重组人肿瘤坏死因子α与其衍生物A的毒性比较

目的比较重组人肿瘤坏死因子α衍生物Ａ（ｒｈＴＮＦαＤａ）与重组人肿瘤坏死因子α（ｒｈＴＮＦα）的毒性。方法急性毒性试验和长期毒性试验。结果急性毒性试验结果：ｒｈＴＮＦαＤａ和ｒｈＴＮＦα的小鼠ＬＤ５０分别为０．６７×１０９和３９×１０６ＩＵ／ｍ２。长期毒性试验结果：ｒｈＴＮＦαＤａ的毒性作用性质与ｒｈＴＮＦα相似，毒性作用广泛，对中枢神经系统、心血管系统、消化系统、造血系统、雄性生殖系统、肾脏均有损害，连续注射且会引起恶病质。ｒｈＴＮＦαＤａ中剂量组（５３×１０６ＩＵ／ｍ２）的毒性作用程度与ｒｈＴＮＦα（５．３×１０６ＩＵ／ｍ２）相当或略低。结论改构后的ｒｈＴＮＦαＤａ的毒性作用性质与ｒｈＴＮＦα相似，但毒性作用程度与ｒｈＴＮＦα相比却下降了１个数量级。     

重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a的制备及纯化

制备符合临床应用标准的高纯度重组人肿瘤坏死因子α衍生物３ａ；高效表达ｒｈ－＝ＴＮＦα３ａ的Ｅ．ｃｏｌｉ工程菌经过超声破碎，硫酸铵分段盐析，Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００层析，得到电泳ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ，其比活性为１．８８×１０＾８ＩＵ／ｍｇ。     

重组人肿瘤坏死因子α衍生物A对小鼠离体造血细胞的抑制作用

研究重组人肿瘤坏死因子α衍生物Ａ（ｒｈＴＮＦαＤａ）对离体造血细胞的抑制作用。方法骨髓细胞半固体培养和悬浮培养,ＤＮＡ凝胶电泳,ＤＮＡ缺口末端标记（ＴｄＴ）,电镜观察。结果在２０ｎｇ／ｍｌＧ－ＣＳＦ存在下,ｒｈＴＮＦαＤａ能抑制小鼠造血祖细胞的集落形成,且ｒｈＴＮＦαＤａ对数剂量与形成的集落数呈负相关（ｒ＝－０．９８４５）。ｒｈＴＮＦαＤａ处理骨髓细胞４８ｈ,ＤＮＡ凝胶电泳可见典型的阶梯状条带,ＴｄＴ法可见大量的细胞核被染成棕色的骨髓细胞,电镜观察可见骨髓细胞核染色质变性、浓缩,细胞膜与核膜完整且明显皱缩。结论ｒｈＴＮＦαＤａ对造血细胞的抑制可能与其促进骨髓细胞凋亡有关。     

重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a突变区的氨基酸序列分析

目的：对重组人肿瘤坏死因子α衍生物３ａ（ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ）突变区进行氨基酸序列分析。方法：通过ＰＣＲ扩增，获得５‘端含ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ突变区的半分子用融合蛋白表达系统对该半分子进行大肠杆菌表达。表达产物经亲和层析法纯化，用Ｘａ因子酶切，去除载体多肽，然后进行Ｎ末端２０个氨基酸顺序分析。结果和结论：氨基酸序列符合预想突变序列，即发生下列氨基酸替换，８０位Ｉｌｅ→Ｓｅｒ，９０位Ｌｙｓ→Ｈｉｓ，     

重组人肿瘤坏死因子α衍生物A对小鼠离体造血细胞的抑制作用

目的 研究重组人肿瘤坏死因子α衍生物Ａ（ｒｈＴＮＦαＤａ）对离体造血细胞的抑制作用。方法 骨髓细胞半固体培养和悬浮培养，ＤＮＡ凝胶电泳，ＤＮＡ缺口末端标记（ＴｄＴ），电镜观察。结果 在２０ｎｇ／ｍｌＧ－ＣＳＦ存在下，ｒｈＴＮＦαＤａ能抑制小鼠造血祖细胞的集落形成，且ｒｈＴＮＦαＤａ对数剂量与形成的集落数呈负相关（ｒ＝－０．９８４５）。ｒｈＴＮＦａＤα处理骨髓细胞４８ｈ，ＤＮＡ凝胶电泳可见典型的阶梯     

