LPS-TOLL样受体-4在急性前葡萄膜炎发病机制中的研究进展

了TLR-4的在眼部的转导路径及其在急性前葡萄膜炎中研究进展.     

内毒素诱导的葡萄膜炎中虹膜固有组织细胞上MyD88与TLR-4的共表达

目的观察小鼠内毒素诱导的葡萄膜炎(endotoxin-induced uveitis,EIU)模型中Toll样受体-4(Toll-like receptor-4,TLR-4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、CD163的共表达。方法 6～8周龄雄性C3H/HeN(野生型)小鼠25只,C3H/HeJ(TLR-4基因缺陷型)小鼠5只,分别腹腔注射霍乱弧菌内毒素细胞壁脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导急性前葡萄膜炎动物模型,处死小鼠后虹膜、睫状体铺片,用免疫荧光三标记的方法检测虹膜、睫状体组织内不同时间CD163、TLR-4、MyD88的表达,并对虹膜内CD163、TLR-4和MyD88阳性细胞进行计数分析。结果 C3H/HeN小鼠LPS注射后12h结膜囊内出现炎症反应,24～48h达到高峰,72h炎症逐渐消退,而C3H/HeJ小鼠LPS注射后没有发现炎症反应。在内毒素诱导的C3H/HeJ小鼠虹膜中未检测到CD163、TLR-4和MyD88阳性细胞。C3H/HeN小鼠腹腔注射LPS后在虹膜铺片内0h未见CD163、TLR-4与MyD88阳性表达,12h后可见阳性细胞(40.3±8.9、45.2±6.3、42.5±4.1),24h阳性细胞数(121.0±39.5、138.6±28.3、125.5±36.1)较12h明显增多,差异均有统计学意义(均为P<0.05);48h阳性细胞数(132.3±54.5、129.9±36.2、122.1±29.3)与24h相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05);72h阳性细胞数(12.8±3.2、10.4±5.6、9.3±5.2)较48h减少,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。结论小鼠EIU模型中,LPS激活了CD163标记的巨噬细胞膜表面的TLR-4,TLR-4与MyD88途径可能是EIU主要的信号传导途径。     

Toll样受体-4及其介导的信号转导与急性前葡萄膜炎

急性前葡萄膜炎是最常见的葡萄膜炎,其发病机制尚不明确。近年来研究认为,G阴性细菌感染启动、Toll样受体-4介导的信号转导在急性前葡萄膜炎的发病机制中发挥重要作用。本文对目前脂多糖-Toll样受体-4信号转导通路及通过对该通路干预来调控炎症的相关研究进展进行综述,以期为前葡萄膜炎的治疗提供新的思路。     

Toll样受体-4在葡萄膜炎中的表达和作用

Toll样受体-4(TLR4)作为内毒素的识别受体在固有免疫与适应性免疫之间的桥梁作用越来越受到重视.葡萄膜炎发病中TLR4的作用不断被证实:TLR4基因突变的C3H/HeJ小鼠不能诱导出葡萄膜炎;正常人眼葡萄膜中有TLR4表达而且是有功能的;葡萄膜炎患者外周血中单核细胞TLR4功能下降.本文对TLR4在葡萄膜炎发病中的信号传导通路的进展及其在抗感染中的作用进行了综述.     

脂多糖受体复合体在急性前葡萄膜炎虹膜色素上皮细胞中作用的研究进展

近年来,有研究结果表明人葡萄膜中的虹膜色素上皮细胞具有对脂多糖(LPS)反应的固有模式识别受体,包括Toll样受体(TLR)4、髓样分化蛋白(MD)2及分化簇(CD)14。这一发现扩展了微生物触发因子和葡萄膜固有免疫在急性前葡萄膜炎发病机制中的解释。提示LPS受体复合物成分可能成为该病的治疗靶点。本文中笔者对LPS受体复合体在人虹膜色素上皮细胞和葡萄膜炎动物模型中的研究现状进行综述。     

