乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸在人原发性肝癌及癌旁组织中存在状态和与肝癌的关系

应用纯化的不含载体质粒顺序的~(32)P-HBV DNA探针(3.2Kb),分析了66例人原发性肝癌中的DNA存在状态,发现34例(51.5％)有不均一的HBV DNA整合;14例(21.2％)存在复制型的游离HBV DNA;11例(16.7％)同时存在整合及游离HBV DNA,7例(10.6％)未见到HBVDNA痕迹。同时对20例癌及癌旁肝组织同时存在有整合型HBV DNA的病例,比较了癌与癌旁肝组织的HBV整合谱型,发现15例(75％)显示不同的整合区带;5例(25％)具有相似的整合谱型。     

乙型肝炎病毒亚基因片段在肝炎患者肝内存在状态的研究

自adw_2克隆中分离纯化乙型肝炎病毒全基因及“S”、“C”亚基因片段,制备探针后,对59例慢性乙肝患者的肝内病毒DNA进行核酸分子杂交研究。从冲发现30例肝内有游离复制型HBVDNA。29例肝内“S”、“C”亚基因片段探针杂交结果相同;但有1例仅有整合的“S”基因片段伴有复制型“S”片段,并未测到“C”片段。另对14例肝癌的癌组织也进行了HBV全基因及“S”、“C”片段核酸杂交研究。本文对“C”基因缺失与肝癌的关系进行了讨论。     

原发型肝癌的HBV感染及肝内的HBVDNA

应用~(32)P标记的3.2kb克隆HBVDNA探针对36例原发型肝癌患者的血清和肝组织作HBVDNA斑点杂交,结果:血清、肝癌组织、癌近邻肝组织和癌远邻肝组织的阳性率分别为56％、91％88％和80％,皆高于国内外一些同类研究,说明其HBV感染率比一般认为的还要常见,尽管肝内良恶组织的HBV DNA阳性率未见显著差别。此外,尚对HBV6项血清标记作了检测,结果HBsAg和PHSA·Re的阳性率均较高,分别为83％和75％,说明多数病例的HBV感染仍然处于病毒活动复制阶段。由于血清HBsAb阳性者,肝内HBV DNA全阳性,提示HCC阶段的“保护性抗体”并不能清除病毒感染。     

原发性肝癌内HBV DNA及HBAg的分布与意义

采用原位分子杂交和免疫组化及双标记技术,对44例原发性肝细胞肝癌及痛旁肝组织进行了乙型肝炎病毒DNA及其表达产物x抗原、核心抗原检测。癌组织中HBV DNA、HBxAg、HBcAg检出率分别为70.5％、65.9％及20.5％;癌旁肝组织依次为76.5％、76.5％及29.4％。HBV DNA及HBxAg主要位于肝细胞浆中,在HBcAg阳性组中的检出率高于HBcAg阴性组(P<0.05)。9例枯否氏细胞浆有HBxAg检出。HBVDNA在癌及癌旁组织中的检出有“伴随现象”。HBcAg多位于核内,部分为核浆型,且总是伴随HBV DNA和(或)HBxAe检出,无一例单独检出HBcAg者。此外,HBxAg可由肝内游离型HBV DNA所表达;肝内核型或浆型HBcAg均可反映HBV的复制。因此,肝内HBxAg的检测可作为HBV感染的灵敏指标之一,进一步证实HBV感染与HCC的发生有密切关系。     

食管癌及癌旁组织中人乳头状瘤病毒DNA的存在状态

作者以人乳头状瘤病毒(HPV)16DNA为探针,采用斑点杂交及Southern分子杂交技术检测24例食管癌及其相应癌旁组织中的HPV16DNA。结果:在食管癌组织中,HPV 16DNA斑点及Southern杂交的阳性率为50％(12/24),癌旁组织为37％(9/24);经Bam H I酶切的食管癌及癌旁组织中,杂交后出现7.2kb的HPV16DNA特异性阳性区带;经Pst I酶切杂交后出现2.7kb、2.3kb、1.75kb、1.18kb四条HPV16DNA阳性区带;未经酶切者来发现阳性杂交带出现。提示人乳头状瘤病毒基因组确实存在于食管癌及癌旁组织DNA中,且多以整合状态存在。     

