氧化苦参碱对细胞共培养体系中酪氨酸酶及黑素的影响

目的探讨氧化苦参碱对人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法培养人表皮黑素细胞并及人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系，利用四甲基偶氮唑蓝（MTr）还原法测定细胞活力，采用酶学方法测定酪氨酸酶活性，475nm比色法测定黑素含量。结果100μmol／L、500μmol／L和1000μmol／L氧化苦参碱对于黑素细胞及共培养细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性抑制作用，500μmol／L及1000μmol／L氧化苦参碱与对照组相比有显著差异（P〈0．01）。结论氧化苦参碱对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性抑制作用。     

刺蒺藜对培养人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨刺蒺藜对培养的人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用MTT法测定刺蒺藜对人A375黑素瘤细胞活力的影响,NaOH裂解法测定黑素合成,并与8-MOP的结果进行比较。结果0．1、0．2和0．5mg／ml刺蒺藜对于人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量依赖性激活作用,0．2mg／ml及0．5mg／ml刺蒺藜与对照组相比有显著差异（P〈0．01）。结论刺蒺藜对于培养的人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量依赖性激活作用。     

龙胆草对人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨龙胆草对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用MTT法测定龙胆草对人A375黑素瘤细胞增殖的影响,NaOH裂解法测定黑素合成,并与8-MOP的结果进行比较。结果0.1 mg/mL、0.2 mg/mL和0.5 mg/mL龙胆草对人A375黑素瘤细胞增殖无影响,0.1 mg/mL、0.2 mg/mL和0.5 mg/mL龙胆草对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性激活作用,0.2 mg/mL及0.5 mg/mL龙胆草与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论龙胆草对培养的人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性激活作用。     

木犀草素在细胞共培养体系中对酪氨酸酶及黑素的影响

目的研究木犀草素对人表皮共培养体系（黑素细胞与角质形成细胞）酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法培养人表皮黑素细胞和人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系,利用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法测定细胞活力,490nm比色法测定酪氨酸酶活性,475nm比色法测定黑素含量。结果 0.5μmol/L、0.75μmol/L和1μmol/L木犀草素对于黑素细胞及共培养细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性增强作用,0.75μmol/L及1μmol/L木犀草素与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）。结论木犀草素对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性增强作用。     

熊果苷对A375与HACAT共培养模型中黑素细胞酪氨酸酶活性的影响

目的体外构建黑素瘤细胞(A375)与人永生角质形成细胞(HACAT)直接接触共培养模型,观察熊果苷对该模型酪氨酸酶活性的影响同时观察熊果苷对该模型黑素合成及细胞的增殖的影响。方法分别培养A375与HACAT,体外构建黑素瘤细胞与人永生角质形成细胞直接接触的共培养模型;将不同浓度熊果苷作用于此模型,用MTT法、多巴氧化法及NaOH裂解法检测酪氨酸酶活性、黑素合成以及细胞增殖的。结果 A375与HACAT能共同存活;分别用1mg/ml,0.5mg/ml和0.2mg/ml的熊果苷对共培养细胞的增殖、黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成均有较强的剂量相关的抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论熊果苷对A375与HACAT共培养模型中细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成均呈浓度依赖性抑制作用。     

验方祛斑汤含药血清对A375人黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的用血清药理学方法研允验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响，并探讨本方治疗黄褐斑的作用机制。方法用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）测定验方祛斑汤对细胞增殖的影响，酶学方法测定其封酪氨酸酶活性的影响，475nm比色法测定其对黑素含量的影响。结果验方祛斑汤含药血清封体外培养的A375人黑素瘤细胞具有抑制细胞增殖，降低酪氨酸酶活性和黑素含量作用。结论验方祛斑汤能抑制黑素细胞黑素合成，这可能是其治疗黄褐斑的作用机制之一。     

