高血糖对人红细胞醛糖还原酶活性的影响

目的研究高浓度葡萄糖对人红细胞醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ）活性的影响。方法利用ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ－５２）柱层析法，将正常人、糖尿病患者及体外高浓度葡萄糖孵育的红细胞醛糖还原酶部分纯化，测定其活性，并对其性质作进一步分析。结果①高浓度葡萄糖孵育的红细胞醛糖还原酶Ｋｍ值下降约６～７倍；②糖尿病红细胞醛糖还原酶活性明显高于正常人，酶活性升高程度与血糖值正相关；③高糖时醛糖还原酶不仅对多种底物的Ｋｍ值（包括葡萄糖）显著下降，而且对醛糖还原酶抑制剂（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＡＲＩｓ）的抑制不敏感。结论①高血糖时ＡＲＩｓ的用量需加大，才能取得满意的疗效；②（ＤＥ－５２）柱层析法测定红细胞ＡＲ活性准确、方便，可以作为判断糖尿病慢性并发症病情及评估醛糖还原酶抑制剂疗效的一项重要指标     

高血糖与醛糖还原酶的激活

应用荧光法、Ｃ１８反相高压液相层析和气相色谱法分别测定１７例正常人和３２例Ⅱ型糖尿病患者（１７例有并发症）红细胞内的醛糖还原酶活性、某些核普酸和糖醇浓度。结果显示：Ⅱ型糖尿病患者红细胞内醛糖还原酶的活性高于正常人；有并发症患者的酶活性又高于无并发症患者，证明高血糖能激活醛糖还原酶，激活程度与血糖浓度呈正相关。患者红细胞内ＮＡＤＰ＋、山梨醇和果糖的浓度高于正常对照；ＮＡＤＰＨ和ＮＡＤ＋浓度低于正常对照，而此５项指标在两组患者间差异无显著性。     

醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心、盐析及ＤＥＡＥ－纤维素、羟基磷灰石、葡聚糖－Ｇ１００多步层析法将牛睾丸ＡＲ分离纯化，醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ），并利用体外酶动力学方法测定其底物特异性，为寻找有效的醛糖还原酶抑制剂提供线索。结果：纯化的酶经ＳＤＳ－ｐＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，牛睾丸ＡＲＭｒ约为（４００００±１０００）ｕ，ＡＲ底物特异性，按１／ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛，ＤＬ－甘油醛，Ｄ－葡萄糖醛酸，Ｄ－木糖，Ｄ－半乳糖，Ｄ－葡萄糖。     

醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心，盐析及ＤＥＡＥ－纤维素，羟基磷灰石，葡聚糖－Ｇ１００多步层析法将牛睾丸ＡＲ分离纯化，醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃａｓｅ，ＡＲ），并利用体外酶动力学方法测定其底物特异性，为寻长有效的醛糖还原酶抑制剂提供线索，结果；纯化的酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，牛睾丸ＡＲ，Ｍｒ约为（４００００±１０００）ｕ，ＡＲ底物特异性，按１／Ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛；ＤＬ－甘油醛，Ｄ     

鼠醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心、盐析及多步层析法将鼠睾丸醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ）分离纯化，纯化的酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，ＡＲ分子量为３９０００±１０００，ＡＲ底物特异性，按１／Ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛，ＤＬ－甘油醛，Ｄ－葡萄糖醛酸，Ｄ－木糖，Ｄ－半乳糖，Ｄ－葡萄糖。     

抗坏血酸抑制红细胞内山梨醇积聚的研究

研究了体外抗坏血酸对人类红细胞中山梨醇和葡萄糖含量的影响。结果显示，随着孵育介质葡萄糖浓度的增加，红细胞中山梨醇含量相应增加；无论在５．６ｍｍｏｌ／Ｌ还是在２８ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖介质中，孵育的红细胞山梨醇含量及可作为细胞内醛糖还原酶活性指标的红细胞中山梨醇与葡萄糖的比值（Ｓ／ＥＧ）均可大大地被抗坏血酸所抑制。提不高浓度葡萄糖确可激活多元醇通路，使红细胞中山梨醇积聚；而抗坏血酸可通过直接抑制多元醇通路活性而有效地抑制红细胞中山梨醇的积聚。糖尿病患者服用中等剂量抗坏血酸（ｌ０００ｍｇ／日）２周可降低红细胞山梨醇水平（Ｐ＜０．０５），平均抑制率为１２．２％；且可降低红细胞山梨醇／同时测定的空腹血糖比值（Ｓ／ＰＧ）（Ｐ＜０．０５），平均抑制率２ｌ．８％，同时测定的空腹血糖水平无显著变化，提示补充中等剂量的抗坏血酸为防治糖尿病慢性并发症的一条安全、有效的途径。     

