大鼠脊髓损伤急性期睾丸生精细胞凋亡及Fas和Bcl-2蛋白表达的改变

目的 研究脊髓损伤急性期对成年大鼠睾丸生精功能障碍的影响及其机制.方法 80只SD雄性大鼠随机分为脊髓损伤组(40只)和脊髓非损伤组(40只),采用原位细胞凋亡TUNEL法检测脊髓损伤后第1、2、4、8、1 6天睾丸生精细胞的形态及数量变化.采用免疫组化SABC法检测大鼠脊髓损伤后第1、2、4、8、16天睾丸生精细胞Fas、Bcl-2表达情况.结果 大鼠脊髓损伤后睾丸TUNEL标记阳性凋亡细胞第4天开始出现,多表达于初级、次级精母细胞及精原细胞,至第16d,随时间点推移阳性凋亡细胞数逐渐增多.脊髓损伤后第4～16d损伤组睾丸生精细胞Fas表达与非损伤组比较显著增强(P＜0.05),Bcl-2表达损伤组与非损伤组差别无显著性(P＞0.05).结论 大鼠脊髓损伤急性期存在睾丸生精细胞凋亡现象,睾丸生精功能障碍与Fas高表达密切相关,和Bcl-2表达无明显相关性.     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠精索静脉曲张生精细胞Caspase-3酶及bcl-2基因的影响

目的 探讨精索静脉曲张大鼠睾丸组织中一氧化氮(NO)与生精细胞凋亡之间的关系并研究其机制.方法 实验分3组:对照组(假手术组)、曲张组(精索静脉曲张组)和药物组,每组10只大鼠.(45±5)d的SD雄性大鼠复制左侧曲张模型.药物组为术后8周起腹腔注射N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME),剂量:50mg/lg·d-1),每组10只大鼠.术后10周用流式细胞仪检测睾丸生精细胞凋亡,分光光度法检测Caspase3活性,用硝酸还原酶法测定睾丸组织NO含量和NOS活性.逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2基因mRNA的表达.结果 与对照组对应侧相比较,曲张组大鼠双侧睾丸组织NO含量增加,NOS活性显著升高(P＜0.01),流式细胞仪枪测生精细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),生精细胞Caspase-3酶的活性显著升高(P＜0.01),bcl.2基因mRNA表达明显减少(P＜0.01).药物组较曲张组大鼠对应侧睾丸组织NO含量、生精细胞凋亡显著减少(P＜0.01),生精细胞Caspase-3酶的活性显著降低(P＜0.01),bcl-2基因mRNA表达明显增加(P＜0.01).结论 精索静脉曲张明显诱导大鼠睾丸组织生精细胞凋亡.其机制可能与NO含量增加,NOS活性升高,生精细胞中Caspase-3酶的活性升高及bcl-2基因表达下调有关.L-NAME对曲张大鼠乍殖细胞有保护作用.曲张对睾丸的影响是是双侧性的.     

饮酒对大鼠生精细胞iNOS,Bcl-2基因表达的影响

目的 探讨酒精对大鼠睾丸诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、Bcl-2基因表达和生精细胞凋亡的影响。方法30只成年健康SD雄性大鼠随机均分为对照组、低剂量组和高剂量组，用不同剂量的酒精灌胃成年大鼠26d（两个生精周期）后，免疫组织化学法（SP法）检测睾丸iNOS、BCl-2基因表达的变化；原位缺口末端标记法（TUNEL法）检测细胞凋亡指数（A1）的变化。结果 与对照组相比，低剂量组大鼠睾丸iNOS、Bcl-2基闪表达强度和细胞凋亡指数（A1）无明显变化（P〉0．05）：而高剂量组与对照组和低剂量组相比，iNOS表达显著增强（P〈0．01），Bcl-2基因表达明显减弱（P〈0．01，P〈0．05），细胞凋亡指数则增加（P〈0.01）。结论 长期大量饮酒可以诱导睾丸生精细胞凋亡增加，iNOS与Bcl-2基因表达的改变是重要原因之一。     

