pBV-IL-6重组质粒构建及其在E.coli中的高效表达

目的构建人ＩＬ－６重组质粒（ｒｈＩＬ－６），并使其在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达。②方法经计算机分析设计，人工合成３条寡核苷酸引物，通过定点诱变并优化起始区，应用ＰＣＲ扩增及重组ＤＮＡ技术，构建重组质粒ｐＢＶ－ＩＬ－６，并转化至Ｅ．ｃｏｌｉ宿主菌ＤＨ５α中诱导表达，对产物进行纯化和复性，ＭＴＴ法检测生物活性。③结果获得２种ｒｈＩＬ－６高效表达的Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α／ｐＢＶ－ＩＬ－６工程菌，一种表达２０．８ｋｕＩＬ－６全蛋白；另一种表达１６．８ｋｕ，Ｎ端缺失２５个氨基酸ＩＬ－６蛋白。薄层密度扫描分析表达产率，前者为２８．３％，后者为３３．４％，且均具有生物学活性。④结论ｒｈＩＬ－６构建成功，并获高效表达     

重组人IL—6在沙门菌x4550中的表达

为在鼠伤寒沙门菌Ｘ４５５０中表达重组人白细胞介素６，利用定点突变，聚合酶链反应，体外重组ＤＮＡ技术构建出重组表达载体ｐＹＡ３３３３－ＩＬ６，利用ＩＬ－６依赖性的小鼠杂交瘤细胞株Ｂ９测定重组人ＩＬ－６ＨＧＦ的活性。     

pCD—rbFGF重组质粒的构建及其在成骨细胞中的表达

为了构建碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor ,bFGF）真核表达质粒,并探讨应用bFGF基因治疗骨科各种疾患的可能性,将鼠碱性成纤维细胞生长因子cDNA克隆至真核表达载体pcDNA3中,构建了重组质粒pCD-rbFGF,通过Lilfectin介导将pCD-rbFGF转染成骨细胞,经免疫组化检测症帝兔成骨细胞获得了bFGF的瞬时表达,提示该bFGF圩真核表达质粒有效,可用于进一步基因治疗研究。     

人IL—1,IL—1ra及IL—6在胸腺上皮细胞中的表达

应用ＭＴＴ及原位杂交技术对本室建立的人胸腺上皮样细胞株（ＴＥＣ１）分泌的细胞因子活性蛋白及其ｍＲＮＡ的表达进行了测定。结果表明，ＴＥＣ１细胞自发性分泌ＩＬ－１及ＩＬ－６活性蛋白，ＴＥＣ１细胞的起始浓度为５×１０４／ｍｌ，培养５天后，ＴＥＣ１细胞培养上清液中ＩＬ－１的活性平均为８４．６±１２．０Ｕ／ｍｌ；ＩＬ－６的活性平均为６５．４±１４．０Ｕ／ｍｌ；经原位杂交发现ＴＥＣ１具有ＩＬ－１、ＩＬ－１ｒａ及ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达。提示：ＴＥＣ１细胞分泌的上述三种细胞因子对Ｔ细胞的发育具有重要意义。     

IL—6在某些疾病中的变化

白细胞介素-6（IL－6）是一种多效应的细胞因子,在机体的免疫反应,应激状态和造血方面起重要作用,同时也与许多疾病的发生,发展有密切的关系,我们对一些疾病患者检测了血清IL－6水平,观察IL－6在这些疾病中变化。材料与方法病例选择所有病例均符合实用内科学中有关?..     

前列腺液中细胞因子（IL—6,TNF—α）在慢性前列腺炎中的意义

探讨前列腺液中细胞因子与慢性前列腺炎的关系。方法：对５５例患者按Ｍｅａｒｅｓ－Ｓｔａｍｅｙ法分慢性细菌组、非细菌组，前列腺痛组，１２例健康人为对照组，采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测了前列腺液中细胞因子水平，用ＳＡＳ统计分析软件中非平衡数据的方差分析方法和ＳＮＫ法作均数间的两两比较。／     

胃癌组织中IL—6及其受体的测定和临床意义

目的：检测胃癌组织中白细胞介素6（IL-6）及其受体的水平与胃癌细胞恶性程度、肿瘤大小、浸润转移的关系及其临床意义。方法：运用ELISA技术半定量、平行地检测了30例胃癌及其相应癌旁组织中IL-6及其受体的水平，并综合分析了IL-6及其受体与胃癌临床生物学指征的相关意义。结果：IL-6和IL-6R，在30例胃癌组织中，均显著高于相应的癌旁组织；在伴有淋巴结转移、浸润到肌层和浆膜层及临床分期较晚的胃癌组织中均明显增高；IL-6在分化低、肿瘤较大的胃癌组织中也显著增高。结论：在胃癌组织中，IL-6及IL-6R的水平明显增高，且与胃癌的临床生物学指征相一致。对IL-6/IL-6R水平的检测是预示胃癌细胞恶性程度和浸润转移的重要手段之一，有利于指导临床诊治，判定预后。     

