培养破骨细胞降钙素受体的免疫组化分析

我们应用Chamber和Boyde等人的方法并加以改良，建立了大鼠破骨细胞体外培养方法，并对培养破骨细胞进行了形态、骨吸收陷窝的观察和酸性磷酸酶（ACP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）及抗酒石酸酸性三磷酸腺苷酶（TrAPas）染色等方面的鉴定，结果均符合破骨细胞的特点［1］。由于降钙素受体是哺乳类动物（鸟类除外）破骨细胞最具有特征的指标[2]，在上述基础上，我们利用免疫组化方法定性测定了培养破骨细胞的降钙素受体。材料和方法动物出生24h内的Wistar大鼠，本校放射医学研究所动物房提供，沪医实验动物准率：34。主要试剂199培养…     

流体剪切力作用下鼠极化破骨细胞的形态变化

目的探讨流体剪切力作用下大鼠极化破骨细胞的形态变化。方法机械分离培养大鼠极化破骨细胞,对破骨细胞鉴定后,采用本课题组白行研制的流体剪切力装置在0．29Pa条件下,观察流体剪切力作用0、15、30、45、60、75、90、105、120min时破骨细胞的形态变化。结果大鼠极化破骨细胞抗泊石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色阳性,吸收试验阳性,细胞形态较大,直径约30μm,形状不规则以类圆形多见,核3～20个,可见空泡,周边大量细胞丝。随流体剪切力作用时间的延长,极化破骨细胞面积、直径均有增大趋势,30min组、105min组与0min组（对照组）间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在本试验条件下,随流体剪切力作用时间的增加,SD-大鼠极化破骨细胞的形态呈波动性变化,直径和面积均有增大的趋势。     

核因子κB受体活化因子在破骨细胞培养中表达时相的研究

目的本研究旨在观察核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factorκB,RANK)在破骨细胞培养中的表达时相。方法采用巨噬细胞集落刺激因子(macrophages colony-stimulating factor,M-CSF)及核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)作为分化诱导因子,诱导大鼠骨髓造血干细胞分化为破骨细胞,RT-PCR检测诱导分化不同时间点(0,3,5,7 d)破骨细胞膜表面RANK mRNA的表达水平。结果 RT-PCR检测结果显示RANK mRNA表达在培养0 d为1.20±0.47,3 d为1.52±0.58,5 d为1.59±0.57,7 d为1.69±0.51。诱导分化后表达量随培养时间延长而增加,各时间点与培养前比较均有统计学差异(P<0.05)。结论在破骨细胞分化的各个时间段RANK均有表达,是体外研究不同因素影响破骨细胞分化及活化的一个特异性指标。     

破骨细胞体外培养与形态观察

破骨细胞体外培养与形态观察于明香，金慰芳，王洪复，关本博，林光义（上海医科大学放射医学研究所２０００３２；日本国金泽医科大学老年病学教室９２０─０２）骨质疏松症的发生与骨形成、骨吸收两者失平衡有关，破骨细胞（ＯＣ）在骨吸收过程中起主要作用，但有关破骨...     

成骨细胞及破骨细胞的整合素表达及其在骨质疏松中的意义

粘附分子 (ａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ)是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间粘附作用的膜表面糖蛋白。粘附分子种类很多 ,包括选择素家族、整合素家族、免疫球蛋白超家簇。整合素是一类细胞膜表面糖蛋白 ,其配体为细胞外基质 (ＥＣＭ)成份 ,如纤维粘连蛋白 (ＦＮ)、纤维蛋白原 (ＦＢ)、胶原蛋白 (ＣＡ)、体外粘连蛋白 (ＶＮ)、层粘蛋白 (ＬＭ)和ｖｏｎｗｉｌｅｂｒａｎｄ因子(ｖＷＦ)等。近年来 ,人们发现成骨细胞、破骨细胞表面均有整合素受体表达 ,其表达水平对骨形成及骨吸收有调控作用 ,与很多骨代谢性疾病的病理机制有很…     

