一氧化氮合酶抑制剂阻断阿片耐受和依赖的信号转导途径

目的探讨一氧化氮合酶（NOS）抑制剂NG-硝基-L-精氨酸（L-NNA）对阿片耐受和依赖机制中腺苷酸环化酶-环磷酸腺苷（AC-cAMP）系统、Ca2 系统和一氧化氮-环磷酸鸟苷（NO-cGMP）系统变化的影响。方法实验共分为对照组，阿片激动剂组，阿片激动剂 纳洛酮组;L-NNA 阿片激动剂组和L-NNA 阿片激动剂 纳洛酮组。采用竞争性蛋白结合试验，3H-精氨酸转化成3H-胍氨酸方法，放射免疫测定和激光共聚焦显微镜技术，测定cAMP含量，NOS活性，cGMP生成量和[Ca2 ]i水平。免疫组织化学检测iNOS蛋白表达。结果稳定表达iNOS基因的NG-LNCXiNOS细胞在高选择性δ-受体激动剂δ-阿片受体高选择性激动剂（DPDPE）长时程作用及纳洛酮戒断时，胞内cAMP水平和[Ca2 ]i增加，胞浆相iNOS活性和cGMP生成增多，与DPDPE预处理剂量成正比。10-4mol/LL-NNA能降低吗啡、DPDPE、DADLE诱发的cAMP、iNOS活性和蛋白及cGMP的升高，但不能降低[Ca2 ]i。结论NOS抑制剂延缓阿片耐受和依赖的发生，可能是负调控AC-cAMP系统和NO-cGMP系统，为临床应用NOS抑制剂防治阿片耐受和成瘾提供了实验依据。     

应用共聚焦激光扫描技术研究阿片受体介导胞内Ca^2＋？…

目的 观察阿片激动剂急性和长时程作用于稳定ｉＮＯＳ基因的ＮＧ－ＬＮＣＸｉｎＯＳ细胞,对细胞内游离钙（〖Ｃａ＾２＋〗ｉ）的影响及Ｇ－蛋白的调节作用。方法 应用共聚焦显微镜和荧光探针Ｆｌｕｏ－３,监测单细胞〖Ｃａ＾２＋）ｉ含量。结果 δ－阿片激动剂ＤＰＤＰＥ和吗啡急性刺激细胞诱发〖（Ｃａ＾２＋〗ｉ）增加,纳洛酮对其起番转作用,用百日咳毒素预处理细胞后,吗啡急性激素不能引起〖（Ｃａ＾２＋〗ｉ增加,ＤＰＤ     

吗啡对大鼠培养海马神经元钙离子作用机制的研究

目的 研究吗啡对海马神经元游离子浓度([Ca^2 ]i)影响的机制，探索吗啡成瘾的神经生物学机制及对吗啡成瘾可能的治疗途径。方法 运用新型荧光探针Fluo-4 , 利用激光共聚焦显微镜研究吗啡对大鼠培养海马神经元[Ca^2 ]i作用机制。结果 10μmol/L吗啡急性刺激引起海马神经元[Ca^2 ]i升高，μ阿片受体选择性拮抗剂CTOP（1μmol/L）不能阻断吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i增加，δ2阿片受体选择性拮抗剂Naltrindole(1μmol/L）阻断了吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i反应，特异性的内质网钙泵抑制剂Thapsigargin(TG,1μmol/L）预处理海马神经元组断吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i增加，L－钙通道阻断剂Verapamil(20μmol/L）预处理海马神经元不能完全抑制吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i增加；100μmol/L吗啡长时程（24h）作用于海马神经元，细胞内[Ca^2 ]i升高，加入10μmol/L纳络酮急性戒断后，不能阻断细胞内[Ca^2 ]i升高，反而引起[Ca^2 ]i异常升高。结论 吗啡急性刺激引起的海马神经元内钙增加主要来源于δ2阿片受体介导的IP3敏感的钙库释放。     