生物素标记HBV DNA探针在肝石蜡切片上作原位杂交技术的研究——各型肝病时HBV DNA的定位及形态

报告用生物素标记HBV DNA探针原位杂交技术,现察75例慢性肝病者肝石蜡切片上HBV DNA定位及形态。共检出HBV DNA阳性者25/75例(33.33％)。其中:CPH2/7例、CAH10/21例、肝硬化0/3例、SS4/11例、无症状HBsAg携带者4/21例和HCC5/12例。HBVDNA在肝切片上呈棕黄色粗颗粒状,主要分布于肝细胞浆内,个别核内亦可见少数浅染棕黄色颗粒。阳性肝细胞分布有三种形式:Ⅰ型(弥漫型):25例中有4例(16％),Ⅱ型(局灶型):20例(80％),Ⅲ型(散在型):仅1例(4％)。颗粒在胞浆内亦有a型(密集)和b型(稀疏)之分。各型乙型肝炎HBV DNA在肝切片上定位与分布不完全相同,可能表示不同的病毒感染状态和复制的活跃程度。HCC只在癌旁肝组织内查见HBV DNA。     

DNA分子杂交检测肝癌病人血清及其肝组织中HBVDNA的应用研究

本文采用目前国内较先进的DNA分子杂交技术,使用~(32)P探针检测92例肝癌病人血清、92例对照病人血清及4例肝癌病人肝组织中的HBVDNA,从分子水平来探讨肝炎与肝癌的关系.肝癌病人血清中HBVDNA的检出率为23.91%,对照病人血清仅4.35%,两组比较P<0.01,差异显著.4例肝组织中HBVDNA检出1例.HBVDNA在肝癌病人血清和肝组织中检出,证明HBVDNA已整合于病人肝细胞中,HBV感染作为肝癌病因之一更加明朗.     

电泳印迹和分子杂交技术在肝内HBV DNA研究中的应用

应用DNA电泳转移、生物素探针Southern杂交及不同探针重复杂交等3项新技术研究肝炎肝癌的肝内HBV DNA分子状态。经过方法学比较以电泳印迹取代毛细渗吸法对65例肝炎肝癌病人的101份肝内组织DNA进行尼龙膜快速转移和HBV DNA杂交,结果检出HBV DNA分子状态里整合型15份、游离型31份、整合型合并游离型30份。其中12例乙型肝炎标本为经生物素探针杂交检测,结果全部检出游离型HBV DNA。还有3例乙型肝炎标本和2例其它肝炎标本为经重复杂交检测,即先用~(32)P探针杂交继去探针再用生物素探针杂交,结果乙型肝炎标本两次杂交HBV DNA都阳性,其它肝炎标本两次均阴性。阳性者表现为3.2kb和2.3kb电泳位置呈现杂交带,代表HBV之松弛环状和超螺旋状结构。由于两种探针各含不同序列,故结果可对待检基因进行初步序列分析。本实验表明,上述3项技术对临床医学研究有广泛的应用价值。     

用不同标记的乙型肝炎病毒DNA探针对肝组织内病毒基因进行原位核酸分子杂交

本文报道采用国产[α-(55)~S]dATP及进口[3~H]dNTP与生物素标记HBV DNA全基因探针进行原位核酸分子杂交,均可获得阳性结果。其中[3~H]dNTP标记探针的敏感性与特异性最佳。对6例慢性乙型肝炎患者肝组织切片进行原位核酸分子杂交,结果与肝组织提取物经Southern吸印转移HBV DNA杂交的阳性率完全一致。原位核酸杂交显影后的银颗粒呈灶性分布于肝细胞内,提示病毒在肝内扩散为细胞——细胞间传播方式进行。对1例有复制型HBV DNA的肝癌组织进行原位核酸分子杂交,发现HBV DNA主要分布在光镜下癌细胞旁肝细胞胞浆中,而癌细胞中未测得HBV DNA,其意义有待更多病例数检测后才能阐明。     

