体外成熟的卵母细胞胞质成熟的评价指标

卵母细胞的体外成熟培养(in vitro maturation,IVM)是辅助生殖技术的重要过程之一.优质的IVM的卵母细胞必须是细胞核和细胞质同步成熟,以保证成功受精、胚胎正常发育乃至健康子代的出生.目前,细胞核成熟的评价标准已得到共识,而细胞质的成熟却表现复杂,尚缺乏有效的观察评价指标.近年来研究发现,卵母细胞成熟时其超微结构、一些信号分子和细胞因子均发生某些变化,这为评价细胞质成熟提供了依据.     

卵母细胞的细胞质体外成熟的观察指标

卵母细胞体外成熟（IVM）培养过程中还存在很多问题,胞核和胞质成熟的不同步直接影响了卵母细胞的发育能力,从而影响了IVM的成功率。在探讨人未成熟卵母细胞IVM的各种影响因素时,对细胞质成熟一直缺乏有效的观察、评价指标,从而影响了研究进程。本文就IVM中卵母细胞成熟胞质的一般形态、超微结构以及可能影响胞质成熟的特异性表达基因做简要综述。     

体内、外成熟卵母细胞的胚胎冷冻-复苏后发育能力的比较

目的比较体外与体内成熟卵母细胞受精后第3天胚胎冷冻-解冻后的发育能力。方法体外成熟组的胚胎来源于在本生殖中心行未成熟卵体外成熟(IVM)治疗的患者(6例)。体内成熟组为同期行常规卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗的患者(22例)。两组患者胚胎移植后多余的胚胎按慢冻法进行冷冻保存。冻胚移植周期时冷冻胚胎按快融法解冻,体外培养约24 h后行胚胎移植。结果体外与体内成熟卵母细胞的胚胎冷冻-解冻后的复苏率、解冻培养后的可移植胚胎率以及临床妊娠率均无显著差异。结论人未成熟卵母细胞在体外培养系统中完成细胞核和细胞质成熟的同时,细胞膜的成熟可能也较充分,受精后的胚胎能够一定程度地耐受冷冻-解冻过程中面临的各种损伤,复苏后,仍能继续发育和着床并获得妊娠。     

卵泡刺激素、黄体生成素对卵母细胞成熟的调节作用

遵循两细胞两促性腺激素的理论,卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)对于卵泡成熟和卵巢性腺类固醇的产生都是必需的。在体内FSH启动卵泡生长,LH促进卵母细胞成熟。FSH及LH的应用显著缩短了卵母细胞体外成熟(IVM)的时间,提高卵母细胞成熟及发育的潜能,提高妊娠率。因此揭示卵母细胞核质成熟的影响因素,对提高IVM卵母细胞的质量至关重要。     

人体外与体内成熟卵母细胞发育潜能及妊娠结局的观察

目的观察体外成熟(IVM)与体内成熟人卵母细胞的发育潜能和妊娠结局。方法69例多囊卵巢或多囊卵巢综合征不育患者,分别行IVM治疗49个周期(IVM组)和体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗29个周期(IVF组)。结果IVM组卵母细胞成熟率为65.4%。IVM组和IVF组受精率和卵裂率分别为62.1%和77.2%,60.2%和91.2%,两组受精率无显著性差异(P>0·05),IVM组较IVF组卵裂率降低非常显著(P<0.01)。IVM组和IVF组临床妊娠率和种植率分别为26.5%和12.6%,41.4%和22.9%,IVM组临床妊娠率和种植率较低,但两组无显著性差异(P>0.05)。IVM组和IVF组卵母细胞受精后D2≥4细胞和D3≥6细胞胚胎数占受精卵数(2PN)的比例分别为24.5%和19.4%,67.0%和66.4%,IVM组较IVF组胚胎发育速度慢,两者有非常显著性差异(P<0.01)。IVM组D3优质胚胎形成率(23.7%)较IVF组(58.2%)为低,亦有非常显著性差异(P<0.01)。结论人卵母细胞IVM将成为一种选择性的辅助生殖技术。人卵IVM较体内成熟卵母细胞受精后2PN至卵裂期发育阻滞发生率高,胚胎发育速度慢和优质胚胎形成率低。     

体外受精周期中卵泡发育阻滞患者应用未成熟卵体外成熟培养的临床观察

目的观察常规体外受精(IVF)中卵泡发育阻滞患者采用未成熟卵体外成熟(IVM)培养治疗结果。方法常规IVF治疗患者11例,在促排卵过程发生卵泡发育阻滞时,取卵行IVM培养成熟后,卵母细胞行卵胞浆内单精子注射(ICSI)以获得受精卵并最终实现胚胎移植。统计分析未成熟卵的成熟率、卵母细胞的受精率、胚胎的发育情况及临床结果。结果共获取卵母细胞128枚,其中成熟卵21枚,行ICSI后15枚正常受精,获10枚正常卵裂胚胎,全部移植3例,均未妊娠;107枚未成熟卵,经IVM、ICSI和体外培养后,成熟率、受精率、正常卵裂率及优质胚胎率分别为72.9%、75.6%、78%及39.1%,胚胎移植后3例临床妊娠(新鲜周期2例,冻融周期1例)。结论常规IVF控制性超促排卵(COH)过程中,发育阻滞的卵泡在体外适宜的培养条件下仍有成熟、受精、继续发育的能力,并最终实现临床妊娠。IVM技术是改善IVF中发生卵泡发育阻滞患者结局的措施之一。     

