TAK1对糖尿病肾病大鼠MAPK及NF-κB信号通路的调节作用及肾脏保护机制

[摘 要] 目的：探讨TAK1对糖尿病肾病大鼠肾脏组织MAPK及NF-κB信号通路的调节作用。方法：将48只大鼠按照随机数字表法分为DN组、TAKl组和对照组,每组16只,对照组大鼠正常喂养,DN组、TAKl组建立DN大鼠模型,DN大鼠模型建立后,TAKl组腹腔注射TAKl抑制剂5Z-7-oxozeaenol;每组分别于4周、8周时处死8只大鼠,观察各组大鼠肾脏组织病理变化,酶联免疫吸附试验检测血清TNF-α、MCP-1、IL-1β表达,免疫印迹法检测肾脏组织p38MAPK、NF-κBp63蛋白表达,实时荧光定量PCR检测肾脏组织p38MAPK、NF-κBp63 mRNA表达。结果：4周、8周时,对照组大鼠毛发有光泽,行动自如,进食、饮食正常;DN组大鼠出现明显多尿、多饮、多食、偏瘦,毛发杂乱且无光泽,大鼠行动偏少;TAKl组亦有DN组大鼠表现,但症状较DN组明显减轻。4周、8周时,DN组、TAKl组大鼠体质量、血糖、UAER均显著高于对照组（P＜0.05）,DN组大鼠体质量、UAER显著高于TAKl组（P＜0.05）。DN组、TAKl组血清TNF-α、MCP-1、IL-1β水平显著高于对照组（P＜0.05）,DN组大鼠血清TNF-α、MCP-1、IL-1β水平显著高于TAKl组（P＜0.05）;DN组、TAKl组p38MAPK、NF-κBp63蛋白及mRNA表达水平显著高于对照组（P＜0.05）,其中DN组p38MAPK、NF-κBp63蛋白及mRNA表达显著高于TAKl组（P＜0.05）。结论：TAK1通过激活MAPK及NF-κB信号通路来诱导炎症反应,并参与糖尿病肾脏损伤;TAK1抑制剂能够下调炎症因子的表达和释放而发挥抗炎作用。     

当归补血汤对糖尿病肾病大鼠PERK通路的影响

[目的]通过观察当归补血汤干预糖尿病肾病(DN)大鼠的葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核生物翻译起始因子2α(eIF2α)表达的变化,探讨其对防治DN的作用机制。[方法]实验设对照组、模型组、格列齐特组、当归补血汤低剂量组(低剂量组)、当归补血汤高剂量组(高剂量组),每组10只大鼠。以腹腔注射链脲佐菌素(STZ)联合高脂饲料建立DN大鼠模型,连续喂养8周,光镜和电镜观察肾脏结构变化,酶偶联比色法测血脂、血糖、肾功能相关指标;免疫组化和Western Blot测肾组织中GRP78、PERK、eIF2α蛋白的表达,Real-time PCR测GRP78的m RNA表达。[结果]模型组大鼠一般情况差,肾功能明显受损,肾脏结构严重损伤,GRP78、PERK、eIF2α蛋白及m RNA的表达明显高于对照组;当归补血汤治疗后肾功能及肾结构改善,GRP78、PERK、eIF2α的蛋白及m RNA表达明显下降,高剂量组下降更明显,呈浓度依赖性。[结论]当归补血汤能抑制模型组大鼠肾脏GRP78、PERK、eIF2α的表达,缓解内质网应激,具有保护肾功能作用。     

TAK1抑制剂对糖尿病大鼠MAPK与NF-κB信号通路的影响及其对肾脏保护机制

目的探讨TAK1抑制剂对糖尿病大鼠MAPK及NF-κB信号通路的影响及其对肾脏的保护机制。方法将48只大鼠按照随机数字表法分为DN组、TAK1组和对照组,每组16只。对照组大鼠正常喂养,不做任何处理;DN组、TAK1组通过向大鼠腹腔注射1%50 mg/kg STZ建立DN大鼠模型。每组分别于4周、8周时处死8只大鼠,观察各组大鼠肾脏组织病理变化,检测血清TNF-α、MCP-1、IL-1β表达,肾脏组织p38MAPK、NF-κBp63蛋白表达及p38MAPK、NF-κBp63 mRNA表达。结果 4周、8周时,DN组、TAK1组大鼠体质量、血糖、UAER均显著高于对照组(P0.05),DN组大鼠体质量、UAER显著高于TAK1组(P0.05)。DN组、TAK1组血清TNF-α、MCP-1、IL-1β水平显著高于对照组(P0.05),DN组大鼠上述指标高于TAK1组(P0.05);DN组、TAK1组p38MAPK、NF-κBp63蛋白及mRNA表达水平显著高于对照组(P0.05),其中DN组上述指标高于TAK1组(P0.05)。结论 TAK1通过激活MAPK及NF-κB信号通路来诱导炎症反应,并参与糖尿病肾脏损伤;TAK1抑制剂能够下调炎症因子的表达和释放而发挥抗炎作用。     

