当归补血汤中当归、黄芪两味中药不同比例搭配对其化学成分的影响

目的:探讨当归补血汤中黄芪与当归不同配比对药物化学成分的影响。方法:采用高效液相色谱法对当归、黄芪的不同比例搭配予以分析,对3种配比中的藁本内酯、芒柄花素、黄芪甲苷及阿魏酸成分含量进行测定。结果:供试品溶液分别配制后,分别测定0h、3h、6h、9h、12h对照品含量,结果显示藁本内酯、芒柄花素、黄芪甲苷及阿魏酸在12h内含量基本稳定;当归、黄芪搭配比为1∶5时,芒柄花素、黄芪甲苷及阿魏酸含量明显高于其他搭配比,藁本内酯含量明显低于其他搭配比(P0.05)。结论:当归与黄芪搭配比为1∶5时,当归补血汤中芒柄花素、黄芪甲苷及阿魏酸含量达到峰值,藁本内酯含量则为最低,当归与黄芪搭配比为1∶5时较为合理。     

超滤膜分离纯化当归补血汤的研究

目的:探讨应用超滤膜技术分离纯化当归补血汤的工艺,并且考察当归分别和黄芪、红芪配伍后对其主要有效成分的影响。方法:采用不同截留分子量的膜,对工艺参数进行正交设计,以当归补血汤中的主要活性成分阿魏酸和芒柄花素为指标,考察不同膜及工艺参数对膜分离效果的影响。结果:截留相对分子质量为100KD的膜具有较好的膜分离效果,选择压力0.04MPa、料液温度40℃、进料体积流量12L/min的操作参数工作效率更高。当归∶黄芪(1∶5)配伍主要有效成分阿魏酸和芒柄花素的含量低于当归∶红芪(1∶5)配伍中阿魏酸和芒柄花素的含量。结论:利用膜分离工艺制备的当归补血汤,能更好的分离纯化其有效成分,提高有效成分的含量。当归与红芪配伍要好于当归与黄芪配伍。     

不同配伍比例当归补血汤化学成分及促血管新生作用比较

目的研究不同配伍比例对当归补血汤化学成分和促血管新生作用的影响。方法采用高效液相色谱法测定不同配伍比例当归补血汤中的主要化学成分阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素含量;采用转基因斑马鱼模型比较不同配伍比例当归补血汤的促血管新生作用。结果随着黄芪含量的增加,不同配伍比例煎液指标成分综合得分有上升趋势,且在黄芪与当归之比为8∶2与5∶1时综合得分最高。对于斑马鱼血管损伤模型,血管恢复率排名前3位的配比分别是黄芪与当归之比为5∶1、6∶1和2∶1。结论从化学成分及促血管新生疗效综合分析,黄芪与当归经典配伍比例(5∶1)好于其他比例。     

黄芪和当归的主要活性成分配伍促进衰老造血干细胞增殖作用的研究

目的探讨黄芪和当归的主要活性成分黄芪甲苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷和阿魏酸配伍对衰老造血干细胞(HSCs)增殖的影响,并从细胞周期调控研究其作用机制。方法以三丁基过氧化氢(T-BHP)构建小鼠HSCs衰老模型,研究不同质量浓度5种活性成分对HSCs衰老和增殖的影响,寻找可促进细胞增殖的主要活性成分。在此基础上,采用正交试验研究5种活性成分配伍对HSCs衰老和增殖的影响,寻找5种活性成分促进细胞增殖的合理配伍。最后,采用HSCs衰老模型,制备黄芪-当归1∶1配伍含药血浆,设立对照组、模型组、空白血浆组、阿魏酸组、黄芪甲苷组、芒柄花素组、毛蕊异黄酮组、毛蕊异黄酮苷组、活性成分配伍组、黄芪-当归1∶1含药血浆组,药物作用于衰老细胞,以SA-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法测定HSCs衰老率,CCK-8法测定细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blotting法检测Cyclin D1、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达。结果阿魏酸、黄芪甲苷、芒柄花素均可显著促进衰老HSCs增殖和降低细胞衰老率,而毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷单独应用对HSCs增殖和细胞衰老率无显著影响。正交试验发现,以阿魏酸、芒柄花素和黄芪甲苷为基础因子,毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮苷为次要因子进行配伍的5种活性成分组合促细胞增殖和降低细胞衰老率的作用最强。阿魏酸、黄芪甲苷、芒柄花素、活性成分配伍、含药血浆均可降低细胞衰老率,使G0/G1期细胞减少,G2/M+S期细胞增加,并使Cyclin D1和CDK4蛋白表达增强。以上效应以活性成分配伍组和含药血浆组最强。结论黄芪和当归的主要活性成分阿魏酸、黄芪甲苷和芒柄花素对衰老HSCs具有促增殖和改善衰老作用,而毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮苷单用时并无明显的作用。当5种活性成分配伍后对衰老HSCs的促增殖作用最强,并可改善HSCs衰老,促进衰老HSCs由静止期向增殖期转换。黄芪和当归的主要活性成分及其配伍促HSCs增殖和抗HSCs衰老的作用可能与调节细胞周期相关蛋白表达及促进细胞周期转换有关。     

