蒲黄总黄酮抑制棕榈酸培养下C2C12骨骼肌细胞白细胞介素6的表达

目的：观察蒲黄总黄酮（Pollen Typhae total flavones，PTF）对棕榈酸培养下C2C12骨骼肌细胞白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）表达的影响，探讨PTF改善骨骼肌胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）的可能机制。 方法：0．25mmol／L棕榈酸培养建立骨骼肌细胞IR模型。根据处理方法不同，设对照组、模型组、核转录因子κB（nuclear factor-kappaB，NF-κB）抑制剂PDTC组、罗格列酮（rosiglitazone，ROS）组、ROS＋PDTC组、PTF组和PTF4-PDTC抑制剂组。处理16h后，^3H-脱氧葡萄糖摄入法观察细胞对葡萄糖的转运率，实时定量多聚酶联反应检测IL-6 mRNA的表达，酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清中IL-6蛋白水平。 结果：0．25mmol／L棕榈酸培养16h，C2C12细胞葡萄糖摄取率下降30．43％，IR模型建立；PTF可使IR模型细胞葡萄糖转运率增加32．39％。IL-6 mRNA表达及细胞培养上清液中IL-6蛋白水平均显著下降，差异有统计学意义（P＜0．05）；加入PDTC后，细胞IL-6 mRNA表达及细胞培养上清液中IL-6蛋白水平上升（P〈0．05）。 结论：PTF通过抑制NF-κB通路而抑制C2C12骨骼肌细胞IL-6 mRNA表达及蛋白分泌，可能是其减轻骨骼肌炎症状态和改善IR的机制之一。     

褪黑素通过抑制ROS改善胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢

目的探讨褪黑素（MLT）对胰岛素抵抗（IR）HepG2细胞葡萄糖代谢的影响及机制。方法培养HepG2细胞,高糖高胰岛素（25mmol／L葡萄糖、1μmol／L胰岛素）诱导24h,建立IR细胞模型并给予MLT（1nmol／L,10nmol／L）处理。葡萄糖氧化酶法、蒽酮法和荧光探针法检测HepG2细胞的糖摄取、糖原含量及活性氧（ROS）产率。结果HGI孵育HepG2细胞24h后,细胞的葡萄糖摄取及糖原含量明显减少（P〈0．01）,ROS产率显著增加（P〈0．01）;而MLT处理增加了IR细胞葡糖糖的摄取（P〈0．01）和糖原合成（P〈0．05）,降低ROS的水平（P〈0．01）。结论MLT可能通过抑制ROS的生成而改善氧化应激,从而促进胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖的摄取和利用、增强其胰岛素敏感性。     

抵抗素对C2C12肌细胞株葡萄糖代谢的影响

【目的】 抵抗素(resistin)是一种与胰岛素抵抗(IR)密切相关的脂肪细胞因子｡本研究通过观察resistin对C2C12肌细胞株葡萄糖代谢的影响,以探讨resistin在骨骼肌IR发生中的作用｡【方法】构建含resistin基因的重组表达质粒pcDNA3.1-resistin,用于转染C2C12肌细胞株,使其表达resistin,用3H-2-脱氧葡萄糖进行葡萄糖摄取试验,用D-[14C(U)]葡萄糖进行葡萄糖氧化和糖原合成试验,RT-PCR检测肌细胞的葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRMA｡ 【结果】 pcDNA3.1-resistin转染的C2C12肌细胞株可表达resistin;resistin使肌细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取率减少约30%,并使GLUT4mRNA 表达降低28%,而对葡萄糖氧化和糖原合成无显著影响｡ 【结论】 resistin可能通过抑制骨骼肌GLUT4mRNA的表达而降低葡萄糖摄取,但对葡萄糖氧化和糖原合成影响较小,提示resistin在骨骼肌IR发生中的作用有限｡     

