铜绿假单胞菌外膜囊泡对肺上皮细胞分泌细胞因子的影响

目的:观察铜绿假单胞菌外膜囊泡(OMVs)对肺上皮细胞分泌细胞因子的影响。方法:培养肺上皮细胞BEAS–2B,采用1、10和30μg·mL-1浓度OMVs刺激12、16或24 h,实时定量聚合酶链式反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF–α)和白细胞介素8(IL–8)和mRNA表达。ELISA检测培养上清TNF–α和IL–8分泌的变化;提取核蛋白,采用ELISA测定OMVs处理前后核因子κB(NF–κB)活性,并采用NF–κB抑制剂处理细胞,观察对OMVs诱导TNF–α和IL–8分泌的影响。结果:采用1μg·mL~(-1)、10μg·mL~(-1)和30μg·mL~(-1) OMVs处理BEAS–2B细胞12 h后,TNF–α和IL–8的mRNA水平均高于阴性对照组,呈一定的剂量依赖性。30μg·mL~(-1) OMVs作用细胞4 h后即可上调TNF–α和IL–8 mRNA表达,并持续至16 h。30μg·mL~(-1) OMVs处理细胞后,NF–κB的活性明显增强,NF–κB抑制剂(PDTC)预处理细胞后,TNF–α和IL–8分泌水平降低。结论:OMVs可诱导BEAS–2B表达TNF–α和IL–8,其机制可能与激活NF–κB有关。     

UPLC法同时测定黑豆甘草汤中8个指标成分

目的建立UPLC法同时测定黑豆甘草汤中8个指标成分。方法采用0.1 mol·L~(-1)盐酸与丙酮溶液提取样品,运用UPLC技术,使用ACE Excel 2 C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱;体积流量为0.3 mL·min~(-1);检测波长为260 nm和530 nm,柱温35℃,进样量为5μL。结果黑豆甘草汤中矢车菊-3-O-葡萄糖苷、大豆苷、黄豆黄苷、甘草苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、甘草酸单铵盐分别在11.88~380.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 2)、16.88~540.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 5)、12.50~400.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 3)、14.38~460.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 2)、17.50~560.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 6)、15.63~500.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 5)、6.00~192.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 2)、15.63~500.0μg·mL~(-1)(R~2=0.999 5)范围内线性关系良好;平均回收率均在95.12%~105.83%。结论所建立的UPLC法可同时测定黑豆甘草汤中8个指标成分,结果稳定可靠,可作为黑豆甘草汤的质量控制的方法。     

气相色谱法测定温郁金挥发油中5种成分含量

目的:同时测定温郁金中5种成分含量,为郁金挥发油制定质量标准。方法:采用气相色谱法,HP-5MS气相色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25μm Aglient),分流不分流进样口:温度250℃,FID检测器:温度300℃,H2:40 m L·min~(-1),空气:400 m L·min~(-1),流速1 m L·min~(-1),程序升温条件:70℃,10℃·min~(-1)至130℃,1℃·min~(-1)至140℃,5℃·min~(-1)至145.5℃,0.1℃·min~(-1)至146℃,2℃·min~(-1)至154℃0.1℃·min~(-1)至155℃,10℃·min~(-1)至280℃。结果:建立了同时测定温郁金中五种成分的气相色谱法。β-榄香烯、莪术醇、异莪术醇、吉马酮、莪术二酮的线性范围分别为13.75~220.00μg·mL~(-1)、5.41~86.50μg·mL~(-1)、15.75~252.00μg·mL~(-1)、3.44~55.00μg·mL~(-1)、14.75~236.00μg·mL~(-1)。精密度、重复性、24 h稳定性、加样回收率良好。结论:该方法操作简便,结果准确,可用于温郁金挥发油质量控制。     