硝基酪氨酸对糖尿病肾病大鼠肾脏NF-κB、MCP-1 及TGF-β1表达的影响

目的观察硝基酪氨酸（NT）对糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏核因子-κB（NF-κB）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和转化生长
因子-β1（TGF-β1）表达的影响,探讨其在DN发生发展中的作用机制。方法用链脲佐菌素腹腔注射法建立DN大鼠模型,造模
成功的大鼠随机分3组：DN模型组、DN+NT组和DN+NT+Ebselen组（NT抑制剂）,另设正常对照组。各组分别干预8周后,观
察24 h尿蛋白定量变化,采用免疫组织化学染色检测肾脏组织NF-κB、MCP-1及TGF-β1蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检
测肾组织NF-κB、MCP-1及TGF-β1 mRNA表达,光镜观察肾脏病理改变。结果与DN模型组比较,DN+NT组大鼠24 h尿蛋
白定量、肾脏组织中NF-κB、MCP-1和TGF-β1的蛋白及mRNA水平均显著增加,肾脏病理改变加重;NT抑制剂Ebselen可明显
减轻这些变化。结论硝基酪氨酸可上调DN大鼠肾脏组织NF-κB、MCP-1及TGF-β1 蛋白及其mRNA的表达,加重炎性反应,
促进DN的进展。
     

当归补血汤对ox-LDL激活RAW264.7细胞核转录因子-κBp65蛋白表达的影响

目的 通过当归补血汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)激活单核细胞核转录因子-κBp65(NF-κBp65)信号转导通路的作用研究,探讨当归补血汤早期阻断动脉粥样硬化病变发展进程的可能性及其机理.方法 新西兰大耳白兔随机分为对照血清组、含药血清组,分别灌胃生理盐水和当归补血汤药液制备血清.将RAW264.7细胞悬液接种于培养瓶中,培养24 h,分为空白对照组、ox-LDL组、抑制剂组、含药血清组,除空白对照组外其余各组均加入100 mg/L ox-LDL刺激细胞.孵育4 h,收集细胞.免疫组化法检测NF-κBp65的表达,免疫印迹法检测RAW264.7细胞中NF-κBp65的蛋白活化量.结果 ox-LDL组细胞浆和核内可见大量棕黄色阳性颗粒,含药血清组棕黄色阳性颗粒较少;ox-LDL组蛋白条带灰度比值为1.288 3±0.013 9,含药血清组为0.918 9±0.015 3,与ox-LDL组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 当归补血汤可下调经ox-LDL刺激后RAW264.7细胞中NF-κBp65的蛋白表达及活化,因此阻断NF-κB信号转导通路可能是当归补血汤抗动脉粥样硬化的作用机理之一.     

芪莲汤颗粒剂对实验性糖尿病肾病大鼠肾组织NF-κB及MCP-1表达的影响

目的 观察芪莲汤颗粒剂对实验性糖尿病肾病大鼠(diabetic nephropathy, DN)肾组织内核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)表达的影响,探讨芪莲汤颗粒剂对糖...     

当归补血汤对氧化低密度脂蛋白激活RAW264.7细胞中核转录因子-κBp65 mRNA表达的影响

【目的】观察当归补血汤含药血清对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)激活小鼠单核细胞系RAW264.7细胞中核转录因子-κBp65(NF-κBp65)mRNA表达的影响。【方法】将新西兰兔8只随机分为空白血清组和含药血清组,每组各4只,分别灌胃生理盐水和当归补血汤水煎液(剂量为8.4g·kg-1·d-1),分离血清。将RAW264.7细胞悬液接种于培养瓶中,培养24h,分为空白对照组、Ox-LDL组、PAR组(终浓度为10μmol/L的小菊白内酯)、体积分数10%的含药血清组。除空白对照组外,其他各组分别加入100μg/mLOx-LDL刺激4h,收集细胞。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞NF-κBp65 mRNA的表达量。【结果】Ox-LDL组与空白对照组比较,NF-κBp65 mRNA的表达量增加(P0.05);含药血清组与Ox-LDL组比较,NF-κBp65 mRNA的表达量减少(P0.05)。【结论】当归补血汤含药血清能下调NF-κBp65 mRNA的表达量,抑制、阻断NF-κBp65的表达可能是当归补血汤抗动脉粥样硬化的作用机制之一。     