Graves病甲状腺NADH－细胞色素b_5还原酶活性变化

以ＮＡＤＨ－高铁氰化钾还原酶法对Ｇｒａｖｅｓ病和正常甲状腺ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ_５还原酶（ｂ_５Ｒ）及过氧化氢酶活性进行测定。发现Ｇｒａｖｅｓ病时甲状腺的ｂ_５Ｒ活性明显增高，而过氧化氢酶活性无改变；Ｇｒａｖｅｓ病患者甲状腺ｂ_５Ｒ活性与其治前血中甲状腺激素水平呈显著正相关。表明Ｇｒａｖｅｓ病时甲状腺内产生过氧化氢酶系活性增高，可能是其甲状腺激素合成增多的重要环节。     

红细胞醛糖还原酶荧光法的建立及意义

目的建立一种准确测定醛糖还原酶（ＡＲ）活性的方法。方法利用ＮＡＤＰＨ、ＤＬ－甘油醛、磷酸缓冲液和适量红细胞溶血液组成的反应体系，以荧光法测定了红细胞ＡＲ活性，并对酶反应最佳条件进行了实验探讨。结果①血红蛋白浓度在１～１０μｌ范围内，随着所加量的增加，反应后的ＮＡＤＰＨ消耗也逐渐增加，两者之间有很好的相关性；②反应温度对测定结果的影响不很明显；③以ＮＡＤＰＨ作辅酶时测得酶活性约为ＮＡＤＰＨ的１／３，这两种辅酶测得的荧光读数有良好的相关性（ｒ＝０．９２）；④ｐＨ６．０～６．５时ＮＡＤＰＨ的消耗最大；⑤批内变异系数（ＣＶ）５．２７％；批间变异系数（ＣＶ）８．９８％；⑥该法测定２０例正常对照和４０例糖尿病人红细胞ＡＲ结果表明，糖尿病人ＡＲ活性显著高于正常人（Ｐ＜０．０１），且ＡＲ活性与血糖值正相关（Ｐ＜０．０１）。结论荧光法灵敏、准确、稳定、特异，为深入研究ＡＲ与慢性并发症（ＤＣＣ）的发生、发展的关系，提供了一个可靠的手段。     

非胰岛素依赖型糖尿病病人红细胞镁浓度变化及镁对红细胞变形能力的影响

检测了６４例非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）病人红细胞镁（Ｅ－Ｍｇ（２＋））浓度变化，同时观察了镁在体外对ＮＩＤＤＭ病人红细胞变形能力（ＥＤ）、红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性、Ｅ－Ｍｇ（２＋）和红细胞钙（Ｅ－Ｃａ（２＋））浓度的影响。结果显示，ＮＩＤＤＭ病ＨＥ－Ｍｇ（２＋）浓度较对照组明显降低（Ｐ＜０．００１），有血管病变者降低更明显。ＮＩＤＤＭ病人红细胞与镁共同孵育后，红细胞滤过指数（ＩＦ）、Ｅ－Ｃａ（２＋）明显降低，Ｅ－Ｍｇ（２＋）和红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性明显增高，与孵育前比较差异有极显著性（Ｐ＜０．００１），与对照组比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。提示镁对改善ＮＩＤＤＭ病人血液流变学、减少血管病变的发生有重要意义。     

Graves病甲状腺NADH—细胞色素b5还原酶活性变化

以ＮＡＤＨ－高铁氰化钾还原酶法对Ｇｒａｖｅｓ病和正常甲状腺ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）及过氧化氢酶活性进行测定。发现Ｇｒａｖｅｓ病时甲状腺的ｂ５Ｒ活性明显增高，而过氧化氢酶活性无改变，Ｇｒａｖｅｓ病患者甲状腺ｂ５Ｒ活性与其治前血中甲状腺激素水平呈显著正相关。表明Ｇｒａｖｅｓ病时甲状腺内产生过氧化氢酶系活性增高，可能是其甲状腺激素合成增多的重要环节。     

