冻存复苏人卵巢皮质在裸鼠体内的发育及卵细胞的提取

目的:探求冻存复苏人卵巢皮质在裸鼠体内的发育及卵细胞的提取。方法:取手术切除的5例患者卵巢皮质,放入1.5 mol/L的二甲基亚砜+10％血清中,应用可控程序冷冻仪逐渐降温,移入液氮中冻存。三个月后,将融解的卵巢皮质移植入89只裸鼠皮下,注射hFSH 12周,刺激卵泡生长。注射hCG 36 h后,用18号针头穿刺提取卵细胞。结果:卵泡直径为3～9 mm,穿刺获19个卵细胞,放入TC-199培养基,加20％胎牛血清,25 mmol/L丙酮酸,75 mIU/mL FSH和LH培养,获15个分裂中期的次级卵母细胞。结论:人卵巢组织冻融后可异体移植生长,且其卵细胞可在体外发育成熟。     

卵巢组织冻存与移植的发展现状

卵巢组织冻存(OTC)与移植目前主要用于青春期前或需尽快接受抗癌治疗的年轻肿瘤患者生育力保存,至今已有二十余年的历史,通过冻存卵巢组织再移植获得的活产已有超过200例的报道,近年来OTC与移植得到了快速发展,但仍存在许多亟待解决的问题。有效性方面,大部分患者自体冻存卵巢组织再移植后,卵巢内分泌功能可恢复至正常,活产率高达40%,然而冻存卵巢组织的回输利用率仍处于较低水平。安全性方面,通过卵母细胞体外成熟、人工卵巢等新兴技术减少肿瘤细胞在卵巢组织移植中转移、复发的风险是近年来众多研究者关注的方向。如何最大限度地保证OTC与移植过程中卵泡的存活也一直是研究的重点,目前有添加生长因子、激素、抗凋亡药物、干细胞等多种方法防治卵泡的凋亡和丢失。然而这些新兴技术大多尚处于实验室阶段,未来期待更多基础和临床研究来为OTC与移植这项生育力保存技术提供更多的有效性和安全性保障。     

两种玻璃化法冻存小鼠卵巢的研究

目的:探讨2种玻璃化法对小鼠卵巢组织、器官形态和功能保存作用的影响。方法:以改良的DMEM-F12为玻璃化液,分别采用常规玻璃化法(A组)和超速玻璃化法(B组)冻存小鼠卵巢组织及器官,解冻后通过组织学观察、卵巢组织异体、卵巢器官自体肾被膜下移植,观察动情周期恢复率、恢复时间、卵泡发育状况,并分别以新鲜卵巢组织异体移植、卵巢器官自体移植(C组)为对照,评价2种玻璃化法的冻存效果。结果:①A组、B组、C组卵巢组织异体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别10.5±5.4d、8.0±2.2d、6.3±1.0d。A组与C组比,差异显著(P<0.05);B组与C组无差异,A组与B组间也无差异(P均>0.05)。②A组、B组、C组卵巢器官自体移植小鼠动情周期出现率为100%,出现动情周期分别为9.4±0.9d、6.9±1.1d、6.1±1.1d,A组与B、C组相比有统计学差异(P<0.05),而B组与C组间无差异(P>0.05)。移植存活的卵巢组织、器官内均可见不同发育阶段的卵泡,形态正常。结论:2种玻璃化法可有效地冻存卵巢组织及器官,但超速玻璃化法效果较优。     

人类卵巢冻存与移植研究进展

卵巢冻存是癌症患者保存生育力的一个理想途径。若患者在癌症治疗前将自己的卵巢冻存,疾病控制或治愈后,将卵巢复苏进行移植,可恢复患者生育能力和生殖内分泌功能。然而目前遇到的问题是冻存的卵巢小皮质片移植后功能维持时间较短,而较大的卵巢皮质的冻存和移植又面临效果不佳和移植后缺血、缺氧损伤。本文就上述问题对近期国内外研究进展进行综述。     

冻存卵巢组织移植的影响因素

冻存卵巢组织移植作为一种保存年轻女性生殖内分泌功能的治疗方法,正日益受到重视,但其影响因素众多,技术程序有待进一步优化.检索综述中英文文献,探索冻存卵巢组织移植的影响因素发现,冻存卵巢组织移植的影响因素包括冷冻保存过程、移植部位、抗氧化损伤、生长因子、激素、机械因素、临床因素等.目前卵巢移植还存在许多亟待解决的问题,随着冷冻保存技术、血管吻合技术和辅助生殖技术的发展,冻存卵巢组织移植将成为解决卵巢早衰、保存年轻癌症患者生殖内分泌功能的有效途径.     