高同型半胱氨酸血症对球囊损伤大鼠颈动脉核转录因子和单核细胞趋化因子蛋白-1表达的影响

目的 观察高蛋氨酸饮食诱导的高同型半胱氨酸(Hcy)血症对大鼠颈动脉球囊损伤后血管组织核转录因子(NF-κBP65)蛋白及单核细胞趋化因子蛋白-1(MCP-1)表达的影响,探讨血管成形术后Hcy对新内膜增生的可能机制.方法 采用免疫组织化学方法分别检测血管组织NF-κB P65蛋白和MCP-1蛋白表达.结果 低及高蛋氨酸组血管组织NF-κB P65蛋白和MCP-1蛋白的表达[分别为(12.32±2.37)μmol/L,(21.33±4.32)μmol/L和(26.32±3.34)panol/L,(33.35±3.87)μmol/L]均高于对照组[(5.17±1.49)μmoL/L,(15.78±2.13)μmol/L](P<0.05,P<0.01),高蛋氨酸组血管组织NF-κB P65蛋白和MCP-1蛋白表达与低蛋氨酸组比较也有明显差异(P<0.05);而且血管组织MCP-1蛋白表达与NF-κB P65蛋白的表达呈显著正相关(r=0.643,P<0.01).结论 高Hcy血症能使球囊损伤后颈动脉组织NF-κB P65、MCP-1蛋白过度表达;推测同型半胱氨酸有可能通过激活NF-κB通路上调血管内皮损伤后动脉组织MCP-1蛋白的表达,这可能是其促进血管成形术后新内膜过度增生的机制之一.     

温脾汤对大鼠残余肾组织中核转录因子-κB/IκB表达的影响

目的了解5/6肾切除大鼠残余肾组织核转录因子κappaB(NF-κB/IκBα)的表达与肾功能损害的关系,并观察温脾汤对NF-κB/IκBα的影响。方法采用5/6肾切除方法建立肾纤维化大鼠模型,以NF-κB p65亚基单抗及IκBα多抗为一抗,采用二步法免疫组化染色检测大鼠残余肾脏中NF-κB p65/IκBα的表达,结合血清肌酐、尿素氮、24 h蛋白尿等肾功能指标及肾脏病理损害情况,分析它们在肾脏损害中的作用,在此基础上阐明温脾汤肾保护作用与核转录因子-κB/IκB的关系。结果模型组肾组织中NF-κB p65的表达较正常组织显著增高,与尿蛋白及血肌酐增高呈正相关关系,而IκBα表达明显低于正常肾组织。与模型组相比,温脾汤可上调IκBα的表达,抑制NF-κB p65的过度活化。结论温脾汤能减轻5/6肾切除对大鼠肾功能的损伤,这一作用与其能降低肾组织NF-κB表达的异常增强有关。     

当归补血汤对内质网应激特有Caspase-12凋亡途径影响

目的:研究当归补血汤对内质网应激特有的Caspase-12凋亡途径的影响,探讨当归补血汤对肾脏的保护机制。方法:60只SD大鼠腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)结合高脂高糖饮食建立大鼠糖尿病肾病模型(DN),喂养8周后,观察大鼠的毛色、精神状态等一般状态;酶偶联比色法检测尿蛋白、BUN、尿肌酐等反应肾功能的相关指标;光镜观察其肾脏病理变化;RT-PCR、western Blot及免疫组化检测GRP78、Caspase-12的蛋白及m RNA表达水平;TUNEL检测肾组织细胞凋亡情况。结果:DN组大鼠空腹血糖、尿蛋白、BUN等明显升高,肾功能受损严重,肾脏组织GRP78、Caspase-12的蛋白及m RNA含量增加,光镜下肾脏结构病变明显,肾组织细胞凋亡率增高;当归补血汤治疗后肾功能损伤减轻,GRP78、Caspase-12的蛋白及m RNA含量降低,光镜下肾组织病变改善,大鼠肾组织凋亡率降低。结论:当归补血汤能抑制内质网应激特有Caspase-12凋亡途径,改善糖尿病肾病大鼠肾功能,减少肾组织过度凋亡。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸酯及吡格列酮保护糖尿病大鼠肾脏机制的实验研究