脂联素对L6大鼠骨骼肌细胞葡萄糖摄取的影响

目的观察脂联素对L6大鼠骨骼肌细胞基础及胰岛素诱导的葡萄糖摄取的影响。方法1. 将L6细胞分为脂联素处理组（脂联素刺激30?min）、胰岛素处理组（10?nmol/L胰岛素刺激20?mi n）和对照组。处理后分别测定各组细胞的葡萄糖摄取率。2. 将稳定表达葡萄糖转运子4（Gluosetransporter 4, GLUT4）的L6细胞(L6 GLUT4细胞)分为6组：① 对照组; ② 脂联素处理组：脂联素刺激30?min;③ 低浓度胰岛素处理组：0.1?nmol/L胰岛素刺激20?min; ④ 高浓度胰岛素组：10?nmol/L胰岛素刺激20?min; ⑤ 脂联素预处理+低浓度胰岛素组：脂联素预处理30?min,0.1?nmol/L胰岛素刺激20?min; ⑥ 脂联素预处理+高浓度胰岛素组：脂联素预处理30?min,10?nmol/L胰岛素处理20?min。处理后分别测定各组细胞的葡萄糖摄取率及GLUT4细胞膜含量。结果L6细胞：脂联素处理组葡萄糖摄取率与对照组差异无统计学意义(P＞0.05) 。L6 GLUT4细胞：① 脂联素处理组细胞膜GLUT4含量、葡萄糖摄取率与对照组差异均无统计学意义(P均＞0.05);②　低浓度胰岛素处理组细胞膜GLUT4含量、葡萄糖摄取率均显著高于对照组（P均＜0.01）;脂联素预处理+低浓度胰岛素组细胞膜GLUT4含量、葡萄糖摄取率均显著高于脂联素处理组（P均＜0.01）以及低浓度胰岛素处理组（P均＜0.01）;③　高浓度胰岛素处理组葡萄糖摄取率、细胞膜GLUT4含量均显著高于低浓度胰岛素处理组（P＜0.05,P＜0.01）;脂联素预处理+高浓度胰岛素组与脂联素预处理+低浓度胰岛素组比较,葡萄糖摄取率显著升高（P＜0.05）,而GLUT4细胞膜含量升高不显著（P＞0.05）;脂联素预处理+高浓度胰岛素组葡萄糖摄取率显著高于单纯高浓度胰岛素组（P＜0.01）,而GLUT4细胞膜含量差异无统计学意义（P＞0.05）。结论① 脂联素对骨骼肌细胞的葡萄糖基础摄取无明显影响;② 脂联素本身不足以诱导骨骼肌细胞的GLUT4细胞膜转位及葡萄糖摄取;③ 脂联素可增加胰岛素诱导的骨骼肌细胞的葡萄糖摄取,其机制可能与加强胰岛素诱导的GLUT4细胞膜转位以及增加细胞膜GLUT4对葡萄糖的转运效率有关。     

牛磺酸降低高糖诱导的视网膜谷氨酸兴奋性及其机制

目的观察牛磺酸对高糖诱导的视网膜谷氨酸兴奋性的影响并探讨其作用的机制。方法体外培养并采用免疫细胞荧光双标鉴定视网膜Muller细胞。实验分10组,分别是：5mmol／L葡萄糖培养组（正常对照组）,5mmol／L葡萄糖＋0．1mmol／L牛磺酸培养组,5mmol／L葡萄糖＋1mmol／L牛磺酸培养组,5mmol／L葡萄糖＋10mmol／L牛磺酸培养组,25mmol／L葡萄糖培养组（高葡萄糖组）,25mmol／L葡萄糖＋0．1mmol／L牛磺酸培养组,25mmol／L葡萄糖＋1mmol／L牛磺酸培养组,25mmol／L葡萄糖＋10mmol／L牛磺酸培养组,5mmol／L葡萄糖＋20mmol／L甘露醇组（甘露醇对照组）。RT—PCR检测谷氨酸转运蛋白（GLAST）和谷氨酰胺合成酶（Gs）表达,p液闪技术检测谷氨酸摄取活性,谷氨酰胺合成酶检测试剂盒检测GS活性。结果25mmol／L高葡萄糖培养后Muller细胞中GLAST、GSmRNA表达量较正常对照组明显降低（P〈0．05）,L-[2,3-3H]-谷氨酸摄取活性由正常对照组的（726±12）cpro／（rain·mgprotein）降为（352±10）cpm／（min·mgprotein）,GS活性由（41．1±2．3）μmol／L γ-谷氨酰羟肟酸（GHA）／（h·nagprotein）降为（20．3±2．1）μmol／LGHA／（h·mgprotein）（P〈0．05）。加入1、10mmol／L牛磺酸干预可明显上调高葡萄糖组Miller细胞中GLAST、GSmRNA表达量,增加L-[2,3-3H]-谷氨酸摄取活性和GS活性（P〈O．05）。加入0．1mmoI／L牛磺酸干预可上调高葡萄糖组Mallet细胞中GLAST、GSmRNA表达量,增加L-[2,3-3H]-谷氨酸摄取活性和GS活性,与高葡萄糖组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。甘露醇对照组Muller细胞中GLAST、GSmRNA表达量、L-[2,3-3H]-谷氨酸摄取活性和GS活性与正常对照组相比差异无统计学意义（P〉O．05）。结论牛磺酸能降低高糖引起的视网膜谷氨酸兴奋性,其作用机制可能通过上调Muller细胞谷氨酸转运和降解能力,从而维持细胞外空间正常的谷氨酸浓度。     