TLR4-MyD88在大鼠急性前葡萄膜炎虹膜中的表达

目的观察内毒素诱导的大鼠急性前葡萄膜炎（EIU）虹膜组织内Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）及核因子-κBp65（NF-κB p65）的表达。方法Wistar大鼠50只,随机分为5组,0、12、24、48、72h,每组10只。0h组为正常对照组,其余4组均足垫部注射霍乱弧菌内毒素脂多糖（LPS）200μg,建立EIU动物模型,每隔2h用裂隙灯观察大鼠眼前节炎症反应。通过铺片免疫组织化学染色,检测虹膜睫状体组织内TLR4、MyD88和NF—κB p65的表达,并对虹膜内TLR4^＋和MyD88^＋及NF—κB p65^＋细胞进行计数。结果注射后24～48h大鼠眼前段的炎症反应达到高峰,72h炎症反应逐渐缓解。组织病理学检查表明,虹膜睫状体组织的炎性细胞浸润在24～48h达到高峰,与临床反应结果相符。TLR4在模型鼠虹膜睫状体炎复合体中表达的免疫组织化学检测结果表明,0h组虹膜铺片内无阳性细胞,12h后可见细胞形态大多为类圆形的阳性细胞,48h达高峰,72h阳性细胞数开始减少,各组阳性细胞数总体差异有统计学意义（F=46．79,P〈0．05）。MyD88和NF—κB p65的表达与TLR4的改变趋势相一致（F=54．37,P〈0．05;F=85．32,P〈0．05）。结论内毒素诱导的EIU虹膜内,TLR4及其下游信号传导分子的表达量发生改变,提示TLR4-MyD88依赖传导途径可能参与了EIU的发病.     

内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎的巨噬细胞中Toll样受体4的表达

目的 探讨在内毒素诱导的Wistar大鼠葡萄膜炎中Toll样受体4(TLR4)阳性细胞与虹膜组织中巨噬细胞的动态变化和分布.方法 实验研究.Wistar大鼠50只,用随机数字法随机分为5组,每组10只,分别为正常对照(0 h)组、6 h组、12 h组、24 h组及48 h组.除0 h组外其余各组均足垫部注射霍乱弧菌内毒素200μg,注射后于裂隙灯显微镜下观察双眼前节炎症反应变化.按实验分组于0、6、12、24、48 h处死大鼠.取虹膜一睫状体及脉络膜组织.通过葡萄膜铺片免疫组织化学方法检测TLR4和巨噬细胞的标记CD163的表达.人工计数虹膜中TLR4~+与CD163~+的细胞并计算细胞密度,计算圆形和多形性的CD163~+细胞占所有CD163~+细胞的百分比.进一步采用免疫荧光双标记检测TLR4和CD163共表达的情况.通过单因素方差分析分别对大鼠虹膜内阳性细胞密度以及圆形、多形性CD163~+细胞的百分比进行统计学检验.结果 正常大鼠虹膜睫状体组织不表达TLR4.6 h组有2只大鼠虹膜内可见少量TLR4~+细胞,12～48 h组所有大鼠虹膜内TLR4~+细胞明显增多(F=167.2,P＜0.001),虹膜内TLR4~+细胞密度分别为(506.1±39.5)个/mm~2(12 h组)、(492.3±54.5)个/mm~2(24 h组)及(663.8±150.2)个/mm~2 (48 h组).在注射LPS后12～48 h期间TLR4~+细胞形态无明显变化.0～48 h组大鼠虹膜内均有CD163~+细胞,0 h组圆形和多形性CD163~+细胞百分比为13%,12～48 h组其百分比约为80%,且圆形细胞主要位于虹膜基质层.免疫荧光双标记可见TLR4和CD163的共表达,TLR4位于细胞膜,CD163位于细胞质.5组大鼠脉络膜内均未见TLR4表达.结论 内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎中虹膜内TLR4表达增高,部分虹膜固有巨噬细胞表达TLR4.TLR4可能在葡萄膜炎的发生发展中起一定作用.     