破骨细胞体外培养方法的建立与形态观察

1　材料和方法1 1　骨磨片制备　新鲜牛股骨皮质锯成 6ｍｍ× 6ｍｍ×2 0 0 μｍ的小块 ,再磨成 10 μｍ厚。1 2　破骨细胞分离培养　拉颈处死出生 2 4ｈ内的新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,75 %乙醇浸泡 5ｍｉｎ。无菌条件下分离股骨、肱骨、胫骨 ,清除骨表面的软组织和骨骺 ,放入培养液 (含ＤＭＥＭ ,2 5ｍｍｏｌ/ＬＨＥＰＥＳ ,15 %胎牛血清 ,青霉素 10 0Ｕ/ｍｌ,链霉素 10 0ｍｇ/Ｌ ,ｐＨ 7 0 )。骨干纵行剖开 ,吸管反复冲洗骨髓腔 ,静止 1ｍｉｎ。取 2 4孔培养板 ,每孔加 1ｍｌ培养液和一个骨磨片或盖玻片 ,37℃、5 %ＣＯ2 孵育箱 1ｈ。吸出培…     

破骨细胞在口腔正畸领域中的研究现状

来源于单核巨噬系统的造血干细胞,在巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子以及白介素等的诱发下演变成为破骨细胞.破骨细胞是进行骨吸收的主要效应细胞,是一个高度分化的多核巨细胞,直接参与骨吸收.     

破骨细胞的分化及可溶性因子调节

破骨细胞起源于造血干细胞的粒细胞 巨噬细胞集落形成单位。在它的分化、融合和增生期均受到体内激素和多种可溶性细胞因子的调节 ,介导破骨细胞的骨吸收作用及其对各种细胞因子反应的信号传导通路 ,主要包括环磷酸腺苷 (cAMP)和受体酪氨酸激酶 (R PTK)。了解破骨细胞研究方面的新进展 ,将有助于临床更好地分析各种骨代谢性疾病的病因及发病机制 ,进而为治疗提供理论依据。     

降钙素受体在骨转移瘤中的表达水平及意义

目的：通过检测CTR在18例骨转移瘤中的表达情况,初步探讨CTR与骨转移瘤之间的关系。方法：选取骨转移瘤患者18例,根据X线表现成骨表现组4例与溶骨表现组14例。应用免疫组织化学染色法检测CTR表达,并作出统计学分析。结果：18例骨转移瘤患者中,CTR阳性表达15例,阳性率为83.0%;10例正常骨组织中,CTR阳性表达3例,阳性率为30.0%,二者之间有非常显著性差异（P〈0.01）。成骨表现组6例,CTR阳性表达3例,阳性率为50.0%;溶骨表现组19例,CTR阳性表达18例,阳性率为92.8%,二者之间有显著性差异（P〈0.05）。结论：CTR在骨转移瘤中的表达水平高于正常骨组织,而且在溶骨型骨转移瘤中的表达水平高于成骨型骨转移瘤。     

Possible effect of fluid shear stress on osteoclastogenesis

Bone remodeling is performed under the joint action of osteoblasts and osteoclasts. Since the effect of osteoclasts has been gradually recognized on bone and joint diseases, targeted researches toward osteoclasts have become a hot research field. This article reviews the relevant medical literature concerning the possible effects of the fluid shear stress （FSS） on the osteoclastogenesis chiefly from the aspects of RANKL-RANK-OPG system, the macrophage colony-stimulating factor （M-CSF）, and calcitonin receptor （CTR）. On the basis of the changes of the expression of osteoclastic activities, it is suggested that FSS is a potent, important regulator of bone metabolism.     

流体切应力对年轻和老年大鼠肠系膜微动脉eNOS表达和NO释放量的影响

目的观察流体切应力引起的年轻和老年大鼠肠系膜微动脉内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达和一氧化氮（NO）释放量改变对血管老化的作用。方法采用选择性结扎年轻（6月龄）和老年（24月龄）大鼠肠系膜微动脉产生不同的流体切应力,制备正常和高流体切应力（NF和HF）微动脉灌流模型,术后3周分离血管测定年轻和老年大鼠NF和HF肠系膜微动脉NO的释放量及其限速酶eNOSmRNA和总蛋白及磷酸化蛋白的表达。结果增加流体切应力后,血管eNOSmRNA和蛋白质表达水平增加,NO释放量增多。结论流体切应力可以改变eNOS的表达及NO的释放量,从而改善老年大鼠微动脉的功能。     