卵巢组织冷冻保存及其应用

癌症治疗会导致大多数妇女过早绝经和不育。卵巢组织冷冻保存给这些患者带来了新的希望。本文主要综述了目前卵巢组织冷冻保存、冻存卵巢组织应用以及相关问题。     

卵巢移植的研究进展

卵巢移植是伴随肿瘤治疗技术的发展而逐渐建立起来的一项技术。卵巢组织冷冻及移植后健康婴儿的出生证明了此技术的可行性,特别是近年癌症患者低龄化趋势渐趋明显,以及大剂量放化疗导致的患者生育力严重下降、丧失,内分泌失调等诸多副作用,严重影响了癌症幸存者的生活质量。因此,作为一种年轻女性生育力的保存方法,卵巢组织冻存和移植技术成为近年的研究热点。目前该技术尚未完全成熟,移植效果会因冷冻方法、卵巢组织块大小、移植部位、抗氧化损伤、生长因子、机械因素等诸多因素的影响而不易确定。此外,卵巢移植技术也面临成功率较低,移植后将冻存卵巢组织内残存肿瘤细胞重新植入体内的风险,以及移植相关的伦理问题等许多亟待解决的问题。总之,目前尚未形成规范、统一的卵巢组织冻存、移植技术和效果评定标准,但可以相信,随着医学技术的发展和进步,卵巢组织冷冻及移植技术将会为女性肿瘤患者生育力和内分泌功能的保存带来福音。     

大鼠胚胎卵巢冻存前后异体异位移植的实验研究

目的 :研究胚胎卵巢冷 解冻移植后的生存、生长及功能恢复情况。方法 :将冻存大鼠胚胎卵巢植入去势成年雌鼠皮下 ,观察阴道脱落细胞变化。以新鲜胚胎卵巢移植作为对照。术后 3个月 ,取移植卵巢及自身子宫进行组织学研究 ,并测定血清雌二醇(E2 )水平。结果 :移植卵巢内可见不同阶段的发育卵泡 ,并可见间质腺和黄体。阴道上皮细胞及子宫内膜有雌激素效应。血清学研究显示 ,移植卵巢具有与正常卵巢接近的内分泌功能。结论 :冻融胚胎卵巢移植后能在异体异位存活、生长发育并具有内分泌功能     

卵巢组织冻存移植保护女性生育力的临床应用

近年来,随着癌症诊断、治疗技术的进步和患者生存率的提高,以及国家三孩政策的放开,女性生育力保护和保存已成为国际和国内的热点。卵巢组织冻存移植技术是儿童及抗癌治疗无法延迟的育龄女性生育力保护的惟一方法。文章主要聚焦于卵巢组织冻存移植生育力保护技术的临床应用。     

不同浓度保护剂对超速冻存小鼠卵巢组织的效果观察

目的:寻找适宜的小鼠卵巢组织超速冻存低温保护剂种类及浓度。方法:以不同浓度二甲亚砜(DMSO)和丙二醇(PROH)(1.5　mol/L、3　mol/L)作低温保护液时,观察超速冻存法对小鼠卵巢组织的冻存效果。解冻后行自体和异体卵巢的肾被膜下移植。通过对受体动情期的恢复及激素水平测定等方法对冻存效果进行观察。结果:低浓度组DMSO和PROH动情期的恢复率分别为75%和71%;血清E2分别为(10.5和16.8)×10-9　mmol/L,与作为对照的慢速程序法组无显著性差异(66.7%和100%;11.7×10-9　mmol/L和12.1×10-9　mmol/L)。高浓度动情期的恢复率分别为100%和62.5%;血清E2分别为14.1×10-9　mmol/L(DMSO)和7.4×10-9　mmol/L(PROH),与慢速组比也无显著性差异。结论:两种浓度的DMSO和PROH均适用于超速冻存法,尽管高浓度的DMSO在超速冻存时可取得较好的动情周期恢复率,但血清E2 水平的结果以低浓度的PROH为好。     

