肿瘤坏死因子-α作用下椎间盘退变动物模型的建立

目的:制作家兔椎间盘退变（IVDD）的动物模型,研究肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对髓核组织的影响。方法:取健康成年家兔30只,手术暴露L₂~L₆,L_3/4、L_4/5作为实验组,每个椎间盘髓核注射20 ng/μL TNF-α 15 μL;L_5/6作为对照组,每个椎间盘髓核注射15 μL磷酸缓冲盐溶液;L_2/3作为空白组,不做处理。于术后4周、8周、12周行腰椎X线及磁共振（MRI）检查,每次随机检查10只家兔,检查完后处死并取其髓核组织经行免疫组织化学及原位末端标记检查。结果:术后4~12周,X线见实验组椎间隙高度进行性下降,MRI可见实验组椎间隙T2加权像信号逐渐降低;免疫组织化学及TUNEL显示实验组髓核组织内Ⅰ型胶原及细胞凋亡率随之时间推移逐渐增加,Ⅱ型胶原逐渐减少。对照组和空白组差异无统计学意义（P>0.05）。结论:实验成功建立了TNF-α作用下的IVDD动物模型。TNF-α介导的椎间盘术后椎间隙高度丢失,同时TNF-α可诱导椎间盘髓核细胞退变及凋亡。微量注射器的穿刺作用对髓核细胞的退变及凋亡无明显影响。     

退变椎间盘组织中TNF-α及IL-18的表达及意义

目的:研究TNF-α、IL-18在突出与正常椎间盘组织中的表达,探讨该类细胞因子在椎间盘退变中的作用.方法:用Elisa法对34例椎间盘突出症患者椎间盘组织中TNF-α、IL-18进行检测,并取15例健康成人正常椎间盘用于阴性对照.结果:Elisa法证实突出椎间盘组织中TNF-α含量为82.18±21.91 pg/ml、IL-18含量为45.39±21.23 pg/ml;正常椎间盘组织中TNF-α含量为8.68±0.78 pg/ml、IL-18含量为3.58±2.84 pg/ml,两者差异有统计学意义(P<0.001).结论:TNF-α及IL-18可能在椎间盘退变中发挥关键作用,并在临床对椎间盘突出的治疗和转归预后有重要意义.     

TNF及其受体在退变椎间盘组织中的表达及意义

目的探讨TNF、TNFR、sTNFRS在退变椎间盘组织中的变化规律与坐骨神经疼痛的相关性以及与退变的关系。资料与方法对实验组与对照组椎间盘标本应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测TNF-α、TNF-β以及sTNFR1,sTNFR2的浓度;用逆转录一聚合酶链式方法（RT-PCR）法检测靶细胞膜表面TNFR1/R2mRNA的表达。结果实验组与对照组中测定的TNF-α/β及sTNFR1/R2两者存在明显的差异;病人临床的评分结果与实验组标本表达成正相关性;实验组中肿瘤坏死因子受体的表达率明显高于对照组;实验组中TNF-α/β及sTNFRl/R2和TNFRl/R2mRNA三者之间存在一定的相关性。结论退变的椎间盘组织中的TNF、TNFR、sTNFRS的含量高于正常的椎间盘组织、说明他们参与了椎间盘的退变;同时,也说明TNF、TNFR、sTNFRS三者之间存在相关性。     

兔退变椎间盘模型中髓核细胞凋亡的实验研究

目的：研究细胞凋亡在兔退变椎间盘模型中的作用。方法：用针刺法制作兔退变椎间盘模型,磁共振检查鉴定模型的建立,HE染色计数髓核细胞,TUNEL法染色标记凋亡髓核细胞,并通过激光共聚焦显微镜计数凋亡细胞比例,RT-PCR检测Bax和Bcl-2凋亡相关基因的表达水平。结果：兔退变模型建立成功,退变组髓核细胞计数低于正常组,凋亡细胞比例高于正常组,退变组抗凋亡基因表达低于正常组,凋亡基因水平高于正常组。结论：凋亡在椎间盘退变模型中存在,并起重要作用。     