哮喘患儿血清肿瘤坏死因子α测定

本组资料采用双抗夹心ＥＬＩＳＡ方法测定２８例哮喘患儿血清肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）含量。与正常儿童对照比较，哮喘病人发作期血清ＴＮＦα明显高于正常对照组，重症哮喘组ＴＮＦα增高尤为明显，于缓解期仍持续高水平。提示哮喘发病过程中存在ＴＮＦα介导的炎症反应，ＴＮＦα水平高低与疾病严重程度相关。     

肿瘤坏死因子—α抗肿瘤研究进展

近年来,基因工程技术迅速发展。1984年首次人肿瘤坏死因子α(TNF-α)cDNA克隆成功并在大肠杆菌中表达。为进一步探讨TNF基因及蛋白质结构提供了可能。在TNF广泛的生物学作用中最引人注目的是其抗肿瘤活性。1985年以来,美日等国已用TNF-α进行了Ⅰ、Ⅱ期临床抗肿瘤试验性治疗并取得了初步结果。多年来的研究表明,TNF作为一种抗肿瘤的侯选药物是有希望的。     

重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a研究的综合报告

目的:将采用点突变技术获取的重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a(rh-TNFα-D3a)研究开发为临床新药.方法:与野生型TNF α比较,采用动物体内抑瘤试验测定其ED50;急性毒性试验测定LD50;长期毒性试验测定安全剂量并观察毒性反应发生的程度;Ⅰ期临床试验观察人体可耐受的安全剂量 ;Ⅱ-Ⅲ期临床试验观察其对肿瘤患者的临床疗效.结果:rh-TNFα -D3a体内抑瘤的ED50为其野生型的2/3;LD50为野生型的11倍;恒河猴长期毒性的安全剂量为日本同类产品PT050的64倍;Ⅰ期临床试验表明,≤2×106 IU/(m2 *d)×7 d为人体可耐受的安全剂量,本品与野生型药物比较,其毒性反应的发生率及反应程度远远降低;Ⅱ-Ⅲ期临床试验表明,胸腔内注射对恶性胸水,静脉途径对多种实体瘤包括恶性淋巴瘤、乳腺癌、恶性黑素瘤和肾癌等均有较好的疗效.结论:研制新一代高效、低毒的肿瘤坏死因子衍生物获得成功.     

冠心病患者血清肿瘤坏死因子—α的测定及意义

目的探讨肿瘤坏死因子与冠心病的相关性.方法研究对象为20例正常人作为对照组,平均年龄51.5岁;70例冠心病(CAD)患者,平均年龄55.5岁,分为3组,单纯冠心病30例,冠心病合并高血压25例,冠心病合并糖尿病15例,各组间在年龄、性别上无显著差异.测定方法放射免疫法测定.结果正常人的血清TNF-α值(单位μmol/L)为(1.3276±0.2468);单纯冠心病组为(1.8896±0.4383);高血压冠心病组为(2.2191±0.4451);冠心病合并糖尿病组为(2.5381±0.8008).冠心病组血清TNF-α值高于正常值,P＜0.05;P＜0.01.而组间比较高血压冠心病组和冠心病合并糖尿病组血清TNF-α值均高于冠心病组,P＜0.05.冠心病合并糖尿病组血清TNF-α值高于高血压冠心病组,P＜0.05.结论从本文初步研究我们认为血清TNF-α与冠心病密切相关,而其血浆浓度与冠心病严重程度可能一致,与有关报道不一,有待于进一步研究.     