胀果甘草多糖对RAW264.7巨噬细胞免疫功能的影响

目的:研究胀果甘草多糖GiP-B1对RAW 264.7巨噬细胞免疫功能的影响。方法:用浓度为25~400μg·mL~(-1)的GiP-B1与RAW 264.7巨噬细胞共同培养,MTT法检测其细胞增殖率,中性红试验检测其吞噬功能,ELISA法检测其分泌TNF-α、IL-1β的功能,Griess法检测其释放NO和iNOS的能力,RT-q PCR法检测其iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA表达。结果:给药24 h后,与空白对照组相比,200~400μg·mL~(-1)组的GiPB1可促进RAW264.7巨噬细胞的增殖,差异极显著(P0.01);50~100μg·mL~(-1)组的GiP-B1可显著促进RAW 264.7巨噬细胞的吞噬作用(P0.05)。作用RAW 264.7巨噬细胞48 h后,100μg·mL~(-1)和400μg·mL~(-1)组的GiP-B1可显著提高巨噬细胞的IL-1β分泌量(P0.05),100~200μg·mL~(-1)组的GiP-B1则可显著提高巨噬细胞分泌TNF-α的能力(P0.05);不同浓度的GiP-B1干预RAW 264.7巨噬细胞后培养48 h,GiP-B1浓度增至100~400μg·mL~(-1)时,NO生成量显著高于阴性对照组(P0.05),且与GiP-B1浓度存在剂量效应关系;NOS生成量也高于阴性对照组,但仅200μg·mL~(-1)组有显著性差异(P0.05)。给药24 h后,100μg·mL~(-1)和400μg·mL~(-1)组的GiP-B1可显著增加iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA表达量(P0.05)。结论:一定质量浓度的GiP-B1能增强RAW264.7巨噬细胞增殖率和吞噬能力,促TNF-α、IL-1β、NO及NOS释放,上调iNOS、TNF-α、IL-1β的mRNA水平,从而增强RAW264.7巨噬细胞的免疫功能。     

虎掌南星中氨基酸含量测定

目的:建立虎掌南星中各氨基酸含量测定的方法。方法:采用柱前衍生化后进行高效液相色谱法定量分析。色谱柱为Diamonsil C_(18)(250mm×4.6mm,5μm),柱温35℃;以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂;乙腈-醋酸铵缓冲液(pH=6.5)为流动相体系,梯度洗脱,流速1.0mL·min~(-1);检测波长254nm。结果:谷氨酸和色氨酸在2μg·mL~(-1)~100μg·mL~(-1)浓度范围内,精氨酸在6~300μg·mL~(-1)浓度范围内,其他氨基酸在0.8~40μg·mL~(-1)浓度范围内均与峰面积呈良好线性关系,相关系数均不低于0.999 5,平均回收率均在93.43%~111.01%之间,RSD均小于3%。结论:该方法灵敏、准确,重现性好,可用于虎掌南星中各氨基酸含量的测定。     

HPLC法同时测定金黄凝胶中5种成分的含量

目的:通过梯度洗脱的方法,建立了金黄凝胶中芦荟大黄素、大黄酸、姜黄素、大黄素、大黄酚的含量测定方法。方法:采用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6×250 mm,5μm),以乙腈-4%冰醋酸为流动相梯度洗脱,柱温:30℃,检测波长:430 nm,流速:1.0 m L·min~(-1)。结果:在此条件下5种成分能够得到很好的分离,芦荟大黄素、大黄酸、姜黄素、大黄素、大黄酚的线性范围分别为0.316~6.32μg·mL~(-1)(r=1.0000,n=5),0.536~10.72μg·mL~(-1)(r=0.9999,n=5),0.325~6.50μg·mL~(-1)(r=1.0000,n=5),0.57~11.40μg·mL~(-1)(r=1.0000,n=5),0.491~9.82μg·mL~(-1)(r=1.0000,n=5)。平均加样回收率(n=6)分别为99.7%,98.8%,99.2%,97.4%,99.9%,RSD%分别为2.47%,2.55%,2.64%,1.50%,2.54%。结论:该方法简便、快速、准确,重复性好,可用于控制金黄凝胶的质量。     