Ghrelin改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗的机制研究

目的观察酰化ghrelin和非酰化ghrelin分别对胰岛素抵抗（insulinresistance,IR）骨骼肌细胞的胰岛素受体后信号通路关键因子P13Kp85α、Akt／PKB及GLUT4的影响。方法大鼠L6成肌细胞经棕榈酸诱导分化,建立IR模型成功后入选实验,分为酰化ghrelin组（AG组）、非酰化ghrelin组（UAG组）、P13K抑制剂（LY）＋酰化ghrelin组（LY＋AG组）、LY＋非酰化ghrelin组（LY＋UAG组）和对照组（IR—CO组）。各组经处理因素干预24h后,激光共聚焦和流式细胞术检测各组骨骼肌细胞在胰岛素刺激下对荧光葡萄糖的摄取能力,免疫印迹法检测骨骼肌组织的磷酸化／总P13Kp85α、磷酸化／总Akt、细胞膜／总GLUT4的蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测骨骼肌组织P13Kp85α、Akt、GLUT4mRNA的表达。结果L6成肌细胞诱导分化及IR模型建立成功;AG组和UAG组的细胞在胰岛素刺激下的葡萄糖摄取分别是IR—CO组的1．25和1．28倍,磷酸形总P13Kp85α相对蛋白表达量分别是IR-CO组的1．78和1．89倍,磷酸化／总Akt、细胞膜／总GLUT4的蛋白表达是IR—CO组的1．84和1．80倍,细胞P13Kp85α、Akt／PKB、GLUT4的mRNA表达均较对照组显著升高,LY＋AG组和LY＋UAG组细胞的上述指标较单独使用酰化ghrelin或非酰化ghrelin作用时显著下降。结论酰化ghrelin和非酰化ghrelin均能改善骨骼肌细胞的IR,增加骨骼肌细胞在胰岛素刺激下的葡萄糖摄取;能够上调骨骼肌细胞的磷酸化P13Kp85α、磷酸化Akt／PKB、细胞膜GLUT4的相对蛋白表达和3者的mRNA表达,PI3K抑制剂LY294002能够抑制酰化和非酰化ghrelin的上述改善作用。     

布比卡因对高糖培养S H-SY5Y 细胞毒性研究

目的：布比卡因作用高糖培养的SH‐SY5Y细胞,观测细胞内活性氧（ROS）及凋亡影响。方法1 mmol／L布比卡因作用不同浓度葡萄糖培养基培养的SH‐SY5Y 细胞6 h ,检测细胞内ROS、GRP78水平变化及凋亡情况。结果葡萄糖浓度为7．80、11．10、13．30 mmol／L组ROS产量均高于5．56、6．10、7．00 mmol／L组（P＜0．05）。细胞凋亡率组间差异均有统计学意义（P＜0．05）。GRP78表达结果为5．56 mmol／L组（1．02±0．12）、6．10 mmol／L组（0．97±0．06）,7．80 mmol／L组（0．49±0．04）,高于7．00 mmol／L组（0．46±0．06）;11．10 mmol／L组（0．22±0．03）与13．30 mmol／L组（0．15±0．07）低于其他各组,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论细胞内ROS增多及凋亡增加与布比卡因增强细胞内质网应激（ERS）有关。GRP78功能减弱进一步增强细胞ERS。     