不同剂量配伍对黄芪-当归中5种化学成分的影响

目的:采用UPLC-MS研究黄芪-当归不同剂量配伍药液及小肠吸收液中5种化学成分(阿魏酸、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷)的含量变化,为二者的临床配伍用药提供参考。方法:利用水提法制备黄芪-当归不同剂量配伍的药液,运用大鼠外翻肠囊法进行药物吸收试验制备药物的小肠吸收液,通过UPLC-MS测定药液和小肠吸收液中5种成分的含量,流动相0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0.4 m L·min-1,进样量1μL,毛细管电压4 k V。结果:黄芪-当归以10∶1和5∶1配伍时,5种成分的溶出量大多与理论值相近;当黄芪-当归以1∶1和1∶5配伍时,5种成分的溶出大多高于理论值。黄芪-当归10∶1和5∶1配伍时,相应质量浓度小肠吸收液中毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷和阿魏酸吸收率大多数高于单用黄芪和单用当归;黄芪-当归1∶1和1∶5配伍时,相应质量浓度小肠吸收液中5种成分的吸收率大多数高于单用黄芪和单用当归。结论:黄芪-当归以1∶1和1∶5配伍时可促进药物中大多数成分的溶出,且黄芪和当归不同剂量配伍时可不同程度地促进大多数成分的吸收。     

当归补血汤化学成分、药理作用、临床应用的研究进展及质量标志物的预测分析

当归补血汤为经典的气血双补名方,主治老疲内伤、气弱血虚、阳浮外越。现代药理学研究表明其具有促进造血、调节免疫、保护心脑血管等作用,临床多用于治疗多种原因所致之贫血等血液系统疾病、心脑血管系统疾病及肿瘤等。该方由黄芪一两、当归二钱组成,芪归用量为5∶1,是现代复方研究补气生血的代表方剂。该文在对当归补血汤的化学成分、药理作用及临床应用研究近况进行综述的基础上,结合中药质量标志物"五原则"——传递与溯源、特有性、有效性、可测性及复方配伍环境对当归补血汤的质量标志物(Q-marker)进行预测分析。结果提示毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花苷、黄芪甲苷、阿魏酸、藁本内酯可作为当归补血汤的Q-marker,为后续建立完整的当归补血汤质量体系提供参考。     

当归的炮制对当归补血汤中活性成分的影响

当归补血汤为金元四大家之一的李东垣所创,至今已有近800年的历史,由当归与黄芪两味中药按照质量比1∶5组成,具有补气生血的功效。主治血虚发热或妇女经期、产后血虚发热头痛之症。原方中当归要用酒制(酒洗)才可入药。然而现代研究中,不论是当归补血汤方剂还是由此衍生的成药,如当归补血丸、当归补血胶囊、当归补血口服液中,当归都没有要求炮制使用。当归所含阿魏酸、藁本内酯、当归多糖,黄芪中所含黄芪甲苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、黄芪多糖为当归补血汤中补血的有效成分[1,2]。为探讨酒制当归对该方剂的影响,本实验对当归炮制前后当归补血…     