高效液相色谱法测定人血浆中拉莫三嗪浓度

目的:建立测定人血浆中拉莫三嗪浓度的高效液相色谱法。方法:以Agilent C18反相柱(150 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为30 mmol·L~(-1)醋酸铵–乙腈–甲醇(30:15:55);流速:1.0 mL·min~(-1);柱温:30℃;检测波长:310 nm。灵敏度为0.01AUFS。以乙酸乙酯与二氯甲烷(75:25)为提取剂。结果:拉莫三嗪的低、中、高(1.0,4.0,16.0μg·mL~(-1))3种浓度平均相对回收率分别为100.1%,99.78%,98.97%,提取回收率分别为73.66%,75.28%,78.61%;日内、日间偏差RSD均低于15%(n=5);分析方法的检测限0.25μg·mL~(-1);线性范围为0.5~24.0μg·mL~(-1)。线性方程:Y=5.277X+1.06,r=0.9995(n=7)。结论:该测定方法对拉莫三嗪的监测和研究具有较高的灵敏度,同时能够对其进行快速准确的判定。     

UFLC法同时测定黄芩中4种活性成分的含量

目的:建立超快速液相色谱法同时测定黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量。方法:采用Shim-Pack XR-ODS柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm);流动相为0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~11 min,35%~41%B;11~12 min,41%~35%B),平衡时间2 min;流速为0.4 m L·min-1;检测波长为275nm;柱温为30℃。结果:黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素分别在20~200μg·mL~(-1)(r=0.999 6)、4.0~40μg·mL~(-1)(r=0.999 5)、0.1~1.0μg·mL~(-1)(r=0.999 3)和0.4~4.0μg·mL~(-1)(r=0.999 6)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为99.2%,98.2%,98.7%和99.1%。结论:该方法结果准确、操作简便、具有良好的重现性和稳定性,可用于黄芩药材的质量控制。     

NT–proBNP和D–二聚体联合检测在COPD合并肺栓塞中的诊断价值

目的:探究N–端脑肽钠前体(NT–proBNP)和D–二聚体在慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺栓塞中的诊断价值。方法:选取2016年6月至2017年12月龙川县人民医院收治的COPD患者60例作为对照组,以60例COPD合并肺栓塞作为观察组,分别检测两组患者血清NT–proBNP和血浆D–二聚体水平。结果:(1)经统计学分析,观察组患者NT–proBNP(2801.29±1320.22)pg·mL~(-1)和D–二聚体水平(1.297±0.445)μg·mL~(-1)均显著高于对照组的(1842.71±814.26)pg·mL~(-1)和(0.748±0.257)μg·mL~(-1),差异具有统计学意义(P 0.05);(2)受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清NT–proBNP和血浆D–二聚体水平联合检验的灵敏度(89.3%)与特异度(94.4%)均显著高于血清NT–proBNP单纯检测和血浆D–二聚体水平单纯检测的灵敏度与特异度,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:NT–proBNP与D–二聚体联合诊断COPD合并肺栓塞中的灵敏度和特异度高,可作为临床诊断标准。     

黄芪甲苷对脂多糖诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1的抗炎作用及机制研究

目的研究黄芪甲苷对脂多糖(LPS)诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1的抗炎作用及有关机制。方法采用LPS不同浓度(0.25、0.5、1、1.5、2μg·mL~(-1))及时间(15、30、45、60、120 min)诱导GES-1细胞炎症反应,筛选LPS诱导的合适浓度、时间。将GES-1细胞分为空白对照组、模型组及黄芪甲苷0.1、1、10μg·mL~(-1)浓度组;黄芪甲苷预处理2 h后,以筛选出的LPS浓度、时间诱导GES-1细胞。采用MTS法检测细胞存活率;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)的含量;采用RT-qPCR法检测细胞诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧合酶2(COX-2)mRNA的表达;采用Western Blot法检测细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白(Erk、Jnk/SAPK、P38 MAPK)的磷酸化水平。结果选择0.25μg·mL~(-1)及30 min作为LPS诱导GES-1细胞炎症模型的浓度及时间。黄芪甲苷浓度≤100μg·mL~(-1)时对GES-1细胞存活率无明显影响。与空白对照组比较,模型组细胞的炎症因子IL-6水平明显升高(P0.01),iNOS、COX-2 mRNA表达水平明显升高(P0.01),p-P38、p-Jnk、p-Erk蛋白表达明显上调(P0.001)。与模型组比较,0.1、1、10μg·mL~(-1)不同浓度黄芪甲苷组的细胞IL-6水平均明显降低(P0.01),iNOS及COX-2(10μg·mL~(-1)浓度组)mRNA表达均明显下调(P0.01),p-P38(1、10μg·mL~(-1)浓度组)及p-Jnk(0.1、10μg·mL~(-1)浓度组)、p-Erk(0.1、10μg·mL~(-1)浓度组)蛋白表达均明显下调(P0.05,P0.01,P0.001)。结论黄芪甲苷可能通过抑制MAPK信号通路的激活来抑制LPS诱导的GES-1细胞炎症相关因子产生,从而发挥抗炎作用。     