特色黎药高良姜改善胰岛素抵抗作用研究

目的：研究特色黎药高良姜改善胰岛素抵抗（IR）的作用,为高良姜临床应用于糖尿病的辅助治疗提供科学依据。方法：利用CCK8试剂盒检测0～200μg/mL高良姜提取物（AOE）和0～100μmol/L高良姜素对HepG2细胞活力的影响,以确定给药浓度;采用高糖诱导HepG2细胞48 h建立IR模型,罗格列酮（ROSI）作为阳性对照药;通过流式细胞仪和葡萄糖检测试剂盒检测AOE和高良姜素对IR-HepG2细胞内、外葡萄糖含量的影响,评价高良姜调节葡萄糖代谢改善IR的功效;利用Western blot实验检测AOE和高良姜素对IR-HepG2细胞中葡萄糖转运蛋白-4(GLUT4)表达的影响。结果：CCK8试剂盒检测结果显示0～200μg/mL AOE和0～50μmol/L高良姜素对HepG2细胞活力没有显著影响;流式细胞术和葡萄糖检测试剂盒结果显示高糖诱导IR的模型组细胞较空白组细胞的葡萄糖摄取量与消耗量均有明显的降低,IR模型成功建立;50μg/mL AOE和10、20μmol/L高良姜素均明显增加了IR-HepG2细胞的葡萄糖摄取量和消耗量（P<0.05）;Western blot结...     

游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4和胰岛素信号传导蛋白的影响

目的：观察游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）和胰岛素信号传导蛋白Grb2及ERK2的影响。方法：分离、培养新生Sprague-Dawley大鼠骨骼肌细胞,分别与软脂酸（0．25mmol/L)或油酸（0．125mmol/L)孵育12、24、36h,提取蛋白后用Western印迹法检测GLUT4、Grb2和ERK2的蛋白水平;用斑点印迹杂交法检测骨骼肌细胞内GLUT4 RNA含量的变化。结果：经软脂酸和油酸孵育12、24、36h后,大鼠骨骼肌细胞GLUT4的蛋白和RNA水平均显著降低（P＜0．05）;同时,Grb2和ERK2的蛋白水平也明显下降（P＜0．05）。结论：游离脂肪酸可抑制GLUT4的基因及蛋白表达和降低胰岛素信号传导蛋白Grb2和ERK2的蛋白表达水平,这可能会影响胰岛素的信号传导作用和骨骼肌的葡萄糖摄取,引起骨骼肌的胰岛素抑抗。     

蛋白激酶C对腹膜间皮细胞己糖激酶活性的调控

目的研究蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）对腹膜间皮细胞（peritoneal mesothelium cell,PMC）己糖激酶（hexokinase,HK）活性的调节作用,以及HK活性与PMC对葡萄糖摄取的相关性。方法大网膜取自雄性SD大鼠,胰蛋白酶-EDTA消化法用于PMC的原代培养及传代,细胞角蛋白抗体的间接免疫荧光染色用于PMC的鉴定;6-磷酸葡萄糖脱氢酶耦联比色法检测HK活性,观察PKC激活剂——佛波酯（PMA、PDD）及经典型PKC（classical PKC,cPKC）抑制剂——Goe6976对HK活性的影响;比色法检测培养液内葡萄糖的消耗量作为细胞对葡萄糖净利用指标。结果原代培养的PMC24h贴壁,5～8d融合,形成铺路石样外观,细胞角蛋白在胞浆阳性表达。PMA对HK活性的诱导呈时间和剂量依赖性,并增加了PMC对葡萄糖的净利用。0．01、0．1及1μmol／L的PMA作用24h后,HK活性分别提高30．7％、59．9％及99．1％（P〈0．05）。1μmol／L的PMA作用于PMC,6h后HK活性开始上调,24h时达到高峰（分别为21．3％和100．4％,P〈0．05）,培养液内的葡萄糖基本消耗一半（2mmol／L,P〈0．05）。0．1μmol／LPDD对HK活性的诱导与1μmol／L的PMA作用相似,PDD的结构相似物4α—PDD对HK活性无上述作用。G66976抑制了PMA对HK活性的诱导。10、20、30、40及50Ixmol／L的Goe976预处理PMC30min,再予1μmol／LPMA培养24h,HK活性分别抑制了14．6％、26．8％、34．2％、44．2％及54．9％（P〈0．05）。结论PKC使HK活性上调,增加了细胞对葡萄糖的净利用,可能与长期腹膜透析后PMC对葡萄糖的吸收加速有关;cPKC抑制剂对HK活性的阻断可能成为提高腹膜透析超滤的有效途径之一。     