重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a的克隆与表达

目的:寻找具有更强抗肿瘤活性和(或)较低毒副作用的TNF α突变蛋白.方法:应用巨引物二轮PCR技术对rh-TNFα的第80 、9 0和92位氨基酸编码的密码子进行定点突变, 经过DNA序列测定证实DNA突变准确后,将突变基因的cDNA插入pBL载体,转化大肠杆菌DH5α,获得表达rh-TNFα-D3a的工程菌.[ HT5W 〗结果:经巨引物二轮PCR获得表达TNFα突变蛋白的基因突变,经序列测定结果与设计一致,重组蛋白表达量占细菌总蛋白18.0％,大部分为可溶性,占rh-TNFα-D3a 总量的60％以上.重组蛋白经纯化,纯度＞98％.rh-TNFα-D3a对L929细胞表现出较高的细胞毒性,比活性大于5×108 IU/mg.与野生型的rh-TNFα相比,rh-TNFα-D3a的毒性降低为野生型的1/10,同时其保留了TNFα的抗肿瘤活性.结论:rh-TN F-αD3a是一个毒性较低,具有较强抗肿瘤作用的衍生物.     

癫痫患儿外周血单个核细胞分泌肿瘤坏死因子α及血清肿瘤坏死因子α的研究

目的 探讨癫痫与肿瘤坏死因子α(TNFα)的关系。方法 用放射免疫分析法(RIA)测定60例癫痫患儿(其中23例服用苯巴比妥，13例服用卡马西平，24例未服药)及20例对照组的外周血单个核细胞(PBMC)分泌的TNFα及血清TNFα。结果 癫痫患儿上述两项指标分别显著高于对照组。进一步研究发现，两项指标于各组癫痫患儿之间无显著性差异，且与癫痫患儿病程、脑电图是否有痫样放电无关。结论 癫痫患儿免疫调节网络处于失衡状态。细胞因子的改变可能是癫痫免疫功能损害的细胞分子学机制之一。     

肿瘤坏死因子-α与扩张型心肌病

<正>扩张型心肌病(Dilated Cardiomyopathy,DCM)是心肌病中最多见的一种,其发病机制尚未完全阐明。近年来,肿瘤坏死因子-α(Tumour Necrosis Factor-α,TNF-α)与DCM发病的关系逐渐引起了人们的注意。     

肿瘤坏死因子-α与卵巢内分泌功能

免疫与内分泌系统通过特殊的化学信息形成复杂的反馈调节环路,其中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)起着重要的作用。TNF-α是由巨噬细胞生成的一种糖蛋白,分子量为17 000道尔顿,由15了个氨基酸组成。TNF-α对肿瘤细胞有直接的抑制作用和细胞坏死作用。近年来发现,TNF-α影响卵巢细胞的生长和分化,并参与卵巢功能的调节。 1 卵巢中TNF-α的来源     

肿瘤坏死因子α及其受体与胰岛素抵抗

<正>胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)指在胰岛素(Insulin,INS)作用的靶组织中,一定量的INS的生物学效应低于预计正常水平。IR既是2型糖尿病的主要发病机制和重要特征,也是高血压、脂质异常、腹型肥胖等心血管疾病危险因素的共同病理生理基础。IR机制的研究已深入到细胞和分子水平。IR机制复杂,近年来对肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor.α,TNF-α)及其受体在IR中的作用备受关注。拟就TNF-α及其受体在IR中的作用综述如下。     

新型重组人肿瘤坏死因子对大鼠肝细胞及小鼠肝组织中钙稳度的影响

目的;研究新型重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－ＮＣ）对培养大鼠肝细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度（「Ｃａ＾２＋」ｉ）及小鼠肝组织中Ｃａ６２＋含量的影响。方法：以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为Ｃａ＾２＋荧光检测,荧光分光光度法测定培养大鼠肝细胞内「Ｃａ＾２＋」ｉ;原子吸收分光光度法测定小鼠肝组织中Ｃａ＾２＋含量。结果：在加入ｒｈＴＮＦ－ＮＣ ３ｈ后,可剂量依赖性地引起培养大鼠肝细胞内「Ｃａ＾２＋」ｉ显著升高。     

