关性（ｒ＝０．６４６     

IL—6在诱导M1白血病细胞分化后凋亡中的应用

目的 探讨ＩＬ－６能否诱导Ｍ１小鼠急性髓样白血病细胞凋亡及其分子机制。方法 透射电镜观察细胞形态判断有无凋亡发生：ＲＴ－ＰＣＲ及狭缝杂交分析ｂｃｌ－２家族成员表达水平的改变。结果：ＩＬ－６诱导Ｍ１细胞向巨噬细胞方向分化后，Ｍ１细胞发生凋亡；ｂｃｌ－２，ｂｃｌ－ＸＬ在ＩＬ－６诱导下表达下调，ｂａｘ表达上调，结论ＩＬ－６诱导Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ比例改变，使Ｍ１细胞分化后凋亡。     

重症烧伤大鼠早期外周血单个核细胞凋亡的实验研究

目的：探讨烧伤后早期外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）凋亡的发生、变化规律及ｂｃｌ－２蛋白表达的变化。方法：应用流式细胞仪、ＤＮＡ凝胶电泳等手段观察烧伤大鼠ＰＢＭＣ凋亡发生的动力学变化、ｂｃｌ－２蛋白的表达及烧伤血清对细胞凋亡的影响。结果：烧伤后６ｈ起,ＰＢＭＣ凋亡率明显增加,随时间的推延呈增高趋势,此时ｂｃｌ－２蛋白表达下调;烧伤血清可以诱导单核细胞株Ｒａｗ２６４．７凋亡。结论：ＰＢＭＣ凋亡在严重烧伤的免疫功能紊乱方面起重要作用,而ｂｃｌ－２基因下调可能是重症烧伤早期ＰＢＭＣ细胞凋亡的分子机制之一;烧伤血清含有（或缺乏）某种物质,可以介导细胞凋亡。     

脑缺血过程中B细胞淋巴瘤—2基因家族基因的表达及与细胞死亡？…

为了了解Ｂ细胞淋巴瘤－２基因家族基因在脑缺血后表达规律及其调节细胞死亡的作用，通过阻塞大鼠双侧颈总动脉和椎动脉建立了全脑缺血模型，观察了Ｂａｘ，ｂｃｌ－ｘＬ及ｂｃｌ－２基因表达变化以及与细胞死亡的关系。     

肝细胞提取物对肝癌细胞（BEL—7402）凋亡相关基因表达的影响

肝细胞提取物经ＨＰＬＣ，ＦＰＬＣ进一步分离纯化，得到了单一色谱峰，激光飞行时间质谱仪测分子量为４．０２０ｋＤ该单一组分（Ｓ４）对ＢＥＬ－７４０２肝癌细胞有增殖回落作用，半数抑制浓度（ＩＣ５０）为７．５８ｍｇ／Ｌ。对ＢＥＬ－７４０２细胞的基因表达影响研究，Ｓ４对Ｐ５３，Ｆａｓ表达有增强作用，而抑制Ｂｃｌ－２，ｃ－ｍｙｃ的表达，Ｓｏｕｔｈｅｒｍｂｌｏｔ技术表明，Ｓ４可抑制Ｂｃｌ－２的ｍＲＮＡ转录，提示     

Bcl-2 和Bax蛋白在慢性病毒性肝炎肝组织中的表达

目的研究细胞凋亡相关的Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ蛋白在慢性病毒性肝炎（ＣＨ）肝组织中表达的情况与该病发生发展的关系。方法对３５例不同病变程度的ＣＨ肝组织用免疫组化法检测Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的表达及定位。结果Ｂｃ１－２和Ｂａｘ分布基本一致，轻、中度ＣＨ主要见于碎屑样坏死（ＰＮ）区中的单个核细胞（ＭＮ），邻近ＰＮ区边缘的肝细胞浆中也有强阳性表达。ＨＥ染色观察，这些Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ阳性肝细胞多呈重度水样变性或嗜酸性变。在重度ＣＨ肝组织中Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ阳性的ＭＮ主要分布于重度ＰＮ区和桥接坏死区，周围部分肝细胞Ｂａｘ阳性，而Ｂｃｌ－２为阴性。在慢性重型肝炎，Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ除在亚大块肝细胞坏死区浸润的ＭＮ胞浆内表达外，残存肝细胞亦呈阳性表达。结论Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ在肝组织中的表达可能不仅与ＣＨ的细胞凋亡有密切关系，而且与慢性重型肝炎的发生发展有关     