糖肾宁对糖尿病肾病大鼠肾组织AGEs与ROS的影响

目的:探讨中药复方糖肾宁对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织糖基化终末产物(AGEs)、活性氧簇(ROS)的影响及抑制肾脏氧化应激的作用机制。方法:高糖高脂饲料喂养加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立DN大鼠模型,按24 h尿微量白蛋白(24 hU-A1b)排泄量随机分为模型组、糖肾宁组、格列喹酮组、糖肾宁+格列喹酮组。予相应药物干预8周后,检测各组大鼠血糖、24 hU-Alb以及肾组织AGEs、ROS的水平。结果:模型组大鼠血糖、24 hU-Alb、AGEs、ROS水平均明显高于正常组(P0.01);糖肾宁组血糖、24 hU-Alb均有所下降,与模型组比较差异均有统计学意义(P0.01),但仍高于正常组(P0.01);糖肾宁+格列喹酮组降糖、降蛋白尿效果优于糖肾宁组、格列喹酮组。糖肾宁治疗后大鼠肾组织AGEs、ROS显著下降,且糖肾宁+格列喹酮组效果优于糖肾宁组和格列喹酮组;糖肾宁组AGEs含量较格列喹酮组明显降低,同时糖肾宁具有与格列喹酮相似的减少肾组织ROS的作用。结论:糖肾宁具有一定抗氧化能力,可抑制肾脏的氧化应激,减缓DN发展。     

柿叶总黄酮对糖尿病小鼠降血糖降血脂作用及其机制研究

目的研究柿叶总黄酮对四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠的降糖降脂作用及其机制。方法采用四氧嘧啶诱导制作糖尿病小鼠模型。给予柿叶总黄酮50、100、200 mg/kg灌胃治疗,连续2周,取血清,测定空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、SOD、MDA含量。灌胃期间,第7、14天分别称其体重。结果与模型组相比,中、高剂量的柿叶总黄酮能够显著降低糖尿病小鼠血糖,提高血清中SOD活性,降低TG、TC、MDA的含量。结论柿叶总黄酮对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠具有降血糖和血脂的作用及提高机体抗氧化能力。     

热休克蛋白70对骨骼肌细胞纤维类型分化的影响

目的：探讨高表达热休克蛋白70（heat shock protein 70,Hsp70）对骨骼肌细胞（C2C12细胞）纤维类型分化的影响。方法：通过构建重组pTRE2 hyg-Hsp70质粒稳定转染C2 C12细胞系,建立Hsp70高表达的C2C12细胞系。经过诱导分化形成骨骼肌纤维,观察不同时间点（0、3、7 d）C2C12细胞的分化情况,并检测骨骼肌类型标志肌球蛋白重链（ myosin heavy chain ,MHC）的表达情况。结果：与对照组相比,高表达Hsp70的C2C12细胞系分化后的3、7 d,MHCⅠmRNA及蛋白的表达明显增高（P＜0．05）,而在分化后7 d,MHCⅡb mRNA及蛋白的表达明显下降（ P＜0．05）。结论：高表达Hsp70的骨骼肌细胞C2 C12可以诱导MHCⅠ的表达,促进骨骼肌细胞向Ⅰ型肌纤维转化。     