Hyper-IL-6重组腺病毒的制备

目的 探讨大量制备高滴度重组腺病毒的方法 .方法 以Pac-1酶切Hyper-IL-6重组腺病毒(AdHIL-6)质粒,乙醇沉淀回收DNA,将线性化的AdHIL-6质粒经脂质体转染293细胞进行病毒的包装扩增,以氯化铯密度梯度离心法纯化重组腺病毒,根据GFP(绿色荧光蛋白)计数法和有限稀释法原理测定病毒滴度及感染293细胞、L02细胞的MOI(Multiplicity of infection,感染复数),并以免疫细胞化学检测感染L02细胞后目的 蛋白Hyper-lL-6的表达.结果 收集的病毒液经PCIL扩增出目的 条带,测得病毒滴度为1.6×109pfu/mL,AdHIL-6感染293细胞、L02细胞的MO1分别是7和54,感染L02细胞后Hyper-IL-6强阳性表达.结论 成功地完成了Hyper-IL-6重组腺病毒的制备,为后续的腺病毒载体介导的基因治疗奠定了基础.     

用PCR方法定量检测IL—6受体基因在前列腺癌中的表达

利用逆转录聚合酶链反应定量检测了１０例正常人前列腺、１５例前列腺癌及ＰＣａ细胞系ＰＣ－３ｍ中白细胞介素６受体基因表达水平。结果表发现，正常人前列腺组织中ＩＬ＿＾Ｒ基因呈低水平表达。     

重组人IL-6在沙门菌x4550中的表达

为在鼠伤寒沙门菌ｘ４５５０中表达重组人白细胞介素６（ＩＬ６），利用定点突变、聚合酶链反应、体外重组ＤＮＡ技术构建出重组表达载体ｐＹＡ３３３３ＩＬ６；利用ＩＬ６依赖性的小鼠杂交瘤细胞株Ｂ９测定重组人ＩＬ６ＨＧＦ的活性。结果：从全菌ＳＤＳＰＡＧＥ考马斯亮蓝染色后薄层扫描分析表达产物产率为１７６％，相对分子质量为２１×１０４；测定重组人ＩＬ６ＨＧＦ活性为２×１０６Ｕ／Ｌ。提示：鼠伤寒沙门菌ｘ４５５０能够表达人ＩＬ６。     

IL—6,IL—6R在肺癌中的表达

利用抗ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ抗体，使用免疫组化的方法。直接标记肺癌组织标本，探讨ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ与肺癌的发生，发展及预后的关系。     

pIRES2-HPV18E2-EGFP质粒重组及其在HeLa细胞中的表达

目的构建人乳头瘤病毒18型E2基因片段(HPV18E2)重组表达质粒并予以表达,为进一步研制HPV18相关疾病提供材料.方法以重组质粒(pBR322-HPV18)为模板,PCR方法扩增HPV18E2DNA片段,将HPV18E2DNA与加强绿色荧光质粒(pIRES2-EGFP)重组构建重组质粒(pIRES2-HPV18E2- EGFP).用酶切电泳及测序检查质粒重组后序列正确性.重组质粒转染Hela细胞.RT-PCR鉴定转染细胞中E2基因.结果 PCR扩增DNA片段约为1 kb,与预期结果相同.克隆重组质粒pIRES2-HPV18E2- EGFP酶切后显示的酶切图谱与预期相同,而且测序验证插入片段全序列无改变.转染并用G418筛选后,在荧光显微镜下可见绿色荧光细胞的表达.转染细胞RT-PCR出现特异性条带.结论成功构建表达HPV18 E2蛋白的靶细胞模型.     

pBV-BPI600重组表达载体的构建及其在E.coli中的表达

①采用RT PCR技术 ,以HL 60细胞mRNA为模板扩增获得编码BPI氨基端 1 93个氨基酸 (rBPI2 1)的基因片段 (BPI60 0 ) ;EcoRI/BamHI酶切扩增产物获得BPI 2 0 0bp和BPI 4 0 0bp 2个基因片段。②成功构建PUC1 8 BPI2 0 0和PUC1 8 BPI4 0 0重组克隆载体 ,DNA测序分析结果与文献报道一致。③成功构建pBV2 2 0 BPI60 0重组表达载体 ;转化E .coliDH5α感受态细胞 ,诱导目的重组蛋白表达 ;经SDS PAGE电泳和Western blot鉴定 ,证实表达的重组蛋白确为外源基因 (BPI 60 0bp)编码的产物BPI2 1重组蛋白。     