HPLC-DAD-ELSD法测定补阳还五汤中8个活性成分含量

目的建立高效液相色谱-二极管阵列检测器-蒸发光散射检测器(HPLC-DAD-ELSD)法同时测定补阳还五汤中羟基红花黄色素A、芍药苷、毛蕊异黄酮苷、阿魏酸、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素和黄芪甲苷8个活性成分含量的方法。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm), 以乙腈-0.1%甲酸为流动相, 梯度洗脱, 流速1.0 ml/min, 柱温30 ℃, 检测波长230 nm(芍药苷)、254 nm(毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素)、322 nm(阿魏酸)和403 nm(羟基红花黄色素A), 蒸发光散射检测器漂移管温度60 ℃, 载气流速1.6 L/min。结果羟基红花黄色素A、芍药苷、毛蕊异黄酮苷、阿魏酸、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素和黄芪甲苷分离度良好, 线性关系符合要求(r=0.994 0～0.999 9), 平均回收率为97.8%～101.4%, RSD为1.28%～3.70%。结论该方法简便、稳定、重复性良好, 可用于补阳还五汤的质量控制。     

指纹图谱结合化学计量法研究广陈皮对黄芪-葛根药对化学成分的影响

目的比较广陈皮对黄芪-葛根药对化学成分的影响,从化学角度探讨广陈皮配伍黄芪-葛根药对的协同增效作用。方法制备6种配比的黄芪-葛根-广陈皮药液,建立广陈皮与黄芪-葛根药对不同配比水煎液指纹图谱,对特征峰面积进行主成分分析,确定变量投影重要度(VIP)>1的差异变量(特征峰),并采用高效液相色谱(HPLC)法对其进行含量测定。结果黄芪-葛根药对(30∶10)与黄芪、葛根、广陈皮(30∶10∶5)配比的OPLS-DA分析结果显示,VIP>1的差异变量由大到小排序:芒柄花素、大豆苷元、毛蕊异黄酮、3-OH葛根素、染料木苷、葛根素,其中芒柄花素、大豆苷元、毛蕊异黄酮在两组药液中有明显差异(P<0.01,VIP>1.2)。含量测定结果显示,随着广陈皮的比例增加,芒柄花素、大豆苷元、毛蕊异黄酮含量呈现先增加后减少的趋势,其中以黄芪、葛根、广陈皮比例为30∶10∶5时含量最高。黄芪、葛根、广陈皮(30∶10∶5)配比和黄芪-葛根药对(30∶10)的药液中芒柄花素、大豆苷元、毛蕊异黄酮含量比分别为1.55∶1、1.39∶1、1.53∶1。结论广陈皮配伍黄芪-葛根药对有协同增效作用,黄芪、葛根、广陈皮的最佳配比为30∶10∶5。     

HPLC-DAD-ELSD测定不同产地黄芪中2种成分的含量

目的:采用HPLC-DAD-ELSD同时测定不同产地黄芪中黄芪甲苷、芒柄花素含量。方法:采用HPLC-DAD-ELSD串联技术,检测波长:265nm;流动相:A水,B乙腈;流速:1mL·min~(-1);柱温:35℃;进样量:20μL;增益值:20;漂移管温度:60℃;加热器级别:60%,载气压力:35PSI。结果:黄芪甲苷在0.1～1.6mg·mL~(-1),峰面积对数和浓度对数呈良好的线性关系;芒柄花素在0.02～0.32mg·mL~(-1),峰面积和浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9997、0.9999,各方法学指标和加样回收率均符合要求。结论:本方法重复性良好,结果准确可靠,可用于黄芪中两种不同类型成分的含量测定。     