应用6种人癌基因探针进行肝癌、胃癌与脑瘤转化基因的RFLPs和扩增及重排的研究

本文应用c-Ha-ras-1、N-ras wigler(左段)和P~(52-c)(右段)、c-sis、v-erbB、c-myc和v-fos六种癌基因作探针,用瑟慎印迹杂交和斑点杂交两种方法研究了94例胃癌、肝癌和脑瘤DNA的限制性片段长度多态性(RFLPs),基因扩增和基因重组情况。和85例正常人组织DNA的杂交结果相比,发现了一些国内外未曾报道过的癌基因等位片段。其中有些等位片段只在癌组织DNA中富集。两个癌患者家系中病人的一级亲属的RFLPs分析表明,这些成员中罕见的癌基因等位片段明显高于正常人群。同时我们在一些肿瘤中还发现有癌基因扩增和重排现象。     

肝细胞癌癌组织、癌外肝组织内HBV标志的免疫组织化学研究

本文用PAP法观察50例早、中期肝细胞癌(HCC)癌组织,癌外肝组织和40例慢性肝病肝组织内HBsAg、HBcAg的检出率与表达方式。HCC癌外肝组织内HBsAg和HBcAg的检出率分别为76％和30％,癌组织内相应的检出率为14％和6％;癌外肝组织HBAg的检出率、表达方式与慢性肝病患者基本相同,提示乙肝病毒(HBV)感染与HCC有密切的关系。本文还观察了HCC患者HBV感染的类型、癌外肝组织内HBAg与病理变化的关系。     

肝细胞癌及相关慢性肝病的乙型肝炎病毒检测

为了探讨乙型肝炎病毒（HBV）的致癌机理,采用免疫组化染色和原位分子杂交方法,对慢性肝炎、肝硬化、癌旁肝硬化、肝细胞癌和正常肝组织共108例进行乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、核心抗原（HBcAg）和HB-VDNA检测。结果：HBsAg HBcAg和HBVDNA的阳性率分别为慢性肝炎61.9%(13/21),42.9%(9/21)和75.0%(12/16);肝硬化64.0%(16/25),36.0%(9/25)和83.3%(15/18）;癌旁肝硬化72.7%(16/22),61.1%（11/18)和85.7%(12/14）;肝细胞癌45.2%(14/31),50.0%/(14/28)和64.3%(9/14);正常肝组织不表达,慢性肝炎、肝硬化和癌旁肝硬化HBVDNA阳性信号较肝细胞癌多而强,结果表明大多数肝细胞癌与HBV感染所致的慢性肝炎和肝硬化密切相关,癌旁肝硬化可能为癌前肝硬化在癌周的残留。     

Immunohistochemical studies on hepatitis B markers in the liver tissue of patients with hepatocellular carcinoma

Summary The incidence and expressive patterns of hepatitis B surface antigen (HBsAg) and core antigen (HBcAg) in tumorous and nontumorous liver tissue of 50 patients with hepatocellular carcinoma (HCC) were studied with peroxidase-antiperoxidase technique. In nontumcrous liver tissue, the incidence of HBcAg and HBcAg was 76% and 30%; in tumcrous tissue, 14 % and 6 % respectively. The incidence and expressive patterns of HBAg in HCC were similar to those of patients with chronic liver disease, suggesting that hepatitis B virus (HBV) infection is closely associated with HCC. The forms of HBV infection, the rate and patterns of the accompanying cirrhosis in patients with HCC were also discussed.