高糖对人腹膜间皮细胞生成活性氧的影响

[目的]研究不同浓度的葡萄糖对人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells,HPMCs）生成活性氧的影响。[方法]HPMCs体外培养并进行免疫组化鉴定,取第3代细胞用于实验。分别按照不同的实验要求将细胞分组。不同葡萄糖浓度干预组：①空白对照组;②1．5％葡萄糖组;③2．5％葡萄糖组;④4．25％葡萄糖组。不同作用时间组：①空白对照组;②2．5％葡萄糖组。两组细胞分别培养12、24、48h。应用流式细胞仪检测细胞对氧化剂敏感的2．7-二氢二氯荧光素（2’,7’-dichlorodihydrofluorescein,DCFH）发生氧化所产生的荧光量,从而间接的反映细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的水平,观察随葡萄糖浓度变化及不同作用时间对人腹膜间皮细胞产生活性氧的影响。[结果]（1）与空白对照组比较,高糖干预人腹膜间皮细胞后,其细胞内平均荧光强度明显升高（P〈0．05）,并且随葡萄糖浓度升高而逐渐增高,其中4．25％葡萄糖组最高。（2）与空白对照组比较,随着时间的延长,高糖作用下细胞内平均荧光强度明显升高（P〈0．05）,培养48h其水平最高。[结论]高糖可刺激体外培养的人腹膜间皮细胞ROS的生成。     

高脂饲养小鼠糖耐量异常的机理研究

目的：研究高脂饲养对小鼠骨骼肌胰岛素信号通路的影响,并对其葡萄糖耐受机制进行初步探讨。方法：C57/B6 J雄性小鼠随机分为正常对照组、高脂饲养组2组,分别进食正常饲料和高脂饲料,6周后检测小鼠空腹血糖、血脂并进行糖耐量试验。应用Western blotting 检测骨骼肌中Akt及其底物TBC1D1信号分子的表达变化。结果：高脂饲养组小鼠血脂升高（P＜0.05）,空腹血糖及腹腔注射葡萄糖后在0.5、1、2 h 3个时间点的血糖也显著上升（P＜0.05）,骨骼肌中Akt 和TBC1D1磷酸化的表达水平均显著下降（P＜0.01）。结论：高脂饲养小鼠存在糖耐量异常,骨骼肌中Akt和TBC1 D1的磷酸化表达下降可能是高脂诱导小鼠糖耐量异常的机制之一。     

蒲黄总黄酮对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响

目的探讨蒲黄总黄酮对脂肪细胞糖脂代谢的影响。方法药物处理胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞24h,通过检测培养液中的葡萄糖含量反映葡萄糖消耗量;XTT法观察药物对细胞活性的影响;3H-葡萄糖摄入法观察细胞对葡萄糖的转运率;通过检测上清液中的浓度观察细胞游离脂肪酸(freefattyacid,FFA)的溢出。结果蒲黄总黄酮在浓度为0.025~0.4g/L时有增加葡萄糖消耗的作用,且呈剂量效应。当浓度为0.4g/L时,XTT值明显下降,显示对细胞的毒性作用。在0.2g/L时,蒲黄总黄酮与罗格列酮相似,可明显提高细胞对3H-脱氧葡萄糖的转运率。蒲黄总黄酮组培养上清液中FFA浓度明显低于空白对照组,而罗格列酮组则无明显差异。结论蒲黄总黄酮能显著增加3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取和消耗,同时可减少FFA溢出,通过调节糖代谢和脂代谢改善胰岛素抵抗。     

氧化应激在碘海醇诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的观察碘海醇诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）凋亡及氧化应激所起的作用。方法将体外培养的HK-2细胞分为4组：①对照组;②碘海醇组（100mgI/ml）;③N-乙酰半胱氨酸（NAC 10mmol/L）组;④共作用组：NAC10mmol/L预处理1h＋碘海醇100mgI/ml。各组以相应药物孵育6h。采用细胞增殖/毒性检测法（CCK-8）测定细胞存活率,核染色、流式Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,DCFH-DA荧光结合流式细胞法检测细胞内活性氧（ROS）的产生,IF、Western blot检测相关信号转导途径。结果碘海醇降低HK-2细胞存活率至（63±5%）（P〈0.01）,细胞凋亡率升至24.41%（对照组0.9%,P〈0.05）,细胞内活性氧升高至对照组的1.3倍（P〈0.05）。NAC预处理与碘海醇共作用后,HK-2细胞存活率比碘海醇组明显增高（118%vs.63%,P〈0.05）,凋亡率比碘海醇组明显降低（13.46%vs.24.41%,P〈0.05）,活性氧降为对照组的0.93倍,比碘海醇组（1.3倍）明显降低（P〈0.05）。碘海醇作用于HK-2细胞,引起p53磷酸化,上调凋亡相关蛋白（Bax）,下调Bcl-2的表达,促进线粒体内细胞色素C（CytC）释放到胞质,进而引起Caspase-3活化,导致细胞凋亡。NAC降低细胞内活性氧浓度,下调Bax、上调Bcl-2、减少Caspase-3活化,从而减轻细胞损伤。结论碘海醇引起的氧化应激在其诱导的HK-2细胞凋亡中起重要作用。     