δ阿片受体激动剂对NG108-15细胞延迟整流钾通道的双向调节作用

目的观察δ阿片受体激动剂DPDPE对NG108-15细胞膜上延迟整流钾通道的调节作用.方法将NG108-15细胞膜电位钳制在-90mV,给予时程为150ms的阶跃脉冲刺激,由-50mV逐渐增至+80mV,每次递增10mV,记录到一系列外向延迟整流钾电流,记录给予不同浓度δ阿片受体激动剂DPDPE前后的钾电流变化,比较其作用与给药浓度的关系,同时观察阿片受体拮抗剂纳洛酮(NAL)和特异性δ阿片受体拮抗剂纳曲酮(NTI)对δ阿片受体激动剂DPDPE的阻断效应.结果δ阿片受体激动剂DPDPE在高浓度(≥10-6mol/L)时,对钾通道产生兴奋性作用;而低浓度(≤10-7mol/L)时,对延迟整流钾通道产生抑制作用,且作用均随着时间的延长而逐渐增强.结论δ阿片受体激动剂DPDPE对延迟整流钾通道的作用具有双向调节作用.     

δ阿片受体激动剂对NGl08—15细胞延迟整流钾通道的双向调节作用

目的 观察δ阿片受体激动剂DPDPE对NGl08—15细胞膜上延迟整流钾通道的调节作用。方法 将NGl08—15细胞膜电位钳制在—90mV,给予时程为150ms的阶跃脉冲刺激,由—50mV逐渐增至 80mV,每次递增10mV,记录到一系列外向延迟整流钾电流,记录给予不同浓度S阿片受体激动剂DPDPE前后的钾电流变化,比较其作用与给药浓度的关系,同时观察阿片受体拮抗剂纳洛酮(NAL)和特异性δ阿片受体拮抗剂纳曲酮(NTI)对δ阿片受体激动剂DPDPE的阻断效应。结果 δ阿片受体激动剂DPDPE在高浓度(≥10^-6mo1/L)时,对钾通道产生兴奋性作用;而低浓度(≤10^-7mol/L)时,对延迟整流钾通道产生抑制作用,且作用均随着时间的延长而逐渐增强。结论 δ阿片受体激动剂DPDPE对延迟整流钾通道的作用具有双向调节作用。     

[D-Pen~2,D-Pen~5]enkephalin在NG108-15细胞株对Bt_2cAMP和佛波醇酯促进的钙内流的影响

在NG108-15细胞株上,用荧光探针fura-2/AM测定细胞内游离钙([Ca~(2 )]1)浓度。结果表明:丁二酰cAMP(Bt_2cAMP)、腺苷酸环化酶激动剂forskolin和蛋白激酶C激动剂十四碳酰佛波醇酯(TPA)均能使([Ca~(2 )]i)升高。钙通道拮抗剂异搏定(verapamil)可以抑制forskolin、Bt_2cAMP和TPA引起的[Ca~(2 )]i增加。δ阿片受体激动剂[D-Pen~2,D-Pen~5)enkephalin(DPDPE)能抑制Bt_2cAMP和forskolin引起的[Ca~(2 )]i增加,但不影响TPA引起的[Ca~(2 )]i增加。提示DPDPE可抑制cAMP依赖的蛋白激酶引起的钙内流,而与蛋白激酶C(PKC)引起的钙内流无关。     

κ阿片受体激动剂对血管系统和呼吸系统的影响及临床应用进展

<正>阿片类药物是临床上常用的一类镇痛药物。经典阿片类受体有δ阿片受体(δ-opioid receptor, DOR)、κ阿片受体(κ-opioid receptor, KOR)和μ阿片受体(μ-opioid receptor, MOR)3种[1]。阿片类药物可作为激动剂、拮抗剂或部分激动剂作用于阿片受体。阿片受体激动剂通过G蛋白与细胞内机制偶联受体引起细胞超极化[2]。     