血管壁剪切力增高对腹主动脉壁管径及动脉壁PDGF-A表达的影响

目的观察体内局部动脉壁剪切力升高情况下血小板衍生生长因子-A(PDGF-A)表达情况以及动脉管径的变化.方法取SD大鼠共20只.在肾动脉平面以下部分缩窄腹主动脉.分别在术后第1,3,7天取缩窄平面上方0.5 cm长腹主动脉片段,分别测量术前及标本取出前缩窄近端动脉管径.以RT-PCR观察PDGF-A链的合成.结果至标本取出时,7 d组缩窄近端腹主动脉直径增加(P＜0.05).3组实验组中PDGF-A的表达较对照组均有不同程度的升高(P＜0.01),且随着时间的增加,PDGF-A的表达也逐渐增多(P＜0.05).PDGF-A的升高与管径变化呈正相关性(P＜0.01).结论血管壁剪切力增高可使局部血管直径逐渐增加;血管壁剪切力增高可使局部PDGF-A链mRNA合成呈时间依从性升高;PDGF-A链mRNA合成的升高与血管壁剪切力的增高以及血管壁的增厚呈正相关;PDGF-A可能在剪切力升高对血管壁的影响以及血管重建过程中起着一定的作用.     

流体剪切力和细胞骨架阻断对肌动蛋白丝的影响

目的：探讨流体剪切力对成骨细胞细胞骨架的影响.方法：实验分为3组,Ⅰ组（流体剪切力）,Ⅱ组（流体剪切力＋细胞松弛素D,Cytochalasin D）,Ⅲ组（流体剪切力＋噻氨酯哒唑,Nocodazole）.分别对Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组施加12dyne/cm2流体剪应力,应力作用时间分别为：0,10,30,60min.采用激光共聚焦显微镜、免疫荧光显微镜技术和免疫荧光染色方法对小鼠成骨细胞骨架进行形态学观察、F-肌动蛋白表达的荧光定量分析.结果：细胞在不同时间点受到同一剪切应力后,细胞的排列方向发生改变,细胞内的F-肌动蛋白排列同应力方向一致,随着应力时间延长到1h,F-肌动蛋白变得厚而丰富,F-肌动蛋白的荧光强度同0时段剪切力组相比明显增强（P〈0.01）.当加入细胞松驰素D后,细胞内F-肌动蛋白结构发生改变,在力的作用下,细胞内微丝断裂明显,随着拉伸时间的延长,微丝断裂更为明显,F-肌动蛋白的荧光强度同0时段剪切力组相比显著减弱（P〈0.01）.加入噻氨酯哒唑后,在剪切力作用下细胞内微管断裂,F-肌动蛋白丝完整且边缘呈锯齿状改变,它的荧光强度同0时段剪切力组相比也有明显减弱（P〈0.05）.结论：不同时间点受到同一剪切应力对细胞骨架微丝、微管结构产生一定的影响,微丝解聚和重排以及微管断裂与否在细胞力传导中起重要作用.     

流体剪切力影响成骨细胞生物学功能及分化机制的研究

摘　要：目的　 探讨流体剪切力（FSS）作用下成骨细胞生物学功能及分化机制。方法 4 组大鼠成骨细胞分别施 加 0、30、60 和 120 min FSS（12 dyn/cm2 ）刺激,免疫荧光染色后观察FSS刺激成骨细胞不同时间后的细胞骨架变化,采 用Image J软件计算细胞分形维数,比较细胞内部复杂程度;使用Ca2+试剂盒检测钙响应,碱性磷酸酶（ALP）测试盒检 测ALP活性;Real-time PCR检测FSS刺激不同时间后成骨细胞的BMP2、Runx2、Osterix（Osx）基因表达;Western blot 检测FSS刺激不同时间后成骨细胞的BMP2、Runx2、Osx蛋白表达水平,采用Quantity one进行光密度分析。结果 12 dyn/cm2 FSS刺激成骨细胞可引起细胞骨架形态、微丝丰富度及细胞复杂程度的变化,以 60 min最明显。与 0 min组相比, 细胞Ca2+浓度在FSS刺激 30 min后明显升高,延续至 60 min为高峰平台期（P<0.05）,120 min 后Ca2+浓度回落;60 min 组的BMP2、Runx2、Osx基因和蛋白表达水平均明显上调（P<0.01）;ALP活性升高,在刺激 60 min时最为明显（P<0.05）。 结论 12 dyn/cm2 FSS刺激能改善成骨细胞生物学功能,促进BMP2、Runx2、Osx基因及其蛋白表达上调;能通过改变成 骨细胞骨架促进Ca2+浓度升高,进而激活与分化高度相关的BMP2-Runx2-Osx信号通路,提高成骨细胞分化标志物ALP 活性。     