人卵母细胞体外成熟后受精所形成胚胎筛选模式的建立

目的利用时差成像系统(TLI)结合胚胎形态学评估建立一种对人卵母细胞体外成熟(IVM)后受精所形成胚胎的筛选模式,以期为临床实践中选择高发育潜能的IVM胚胎提供参考。方法收集2016年2月至2019年5月于本中心接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗患者的402枚未成熟卵母细胞进行IVM培养,卵母细胞成熟后行卵胞浆内单精子注射(ICSI)授精。受精后胚胎在TLI系统中观察培养,观察IVM胚胎各种卵裂模式与其形成囊胚潜能的关系,并收集胚胎发育的动力学参数,分析原核消失时间(tPNF),发育至2细胞时间(t2)、3细胞时间(t3)、4细胞时间(t4)、5细胞时间(t5),2细胞发育至3细胞所需时间(cc2)、3细胞发育至4细胞所需时间(s2)这些参数在第3天(D3)IVM胚胎未形成囊胚组(A组,111枚)和形成囊胚组(B组,51枚)之间的差异。结果 402枚未成熟卵母细胞进行IVM培养,共有315枚(78.4%)成熟;315枚IVM成熟卵母细胞进行ICSI,正常受精219枚,其中非二倍性卵裂的发生率最高(24.2%),其次为正常卵裂(21.9%)。IVM胚胎中正常卵裂胚胎的囊胚形成能力最高(52.1%),卵裂球碎裂最低(10.0%),发育停滞和非二倍性卵裂胚胎均无囊胚形成。A、B两组的动力学参数tPNF、t2、t3、cc2、s2比较均无显著性差异(P0.05),t4、t5组间有显著性差异(P0.05);B组t4、t5的参数值范围分别为(24.6～41.9)h和(26.1～56.9)h,该范围内的IVM胚胎具有更高的囊胚形成能力。利用TLI系统结合胚胎形态学评估建立一种高发育潜能IVM胚胎的筛选模式,验证该模式所选出A级胚胎的囊胚形成率显著高于优选胚胎(64.3%vs. 44.0%)(P0.05)。结论利用TLI系统结合胚胎形态学评估方法建立的针对IVM胚胎的筛选模式可以作为筛选高发育潜能IVM胚胎的有效工具。     

时差监测培养系统在人未成熟卵母细胞体外成熟及其授精时机中的应用

目的观察时差监测培养系统在人未成熟卵母细胞体外成熟(IVM)中的应用,并探讨核成熟后最佳的授精时机。方法收集我生殖中心促排卵周期中捐赠用于科研的240枚GV期卵母细胞,应用时差监测培养系统联合IVM技术,观察卵母细胞核成熟的动力学参数,包括GV破裂时间、第一极体排出时间、MI持续和MⅡ静止的时间段。经过培养,对其中160枚卵母细胞根据第一极体排出后不同ICSI授精时间分为3组:3h组、3~6h组和6h组,比较各组的受精情况及胚胎发育情况。结果 240枚GV期卵母细胞体外成熟率为73.3%,平均GV破裂时间为实施IVM后的(7.0±0.3)h,MI持续平均时间为(14.9±0.2)h,第一极体排出平均时间为(22.7±0.5)h。不同授精时间3组的正常受精率、卵裂率和可利用胚胎率比较均无显著性差异(P0.05)。结论时差监测培养系统为未成熟卵母细胞IVM培养系统优化提供了新思路;第一极体排出后的3~6h实时ICSI可用胚胎率有增高的趋势,但其具体影响及最佳授精时间仍有待进一步研究探讨。     

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸在卵母细胞成熟及受精激活中的作用

窦状卵泡的卵母细胞直径为100～130μm时已达成熟卵泡大小，此后的卵母细胞胞质及细胞核将经历生发泡期至第二次减数分裂中期过程中的重大变化，为随后的受精及将来的胚胎发育作准备。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)在传统上被视为参与包括线粒体中的电子传递在内的无数氧化还原反应的辅酶，在能量传递过程中发挥重要作用。在细胞信号传递方面，NADP可以作为底物合成烟酸酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAADP),进而诱发卵母细胞内钙活动。有关NADP自身在哺乳动物的卵母细胞成熟及受精激活中的影响及其作用机制目前知之甚少，也缺乏相关研究。本综述介绍NADP对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响，同时讨论了NADP对卵母细胞内相关钙波的作用。     

自然周期体外受精联合未成熟卵母细胞体外成熟技术在卵巢低反应患者中的临床应用价值初探

目的 对自然周期体外受精/体外成熟(IVF/IVM)技术治疗卵巢低反应引起的不育症的临床效果进行初步探讨.方法 31例适应证患者接受34个自然周期IVF/IVM治疗.取卵前36 h注射人绒毛膜促性腺激素(hCG) 10,000 IU.抽吸优势卵泡和小卵泡的卵母细胞,成熟卵母细胞于2～3 h后进行卵胞浆内单精子注射(ICSI);未成熟卵母细胞体外培养24或48 h后,成熟卵母细胞ICSI受精.得到的胚胎于取卵后第3天进行移植.结果 取消周期4个,共27例患者取卵成功30个周期.11例获得临床妊娠,9例已分娩,全部为单胎;1例妊娠中;1例宫外孕.结论 自然周期IVF/IVM对于治疗卵巢低反应不育症是一种简便有效的方法.