核转录因子kappa B在兔椎间盘退变中表达的相关研究

目的通过建立兔退变模型,分析核转录因子kB（NF-kB）在其中表达的关系,观察在不同的时间点核转录因子kB表达情况,了解其在椎间盘退变的作用。方法①实验新西兰大白兔采用自体对照,12只前路行椎间盘穿刺,来建立动物椎间盘退变的模型。②通过应用免疫组化的方法检测在不同时间点退变椎间盘与自身对照椎间盘中核转录因子kB的表达情况。③应用Image pro plus 6.0图象分析免疫组化切片所得各数据经SPSS 13.0统计学软件进行统计学分析。结果经免疫组化染色分析NF-kB在椎间盘退变过程中在不同的时间表达的情况不同,在早期表达明显,随着时间及退变的加重表达在下降。结论 NF-kB在椎间盘退变的早期起促进作用。     

纤维环穿刺法建立兔椎间盘退变模型

目的:拟建立一个有效的可重复的椎间盘退变模型.方法:取健康成年新西兰大白兔40只,体质量2.5~3.0 kg,雌雄不限,随机分为纤维环穿刺组和对照组,每组20只.经腹膜外入路暴露L4/5、L5/6两个椎间隙,采用21号针头从椎间隙侧前方刺入L4/5、L5/6椎间盘的纤维环,深度控制在5 mm.对照组仅分离暴露椎间盘,不做任何处理.术后1、2、4、6、8周每组随机选取4只兔子行MRI、HE染色及Ⅱ型胶原免疫组化观察退变椎间盘的变化.结果:MRI观察发现,纤维环穿刺组术后椎间盘T2信号强度呈持续减弱趋势,椎间隙高度也不断下降.从术后2周开始两组差异有统计学意义(P<0.05).HE染色观察发现,随着时间进展,纤维环穿刺组髓核细胞逐渐减少,8周时组髓核组织几乎完全变性,被纤维软骨组织替代.Ⅱ型胶原免疫组化染色示,纤维环穿刺组Ⅱ型胶原表达随时间呈进行性下降,从术后第2周开始两组差异有统计学意义(P<0.05).结论:纤维环穿刺法可以诱导兔椎间盘缓慢退变,为深入研究椎间盘退变机制及治疗手段提供可靠的动物模型.     

血府逐瘀汤对大鼠颈椎间盘退变中软骨终板IL-1β影响

目的:观察血府逐瘀汤对大鼠颈椎间盘退变中软骨终板IL-1β的影响。方法:选取健康SPF级6周龄SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型对照组、血府逐瘀汤实验组,每组各大鼠12只。模型组和实验组建立大鼠颈椎动力平衡失衡模型,诱导颈椎间盘退变;假手术组仅作颈背后正中皮肤切开缝合。造模1周后实验组予以血府逐瘀汤中药灌胃1月,余组灌胃等量生理盐水。在术后第9周、18周、36周随机处死每组4只老鼠,用酶联免疫吸附试验(ELisa)检测椎间盘软骨终板中白细胞介素-1β含量;HE染色观察大鼠颈椎间盘组织形态学改变;TUNEL法检测大鼠颈椎间盘软骨终板细胞凋亡。结果:Elisa检测结果显示,与假手术组相比,模型组和血府逐瘀汤实验组3个时间点软骨终板IL-1β含量均明显高于假手术组(P0.01),其中,模型组软骨终板IL-1β的含量高于血府逐瘀汤实验组(P0.05);HE染色显示软骨终板软骨细胞数量、密度模型组和实验组低于假手术组,并随着时间延长逐渐降低,其中模型组软骨细胞数量减少更加明显;TUNEL法检测结果显示模型组椎间盘软骨终板细胞凋亡数量明显增加,且随着时间的延长而逐渐增多,血府逐瘀汤能延缓椎间盘软骨终板细胞凋亡的速度。结论:血府逐瘀汤可抑制椎间盘软骨终板炎性因子白介素-1β含量的增加,保护椎间盘软骨终板软骨细胞,抑制软骨终板细胞的凋亡,对椎间盘具有保护作用。     