白芨水提物对黑素瘤与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的：利用人表皮黑素瘤细胞（A375细胞）与人永生化角质形成细胞（HaCat细胞）共培养模型,观察白芨水提物对该模型中黑素合成的影响.方法：构建A375细胞与HaCat细胞共培养模型,采用氢氧化钠裂解法、MTT法和多巴氧化法分别检测白芨水提物对黑素含量、细胞增殖和酪氨酸酶（TYR）活性的影响.结果：与阴性对照组比较,2 g/L、1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L白芨水提物对黑素合成有显著抑制作用（P＜0.01）,2g/L、1 g/L组对黑素合成的抑制作用与阳性对照药物熊果苷组相当;白芨水提物对TYR活性有显著抑制作用（P＜0.01）,其中0.5 g/L、0.25 g/L和0.125 g/L组与阳性对照药物熊果苷组的作用相当.结论：白芨水提取物可以通过抑制TYR活性抑制A375细胞与Hacat细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用白芨治疗黄褐斑提供了实验依据.     

壬二酸对人黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞黑素合成功能的影响

目的 建立体外培养的正常人表皮黑素细胞系，检测壬二酸对人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞黑素合成的影响。方法 体外人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B．。细胞培养，TRP-1染色观察壬二酸作用后，细胞形态的变化；测定壬二酸对人表皮黑素细胞和鼠黑色素瘤B16细胞酪氨酸酶活性及黑素含量变化观察壬二酸的脱色素作用。结果 壬二酸作用于人表皮黑素细胞后，可见细胞树突明显减少；壬二酸作用于B16细胞后，细胞形态无明显改变。壬二酸抑制人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞的酪氨酸酶活性，细胞黑素合成减少，而且具有浓度依赖性。结论 壬二酸对体外培养的人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成都有抑制作用，可临床应用于治疗色素性疾病。     

8-甲氧补骨脂素脂质体对小鼠黑素瘤细胞黑素生成影响的研究

目的探讨 8 -甲氧补骨脂素脂质体 (LMOP)对B16F小鼠黑素瘤细胞增殖、黑素含量、酪氨酸酶活性的影响。方法采用体外培养的小鼠B16F黑素瘤细胞株 ,以等浓度的 8-甲氧补骨脂素 (MOP)为对照 ,用MTT法测定细胞增殖情况 ;NaOH裂解法测定黑素合成 ;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果与等浓度MOP相比 ,LMOP低浓度 (10～ 5 0 μmol/L)时显著提高酪氨酸酶活性和黑素含量 (P <0 .0 5 ) ,高浓度 (10 0～ 2 0 0 μmol/L)时对细胞的抑制作用更显著 (P <0 .0 5 )。 结论用脂质体作为MOP的载体可以显著提高MOP对靶细胞的作用 ,为LMOP制剂治疗白癜风的临床应用提供了实验依据。     

过氧化氢诱导人黑素细胞氧化性损伤对TLRs表达的影响

目的 观察过氧化氢（H₂O₂）诱导人黑素A375细胞出现氧化性损伤后,TLRs的表达变化与白癜风病理过程的关系。方法 利用不同浓度的过氧化氢处理A375细胞,分为空白对照组（不予H₂O₂处理）及3个不同浓度（100、500和1000μmol/L）H₂O₂处理的实验组,分别作用24、48、72h后,通过黑色素含量检测试剂盒检测诱导后细胞的黑色素含量变化,CCK8检测细胞氧化损伤程度,同时通过qPCR检测过氧化氢诱导后A375细胞中TLRs的表达变化。结果 500μmol/L和1000μmol/L的H₂O₂能显著诱导A375细胞损伤,其中500μmol/L处理72h时细胞活性损伤率约为50%,1000μmol/L过氧化氢处理72h时细胞活性损伤>50%。黑色素含量检测显示,500μmol/L和1000μmol/L过氧化氢处理后A375细胞中黑色素含量降低最显著。qPCR检测结果显示TLRs家族基因的表达均不同程度上调。结论 综合评估过氧化氢诱导后细胞活性和细胞内黑色素含量的变化,确定500μmol/L处理72h为A375细胞氧化应激损伤的最佳诱导条件。初步提示TLRs家族可能在氧化应激诱导的黑色素细胞损伤的过程中发挥重要作用,为开发新的药物靶点提供依据。     