急性脑血管病肿瘤坏死因子-α的临床研究

目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在急性脑血管病（ACVD）中的作用及其变化的临床意义。方法：选取95例ACVD患者，并设性别及年龄相匹配的血清对照组（20例）及脑脊液对照组（10例）。应用酶联免疫吸附法（ELISA）于发病后第1、3、7、14d测定血清和脑脊液中TNF-α。结果：①三种脑血管病患者血清TNF-α动态变化存在差异，脑出血和脑梗死组的峰值单间为发病后第3d，而蛛网膜下腔出血（SAH）组为第1d。②脑梗死患者血清TNF-α水平与梗死面积、神经功能缺损程度及病情恶化与否相关。③SAH组于发病后第1d、3d、7d脑脊液TNF-α值高于血清，14d时降至对照组水平并与血清无差异。结论：①脑梗死患者血清TNF-α的动态观察，可为临床预测梗死灶大小、神经功能缺损程度及病情恶化与否提供依据。②发病早期的脑梗死患者若CT未能显示病灶时，血清TNF-α的明显升高有助于临床诊断和治疗。③SAH患者脑脊液中TNF-α水平明显高于血清，进一步提示脑内神经组织可产生TNF-α。脑脊液中TNF-α的持续明显升高可能与SAH后脑血管痉挛有关。④TNF-α参与了ACVD的炎性反应过程，早期抑制TNF产生及抗炎性反应的治疗可能具有潜在的临床价值。     

急性中毒患者血清肿瘤坏死因子α检测的临床意义

目的 探讨血清肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）在急性中毒中的临床意义。方法 采用ＥＬＩＳＡ法检测８０例急性中毒患者（镇静催眠药、乙醇、一氧化碳、农业杀虫剂各２０例）及２０例正常人血清ＴＮＦα。结果 急性镇静催眠药中毒组（ＳＨ组）与急性一氧化碳中毒（ＣＯ组）血清ＴＮＦα均高于正常对照组（Ｐ〈０．０５,Ｐ〈０．００１）,急性乙醇中毒组（ＡＬ组）和急性农业杀虫剂中毒组（ＦＩ组）与对照组间差异无显著性（Ｐ〉０．０５）;ＣＯ组血清ＴＮＦα明显高于ＡＬ组与ＦＩ组（Ｐ〈０．００１）,余各组间差异无显著性（Ｐ〉０．０５）;ＳＨ组与ＡＬ组治疗后血清ＴＮＦα均低于治疗前血清ＴＮＦα（Ｐ〈０．０５）,ＣＯ组治疗后血清ＴＮＦα明显低于治疗前（Ｐ〈０．００１）,ＦＩ组治疗后血清ＴＮＦα与治疗前差异无显著性（Ｐ〉０．０５）。结论 血清ＴＮＦα在     

重组人α—肿瘤坏死因子对移植至裸鼠后的增生性瘢痕的影响

目的：观察重组人α－肿瘤坏死因子（ｒｈｕＴＮＦ－α）对烧伤后增生性瘢痕组织胶原含量及组织形态学的影响。方法：１２只ＢＡＬＢ／ｃ裸鼠，于背部体表移植人体烧伤后增生性瘢痕组织（２ｃｍ×２ｃｍ）成活后，随机分为试验组及对照组。试验组在增生性瘢痕组织内注射生理盐水溶解的ｒｈｕＴＮＦ－α０．１ｍｌ（５００ｎｇ／ｍｌ），每周３次，对照组同法注射生理盐水，３周后测定瘢痕组织中胶原、羟脯氨酸及酸性粘多糖含量，同时观察组织形态学变化。结果：局部注射ｒｈｕＴＮＦ－α后，增生性瘢痕组织中胶原、羟脯氨酸及酸性粘多糖含量显著降低。增生性瘢痕组织变平、缩小，胶原结节明显减少或消失。成纤维细胞粗面内质网显著减少，无扩张。结论：ｒｈｕＴＮＦ－α能显著减少增生性瘢痕组织中胶原沉积，在增生性瘢痕治疗中可能有潜在应用价值。