非胰岛素依赖型糖尿病病人红细胞镁浓度变化及镁对红细胞变…

检测了６４例非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）病人红细胞镁（Ｅ－Ｍｇ＾２＋）浓度变化，同时观察了镁在体外对ＮＩＤＤＭ病人红细胞变形能力（ＥＤ）、红细胞膜Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性，Ｅ－Ｍｇ＾２＋和红细胞钙浓度的影响。结果显示，ＮＩＤＤＭ病人Ｅ－Ｍｇ＾２＋浓度较对照组明显降低（Ｐ〈０．００１），有血管病变者降低更明显。ＮＩＤＤＭ病人红细胞与镁共同孵育后，红细胞滤过指数（ＩＦ）、Ｅ－Ｃａ＾２＋明显     

一氧化氮对腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性的影响

目的通过观察一氧化氮对腹膜间皮细胞醛糖还原酶（AR）活性的影响，探讨一氧化氮对腹膜间皮细胞醛糖还原酶的调节作用。方法采用人的网膜作为细胞来源，胰蛋白酶-EDTA消化法进行人腹膜间皮细胞（HPMC）的分离、培养，间接免疫荧光法对第二代细胞进行鉴定。第2-3代细胞用于实验。以硝普纳为一氧化氮供体，硝普纳（0．5mmol／L、1mmol／L、2mmol／L）＋1．5％葡萄糖培养液为实验组，以无一氧化氮1．5％葡萄糖培养液为对照组，观察剂量及时间对腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性的影响。应用紫外分光光度计记录NADPH在340nm处吸光值的下降表示醛糖还原酶活性。结果高糖状态下各浓度一氧化氮组醛糖还原酶活性均高于对照组，且醛糖还原酶活性随一氧化氮浓度的增加而增加；一氧化氮＋葡萄糖组醛糖还原酶活性随着时间的延长而逐渐增加。各时点一氧化氮＋葡萄糖组醛糖还原酶活性均高于葡萄糖组。结论一氧化氮以时间及剂量依赖的方式使腹膜间皮细胞醛糖还原酶活性增加。     

糖尿病病人红细胞醛糖还原酶测定及意义

应用荧光分光光度计测定４０例非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞内醛糖还原酶（ＡＲ）的活性。结果提示：糖尿病患者红细胞ＡＲ明显高于健康对照组，并与血糖呈明显正相关。     

糖尿病病人红细胞醛糖还原酶测定及意义

应用荧光分光光度计测定４０例非胰岛素依赖型糖尿病患者红细胞内醛糖还原酶（ＡＲ）的活性。结果提示：糖尿病患者红细胞ＡＲ明显高于健康对照组，并与血糖呈明显正相关。     

还原型辅酶II在葡萄糖6—磷酸脱氢酶缺乏新生儿黄疸中的作用

目的 了解还原型辅酶Ⅱ在葡萄糖６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）缺乏新生儿黄疸发生中的作用，以探讨有效的预防和治疗途径。方法 采用酶活性检测法检测红细胞Ｇ６ＰＤ、红细胞过氧化氢酶（Ｃａｔ）和谷胱苷肽过氧化物酶（ＧＳＨｐｘ）活性，采用硫代巴比妥酸法和染料比色法分别检测红细胞丙二醛（ＭＤＡ）和还原型辅酶Ⅱ的含量，比较了Ｈ２Ｏ２孵育前后Ｇ６ＰＤ正常和异常红细胞上述指标的变化。结果 Ｇ６ＰＤ缺乏黄疸新生儿的红细胞     

糖尿病大白鼠组织山梨醇的代谢研究

本文测定了糖尿病大白鼠心肌、肌肉、肝脏等组织和血浆的葡萄糖、山梨醇的含量,以及心肌、肌肉、肝脏组织的醛糖还原酶和山梨醇脱氢酶的活性。结果发现：心肌、肌肉、血浆的葡萄糖和山梨醇含量以及心肌、肌肉的醛糖还原酶活性升高（P＜0．01）。心肌、肌肉的山梨醇脱氢酶活性糖尿病组大白鼠较正常对照组降低（P＜0.01）．肝组织的葡萄糖、山梨酵的含量和醛糖还原酶、山梨醇脱氢酶的活性在两组动物没有明显的变化（P＞0．05）．根据上述结果推测,心肌、肌肉等细胞内的山梨醇部分分流到血液,运输至肝脏,再进一步的代谢。     