前列腺癌细胞凋亡与iNOS、Bcl-2的表达及意义

目的 :探讨细胞凋亡和诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)、Bcl 2蛋白表达在前列腺癌中的意义以及两者之间的关系。　方法 :对 2 4例前列腺癌、15例前列腺增生及 5例正常前列腺组织行原位细胞凋亡检测及iNOS、Bcl 2蛋白免疫组化检测。　结果 :前列腺癌组的细胞凋亡率和iNOS的染色强度均显著高于前列腺增生组及正常前列腺组(P <0 .0 1) ,且Bcl 2蛋白表达阳性者的细胞凋亡率显著低于阴性者 (P <0 .0 1)。　结论 :前列腺癌的细胞凋亡率可反映其恶性程度 ;iNOS的表达与前列腺癌的分化程度无关 ,但与Bcl 2蛋白表达呈负相关 ;Bcl 2蛋白表达与前列腺癌细胞凋亡呈负相关。iNOS与Bcl 2均可通过影响前列腺癌细胞凋亡而在前列腺癌病理发生发展中起作用     

慢性疼痛应激对雄性SD大鼠生殖相关参数的影响

目的 观察不伺时间段慢性疼痛应激后,SD大鼠生殖相关参数的变化.方法 建立坐骨神经分支选择性损伤模型.经不同时间疼痛应激后,于14 d、21 d和28 d处死大鼠,取睾丸、附睾称重,并对附睾尾精子计数,HE染色显示睾丸结构变化,western blot检测3 β-HSD蛋白表达的改变.结果 14 d和21 d手术组大鼠体重均略低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).不同时间段各组大鼠睾丸和附睾系数均无明显变化.28 d后手术组附睾尾精子相对计数显著低于对照组(P<0.05).HE染色显示,坐骨神经分支选择性损伤诱导疼痛应激28 d后睾丸生精上皮中生精细胞减少,生精小管腔内精子数量减少.Western blot结果显示28 d手术组3 β-HSD表达显著低于正常照组和假手术组(P<0.05).结论 慢性疼痛应激如其他方式应激一样,能引起大鼠附睾尾精子相对计数减少,睾丸生精上皮中生精细胞减少,睾丸内3 β-HSD含量降低,慢性疼痛应激降低了大鼠的生精功能.     

大鼠睾丸扭转后生殖细胞凋亡与Bcl-2和Bax基因表达

目的 :研究睾丸扭转复位后生殖细胞凋亡与Bcl 2 /Bax基因表达的关系。　方法 :30只成年健康SD雄性大鼠随机分成扭转组 (n =15 )和对照组 (n =15 )。建立单侧睾丸扭转复位动物模型 (72 0° 2h)。术后 3d取手术侧睾丸 ,采用原位缺口末端标记法 (TUNEL)检测生殖细胞凋亡 ,免疫组化SP法检测Bcl 2 /Bax基因表达。　结果 :与对照组相比 ,扭转组手术侧睾丸生殖细胞凋亡显著增多 (P <0 .0 1) ,Bax表达显著升高 (P <0 .0 1) ,Bcl 2表达显著降低 (P <0 .0 1)。凋亡细胞主要是初级精母细胞和圆形精子细胞。　结论 :睾丸扭转复位后 ,生殖细胞凋亡与Bcl 2 /Bax基因表达密切相关。细胞内Bcl 2 /Bax比值是影响生殖细胞凋亡的重要因素之一。     