目的探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)及吡格列酮(PIO)对糖尿病大鼠肾脏保护作用及机制。方法链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型组大鼠40只,随机分为糖尿病未治疗组(DM组),PDTC治疗组(P组),吡格列酮治疗组(PIO组)和PDTC联合PIO治疗组(P+P组),正常大鼠作为对照组(NC组)。8周后测定血糖、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、24h尿蛋白(24hUP)及肾重指数(KI);银染观察肾病理改变及免疫印迹测定肾脏NF-κBp65、MCP-1表达。结果①与NC组比,DM组及各治疗组KI、血糖、BUN、Scr、24hUP、ECM堆积指数及NF-κBp65和MCP-1表达均明显增加,体重显著减轻(均P0.01);②与DM组比,各治疗组KI、血糖、BUN、Scr、24hUP、ECM堆积指数均明显降低,体重显著增加(均P0.05或P0.01);NF-κBp65、MCP-1表达明显降低并与肾病理及功能改变呈正相关(P0.01);③与P组、PIO组比较,P+P组上述指标改善更明显,NF-κBp65和MCP-1表达进一步下降,肾病理及功能改善更明显(除了P+P组血糖与PIO组比,P0.05,余均P0.01;)。结论糖尿病大鼠肾组织NF-κBp65和MCP-1表达明显增加,PDTC和PIO对DM大鼠肾脏均有保护作用;二者联用较单药效果更好,其机制可能与抑制NF-κB活性,下调MCP-1表达有关。     

核转录因子NF-κB对血管损伤和新生内膜形成的影响

目的探讨核转录因子NF-κB的反义和诱骗性寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖以及大鼠颈动脉球囊损伤后血管新生内膜的作用。方法原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞。检测增殖的平滑肌细胞内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和NF-κB蛋白水平。制作大鼠血管球囊损伤模型。SD大鼠126只,随机分为7组,每组分为6个时间点(6 h和1、3、5、7、14 d),每个时间点3只大鼠。检测血管球囊损伤后新生内膜形成以及单核细胞化学趋化因子(monoaytes chemotactic protein-1,MCP-1)、NF-κBp65和细胞外信号调节激酶(extra cellular signal regulated kinase 2,ERK2)的表达水平。结果增殖的平滑肌细胞PCNA和NF-κBp65蛋白水平表达增加。增殖的平滑肌细胞质、细胞核内均有NF-κBp65的基因表达。NF-κB p65反义和诱骗寡核苷酸抑制PCNA表达。大鼠血管球囊损伤后第5天,正义组、诱骗对照组、模型组内膜面积、中膜面积和内膜／中膜比值显著升高(P<0．05), 7 d后达到高峰。反义组、诱骗组和反义加诱骗组显著降低内膜与中膜比值。RT-PCR显示球囊损伤后6 h, MCP-1 mRNA表达明显增加,1 d后表达减少,3、5、7 d MCP-1 mRNA持续而明显的表达增强,14 d后略为降低。反义组、诱骗组、反义加诱骗组在各时间点均能减少MCP-1 mRNA表达。Western Blot检测显示血管球囊损伤后6 h, NF-x Bp65、ERK2蛋白表达微弱, 1 d后ERK2蛋白表达略增强,NF-κB的蛋白合成明显增强。7 d后p65、ERK2的蛋白合成达到高峰。第14天, ERK2与p65的蛋白合成较第7天减弱。反义组、诱骗组、反义加诱骗组较模型组、正义组、诱骗对照组各时间点蛋白合成均减弱。结论增殖的平滑肌细胞NF-κBp65基因表达增加,NF-κB调控MCP-1的基因表达和蛋白质水平。血管球囊损伤后,血管平滑肌细胞增殖有动态性变化。局部转染NF-κB反义和诱骗寡核苷酸能抑制所调控靶基因的表达。     