瑞芬太尼对椎间盘退变模型大鼠椎间盘的影响及机制

目的：观察瑞芬太尼对椎间盘退变（intervertebral disc degeneration,IDD）模型大鼠椎间盘的保护作用,并探讨其作用机制。方法：将40只健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组和瑞芬太尼低、中、高剂量组,每组8只;采用针刺纤维环法构建IDD模型;瑞芬太尼低、中、高剂量组于造模后以0.2、0.6、1.2μg/（kg·min）经大鼠尾静脉泵注瑞芬太尼30 min,模型组和假手术组给予等量生理盐水泵注。采用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察椎间盘组织病理变化;酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;Western blot检测椎间盘组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor-1α,PGC...     

西红花苷对椎间盘退变的保护作用

目的 探讨西红花苷对椎间盘退变的治疗效果和作用机制。方法 将收集的人类髓核组织Pfirrmann II级样本分成两部分,一部分提取髓核细胞并培养,根据培养基的成分,将髓核细胞分为4组,包括空白对照组、肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激组、西红花苷低浓度治疗组(10μg/mL)以及西红花苷高浓度治疗组(40μg/mL)。培养24 h后,采用实时定量PCR检测4组髓核细胞中炎症因子和代谢标志物的mRNA表达水平。培养0、15、30 min和48 h后,采用Western blotting检测4组髓核细胞中炎症因子、代谢标志物、凋亡标志物以及核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)信号通路关键蛋白p-P65的蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因检测西红花苷对NF-κB信号通路的作用效果。另一部分髓核组织进行离体培养,根据培养基不同,分为空白对照组、TNF-α刺激组以及西红花苷治疗组(40μg/mL)。使用免疫组化检测各组髓核组织中炎症因子以及细胞代谢标物的蛋白表达水平。结果 实时定量PCR检测与Western blotting检测结果显示,与空白对照组相比,TNF-α刺激组髓核细胞的炎症反应...     

退变椎间盘组织中肥大细胞浸润的研究

在椎间盘退变的病理过程中 ,不仅有生物力学的变化 ,而且受全身因素的影响 ,许多内分泌激素和局部炎性介质参与调节。肥大细胞是产生炎性介质的重要细胞之一 ,例如在临床常见的 型过敏反应中 ,它是亲细胞抗体钉附的靶细胞[1～ 3 ]。。此外 ,肥大细胞含有的类胰蛋白酶和胃促胰酶与血管增生和组织基质的降解有潜在的关联 [4] 。它还能产生若干种细胞因子 ,例如肿瘤坏死因子 ( TNF )、白介素 ( IL ) 4,5 ,6和 8等[5～ 7] 。本研究采用 Giemsa特殊染色法检测肥大细胞在退变的椎间盘组织中的浸润 ,以期探讨肥大细胞与椎间盘退变的关系。1　资…     

椎间盘退变模型研究进展

研究椎间盘退化的主要目的是研究其与腰背痛的关系。由于很难获取人体组织,特别是正常的组织,很多学者将大鼠、小鼠、沙鼠、兔子、狗、羊、猪、山羊作为模型来研究椎间盘退变的发病机理及治疗方法等方面的问题。近年来,模型的种类与造模方法越来越多,主要分为体内和体外椎间盘退变模型。     

纤维环穿刺法诱导兔椎间盘退变模型的组织学和影像学分析

目的探讨纤维环穿刺法诱导椎间盘退变模型的可行性和科学性。方法新西兰大白兔18只,经右侧腹膜外入路用弯血管钳夹持16G穿刺针准确刺入L3-4、L4-5、L5-6椎间盘的纤维环,深度控制在5 mm。于术前及术后4、8、12周对造模后的椎间盘及对照组的椎间盘（以L1-2、L2-3、L6-7为对照）行计算机X线摄影（computed radiography,CR）、MRI检查,并进行组织学观察。结果从手术后第4～12周,造模后的椎间盘高度指数（disc height index,DHI）呈递减趋势,MRI T2WI信号呈现持续减弱趋势（P〈0.01）;组织学观察发现4、8周造模组髓核细胞逐渐减少,12周组髓核细胞几乎被纤维软骨组织替代,纤维环排列不整齐,与髓核界限不清。结论纤维环穿刺法可以诱导兔椎间盘的缓慢退变,为临床深入研究椎间盘的退行性变提供了切实可行的动物模型。     