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Immunhistologische Untersuchung der Hepatitis B-Marker im Lebergewebe von Patienten mit hepatozellul?rem Karzinom

Auszug H?ufigkeit und expressive Figuren des Hepatitis B surface Antigens (HBsAg) und core Antigens (HBcAg) im Tumorgewebe und nicht-tumor?sem Gewebe der Leber von 50 Patienten mit hepatozellul?rem Karzinom (HCC) wurden mittels der Peroxidase-Antiperoxidase-Technik untersucht. In nicht-tumor?sem Gewebe war die Nachweisrate von HBsAg und HBcAg 76 % bzw. 30 %; in Tumorgewebe 14 % bzw. 6 %. Diese Befunde zeigten gro?n ?hnlichkeit mit denjenigen von Patienten mit chronischen Lebererkrankungen. Dieses Ergebnis weist darauf hin, da? enge Zusammenh?nge bestehen zwischen der Hepatitis B-Infektion und dem hepatozellul?ren Karzinom. Die Formen der HBV-Infektion und die H?ufigkeit und Art der begleitenden Leberzirrhose bei den Patienten mit HCC wurden ebenfalls diskutiert.

     

Immunohistochemical detection of hepatitis C virus antigen from hepatocellular carcinoma]

To investigate the infection of HCV and the expression of HCV antigen (HCAg) in HCC, immunohistochemical protocol was performed on tumorous liver tissues from 40 patients with HCC to detect HCAg and hepatitis B virus surface antigen (HBsAg) simultaneously. The results showed that the positive rates for HCAg and HBsAg were 17.5% (7/40) and 70% (28/40) respectively. HBsAg and HCAg were simultaneously detected in six of 40 cases and only one case had HCAg positive alone in the liver tumorous tissue. The positive signals were localized in diffuse cytoplasm of hepatocytes and the positively stained cells were mainly distributed in local pattern. The results suggested that HCV infection did exist in some cases of HCC, so HCV might be a viral risk factor in addition to HBV in the genesis of HCC in China.     

肝细胞癌组织中丙肝病毒抗原及HBsAg的免疫组化检测

为了解丙肝病毒（ＨＣＶ）感染与我国肝细胞癌（ＨＣＣ）之间的关系,以及ＨＣＶ抗原成分（ＨＣＡｇ的）在ＨＣＣ组织中的分布状况,应用鼠抗ＨＣＶ单克隆抗体,采用免疫组化技术检测ＨＣＣ组织中ＨＣＡｇ的表达,同时检测了乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）。结果：４０例ＨＣＣ标本组织中ＨＣＡｇ、ＨＢｓＡｇ检出率分别为１７．５％（７／４０）和７０％（２８／４０）,其中单一ＨＣＡｇ阳性者仅１例,ＨＣＡｇ和ＨＢｓＡｇ同时存在的检出率为１５％（６／４０）。镜下见ＨＣＡｇ呈细颗粒状分布于细胞胞浆,ＨＣＡｇ阳性细胞以局灶型分布为主。提示我国部分肝癌患者的癌组织中确实存在ＨＣＶ,ＨＣＶ感染可能是除乙肝病毒以外,导致我国ＨＣＣ发生的另一相关因素。     

Analysis of intrahepatic HBVDNA in serologic HBV markers-negative or HBsAg-negative patients with chronic hepatitis

Summary To explore HBV infection status in a group of serologic HBV markers-negative or HBsAg-negative patients with chronic hepatitis, in situ hybridization to hepatccellular HBVDNA was carried out in combination with detection of HBsAg and HBcAg in the liver tissues. It was found that prevalence of intrahepatic HBVDNA, HBsAg and HBcAg was 43 %, 39 % and 17 % respectively, and 15 out of 23 cases studied were sure to bear one or more positive marker (s) of intrahepatic HBVDNA, HBsAg and HBcAg. These findings suggest that more than half of the patients with chronic hepatitis were still undergoing HBV infection, despite serologic HBV markers or HBsAg negative. Furthermore, we found that hepatocytes containing HBV-DNA or surface or core antigen were often close to hepatic necrosis foci, indicating that HBV replication and its antigen(s) expression in hepatocytes could account for chronic, active and necrotic inflammation occurring in the liver of the patients mentioned above.     