NF-κB核酸对大鼠血管平滑肌细胞炎症反应和凋亡的影响

目的探讨NF-κB核酸对增殖的血管平滑肌细胞炎症反应和凋亡的影响.方法大鼠胸主动脉平滑肌细胞传代培养,实验共分六组.阳离子脂质体转染法将NF-κB寡核苷酸导入血管平滑肌细胞,检测细胞凋亡、细胞内NF-κBp65基因表达以及ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白合成情况.结果血管平滑肌细胞转染NF-κB反义或诱骗寡核苷酸后,细胞凋亡增强,凋亡时间延长.反义组NF-κBp65蛋白质表达较正义组降低(P<0.05);反义+诱骗联合干预并未优于反义组单独治疗,但与诱骗组相比NF-κBp65的蛋白质表达降低(P<0.05).反义组、诱骗组的ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白质表达较相应的对照正义组、诱骗对照组均降低(P<0.05).结论 NF-κB的反义和诱骗寡核苷酸均能抑制血管平滑肌细胞ICAM-1、VCAM-1、MCP-1的蛋白质表达,抑制血管平滑肌细胞增殖,使细胞凋亡增强;NF-κB反义寡核苷酸及反义+诱骗寡核苷酸联合干预可减少NF-κB生成.     

核因子-κBp65与大鼠糖尿病肾病的相关性研究

目的 探讨糖尿病大鼠肾组织核因子-κBp65（nuclear factor-κB,NF-κB p65）的表达和肾功能损害的关系.方法 实验动物随机分为2组：正常对照组和模型组,用链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）制造大鼠糖尿病模型,在模型成功后分别于4、8、12周处死大鼠,留取肾标本和血液标本.用化学比色法测定血清中的肌酐、尿素氮含量.用免疫组化染色法检测各组肾组织NF-κB p65表达水平,并分析其与尿蛋白及肾功能的关系.结果 模型组血糖、肌酐、尿素氮、NF-κBp65表达均显著高于NC组.结论 NF-κBp65可能在糖尿病肾病发生中有重要作用.肾组织中NF-κBp65的表达可作为反映进行性肾损害的指标.     

活性维生素D3抗炎机制对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

[摘要] 目的 探讨活性维生素D3对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制。方法 实验选用3月龄雄性SD大鼠(清洁级)24只。按随机数字表法分为3组，分别为正常对照组(NC)，糖尿病模型组(DM)，活性维生素D3治疗组(DC)，每组8只。喂养12周后，观测肾组织形态学和肾功能变化，尿白蛋白排泄率等指标的变化，用免疫组化法检测肾脏转化生长因子- 1（TGF- 1）、核转录因子- B （NF- B）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、CD68表达水平的变化，RT-PCR方法检测各组大鼠肾皮质TGF- 1 、NF- B、MCP-1 mRNA表达水平的变化。结果 与正常对照组比较，第12周末糖尿病肾病模型组大鼠的肾脏肥大指数（KW/BW）、平均肾小球体积（MGV）、系膜面积比(FMA)、尿白蛋白排泄率(UAER)、血肌酐(Scr)、均有明显升高(P<0．05)，肾皮质TGF- 1 、NF- B、MCP-1 、CD68的蛋白表达水平也有显著增高(P<0．05)，同时肾组织TGF- 1 、NF- B、MCP-1 mRNA表达水平均明显升高(P<0．05)。活性维生素D3治疗组的上述指标与糖尿病模型组比较，则有明显的降低(P<0．05)。结论 活性维生素D3对于糖尿病肾脏病变至少具有部分保护作用，其机制可能为通过抑制糖尿病大鼠肾脏的TGF- 1 、NF- B、MCP-1等细胞因子的表达，抑制巨噬细胞的聚集，从而经由抗炎机制发挥对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。     

白藜芦醇对高脂鼠肾脏NF-κB和MCP-1表达的影响

目的:探讨白藜芦醇对高脂饲养大鼠肾脏的保护作用及对核因子-κB(NF-κB)活性和单核细胞趋化蛋白质(MCP-1)表达的影响。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、高脂喂养组和白藜芦醇治疗组。喂养16周后,检测各组大鼠的血糖(FPG),甘油三脂(TG),胆固醇(TC),肌酐(Scr),尿素氮(BUN)水平及24h尿蛋白定量(uPro);免疫组织化学法检测肾组织中核因子(NF-κB)和单核细胞趋化蛋白质-1(MCP-1)的表达。结果:白藜芦醇治疗组大鼠体内BS、TG、TC无显著差异;但24 h uPro、Scr、BUN均明显降低,肾组织NF-κB和MCP-1的表达减弱。结论:白藜芦醇可改善高脂大鼠的肾脏功能,可能与其抑制NF-κB活性、降低MCP-1的表达有关。     