辛伐他汀对兔硬化髂动脉TNF-α的影响

目的研究辛伐他汀对兔粥样硬化髂动脉肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响. 方法30只雄性新西兰大白兔,分别予普通饲料喂养(n=8)及高脂喂养(胆固醇1g/d,猪油10g/d;n=22)6周.高脂喂养2周后行髂动脉内膜球囊损伤术;术后辛伐他汀组(n=12)予辛伐他汀15mg/d;分组喂养4周后处死所有动物取一侧病变髂动脉做病理切片,用免疫组化方法观察TNF-α的表达情况;取另一侧病变髂动脉抽提总RNA和总蛋白,分别应用半定量逆转录多聚酶链式反应和Western蛋白印迹测定TNF-αmRNA和蛋白质水平的表达. 结果辛伐他汀可以显著降低兔血浆总胆固醇,降低粥样硬化髂动脉组织TNF-α的表达,正常对照组、基础对照组和辛伐他汀组动脉壁 TNF-α mRNA的相对值分别为0.16±0.024、0.56±0.050、0.37±0.031,相互间有统计学差异(P＜0.05),Western blot 检测和免疫组化结果一致. 结论辛伐他汀可以显著降低兔粥样硬化髂动脉组织TNF-α的表达.     

脊髓型颈椎病退变椎间盘局部炎性细胞因子的变化

目的 :分析脊髓型颈椎病 (CSM)中退变颈椎间盘局部炎性细胞因子的变化 ,探讨 CSM中颈椎间盘退变的生物学机制。方法 :收集 2 5例手术治疗的 CSM患者的退变椎间盘组织 ,取 5例正常椎间盘组织作为对照 ,匀浆后取上清液 ,EL ISA法检测炎性细胞因子 IL- 1β、IL- 6、IL- 8、TNF- α的含量 ;随机取 8例 CSM患者的外周血作检测。 结果 :CSM退变椎间盘组织中炎性细胞因子的含量明显高于自身血清 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1) ,也显著高于正常对照组 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。结论 :局部慢性炎症参与颈椎间盘退变过程 ,IL - 1β、IL - 6、IL - 8、TNF-α水平的增高 ,使局部组织中血管内皮细胞受损 ,引起颈椎骨代谢异常 ;这可能是导致颈椎退变逐渐加重的生物学机制之一。     

椎间盘退变模型的研究进展

目前国内外关于椎间盘退变的病因和发病机制尚无定论,构建能模拟人退变椎间盘的动物模型是研究的关键。常用于研究椎间盘退行性疾病的模型可分为体内、体外模型。目前已成功建立的椎间盘动物模型均具有一定的局限性,尚无公认的能够完全模拟人类椎间盘退变的标准模型。随着大型动物与灵长类动物模型的建立,动物椎间盘退变模型与人类椎间盘退变之间的相关性和可比性逐渐明确,其在椎间盘退变疾病的研究中具有广阔的前景。     

组织蛋白酶D与兔椎间盘退变相关性研究

目的:采用椎间盘内注射不同浓度的组织蛋白酶D,探讨组织蛋白酶D在兔椎间盘退变中的作用.方法:健康大白兔60只随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组,实验组分为3个亚组,椎间盘内注射3种不同浓度的组织蛋白酶D,阴性对照组中在椎间盘内注射生理盐水,空白对照组不做任何处理.分别于术后3、6周,检测椎间盘髓核中蛋白多糖含量,采用HE染色组织学观察椎间盘的退变特征.结果:HE染色组织学观察6周时在实验组及阴性对照组椎间盘中,组织学观察到不同程度的椎间盘退变特征;蛋白多糖含量的测定显示,6周时各实验组蛋白多糖含量下降程度大于阴性对照组(P＜0.05).结论:组织蛋白酶D可导致兔腰椎间盘髓核内蛋白多糖含量的降低,说明组织蛋白酶D在椎间盘退变过程中可能起重要作用.     