荷人卵巢上皮癌裸鼠冻融卵巢组织移植的效果评价

目的:获取人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤癌旁正常卵巢组织,经安全筛查并冻融后移植至去势裸鼠体内,探讨移植后效果,为临床应用提供依据。方法:将人卵巢上皮癌OVCAR3细胞种植于裸鼠皮下以获取瘤源,并进行卵巢原位移植,建立卵巢癌原位移植瘤模型,解剖裸鼠获取癌旁正常卵巢组织。癌旁组:取筛选后的癌旁卵巢组织进行玻璃化冷冻,复苏后分别进行皮下及原位移植,各20例;对照组:同龄正常裸鼠卵巢组织,皮下移植及原位移植各20例;去势裸鼠组:20只同龄去势裸鼠;正常卵巢组:20只同龄正常裸鼠。移植12周后,分析各组裸鼠卵巢组织内卵泡形态及激素分泌功能。结果:40只人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤模型中共获取35份活检正常的癌旁卵巢组织,获取率87.5%(35/40)。玻璃化冷冻前后卵巢组织中卵泡形态及各级卵泡比例均无显著差异(P>0.05),癌旁冷冻组织和癌旁新鲜组织的异常卵泡比例差异无统计学意义(P>0.05),冷冻组织以初级卵泡及次级卵泡等窦前卵泡为主。癌旁组皮下移植组织存活率80%(16/20),对照组皮下移植组织存活率90%(18/20),癌旁组原位移植组织存活率90%(18/20),对照组原位移植组织存活率95%(19/20)。移植后组织内卵泡以次级卵泡及窦状卵泡为主,各级卵泡的形态及构成比和未移植的同龄正常裸鼠卵巢相似(P>0.05);癌旁组卵泡数明显低于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01);皮下移植和原位移植组织内的各级卵泡数差异无统计学意义(P>0.05)。癌旁组卵泡刺激素水平明显低于去势裸鼠组,而雌二醇水平明显高于去势裸鼠组(P<0.01);癌旁组卵泡刺激素水平明显高于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01),而雌二醇水平明显低于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01);皮下移植和原位移植的卵泡刺激素水平和雌二醇水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:癌旁卵巢组织冻融移植后有正常卵泡发育及激素分泌功能;皮下移植和原位移植均可取得较好的效果;癌旁卵巢组织冻融移植有望作为卵巢上皮癌患者治疗后恢复卵巢内分泌功能的有效手段。     

卵泡液中双酚A在多囊卵巢综合征发病中的作用及相关因素探讨

目的:探讨卵泡液中双酚A(bisphenol A,BPA)在多囊卵巢综合征(PCOS)发病中的作用。方法:于取卵日收集行体外受精/卵胞质内单精子显微注射(IVF/ICSI)的PCOS患者和非PCOS患者的卵泡液,检测患者卵泡液BPA水平和卵泡液性激素水平,并进一步与患者血清抗苗勒氏管激素(AMH)及临床结局等因素行相关性分析。结果:PCOS患者和非PCOS患者的卵泡液BPA水平(446.57±63.57 ng/L vs 336.29±59.02 ng/L,P0.001)、血清AMH水平(12.09±4.78μg/L vs5.69±2.98μg/L,P0.001)、卵泡液FSH(5.58±1.66 IU/L vs 3.95±1.54 IU/L,P=0.008)、LH(4.54±2.97 IU/L vs 0.96±1.10 IU/L,P0.001)和T(54.68±34.34 nmol/L vs 32.48±16.68 nmol/L,P=0.035)组间比较有统计学差异。相关性分析显示,卵泡液中BPA水平与血清AMH水平呈显著正相关(r=0.577,P=0.001)。结论:卵巢局部的BPA暴露可能参与了PCOS疾病的发生、发展。     