UPLC同时测定4种酶定向炮制黄芪中的6种黄酮类成分含量

目的:建立黄芪中6种黄酮类成分的含量测定方法,研究4种酶(复合酶、植物纤维素酶、蜗牛酶及β-葡萄糖苷酶)定向炮制对黄芪中黄酮苷类成分及其苷元含量的影响。方法:采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液梯度洗脱,检测波长260 nm,流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃,进样量2μL。结果:6种成分毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、黄芪紫檀烷苷、美迪紫檀素的分离度良好,在各自线性范围内线性关系良好(R2≥0.9985),精密度、稳定性、重复性试验的RSD均<5.0%;平均加样回收率97.62%~101.13%,RSD 1.4%~2.7%。在0.5 g·L^-1酶溶液水平,毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、黄芪紫檀烷苷、美迪紫檀素在复合酶制黄芪中的质量分数分别为0.0820,0.3359,0.0559,0.1049,0.0150,0.0097 mg·g^-1,在纤维素酶制黄芪中的质量分数分别为0.1057,0.3642,0.0702,0.1174,0.0208,0.0125 mg·g^-1,在蜗牛酶制黄芪中的质量分数分别为0.0314,0.5100,0.0435,0.2109,0.0130,0.0130 mg·g^-1,在β-葡萄糖苷酶制黄芪中的质量分数分别为0.0853,0.3124,0.0615,0.1108,0.0058,0.0096 mg·g^-1。结论:黄芪经4种酶炮制后,除黄芪紫檀烷苷外,毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷的含量均降低,但这3种黄酮苷类成分所对应苷元的含量均显著增加。该方法操作简便、准确、重复性好,适用于黄芪中6种黄酮类成分的含量测定,可为黄芪的酶定向炮制研究提供参考。     

HPLC-ELSD同时测定当归补血总苷中黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅱ

目的 建立HPLC-ELSD测定当归补血总苷(黄芪、当归)中的黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅱ的方法.方法 色谱柱Kromail C18(4.6mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水(37.5∶62.5);体积流量0.8 mL/min;ELSD参数:漂移管温度100℃;N2气流体积流量2.60 L/min.结果 黄芪甲苷在0.85 ～6.76 μg之间呈良好的线性关系(r=0.999 2),平均回收率为98.8％,RSD为1.50％.黄芪皂苷Ⅱ在1.05～8.4 μg之间呈良好的线性关系(r=0.999 4),平均回收率为95.7％,RSD为2.70％.结论 该法精密度、重复性良好,简便、快速、准确,适用于当归补血总苷中黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ的测定.     

黄芪薄层鉴别方法的改进

目的:改进黄芪的薄层鉴别方法。方法:以黄芪甲苷、芒柄花素、芒柄花苷和黄芪对照药材为对照,对黄芪药材进行了薄层鉴别条件的研究,改进了原标准的供试品前处理方法和展开系统。结果:薄层色谱斑点清晰,黄芪甲苷、芒柄花素和芒柄花苷的分离度好,Rf值适当。结论:所建立的黄芪薄层鉴别方法可以同时鉴别黄芪中的黄芪甲苷、芒柄花素和芒柄花苷,操作简单、耐用性佳,可替代原标准用于黄芪的鉴别。     

甘肃不同产地及不同生长年限红芪和黄芪中4种异黄酮类成分的含量对比

目的:建立甘肃红芪和黄芪药材中4种异黄酮类成分含量测定的方法,比较甘肃不同产地一年生、二年生红芪和黄芪中4种异黄酮类成分含量。方法:以毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素为对照品,采用HPLC法,Agilent Eclipse-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱,在254 nm处检测。结果:毛蕊异黄酮苷在2.25~0.005 625μg(r=0.999 7),芒柄花苷在2.22~0.111μg(r=0.999 4),毛蕊异黄酮在0.112~0.001 12μg(r=0.999 9),芒柄花素在1.68~0.001 68μg(r=0.999 8)与峰面积呈良好的线性关系。红芪和黄芪的平均加样回收率均在95%~105%,RSD均3%(n=6)。结论:该研究建立的红芪和黄芪中4种异黄酮类成分含量测定方法简便、准确、重复性好,可用于甘肃地区红芪和黄芪中4种异黄酮类成分含量测定及其对比研究。从4种异黄酮类成分含量分析,一年生、二年生红芪质量相当,一年生黄芪优于二年生,且黄芪质量优于红芪。红芪最佳产区为武都,黄芪最佳产区为宕昌。甘肃地区红芪芒柄花素含量高于黄芪,黄芪毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷含量高于红芪。在开发和利用甘肃红芪和黄芪时,应根据二者异黄酮含量各自优势有所选择,二者不适合替代使用。     