原发性肝细胞癌中乙型肝炎病毒基因整合的突变分析

目的探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)整合序列中基本核心区突变与乙肝病毒相关肝癌发生的相关性。方法应用Alu-PCR和基于接头的LM-PCR方法扩增40对乙肝相关性肝癌组织和配对癌旁组织中整合的HBV序列,PCR产物纯化后以ABI公司3700测序仪进行全自动测序,测序结果使用Pub Med BLAST软件和Bio Edit软件进行分析。结果 65.0%的肝癌组织检测到整合HBV病毒序列(26/40),共检出37个不同的HBV整合序列。67.5%的癌旁组织中检测到整合HBV病毒(27/40),共检出68个不同的整合序列。平均每例肝癌组织中HBV整合序列检出数为1.42个,而癌旁组织为2.52个,癌组织低于癌旁组织。整合HBV序列发生A1762T/G1764A双突变在肝癌中的检出率高于癌旁组织,差异无统计学意义。结论 HBV感染相关肝癌组织及癌旁组织中都检测到整合HBV序列,再次表明整合是肝癌发生中的一个早期事件;而肝癌组织中整合HBV序列有更高的A1762T/G1764A突变检出率,从一个新的侧面表明这些突变在病毒的致癌过程中具有重要作用。     

肝细胞癌几种相关性标志的免疫组织化学研究

本文用PAP法定位研究了22例肝细胞癌(HCC)和18例其它肝病肝组织内乙肝病毒抗原(HBAg)、甲种胎儿蛋白(AFP)、α_1-抗胰蛋白酶(A_1AT)、α_1-酸性糖蛋白(A_1AG)和转铁蛋白(TF)。结果表明,AFP和A_1AT作为HCC的相关性标志有助于HCC的临床诊断,但不能鉴别HBAg阳性和阴性的HCC,同时检测AFP和A_1AT有助于提高HCC的诊断率。A_1AG和TF的特异性较差,不宜作为HCC的临床诊断指标。     

生物素标记HBVDNA探针原位杂交碱性磷酸酶过氧化物酶显色检测肝内HBVDNA

本研究应用国产生物素标记HBVDNA探针,于福尔马林固定,石蜡包埋肝组织切片上,建立了碱性磷酸酶过氧化物酶显色的原位杂交技术,在此过程中发现,蛋白酶的消化是杂交能否成功的关键因素,酸、三乙醇酐、洋地黄的预处理,能促进探针参入,降低非特异背景,减低蛋白酶作用浓度或作用时间,因而提高实验稳定性、特异性。并用这一技术检测了34例肝活检和4例尸检肝组织,结果:尸肝组织均检出了HBV—DNA,其中2例核型见于肝硬化,肝癌旁组织,而2例浆型HBV—DNA见于慢活肝,亚重肝。34例肝活检组织中,只检出12例浆型HBV—DNA,其中CAH—CPH无症状携带者中检出率分别为42.9％,38.8％,33.3％,均明显高于肝硬化组织(16.7％)(P<0.05)。由此可见浆型HBV—DNA分布同病变轻重程度的关系可能并不密切,不同分布型的HBV—DNA可能只反映HBV的复制状态。     

乙型肝炎病毒基因定量检测及临床应用

目的：了解乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒基因(HBVDNA)水平与乙型肝炎病毒(HBV)感染的临床关系及HBVDNA定量分析在拉米夫定治疗中的应用；方法：用聚合酶链反应(PCR)技术测定109例HBV感染者血清中HBVDNA水平及观察35例乙型肝炎患者拉米夫定治疗效果；结果：109例HBV感染者血清中HBVDNA水平与乙型肝炎病毒五项指标(HBV—M)的阳性模式有一定相关性，在HBsAg、HBeAg阳性模式中约有93％以上病例HBVDNA阳性，其含量最高，而在HBsAg，抗—HBe，抗—HBc阳性模式中其HBVDNA阳性检出率仅为67．7％，其含量不高。HBVDNA水平与乙型肝炎临床分型的相关性不显著(P＞0．05)。拉米夫定治疗前后血清HBVDNA含量有显著性差别(P＜0．01)；结论：应用PCR技术定量检测血清HBVDNA含量是诊断乙型肝炎和了解病毒复制与临床关系的重要指标，是指导乙型肝炎抗病毒治疗的重要手段。