还原型辅酶 Ⅱ 在葡萄糖 6-磷酸脱氢酶缺乏新生儿黄疸中的作用

目的了解还原型辅酶Ⅱ在葡萄糖６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）缺乏新生儿黄疸发生中的作用，以探讨有效的预防和治疗途径。方法采用酶活性检测法检测红细胞Ｇ６ＰＤ、红细胞过氧化氢酶（Ｃａｔ）和谷胱苷肽过氧化物酶（ＧＳＨｐｘ）活性，采用硫代巴比妥酸法和染料比色法分别检测红细胞丙二醛（ＭＤＡ）和还原型辅酶Ⅱ的含量，比较了Ｈ２Ｏ２孵育前后Ｇ６ＰＤ正常和异常红细胞上述指标的变化。结果Ｇ６ＰＤ缺乏黄疸新生儿的红细胞ＭＤＡ含量明显增高，每克血红蛋白（Ｈｂ）为３６±８ｎｍｏｌ／Ｌ；而还原型辅酶Ⅱ含量明显降低，为１７９２±１０６μｍｏｌ／Ｌ。Ｈ２Ｏ２孵育后，Ｇ６ＰＤ正常红细胞的还原型辅酶Ⅱ含量及Ｃａｔ、ＧＳＨｐｃ活性变化表现为先增加，随孵育时间延长才降低。在Ｇ６ＰＤ缺乏红细胞中，所有这些指标匀进行性下降。结论Ｇ６ＰＤ缺乏性的新生儿黄疸的发生与还原型辅酶Ⅱ含量降低，致红细胞过氧化损伤密切相关。Ｇ６ＰＤ缺乏新生儿的红细胞还原型辅酶Ⅱ的生成是不足的，不能维持抗红细胞氧化损伤的能力，致使红细胞因过氧化损作而大量破坏，而导致其发生黄疸。     

硒对急性心肌梗塞病人红细胞变形能力的影响及机制探讨

①目的探讨硒（Ｓｅ）对急性心肌梗塞（ＡＭＩ）病人红细胞变形能力（ＥＤ）的影响及其机制。②方法检测了４２例ＡＭＩ病人和３７例健康人红细胞滤过指数（ＥＦＩ）、红细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ｐｘ）活性和脂质过氧化物（ＬＰＯ）的变化，同时观察了硒在体外对ＡＭＩ病人ＥＦＩ，Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶、ＧＳＨ－ｐｘ和ＬＰＯ的影响。③结果ＡＭＩ病人ＥＦＩ，ＬＰＯ明显增高，Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶和ＧＳＨ－ｐｘ活性明显降低，与对照组比较差异均有极显著性（ｔ＝４．２０６～４．９５２，Ｐ均＜０．００１）；ＡＭＩ病人红细胞与Ｓｅ在体外孵育２４ｈ后，ＥＦＩ与ＬＰＯ明显降低，Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶和ＧＳＨ－ｐｘ活性明显增高，与孵育前组比较差异均有极显著性（ｔ＝３．５０５～４．５１７，Ｐ＜０．００１），与对照组孵育前后组比较差异均无显著性（ｔ＝１．３６５～１．８４２，Ｐ均＞０．０５）。④结论Ｓｅ具有改善和提高ＡＭＩ病人ＥＤ的作用，其机制与增强红细胞膜ＡＴＰ酶和ＧＳＨ－ｐｘ活性有关。     

蝮蛇蛇毒柱层析分离及生化药理作用

应用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＮａＣｌ分段梯度洗脱的方法，对蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｂｌｏｍｈｏｆｆｉｂｒｅｖｉｃａｎｄｕｓ）蛇毒进行柱层析分离，获得１２个蛋白峰。１，３～７，１１组分有蛋白水解酶活性；２，３组分有磷酯酶Ａ２活性；５～８组分具有精氨酸酯酶、凝血酶样酶活性及出血毒性和致死毒性；４，５组分有神经毒作用。用体外微量培养方法测定，４～８组分对人肝癌细胞株（ＳＭＣ－１７２２）有杀伤或抑制生长作用。     

α-晶体蛋白对抗氧化酶失活的保护

目的 研究α－晶体蛋白的分子伴侣特性。方法 采用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００ＨＲ凝胶性分离纯化牛α－晶体蛋白。应用分光光度计检测超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）的活性,以酶失活后保留的酶活性占其对照组活性的百分比表示α－晶体蛋白的伴侣作用。结果 糖与酶的孵育导致时间依赖性的ＳＯＤ和ＣＡＴ失活。果糠和核糖比６－磷酸葡萄糖和葡萄糖具有糖基化诱导ＳＯＤ和ＣＡＴ的快速失活效应。α－晶体蛋白与