用细菌／杆状病毒系统在昆虫细胞中表达HIV—2外膜糖蛋白gp105和跨膜糖蛋白g

目的 用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ）表达系统在昆虫细胞Ｓｆ９中表达ＨＩＶ－２外膜糖蛋白ｇｐ１０５跨膜糖蛋白ｇｐ３６,为研制艾滋病疫苗和诊断试剂奠定基础。方法 分别将ＨＩＶ－２外膜蛋白ｇｐ１０５和跨膜蛋白ｇｐ３６全基因序列克隆到杆状病毒转座载体ｐＦａｓｔ Ｂａｃ ＴＨａ和ｐＦａｓｔ Ｂａｃ ＴＨｂ中我角体启动子下游,构建成重组转座载体ｐＦａｓｔ Ｂａｃ ＨＴａ－ｐｇ１０５和ｐＦａｓｔ Ｂａｃ ＨＴｂ－ｇｐ３６,利用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ）表达系统筛选重组杆状病毒,并在昆虫细胞Ｓｆ９中表达ＨＩＶ－２的ｇｐ１０５和ｇｐ３６。结果 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果表明,ｐｇ１０５基因表达产物为－６６０００ｕ糖蛋白,ｐｇ３６基因则表达－４１０００ｕ糖蛋白,与天然产物一致。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示：     

ACI血小板、淋巴细胞膜Fas、APO2.7、bcl-2表达

测急性脑梗死（ＡＣＩ）患者血浆中血小板和淋巴细胞膜Ｆａｓ,ＡＰＯ．２７,ｂｃｌ－２阳性表达率,为研究上述促,抑凋亡基因对ＡＣＩ形成机制及预后的影响,寻找超早期防治措施。用流式细胞仪对制备好的血小板和淋巴细胞膜样本进行测定。结果：ＡＣＩ组血小板,Ｆａｓ,ＡＰＯ２．７ｂｃｌ－２阳性表达率均显著高于对照组,Ｐ〈０．０５。     

静脉注射活化B细胞诱导Mls特异性免疫耐受

在胸腺摘除的成年小鼠静脉内注射Ｍｌｓ＋的活化Ｂ细胞可诱导Ｍｌｓ特异性免疫耐受。来源于ＣＤＦ１小鼠（Ｍｌｓ－１ｂ／ａ）的脾脏Ｂ淋巴细胞用抗ＩｇＭ抗体加ＩＬ－４刺激后静脉注射给摘除胸腺的成年ＢＡＬＢ／ｃ小鼠（Ｍｌｓ－１ｂ），在注射后第７、１１、１５天淋巴结中ＣＤ４＋Ｖβ６＋Ｔ细胞显著减少，而ＣＤ８＋Ｖβ６＋Ｔ细胞数无明显改变；在注射后第３天，与对照组相比，ＣＤ４＋Ｖβ６＋Ｔ细胞增加，但这些细胞对Ｍｌｓ抗原的反应性明显低于对照组。这些结果清楚地表明，自反应Ｔ细胞不但在胸腺被排除或功能性“排除”，而且在外周通过同样的机制维持自身耐受。     

Apo－1／Fas抗原与细胞程序化死亡

Ａｐｏ－ｌ／Ｆａｓ抗原是一种跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）受体超家族的一个成员，Ａｐｏ－ｌ／Ｆａｓ是细胞程序化死亡信号传导系统的重要组成部份。Ａｐｏ－ｌ／Ｆａｓ系统介导的细胞程序化死亡，与粘附分子ＣＤ５４、原癌基因Ｂｃｌ－２的表达，以及二磷酸腺苷多聚化过程有关。Ａｐｏ－ｌ／Ｆａｓ系统的研究，有助于自身免疫疾病的发病机制，以及抗肿瘤基因治疗方案的设计和研究。