退变的椎间盘组织中IgG表达及其意义

椎间盘退变发生发展的确切机制 ,以及椎间盘突出及其导致的神经根损伤的病理生理目前还不清楚。有人设想髓核引起的自身免疫反应对脊柱的退行性病变有一定影响 ,并可导致继发性的神经根损伤 [1～ 3 ]。这是由于缺乏血管 ,免疫系统不能识别髓核所致 [1 ]。髓核从椎间盘中突出后 ,对机体来说是外来物 ,引起机体继发性免疫反应 ,从而使脊柱及周围组织产生一系列的病理生理改变。以前的一些研究也支持这个理论。本研究采用免疫组化二步法 ,检测退变组织中 Ig G的表达及分布 ,以探讨特异性免疫反应在椎间盘退变中的意义。1　材料和方法1.1　标本…     

椎间盘退变的分子生物学研究进展

椎间盘退变是个慢性、复杂的过程,然而椎间盘退变其发生机制尚未完全阐明。近年来研究表明,椎间盘的退变过程不仅仅表现为形态学上的变化,更伴随着椎间盘的组织学与生化性质的系统性改变,现发现许多分子生物学方面的机制与椎间盘退变密切相关。     

经皮微创纤维环穿刺法制作兔椎间盘退变模型

目的应用经皮微创穿刺方法制造兔腰椎间盘退变模型。方法在C型臂X光机监控下,定位18只兔子的L3/4、L4/5、L5/6椎间盘,应用经皮穿刺方法穿刺纤维环,每组行MRI检查后予以处死,取L3/4、L4/5、L5/6椎间盘髓核组织行HE染色观察髓核细胞,用免疫组化染色法观察Ⅱ型胶原蛋白染色情况,取L2/3及L6/7正常间盘组织作为对照。结果造模前后椎间盘髓核的MRI信号强度有随造模手术后的时间延长而逐渐降低的趋势(L3/4、L4/5及L5/6,P<0.05)。病理HE染色观察发现,对照组正常的髓核组织中有大量的髓核细胞,随着通过微创法制作兔腰椎间盘退变动物模型后时间的延长纤维环细胞、髓核细胞数量逐渐减少,到第12周时,髓核组织中只有很少量的髓核细胞,却有很多纤维软骨组织。对照组及术后4、8、12周组Ⅱ型胶原免疫组化染色的灰度值单因素方差分析结果 F=41.82,P<0.05,组间比较LSD-t检验结果显示除术后4周与8周组比较差异无统计学意义外,其余组间比较均有显著差异(P<0.05)。结论成功建立了新的微创兔腰椎间盘退变动物模型。     

穿刺抽吸法诱导兔椎间盘退变模型

目的:实验通过纤维环穿刺抽吸法建立兔椎间盘退变模型,并通过病理组织学、影像学检测分析此种方法的特点。方法:取10月龄健康日本大耳白12只,雌雄不限,利用21 G穿刺针分别在兔L3～4、L4～5、L5～6节段刺入纤维环并抽吸髓核约8～10 mg;L1～2、L2～3及L6～7节段只暴露不做穿刺抽吸。造模完毕后,实验兔分别于术后4、8、12、16周各取3只进行指标检测MRI检查,然后处死实验动物获取椎间盘,利用病理组织学观察。结果:L3～4、L4～5、L5～6椎间盘髓核MRIT2WI信号强度在术后随时间延长呈现逐渐降低趋势,髓核面积逐渐缩小,椎间隙高度也逐步下降,从术后4周开始两组差异有统计学意义(P<0.05)。随着时间的进展,番红"O"染色显示纤维环穿刺组髓核内细胞外基质含量逐渐减少。结论:纤维环穿刺法可成功建立椎间盘退变模型,比较真实地模拟了人类椎间盘损伤后的退变过程。