解脲支原体感染对大鼠生精细胞线粒体核糖体蛋白S22的影响及知柏地黄汤的干预作用

目的:观察解脲支原体(UU)感染对大鼠睾丸生精细胞线粒体核糖体蛋白S22(MRPS22)表达的影响及知柏地黄汤的干预作用。方法:UU感染SD雄性大鼠模型45只,随机分成模型组、知柏地黄汤组、西药组,并以健康大鼠为对照组,每组15只。造模成功后第10天起知柏地黄汤组予以知柏地黄汤灌胃[1 g/(k·d)],西药组予以阿奇霉素灌胃[0.105 g/(k·d)],对照组、模型组予以同体积生理盐水灌胃,连续灌胃21 d。采用TUNEL法检测生精细胞凋亡,电镜观察生精细胞线粒体结构,流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP),RT-PCR检测大鼠睾丸生精细胞MRPS22 m RNA表达,Western印迹检测大鼠睾丸生精细胞MRPS22蛋白表达。观察各组大鼠睾丸生精细胞凋亡指数(AI)、生精细胞线粒体结构、MMP、生精细胞MRPS22 m RNA和蛋白表达情况。结果:模型组大鼠睾丸生精细胞AI[(11.23±1.65)%]显著高于知柏地黄汤组[(6.62±0.49)%]和西药组[(7.82±0.81)%](P 0. 01),知柏地黄汤组显著低于西药组(P 0.05)。知柏地黄汤组及西药组大鼠睾丸线粒体结构较模型组显著改善。模型组大鼠睾丸生精细胞MMP水平[(8. 77±1. 73)%]显著低于对照组[(22. 33±1. 66)%](P 0. 01),知柏地黄汤组[(18. 26±1. 32)%]显著高于模型组(P 0.01)和西药组[(15.91±1.69)%],西药组MMP水平显著高于模型组(P 0. 01)。模型组MRPS22 m RNA表达(8.02±3.21)与对照组(15.43±2.54)、知柏地黄汤组(11. 26±3. 82)相比均具有显著性差异(P 0. 01),知柏地黄汤组MRPS22 m RNA表达显著高于西药组(8. 79±2. 03)(P 0. 01)。模型组(22. 65±5. 31) MRPS22蛋白表达与对照组(33.31±7.09)、知柏地黄汤组(33.35±3.96)和西药组(28.11±4.13)相比均具有显著性差异(P 0. 01),知柏地黄汤组显著高于西药组(P 0.01)。大鼠睾丸生精细胞MRPS22蛋白表达量与MMP呈显著正相关(r=0.639,P 0.01)。结论:UU感染可能通过抑制大鼠睾丸生精细胞MRPS 22 m RNA及蛋白表达,降低MMP,引起生精细胞的凋亡。知柏地黄汤通过改善UU感染大鼠睾丸生精细胞MRPS22 m RNA及蛋白表达,提高MMP,减轻大鼠睾丸生精细胞凋亡。     

通精灵对实验性精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的：探讨实验性精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡状况及通精灵对精索静脉曲张大鼠睾丸生精功能的保护作用。方法：成年清洁级雄性Wistar大鼠50只,按Sapyol法制作左精索静脉曲张大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、通精灵低剂量组、通精灵中剂量组、通精灵高剂量组各10只。造模1个月后,各组予以不同药物灌胃1次／d。2个月后处死,用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测睾丸生精细胞凋亡,免疫组化法检测睾丸组织Bcl-2表达。结果：模型组大鼠左睾丸凋亡指数明显高于假手术组及通精灵各组（P〈0．01）,通精灵各组左睾丸凋亡指数显著低于模型组（P〈0．05）。与假手术组比较,模型组大鼠睾丸组织Bcl-2蛋白表达下降（P〈0．05）,与模型组比较,通精灵中、高剂量组睾丸组织Bcl-2蛋白表达显著上升（P〈0．05）。结论：通精灵能降低实验性精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡,减轻实验性精索静脉曲张大鼠睾丸组织的病理损害,上调凋亡抑制基因Bcl-2表达。     

输精管阻断对大鼠睾丸转化生长因子β1表达的影响

目的　了解大鼠输精管阻断和阻断解除后睾丸内TGFβ1表达状况。　方法　大鼠 90只 ,随机分为输精管阻断 (VG)组 35只 ,输精管阻断解除 (VOG)组 2 0只 ,假手术组 (SOG) 35只 ,采用免疫组织化学染色和原位杂交技术检测TGFβ1的表达。　结果　VG组从实验第 8周起近基底膜的管周细胞和精原细胞TGFβ1表达较SOG组增强 ,其中 8、16、2 0、2 4周与SOG组相比差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。表达量在 8周后并不随结扎时间延长而改变 ,而是维持在相对稳定的水平。VOG组TGFβ1表达亦较SOG组显著增高。　结论　输精管阻断后TGFβ1表达升高可能是导致睾丸细胞凋亡的原因 ,而阻断解除后TGFβ1水平无明显下降可能是导致生精功能恢复不完全的原因。     