核因子-κB及单核细胞化学趋化蛋白-1在慢性阻塞性肺疾病大鼠中的表达

目的：探讨核因子-κB（NF-κB）及其调控的单核细胞化学趋化蛋白-1（MCP-1）在慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型中的表达.方法：36只Wistar大鼠随机分为空白对照组、COPD组、布地奈德治疗组和茶碱治疗组,每组9只;用ELISA法检测各组大鼠外周血单个核细胞（PBMC） NF-κB和MCP-1的表达水平,用免疫组织化学染色和原位杂交技术检测各组大鼠细支气管上皮细胞NF-κB和MCP-1的表达水平.结果：（1）COPD组大鼠PBMC中NF-κB和MCP-1水平以及细支气管上皮细胞NF-κB核染色阳性细胞百分比、MCP-1 mRNA和蛋白表达明显高于正常对照组;（2）布地奈德治疗组和茶碱治疗组大鼠PBMC中NF-κB、MCP-1水平以及细支气管上皮细胞NF-κB核染色阳性细胞百分比、MCP-1 mRNA表达和蛋白表达明显低于COPD组.结论：NF-κB基因及其调控蛋白MCP-1参与了COPD的发病过程,用激素和茶碱治疗后可延缓COPD的发展.     

白藜芦醇对高脂喂养大鼠肾脏的保护作用

织化学检测.结果 与B组比较,C组大鼠体内BS、TG、TC差异没有显著性;而肾组织MDA含量降低,Cu、Zn-SOD及GSH-PX活性升高;肾小球基质面积减小;NF-κB和MCP-1的表达降低.结论 白藜芦醇可改善高脂饲养大鼠的肾脏功能,其机制可能与其抗氧化、抑制NF-κB活性、降低MCP-1的表达有关.     

辛伐他汀对脂多糖诱导人THP-1单核细胞MCP-1表达与NF—κB活化的影响及机制

目的 通过研究辛伐他汀对脂多糖(LPS)诱导人THP-1单核细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达与NF-κB活化的影响,探讨辛伐他汀调控炎症状态下单核细胞MCP-1表达与NF-κB活化的机制.方法 体外培养人THP-1单核细胞,分为对照组、LPS组、辛伐他汀低、中、高浓度组,辛伐他汀3组加入不同浓度(1、5、10 μmol/L)辛伐他汀预孵2h与LPS组均加入LPS刺激24 h.应用Western blot检测各组细胞质蛋白IκBα、NF-κB p65、MCP-1水平与各组细胞核蛋白NF-κB P65水平,ELISA检测各组细胞培养上清MCP-1水平.结果 辛伐他汀呈浓度依赖性抑制LPS诱导人THP-1单核细胞胞质蛋白与培养上清MCP-1增加;辛伐他汀呈浓度依赖性抑制LPS所致人THP-1单核细胞胞质蛋白IκBα与NF-κB P65降低及核蛋白NF-κB P65增加.结论 辛伐他汀抑制LPS诱导人THP-1单核细胞MCP-1表达可能与其抑制NF-κB活化有关;而抑制NF-κB活化可能与其抑制IκBα降解有关.     

神经肽P物质诱导高糖条件下人皮肤成纤维细胞分泌MCP-1的分子机制

目的 探讨神经肽P物质(SP)诱导高糖培养环境中的人皮肤成纤维细胞分泌单核细胞趋化蛋白1 (MCP-1)的分子机制.方法 采用高糖DMEM培养基培养人皮肤成纤维细胞,加入同一浓度(10 nmol/L) SP孵育不同时间,Western blotting检测细胞中核因子κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p-IκBα)和磷酸化NF-κB亚单位p65 (p-NF-κBp65)的表达,免疫荧光方法观测细胞p-NF-κBp65表达和转位情况.将高糖DMEM培养基培养人皮肤成纤维细胞分为对照组、SP组和SP+ NF-κB抑制剂(MG132)组(以MG132预处理细胞60 min),Western blotting检测各组细胞内p-NF-κBp65的表达,ELISA方法测定细胞培养上清液中MCP-1的浓度.结果 随着SP作用时间的延长,成纤维细胞IκBα的表达量显著减少,p-IkBα的表达量显著增加(P＜0.05);同时p-NF-κBp65的表达量在SP作用后显著增加(P＜0.05),并保持递增趋势;免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察证实SP作用后细胞胞核内p-NF-κBp65表达增强.与SP组比较,SP+ MG132组细胞p-NF-κBp65表达及细胞培养上清液中MCP-1浓度均显著降低(P＜0.05).结论 SP促进人皮肤成纤维细胞分泌MCP-1的作用机制可能与NF-κB信号通路激活有关.