复发性子宫内膜异位症根治术时自体卵巢组织移植的价值

目的 探讨保守手术后复发的重症子宫内膜异位症(内异症)根治术时自体卵巢组织移植的应用价值。方法 1997年2月-2000年3月,对17例40岁以下,内异症保守手术后出现复发性疼痛和盆腔包块,药物治疗无效的Ⅳ期内异症患者,施行根治术时将自体卵巢组织片移植于大网膜之中。术后雌激素替代治疗3个月。停药后1个月后每月测定卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌激素(E2),直至卵巢功能恢复。E2水平上升后,测定基础体温,每周做阴道脱落细胞检查,计算成熟指数(MI)。每4次为1个周期。结果17例患者中,8例术后4个月血清E2水平上升,7例术后6个月E2水平上升,2例术后12个月E2维持在低水平,FSH、LH上升被列为卵巢组织失活。卵巢组织移植成活率为88.2％。卵巢功能恢复后,基础体温呈双相型,阴道脱落细胞涂片呈现周期性变化片型。随访17例患者均无复发性疼痛和盆腔包块。结论 对卵巢组织破坏严重的复发性重症内异症患者,根治术时实施卵巢组织移植是避免内异症复发,重建卵巢功能的有效方法。     

卵巢过度刺激综合征伴视神经症状一例

患者 31岁 ,结婚 7年未孕。 14岁月经初潮 ,周期 30d至数月。B超检查显示 :子宫大小正常 ;双侧卵巢均匀性增大 ,包膜回声增强 ,轮廓较光滑 ,每侧卵巢均可见 10余个小囊性卵泡 ,呈车轮状。血清雌二醇 (E2 ) 2 4 4 pmol/L ,促卵泡激素 (FSH) 5 95IU/L ,促黄体生成激素 (LH) 17 3IU/L ,睾酮 (T) 2 5 1nmol/L ,孕酮 (P) 1 8nmol/L ,泌乳素 (PRL)4 8nmol/L ,确诊为多囊卵巢综合征。于 2 0 0 1年 11月行体外受精 胚胎移植治疗。治疗周期前 7d开始予促性腺激素释放激素激动剂 (喷鼻剂 )喷鼻 ,每日 6次 ,每日剂量 6 0 0 μg ,周期第 3天…     

GnRHa化疗期间对卵巢功能保护的临床研究

目的 探讨促性腺激素释放激素类似物（GnRHa）对化疗患者卵巢功能保护的临床价值。方法 选取60例绝经前妇科恶性肿瘤患者,采用随机数字表法分为研究组（30例,给予GnRHa治疗）与对照组（30例,不给予GnRHa治疗）,连续使用6次,治疗结束后均随访观察3个月。比较两组患者治疗前后促黄体生成素、抗缪勒管激素（AHM）、卵泡刺激素水平、月经来潮恢复情况与时间及卵巢功能损伤症状发生率。结果 治疗前,两组患者促黄体生成素（8.05±1.26VS 8.12±1.30 mIU/ml）、AHM(3.95±1.10 VS 4.02±1.07 ng/ml)、卵泡刺激素（5.43±0.95 VS 5.50±0.94 pg/ml）水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）;治疗结束后研究组患者促黄体生成素（9.59±1.75 VS 15.43±2.59 mIU/ml）、卵泡刺激素（7.26±1.22 VS 10.35±2.45 pg/ml）水平低于对照组,AHM(2.55±0.89 VS 1.43±0.28 ng/ml)水平高于对照组,研究组患者化疗结束后3个月内的月经恢复率（100%VS 70%）...     

应用重组人促卵泡激素治疗世界卫生组织Ⅱ型无排卵妇女导致卵泡正常发育,雌二醇分泌及妊娠

采用小剂量遗传工程重组的人促卵泡激素(FSH)长期皮下注射,治疗1例WHO Ⅱ型无排卵性不育患者,成功地诱导正常卵泡发育及妊娠。患者25岁,主诉月经稀10年,不育3年。体重指数(BMI)34.1。血清促黄体激素(LH)6.5IU/L,FSH4.9IU/L,雌二醇(E_2)110pmol/L,睾酮(T)2.9nmol/L;泌乳素、17α羟孕酮及去氢表雄酮硫     