持续高水平PEEP治疗肺内源性ARDS的临床价值研究

目的：探索持续高水平呼气末正压通气（PEEP）治疗肺内源性急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的临床价值,为机械通气治疗ARDS提供依据.方法：收集70例肺内源性ARDS患者的临床资料,根据其PEEP是否＞12 cmH2O,分为观察组和对照组,比较两组患者的机械通气后PaO2和PaCO2的改善情况、气压伤发生率、住ICU时间、机械通气时间以及病死率.结果：两组患者机械通气0h、24 h、72 h后PaO2和PaCO2的改善情况无差异（P＞0.05）,1周后观察组PaO2为（159.41±29.16）、PaCO2为（44.51士10.23）,对照组PaO2为（286.14±38.46）、PaCO2为（40.21±8.97）,两组对比差异显著（P＜0.05）;观察组住ICU时间、平均机械通气时间和病死率为（11.78±9.86）d、（7.56±6.09）d、34.51％,对照组为（6.51±8.97）d、（3.98±5.76）d、18.76％,两组对比差异有统计学意义（P＜0.05）;观察组有3例气压伤,对照组无气压伤发生.结论：持续高水平PEEP治疗肺内源性ARDS患者并不能有效改善氧合,但延长患者住ICU时间,增加病死率.     

SCAP/SREBP2/LDLr通路在LPS诱导人血管平滑肌细胞泡沫化中的作用

目的：研究炎症介质——脂多糖（LPS）是否通过扰乱固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白-固醇调节元件结合蛋白2（SCAP-SREBP2）复合物介导的低密度脂蛋白受体（LDLr）负反馈调控,增加人血管平滑肌细胞对天然低密度脂蛋白胆固醇（LDL）摄取,导致泡沫细胞形成。方法：人血管平滑肌细胞在无血清培养基中培养24 h后,分为对照组（继续无血清培养）;高脂组（加入LDL负荷,终浓度为25μg/ml）;高脂加LPS组（加入LDL负荷,终浓度为25μg/ml,同时加入LPS,终浓度400 ng/ml）;高脂加LPS加肝素组（加入LDL负荷,终浓度为25μg/ml,加入LPS,终浓度400 ng/ml,加入肝素,终浓度5 mg/ml）,以上各组细胞培养24 h后收获。酶化学法检测细胞内胆固醇浓度,油红O染色法检测细胞内脂质水平,Real time PCR法检测LDLr、SREBP2表达水平,细胞免疫化学法检测SCAP蛋白表达,激光共聚焦检测SCAP在内质网与高尔基体间的转位情况。结果：细胞内胆固醇测定及油红O染色发现,LPS通过增加人血管平滑肌细胞对非修饰LDL摄取,导致人血管平滑肌细胞转变为泡沫细胞。在LPS不存在时,25μg/ml LDL减少LDLr mRNA水平（P〈0.05）。然而,LPS增加LDLr mRNA水平,逆转25μg/ml LDL对LDLr的抑制效应,不恰当的增加了血管平滑肌细胞对LDL摄取（P〈0.05）,LPS刺激也导致了SCAP蛋白表达增加和SREBP2的mRNA水平升高（P〈0.05）,同时促进了SCAP从内质网转移到高尔基体。这些结果提示LPS通过增加SCAP/SREBP2复合物从内质网到高尔基体转位,干扰了胆固醇介导的LDLr负反馈调控,使非修饰LDL在血管平滑肌细胞内堆积,导致泡沫细胞形成。结论：本研究提示,在LPS刺激条件下,SCAP/SREBP2/LDLr通路可能是血管平滑肌细胞泡沫化的另一条通路。