新型阿片受体配基的生物鉴定

目的研究新合成的阿片受体配基对μ阿片受体的激动作用.方法采用生物鉴定的方法,检测新型阿片受体配基、DAMGO和吗啡对豚鼠回肠(GPI)纵行肌收缩的抑制作用和所激动的阿片受体亚型,评价效价强度,测定IC50值.结果新型阿片受体配基、DAMGO和吗啡都可抑制GPI的电刺激收缩,在GPI上显示纯激动剂作用.新型阿片受体配基与阿片受体的结合为可逆性结合.新型阿片受体配基1#、2#、3#、6#、8#、9#和12#以及典型的阿片受体激动剂DAMGO和吗啡的IC50值分别为(11.57±0.71)、(1255.00±407.00)、(9.40±1.41)、(240.60±146.40)、(453.00±7.07)、(130.60±10.61)、(7.68±0.71)、(12.04±0.61)和(72.15±22.63)nmol/L.竞争性拮抗剂纳洛酮可拮抗配基的激动作用,使新型阿片受体配基、DAMGO和吗啡的量效曲线平行右移.结论新型阿片受体配基可激动μ阿片受体,是典型的μ受体激动剂.     

G蛋白对阿片受体调节延迟整流钾通道的影响

目的观察G蛋白在阿片受体激动剂对钾通道的双相调节中所起的作用。方法利用膜片钳技术(patchclamp),采用全细胞记录方式,观察在电极液中分别加入G蛋白稳定抑制剂(GDPβS)、百日咳毒素(PTX)、二磷酸核苷酸激酶(NDPK)及环磷酸腺苷(cAMP)后,对阿片受体激动剂调节NG108-15细胞膜延迟整流钾通道作用的影响。结果(1)GDPβS能够阻断高浓度δ-阿片受体选择性激动剂(DPDPE)对钾电流的兴奋作用及低浓度DPDPE对钾电流的抑制作用(P<0.05)。(2)高浓度DPDPE对钾电流的兴奋性调节作用完全被PTX阻断(P<0.05),而霍乱毒素CTX对DPDPE对钾电流的双相调节作用无影响。(3)尿苷二磷酸(UDP)能够阻断NDPK对高浓度阿片受体激动剂对细胞膜钾通道兴奋性调节作用,而UDP对低浓度阿片受体激动剂的抑制作用无影响。(4)cAMP对高浓度阿片受体激动剂具有调节作用(P<0.05),而对低浓度阿片受体激动剂的抑制作用无影响。结论阿片受体对NG108-15细胞膜上延迟整流钾通道具有双相调节作用,其中高浓度激动剂引起的兴奋作用可能由Gi/o介导,并与cAMP有关,而其抑制作用可能是由G蛋白βγ亚单位直接作用。     

μ-和δ-阿片受体对神经元树突棘可塑性调节的动态观察

目的 探讨μ阿片受体(MOR)和δ阿片受体(DOR)在海马神经元树突棘可塑性调节中的功能角色.方法 用磷酸钙共沉淀法将编码绿色荧光蛋白EGFP的质粒转染到5-9DIV原代培养海马神经元,EGFP标记的神经元发育到2周时,随机挑选形态健康的神经元作为观察目标,使用倒置荧光显微镜对同一视野活细胞定时定位观察MOR受体促进剂吗啡和DOR受体促进剂DPDPE给药前及给药后3 h、24 h、72 h树突棘形态大小及密度变化.结果 1.吗啡组和吗啡+DPDPE组,从形态学观察,部分树突棘在给药后24～72h内逐渐变小,甚至消失;2.吗啡组加药后3h树突棘的密度无明显变化(P＞0.05),24h后降低了28%,72h后降低了37%(P＜0.01);吗啡+DPDPE组加药后3 h树突棘的密度无明显变化(P＞0.05),24h后降低了27%(P＜0.05),72h后降低了38%(P＜0.01);DPDPE组和对照组在给药后3～72h树突棘的密度无明显变化(P＞0.05);而DPDPE单独给药组和对照组神经元树突棘形态大小、密度在各时间点均无明显变化.结论 本实验表明阿片MOR受体参与了神经元树突棘可塑性的调节,动摇了树突棘的稳定性,而DOR受体无显著作用,同时MOR和DOR受体在对神经元可塑性调节方面也无协同作用.