表达人癌胚抗原重组痘苗病毒的构建

用痘苗病毒作载体，成功构建了高效表达人癌胚抗原（ＣＥＡ）的ＣＥＡ－重组痘苗病毒，用１４３ＴＫ－细胞作主宿主细胞，表达的蛋白质只在细胞膜上的能检测到，而胞质内和细胞上清液中均未能检测到，可见所表达的蛋白保持了其原有特性，再次证实痘苗病毒是真核表达扔效载体，本结果为进一步研究ＣＥＡ－重组痘苗病毒能否激活机体的免疫系统杀伤表达ＣＥＡ的肿瘤提供了物质基础。     

重组质粒pBud-CD44v6的构建及其在胃癌细胞内的表达

目的 构建含人的肿瘤侵袭和转移的特异性抗原CD44v6编码基因的真核表达的重组载体,进行核苷酸序列分析,并在肿瘤细胞中表达.方法 ①以pBud作为真核表达载体,选择CD44v6编码基因进行RT-PCR扩增,构建重组表达质粒,进行酶切鉴定和测序分析.②在Lipofectamine 2000的介导下,将构建成功的pBud-CD44v6重组表达质粒转染到肿瘤细胞中,通过免疫组织化学方法检测CD44v6的表达.结果 经酶切鉴定和测序分析表明,插入的目的 基因片段为CD44v6的编码基因,长为129 bp,与GenBank中登录的cDNA相比较,同源性高达100%,且方向正确;重组质粒pBud-CD44v6转染对数生长期胃癌细胞株SGC-7901,进行免疫组织化学检测结果显示,与空质粒转染组对比,重组质粒组肿瘤细胞的细胞质中可见大量CD44v6基因编码的表达,其蛋白呈棕黄色,而对照组呈阴性.结论 成功构建了pBud-CD44v6真核表达的重组载体,并在肿瘤细胞中表达.     

左旋咪唑对实验性过敏性脑脊髓炎大鼠脊髓IL—1、IL—2及IL—6mRNA表达的影响

目的了解左旋咪唑(LMS)对实验性过敏性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓内白细胞介素(IL)-1、IL-2及IL-6mRNA表达的影响,为探讨LMS性白质脑病的发病机制提供实验依据。方法用豚鼠全脊髓匀浆免疫wistar大鼠建立EAE模型,EAE+LMS组大鼠分别于免疫后0、24、48hipLMS10mg/kg;大鼠免疫后第16天处死,采用RT-PCR的方法检测大鼠脊髓内IL-1α、IL-1β、IL-2和IL-6mRNA表达的相对量。结果和正常对照组相比,EAE组大鼠脊髓内IL-1α(P＜0.05)、IL-1β(P＜0.05)、IL-2(P＜0.01)和IL-6(P＜0.05)mRNA的表达量均明显升高。EAE+LMS组大鼠脊髓内IL-1α、IL-1β、IL-2和IL-6mRNA的表达量和EAE组相比则分别升高131％(P＜0.05)、121％(P＜0.05)、95％(P＜0.05)和28％(P＞0.05)。结论LMS能明显促进EAE大鼠脊髓内IL-1α、IL-2β、IL-2mRNA的表达,提示该作用可能是LMS促发EAE的机制之一。     

氯胺酮对体外循环病人IL—6和IL—8的影响及其意义

OBJECTIVE: To investigate the effects of ketamine on cardiopulmonary bypass-induced IL-6 and IL-8 response. METHODS: Twenty-four adult patients undergoing cardiac valve replacement were divided into control and ketamine group (n = 12). In the ketamine group, 1 mg.kg-1 ketamine was infused intravenously at the beginning of operation and CBP. Plasma levenof IL-6 and IL-8 were measured at different time after induction of anesthesia. RESULTS: In both groups, the levels of IL-6 and IL-8 increased significantly compared with those at the time before CBP (P < 0.05), but compared with those in control groups, IL-6 and IL-8 levels decreased obviously in ketamine group(P < 0.05). CONCLUSIONS: Ketamine is effective to reduce cardiopulmonary bypass-induces IL-6 and IL-8 response and protect reperfusion myocardium.