当归补血汤中4种成分在大鼠血浆中的药动学研究

目的考察当归补血汤中阿魏酸、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素、黄芪甲苷在大鼠血浆中的药动学。方法UPLC⁃MS/MS法测定4种成分含有量,分析采用Waters BHE C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相0.1%甲酸⁃乙腈,梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;柱温30℃。大鼠灌胃给予药物冻干粉溶液,于不同时间点采血,DAS 3.0软件拟合血药浓度⁃时间曲线,计算药动学参数。结果阿魏酸、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素、黄芪甲苷在各自范围内线性关系良好(r≥0.9951),提取回收率91.42%~124.83%。四者Cmax分别为312.30、799.39、149.19、120.46 ng/mL,Tmax分别为19.29、21.43、53.57、70.71 min,t1/2分别为192.37、173.95、185.34、408.77 min,AUC0~t分别为19220.97、111546.04、29073.89、18401.73μg/(L·min),AUC0~∞分别为20136.85、118807.61、34089.10、19921.64μg/(L·min)。结论该方法快速、灵敏、准确,可为当归补血汤临床应用和质量监控提供参考。     

UPLC-MS同时测定黄芪中10种化合物含量

目的:建立UPLC-MS法同时测定黄芪中黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、刺芒柄花素、7,2′-二羟基-3′,4′-二甲基异黄烷、3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷10种化合物的含量。方法:采用Phenomenex Kinetex C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相为0.1%甲酸溶液(A)-含0.1%甲酸的乙腈(B);ESI负离子模式扫描。结果:10个化合物在各自浓度范围内线性关系良好(R~2≥0.9990),平均加样回收率为96.6%～104.5%。不同批次的黄芪中化学成分含量不同,部分成分含量之间有相关性。结论:该方法简便准确,重复性好,可为黄芪植物的鉴定和质量标准完善提供科学依据。     

硫磺熏蒸对黄芪中黄酮类和皂苷类成分的影响

目的测定硫磺熏前后黄芪中黄酮类和皂苷类成分的变化,确定硫磺熏对黄芪药材质量的影响,为评价熏硫加工对黄芪质量的影响提供依据。方法对收集的黄芪进行熏硫加工,采用HPLC-DAD法测定了毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素4种黄酮成分,UPLC-ELSD法测定了黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷4种皂苷成分。结果硫磺熏过的黄芪药材中毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷含量降低,毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪皂苷I、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷的含量变化不明显。结论黄芪熏硫加工后,黄酮苷成分有所降低,其余成分变化不明显。     

当归补血汤颗粒中黄芪甲苷和黄芪多糖的含量测定

目的:探讨当归补血汤颗粒中黄芪甲苷和黄芪多糖的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定黄芪甲苷的含量,采用苯酚-硫酸比色法测定黄芪多糖的含量,旨在为自制的当归补血汤颗粒质量评价奠定基础。结果:黄芪甲苷和黄芪多糖的平均回收率分别为97.64%,97.61%,RSD分别为2.10%,3.20%。结论:采用高效液相色谱法测定黄芪甲苷的含量,高效液相色谱法能实现黄芪甲苷与有关物质的有效分离,黄芪甲苷峰形好,含量测定结果重复性好;所用测定黄芪多糖含量的苯酚-硫酸比色法,具有准确可靠、灵敏度高、重现性好等优点,可用于评价当归补血汤颗粒质量的有效方法。     

基于一测多评法对不同生长年限黄芪中黄酮类成分的分析研究

目的:建立一测多评法同时测定不同生长年限黄芪药材中4种黄酮类成分的含量。方法:采用Phenomenex Luna C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;柱温为30℃;流速为1.0 mL/min。以芒柄花素为参照物计算毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷和毛蕊异黄酮的相对校正因子,测定不同生长年限样品中黄酮类成分的含量。结果:毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮含量QAMS测定结果与外标法测定结果的相对误差2.5%,表明QAMS测定方法可行。黄芪样品中4种黄酮总量及毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量随着生长年限的增加而升高,但是春季和秋季采挖的黄芪样品中各成分含量相似。结论:一测多评法可用于黄芪黄酮类成分毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷和芒柄花素的含量测定,黄芪药材生长年限越长,黄酮类成分含量越高。     

高效液相色谱法测定黄芪精口服液中芒柄花素的含量

目的:建立黄芪精口服液中芒柄花素的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(rom asil 5-C18,250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(60:40);流速:1m l.m in-1;检测波长:249 nm。结果:芒柄花素在0.02~0.36μg范围内,其进样量与峰面积呈良好线性关系。芒柄花素的平均回收率为99.14%,RSD=0.87%。结论:该方法准确,重复性好,可对该制剂进行含量测定及质量控制。