黑素生成过程中黄芩的调节作用

目的 :观察中药黄芩对B16F小鼠黑素瘤细胞增殖、黑素含量、酪氨酸酶活性的影响。方法 :采用体外培养的小鼠B16F黑素瘤细胞株 ,用MTT法测定细胞增殖情况 ;NaOH裂解法测定黑素合成 ;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果 :在浓度为 0 .0 1～ 1.0 g·L-1时 ,黄芩可浓度依赖性促进B16F细胞增殖 ,酪氨酸酶活性和黑素含量 ,以 1.0 g·L-1为最佳。结论 :黄芩可促进细胞增殖 ,激活酪氨酸酶活性 ,提高黑素含量 ,从而为黄芩治疗白癜风的临床应用提供了实验依据。     

负载酪氨酸酶抑制肽的牛奶外泌体抑制酪氨酸酶活性及黑色素生成研究

目的:探讨酪氨酸酶抑制肽（YRS）功能化的牛奶外泌体（mEXOYRS）,对酪氨酸酶活性及黑色素生成的抑制作用。方法:通过超速离心法获取牛奶外泌体（mEXO）;利用外泌体特异锚定肽CP05将YRS修饰在mEXO表面,获得mEXOYRS,随后通过流式细胞仪分析YRS的负载效率;在黑色素瘤细胞B16-F10中,检测细胞对mEXOYRS的摄取效率以及YRS与酪氨酸酶的共定位效率,评估mEXOYRS对B16-F10黑色素瘤细胞酪氨酸酶活性的抑制效果及对黑色素合成的抑制作用;进一步将mEXOYRS均匀涂抹于Nude BALB/c小鼠黑色素瘤细胞B16-F10所成皮下瘤模型上,评估其在体内对黑色素合成的抑制作用;通过对C57BL/6小鼠表面皮肤涂抹mEXOYRS,评估其对小鼠毛囊的着色程度及小鼠皮肤的美白效果。结果:YRS通过外泌体特异锚定肽CP05高效负载至mEXO,并且不影响mEXO的形态结构及标志性蛋白的表达;在B16-F10黑色素瘤细胞摄取实验中,mEXO能够增强YRS与细胞内酪氨酸酶共定位的效率,在1周、2周及6周时均显著抑制细胞产生黑色素（F=56.117、48.954、560.006,均P＜0.05）;在Nude BALB/c小鼠黑色素皮下瘤模型中,与YRS组相比,mEXOYRS更好的抑制了黑色素的产生;在C57BL/6小鼠模型中,mEXOYRS降低了黑色素的产生,并显著降低了黑色素含量（F=173.083,P＜0.05）及酪氨酸酶活性指标（F=34.156,P＜0.05）,取得了美白效果。结论:YRS修饰的mEXO可通过内体转运途径,靶向运输到酪氨酸酶处,降低酪氨酸酶活性,并有效抑制黑色素生成,提高YRS的美白效果。     

忍冬藤与其伪品金银忍冬藤、连翘茎的鉴别研究

目的:对忍冬藤与其伪品金银忍冬藤、连翘茎进行比较和鉴别。方法:按生药学常规方法对忍冬藤、金银忍冬藤及连翘茎在基源、性状、显微方面进行比较和鉴别。结果:忍冬藤、金银忍冬藤及连翘茎在基源、性状及显微特征方面均存在一定差异。结论:性状鉴别和显微鉴别方法简便、可靠,为保证忍冬藤药材质量提供了有效的鉴别方法。