腹腔巨噬细胞核因子转位在小鼠内毒素诱导葡萄膜炎发病中的作用

目的观察野生型C3H/HeN小鼠和Toll样受体4(TLR4)基因缺陷型C3H/HeJ小鼠腹腔巨噬细胞在脂多糖(LPS)刺激下激活状态的差异,从体外途径探讨TLR4传导信号在前葡萄膜炎发病中的可能作用机制。设计实验研究。研究对象健康成年C3H/HeN和C3H/HeJ小鼠。方法常规提取两种小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,按处理因素不同随机分六组:C3H/HeN小鼠LPS组、正常对照组、抗TLR4单克隆抗体加LPS组、抗TLR4单克隆抗体组;C3H/HeJ小鼠LPS组、正常对照组。各组在不同处理后1h、3h、6h、12h、24h五个时间点通过免疫荧光组织化学染色进行观察。主要指标TLR4传导途径中关键分子TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)免疫荧光强度及表达位置差异。结果所有组TLR4均表达于细胞膜,MyD88表达于细胞质和细胞核。C3H/HeN小鼠LPS组和C3H/HeJ小鼠LPS组TLR4荧光强度比较,差异有统计学意义;余各组TLR4荧光强度两两比较,差异无统计学意义。C3H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞LPS组随LPS刺激时间的延长,各观察时间点MyD88荧光强度逐渐减弱,总体差异有统计学意义;余各组各时间点MyD88荧光强度无明显变化。C3H/HeN小鼠正常对照组、抗TLR4单克隆抗体组,C3H/HeJ小鼠正常对照组腹腔巨噬细胞各时间点NF-κB均表达于胞质,C3H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞LPS刺激1h后NF-κB表达于胞核,3h依旧表达于胞核,此后无法检测到NF-κB的表达。C3H/HeN小鼠抗TLR4单克隆抗体加LPS组、C3H/HeJ小鼠LPS组巨噬细胞经LPS刺激1h后NF-κB转移至胞膜,直至24h一直表达于胞膜。结论腹腔巨噬细胞TLR4传导途径中核因子的转位可能与前葡萄膜炎的发病有关,特异性阻断该途径或许为前葡萄膜炎的治疗提供新思路。     

合理应用糖皮质激素治疗急性前葡萄膜炎

目的:探讨急性前葡萄膜炎糖皮质激素应用的合理方法。方法:对65例72眼急性前葡萄膜炎患者使用糖皮质激素局部频繁点眼治疗,观察其疗效。结果:所有患者均能很快控制病情并治愈,治愈时间5～35(平均约12)d。论:对绝大多数急性前葡萄膜炎患者仅用糖皮质激素、甾体消炎药和睫状体麻痹剂点眼即能治愈炎症。     

TLR-4在大鼠慢性高眼压模型视网膜中的表达

】背景TLR-4是一种天然免疫受体,在免疫性中枢神经系统损伤的修复中发挥重要作用,但在青光眼视神经损伤中的具体作用机制不详。目的从基因和蛋白质水平研究正常大鼠及慢性高眼压模型大鼠视网膜组织中TLR4的表达情况,探讨高眼压视网膜神经节细胞（RGCs）损伤的免疫机制及TLR-4在RGCs修复中的可能作用。方法选择d～5周龄的雄性清洁级纯种SD大鼠150只,用烧烙3条巩膜静脉联合术中应用丝裂霉素的方法建立大鼠慢性高眼压模型。Tono—penⅡ型笔式眼压计测量造模前、造模后2h,1、3、7、14、28、56d大鼠眼压。上述各时间点分别取5只高眼压组及空白对照组大鼠视网膜行免疫组织化学染色,观察视网膜TLR4蛋白的表达情况。应用逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）法及Westernblot法检测各组视网膜组织中TLR-4mRNA及蛋白质的表达。结果实验组手术后眼压明显升高,与空白对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。免疫组织化学检测结果显示造模后早期TLR--4在视网膜组织中的表达开始增加,表达量均高于空白对照组（P〈O．05～0．01）;RT—PCR检测表明,大鼠慢性高眼压模型眼造模后各时间点TLR-4mRNA在视网膜的表达量明显高于空白对照组（P〈0．05～0．01）;WesternNot检测显示TLR4在造模后早期视网膜组织中即有表达,结果显示组间差异有统计学意义（P〈0．05～0．01）。结论TLR-4在大鼠慢性高眼压模型眼视网膜中的表达明显上调,提示其在大鼠慢性高眼压视神经退行性病变中发挥免疫调节作用。     

Toll样受体在眼部各组织中的表达及其作用

Toll样受体是新近发现的一类广泛存在于植物、昆虫和哺乳动物体内的与跨膜信号转导有关的受体，在进化上具有高度保守性。研究揭示了其在机体免疫特别是抗感染免疫中有重要作用。越来越多的研究已经发现人眼角膜细胞、巩膜、结膜、葡萄膜、视网膜、虹膜内皮细胞、睫状体等都能表达Toll样受体，而且与眼部的免疫和炎症反应密切相关。Toll样受体的发现为深入研究眼部感染性疾病的发病机制及临床治疗开辟了更为广阔前景。     

TLR4和CD14在体外培养的晶状体上皮细胞有表达

目的：探讨Toll样受体4（toll-like receptor4,TLR4）和CD14在晶状体上皮细胞（lens epithelial cell,LEC）的表达。方法：采用一步法反转录多聚酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）检测LEC中TLR4mRNA和CD14mRNA的表达。结果：用RT-PCR检测分别获得451bp和348bp的清晰扩增条带,经基因测序证实为TLR4 mRNA和CD14 mRNA。结论：晶状体上皮细胞可表达TLR4和CD14。     