冻融后移植的小鼠卵巢组织对促性腺激素的反应

目的 探讨冻融后移植的小鼠卵巢组织对促性腺激素的反应.方法 将36只性成熟雌性小白鼠随机分为新鲜移植组、冻融移植组和对照组,每组12只.新鲜移植组小鼠切除双侧卵巢,将卵巢切成小组织块,立即移植人双侧肾被膜下;冻融移植组小鼠切除双侧卵巢,将卵巢切成小组织块,采用玻璃化冷冻方法冷冻保存,2周后将冷冻卵巢组织复苏,移植入小鼠双侧肾被膜下.卵巢组织移植2周后,新鲜移植组和冻融移植组每组随机取6只小鼠应用7.5 IU人绝经期促性腺激素及10 IU绒毛膜促性腺激素,观察移植后的卵巢组织对促性腺激素的反应.同时应用免疫组化染色方法观察各组卵泡中卵泡刺激素受体的表达情况.结果 新鲜移植组、冻融移植组和对照组未应用促性腺激素小鼠卵巢组织内近成熟卵泡百分率分别为2.3%、2.3%和2.6%,应用促性腺激素小鼠卵巢组织内近成熟卵泡百分率分别为4.2%、4.0%和5.8%,各组内分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);新鲜移植组和冻融移植组与对照组比较,差异均元统计学意义(P＞0.05).新鲜移植组、冻融移植组和对照组卵泡刺激素受体表达积分吸光度值在窦状卵泡中分别为9408±2777、9175±3093和8838±2064,在窦前卵泡中分别为4531±1903、4808±1386和5516±1136,各组间分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 卵巢组织冷冻保存、复苏及移植过程未影响卵巢卵泡刺激素受体的表达,冻融后移植的小鼠卵巢组织对外源性促性腺激素的反应未受冷冻、复苏及移植等过程影响.     

子宫内膜异位症根治术时自体卵巢组织移植的应用

目的　评价保守手术后复发的重症子宫内膜异位症 (内异症 )根治术时实施自体卵巢组织移植的价值。方法　常州市妇幼保健院 1997年 2月至 2 0 0 1年 12月对 2 5例子宫内膜异位症保守手术后出现复发的Ⅳ期内异症患者 ,施行根治术或剩余卵巢切除术 ,术时将自体卵巢组织片移植于大网膜之中。术后测定卵泡刺激素(FSH)、黄体生成激素 (LH)和雌二醇 (E2 )。E2 水平上升后 ,测定基础体温 ,做阴道脱落细胞学检查。结果　 2 5例患者中 ,2 0例术后 4～ 6个月E2 水平上升 ,卵巢组织移植成活率为 80 0 %。卵巢功能维持时间最长者已达 4年以上。仅 1例出现内异症复发 ,复发率为 5 0 %。结论　对卵巢组织破坏严重的复发性重症内异症患者 ,根治术时实施卵巢组织移植是保留卵巢功能 ,减少内异症复发的有效方法。     

卵巢过度刺激综合征的病例分析

病例简介患者25岁,已婚3年未孕。月经稀发3～6个月一次,每次5～7天,量中等。输卵管通水及输卵管造影均示通畅。丈夫精液分析正常。既往BBT 单相型,经前子宫内膜活检为“增生期内膜”,经多次使用克罗米芬诱发排卵失败。体重65kg,腹中线及小腿皮肤毛多且长。外阴、阴道及宫颈正常,宫体前倾,大小质地正常,双侧卵巢稍大,双侧乳房挤压无乳汁。LH50IU/L,FSH15IU/L,PRL15μg/L,孕酮试验阳性。患者末次月经始于1988年11月16日,于11月20日开始服克罗米芬,每日100mg,连续5天。于11月23日始肌注hMG2支/日(1支hMG 含FSH 及LH 各75IU),连续3天。从11月26日(周期第11天)起每天作B 型超声检查及血清E_2放射免疫测定,监测卵泡发育,结果见附表。     

自然周期ICSI+IVM妊娠三胎减胎后成功分娩双胎一例报道

患者,30岁,其丈夫因少精子症,在外院行ICSI助孕未孕来我院就诊。B超检查:右侧卵巢:40×25mm,左侧卵巢:40×20mm,双侧卵巢均可见10余个小卵泡。考虑患者为多囊卵巢,为预防OHSS,减少超促排卵费用及降低所带来的副作用,拟行自然周期取卵行卵浆内单精子注射(ICSI)胚胎移植,其中未成熟卵体外培养(IVM)成熟后再行ICSI后移植。IVM培养液含TCM199(美国Sigma产品)、r-hFSH(瑞士Serono产品)和hMG(珠海丽珠公司产品)。月经d8开始阴道超声监测卵泡发育,月经d12测得右侧卵巢优势卵泡为14×14mm,内膜8mm,呈三线性,双侧卵巢可见20余小卵泡,肌…