提睾肌在无张力疝修补术后对大鼠生精功能的保护意义

【摘要】 目的 探究提睾肌在无张力疝修补术后对大鼠生精功能的保护意义。方法〓选择成年SD大鼠建立实验动物模型,分正常对照组(NC组)、假手术组(Sham组)、手术组,手术组又分为OP1组和OP2组,前者保留提睾肌的完整性后者完全切断提睾肌。于术后90天分别将各组大鼠术侧睾丸组织HE染色观察病理变化,流式细胞仪测定各级生精细胞数量变化。结果〓OP1组生精过程轻度异常,生发上皮紊乱,生精细胞层数减少,可见大量的精子细胞和精子,各级生精细胞与Sham组相比差异无统计学意义。OP2组大鼠睾丸呈退行性变化,生发上皮紊乱,生精细胞层数减少,单倍体细胞及二倍体细胞数量减少,与OP1组及Sham组比较P<0.05。结论〓提睾肌对雄性大鼠的生精功能具有保护作用,男性腹股沟疝患者行无张力修补术无张力修补术时,应尽可能保护提睾肌的连续性和完整性。     

Effect of spinal cord injury on iNOS and Bcl-2 gene expression in spermatogenic cell of male rats

Effect of spinal cord injury on iNOS and Bcl-2 gene expression in spermatogenic cell of male rats     

Abnormal lipid metabolism induced apoptosis of spermatogenic cells by increasing testicular HSP60 protein expression

Long-term consumption of high-fat and high-calorie foods not only causes obesity, but also may cause a decline in sperm quality in men. Rats with abnormal lipid metabolism (high-fat rats) were established by high-fat diet for 24 weeks. HE staining was used to observe the morphological changes of testis in rats, TUNEL and flow cytometer was used to detect the cell apoptosis in rat testis and in vitro. Immunohistochemistry and Western blotting were used to detect the expression of protein. After 24 weeks of high-fat food feeding, the body weight, serum lipids and number of apoptotic spermatogenic cells in the high-fat group rat were significantly higher than those in the control group. In vivo, the expression of HSP60 protein in testis of high-fat rats was positive related to apoptosis of spermatogenic cells, cleaved caspase 3/caspase 3 protein expression and Bax/Bcl2 protein expression in testis of high-fat rats. Proportion of apoptotic spermatogenic cells was increased by up-regulation of HSP60 protein expression in vitro. Long-term consumption of high-fat diets can cause high expression of HSP60 and spermatogenic cells apoptosis in rats, while HSP60 over-expression promotes spermatogenic cell apoptosis and MAPK signal pathway in vitro.     

带血运的组织移植对损伤脊髓细胞凋亡的影响

目的：探讨带蒂的大网膜和椎旁肌移植覆盖脊髓对脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法：应用改良的Ａｌｌｅｎ‘ｓ法致伤脊髓,将动物分为单纯脊髓损伤组（Ａ组）,损伤＋椎旁肌组（Ｂ组）,损伤＋大网膜组（Ｃ组）。移植后１、３、７、１４、２８天对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（ＴＵＮＥＬ）以及Ｂｃｌ－２蛋白表达的测定（免疫组化法）。结果：Ａ、Ｂ、Ｃ组中均发现凋亡细胞及ＢＣＬ－２蛋白阳性表达,图象分析发现,细胞凋亡率为Ａ     

体外转基因成肌细胞移植对大鼠损伤脊髓细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后胚胎脊髓和腺病毒介导的脑源性神经生长因子（AxCA-BDNF)体外转基因成肌细胞移植对大鼠脊髓细胞凋亡的影响。方法：将动物分为：大鼠脊髓半切洞损伤明胶海绵填充组（A组）,大鼠脊髓半切洞损伤应用胚胎脊髓移植组（B组）,脊髓半切洞损伤损伤AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（C组）大鼠脊髓半切洞损伤后应用胚胎脊髓和AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（D组）。手术后1、3、7、14、28d应用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况,对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（TUNEL）以及Bcl-2蛋白表达的测定（免疫组化法）。采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果：A、B、C、D四组中均发现凋亡细胞及Bcl-2蛋白阳性表达细胞,图像分析发现,各组凋亡细胞核为A＞B＞C＞D;Bcl-2免疫反应阳性细胞表达顺序为D＞C＞B＞A,Bcl-2免疫反应阳性细胞的表达与大鼠后肢功能恢复有同样的变化趋势。结论：大鼠胚胎脊髓和体外转基因成肌细胞移植能抑制脊髓损伤后的细胞凋亡。     