TLR4和CD14在体外培养的晶状体上皮细胞有表达

目的:探讨Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)和CD14在晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)的表达。方法:采用一步法反转录多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测LEC中TLR4mRNA和CD14mRNA的表达。结果:用RT-PCR检测分别获得451bp和348bp的清晰扩增条带,经基因测序证实为TLR4 mRNA和CD14 mRNA。结论:晶状体上皮细胞可表达TLR4和CD14。     

葡萄膜炎患者外周血CD4^＋CD25^high调节性T细胞的表达

目的：通过检测葡萄膜炎患者外周血中CD4^＋CD25^high调节性T细胞的表达水平,初步探讨其在葡萄膜炎发病中的作用。 方法：取16例正常健康对照及30例不同类型活动期葡萄膜炎患者,采取抗凝外周血,进行三色免疫荧光染色、流式分析。 结果：葡萄膜炎患者外周血中CD4^＋CD25^highT细胞的百分率与正常健康对照（8.56%±4.22%vs5.72%±3.11%）相比,显著升高（P=0.022）,而且与患者病情严重程度明显相关（P=0.007）。另外CD4^＋CD25^highCTLA4＋T细胞在葡萄膜炎患者外周血中比例较正常对照明显升高（P=0.012）。 结论：葡萄膜炎患者外周血中CD4^＋CD25^highTreg细胞的异常表达可能参与疾病的发生发展,并与疾病的活动密切相关。     

Increased CD40 ligand in patients with acute anterior uveitis

PURPOSE: The inflammatory response in acute anterior uveitis (AU) is believed to be primarily mediated by autoreactive T-cells. We wanted to evaluate whether the T-cell activation marker CD40 ligand is involved in the AU immunopathogenesis. METHODS: We evaluated the expression of the CD40 ligand on CD4+ T-cells, CD8+ T-cells and CD19+ B-cells on peripheral blood mononuclear cells using flow cytometry in six patients with unilateral AU, six patients with monosymptomatic optic neuritis (ON) as inflammatory controls, and in six healthy controls. The ex vivo induction of the CD40 ligand on T-cells in patients and controls was also studied. RESULTS: A significantly higher expression of the CD40 ligand on both CD4+ (p < 0.05) and CD8+ (p < 0.05) T-cells in patients with AU compared to ON patients and healthy controls was found. There was a significantly higher induction of the CD40 ligand on CD8+ T-cells in AU patients compared to ON patients and healthy controls (p < 0.01). No differences in the B-cell population were observed between the three groups. CONCLUSION: Patients with AU had increased expression of the CD40 ligand on T-cells in the blood and expressed higher levels of the CD40 ligand when stimulated, compared to ophthalmological inflammatory controls and healthy controls. The data suggest that the CD40 ligand is involved in the development of AU.     

CD4＋T细胞与非感染性葡萄膜炎

目前认为非感染性葡萄膜炎是由T细胞（主要是CD4＋T细胞）介导的自身免疫性炎症。CD4＋T细胞分为Th1、Th2、Th17和调节性T细胞（Treg）4个亚群,各细胞亚群间通过复杂的细胞因子网络介导自身免疫反应和炎症反应。对各细胞亚群及其在非感染性葡萄膜炎中作用的研究是国内外葡萄膜炎发病机制研究的热点。就CD4＋T细胞各亚群分泌的细胞因子、相互作用及其在非感染性葡萄膜炎中的作用进行综述。     

变应性鼻炎血清CD14水平及其与血清总免疫球蛋白E的关系△

目的 观察分析变应性鼻炎(AR)患者血清CD14水平,探讨血清CD14水平对AR患者的临床意义。方法 选择2018年7月~2019年6月我科收治的AR患者68例作为病例组,同时选择同期来自我院体检中心的健康体检者68例,测定2组人群的血清CD14和血清总免疫球蛋白E(IgE)水平。结果 AR患者的血清CD14水平显著高于健康对照组(P<0.05)。中至重度AR患者的血清CD14水平显著高于轻度患者(P<0.05)。AR患者血清CD14和总IgE水平存在显著正相关(r=0.73,P<0.001)。结论 AR患者血清CD14水显著高于正常人群,并随着疾病的严重程度增加而升高,且与血清总IgE有关,在临床上有一定参考价值。