ER、PR在子宫腺肌病组织中的表达及临床意义研究

目的:探讨子宫腺肌病组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达及其临床意义。方法:应用免疫组化SP法检测40例子宫腺肌病患者子宫标本的在位内膜、异位内膜、腺肌病灶周边组织、正常肌层组织及40例正常子宫内膜组织正位内膜中ER、PR的表达。结果:子宫腺肌病患者异位内膜腺上皮ER、PR的阳性表达率分别为82.5%、80%,均低于其在在位内膜组织中的表达率97.5%、95%(P<0.05),而高于正常子宫内膜组织中的表达率57.5%、60%(P<0.05);子宫腺肌病病灶周边组织ER、PR的阳性表达率分别为47.5%、52.5%,均高于正常肌层组织的表达率25%、27.5%(P<0.05),而低于异位内膜组织的表达率82.5%、80%(P<0.05)。结论:子宫腺肌病是性激素依赖性疾病,其发病可能与ER、PR有关;子宫腺肌病病灶周边组织ER、PR的高水平表达可能是子宫腺肌病复发的重要原因之一。     

大鼠液压冲击脑损伤脑组织Toll样受体4表达与神经功能的关系

目的 观察大鼠液压冲击脑损伤Toll样受体4（TLR4）表达变化,探讨其与神经功能的关系.方法 成年雄性SD大鼠56只,随机分为损伤组（n=48）和假手术组（n=8）.采用液压冲击制备颅脑损伤模型,术后1h、6h、12h、24 h、3d、7d对动物进行神经功能评分,并用干湿重法、免疫组化法和Western Blot 分别测定水肿脑组织含水量及TLR4蛋白表达.结果 神经功能评分6h出现下降[（3.86±0.42）分],24 h下降至最低值[（2.65±0.32）分],3d逐渐升高[（3.25±0.17）分];免疫组化和Western Blot均显示水肿脑组织TLR4的表达均6h开始增高,24h至3d达到高峰,7d后降低.线性相关性分析发现TLR4表达与神经功能评分呈显著负相关（r1=-0.824,rw=-0.867,P＜0.05）.结论 大鼠颅脑液压冲击伤TLR4出现高表达,可能诱发了继发性炎性脑损伤导致神经功能障碍.     

Intravenous injection of nicardipine changed the distribution of coronary artery endothelial shear stress and fluid dynamics in patients with unstable angina

Background  Coronary endothelial shear stress (ESS) triggered the development of atherosclerosis. However, the effect of calcium channel antagonist on the distribution of ESS remained unclear.

Methods  Twenty consecutive patients with acute coronary syndrome (ACS) 48 hours after maximal medication with single left anterior descending artery stenosis <50% were studied. Nicardipine was intravenously injected at 1 µg/kg after a bolus of 10 mg in order to achieve mean blood pressure (MBP) reduced by 10% or more, or the heart rate increased by 10–15 beats/min. Hemodynamic variables and angiogram at baseline and during injection of nicardipine were recorded, respectively. Coronary artery 3-D reconstruction was used for the analysis of ESS.

Results  Distal reference-vessel-diameter and minimal lumen diameter decreased significantly from (2.42±0.41) mm and (1.47±0.49) mm at baseline to (2.22±0.35) mm and (1.35±0.49) mm at maximal drug-dosage (P=0.018 and 0.020, respectively). Nicardipine did not change blood velocity. Lowest mean shear stress at segments 2-mm distal to plaque increased significantly from (0.034±0.519) Pa at baseline to (0.603±0.728) Pa (P=0.013) at peak effect of drug.

Conclusions  Nicardipine was associated with the constriction of diseased vessel segment that adapted to the reduction of blood pressure, without dynamic change of blood velocity at each stage of whole cardiac cycle. Increased ESS value at segments distal to plaque reflected the cardioprotection by nicardipine (ChiCTR-TRC-10000964).