大剂量甲基强地松龙对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后应用大剂量甲基强地松龙(MP)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响。方法：成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用大剂量甲基强的松龙治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组)，损伤后不同时间点(4h、8h、1d、3d、7d、14d、21d)按Tarlov标准评价大鼠双后肢神经功能恢复情况，然后处死。用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，用免疫组化染色检测iNOS阳性细胞，原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。结果：HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及iNOS表达，神经细胞凋亡指数及iNOS表达均为B组＞A组(P＜0．01)。结论：大剂量甲基强的松龙能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡。     

脊髓腹侧压迫损伤后MP、Iloprost和Riluzole对Bcl—2表达的影响

目的：观察脊髓腹侧迫损伤后Bcl-2表达的动态变化及神经保护剂对Bcl-2表达的影响。方法：大鼠胸脊髓腹侧压迫损伤后,将受试运动分别用甲基强的松龙（MP）、Iloprost,Riluzole及以上三种药物合用联合治疗。应用免疫组织化学及原位杂交方法检测治疗组及损伤组中Bcl-2的表达。结果：脊髓伤后1h Bcl-2蛋白增加,伤后3h达高峰,伤后2周表达接近于正常水平。Bcl-2 mRNA的表达也有相似的变化过程。。MP、Iloprost和Riluzole能增加Bcl-2蛋白表达,但对Bcl-2 mRNA的表达增加不明显。结论：作用方式不同的几种神经保护剂均能增加脊髓损伤组织中的Bcl-2蛋白的表达。     

高压氧对精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡及其基因缺氧诱导因子-α、bcl-2及bax表达的影响

目的 观察高压氧(HBO)对精索静脉曲张(VC)SD大鼠生精细胞凋亡的影响,探讨精索静脉曲张导致男性不育的机制.方法 50只青春期雄性SD大鼠,随机抽出10只作为假手术对照组(A).A组只游离左肾静脉不予结扎,其余40只部分结扎左肾静脉建立VC模型,8周后,将建立了VC模型的40只随机分为VC模型组(B)和HBO干预的VC模型组(C),C组用HBO对VC模型进行干预.实验结束后各组大鼠切取双侧睾丸,采用原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠睾丸生精细胞凋亡,免疫组织化学检测低氧诱导因子(HIF)-α、bcl-2及bax的基因表达.结果 B组较A组生精细胞凋亡数明显增多,HIF-α、bax表达增强(P＜0.01),bcl-2表达减弱(P＜0.01),bcl-2/bax比值降低;C组大鼠较B组生精细胞凋亡数减少(P＜0.01),HIF-α表达减弱(P＜0.01)、bcl-2/bax比值上升,而与A组比较差异无统计学意义.结论 VC大鼠生精细胞凋亡率增加,HIF-α表达增强、bcl-2和bax基因表达失调为其凋亡机制之一;高压氧可能通过HIF-α、bcl-2和bax基因调控途径调节生精细胞凋亡,从而改善VC所致的生精功能障碍.     

静脉移植骨髓间充质干细胞促进脊髓损伤后GDNF基因的表达

[目的]探讨经静脉移植骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠脊髓损伤(SCI)后胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响。[方法]MSCs提取自成年Wistar大鼠的股骨干骨髓,经原代培养、鉴定及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)核标记。以改良Allen′s打击装置制作大鼠T10节段脊髓损伤(SCl)模型,于伤后立即缝合切口并经尾静脉注射移植MSCs。实验共分为3组MSCs尾静脉移植组(A组)、生理盐水注射组(B组)、正常对照组(C组)。术后不同时间点应用免疫组化法和逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)观察MSCs移植后的存活状态以及不同时间点GDNF基因的表达变化。[结果]免疫组化结果MSCs经尾静脉移植后在损伤脊髓平面可以检测到迁移及存活,标记细胞呈棕黄色的核标记,以损伤区域为多并向周围迁移,移植术后第14d,A组Brdu阳性细胞较多,最远于距离损伤区2.5cm处可检测到。B及C组则均未检测到阳性细胞。RT-PCR结果移植术后第1、3、5d,A组表达量呈逐渐升高趋势,B组呈一过性表达升高,C组无变化。各时间点A组GDNFmRNA的表达量明显高于B组,P<0.05。免疫组化结果移植术后第7、14、28dGDNF的表达量明显高于B组,P<0.05。[结论]骨髓间充质干细胞经尾静脉移植后可迁移至脊髓损伤区域,并上调胶质细胞源性神经营养因子基因的表达,是该移植方式修复大鼠脊髓损伤的机制之一。