类叶牡丹提取物对TNF-α诱导的人类风湿性关节炎成纤维滑膜细胞因子的影响

目的利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人类风湿性关节炎成纤维滑膜细胞(MH7A)对细胞因子分泌的影响来探讨类叶牡丹提取物(Caulophyllum robustum Maxim Extract,CRME)抗类风湿性关节炎(RA)的分子机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测CRME对MH7A细胞活力的影响,选取半数抑制浓度(IC_(50))以下的药物浓度作为干预剂量;ELISA法检测CRME(50,100,500μg·mL~(-1))剂量对TNF-α(20 ng·mL~(-1))诱导MH7A细胞释放白介素-6(IL-6)、白介素-4(IL-4)、血管内皮生长因子(VEGF)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、促凋亡因子Bax、Fas L和抗凋亡因子Bcl-2的影响。结果 CRME在质量浓度为50μg·mL~(-1)~500μg·mL~(-1)对细胞活力均无影响,IC_(50)值为645.32μg·mL~(-1)。与空白组比较,模型组细胞上清中IL-4、IL-6、VEGF、RANKL、Bax、Bcl-2和Fas L含量均显著提高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,CRME各剂量组均能降低IL-6水平及升高IL-4水平(P0.01);CRME 100,500μg·mL~(-1)剂量组能明显降低VEGF的表达(P0.05),且具有浓度依赖性;CRME 500μg·mL~(-1)剂量组能明显降低RANKL含量(P0.01);CRME 100μg·mL~(-1)剂量组可促进Fas L的表达(P0.01);CRME 50μg·mL~(-1)剂量组可降低Bcl-2的表达(P0.05);CRME各剂量组均可促进Bax的表达(P0.01)。结论减轻炎症、降低血管翳形成、增加骨保护,促进异常增生的滑膜细胞的凋亡可能是CRME抗类风湿性疾病的机理之一。     

HPLC法同时测定苏叶黄连汤中5种成分的含量分析

目的:建立同时测定苏叶黄连汤中木犀草素、芹菜素、迷迭香酸、盐酸小檗碱和盐酸巴马汀5种成分的HPLC方法。方法:采用Agilent Hypersil BDS-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相为乙腈(C)-0.2%磷酸水溶液(三乙胺调节pH=4)(A),梯度洗脱;流速1.0 mL·min~(-1);检测波长345 nm;柱温35℃。结果:5种成分分离度良好,阴性无干扰,木犀草素、芹菜素、迷迭香酸、盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的质量浓度分别在0.13～4.20μg·mL~(-1)(r~2=0.999 8)、0.05～1.50μg·mL~(-1)(r~2=0.999 7)、8.75～280.00μg·mL~(-1)(r~2=0.999 5)、28.75～920.00μg·mL~(-1)(r~2=0.999 7)和1.63～52.00μg·mL~(-1)(r~2=0.999 5)范围内与峰面积呈良好的线性关系;精密度、重复性良好,RSD均小于3%;在室温条件下24 h内稳定;平均加样回收率在99.41%～102.81%之间(RSD为0.27%～2.88%)。结论:所建立的方法操作简单,重复性好,可用于苏叶黄连汤中5种成分的同时测定。     

β-细辛醚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞炎症因子表达的影响

目的:探讨β-细辛醚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞炎症因子表达的影响。方法:(1)将对数生长期PC12细胞随机分为正常对照组、Aβ_(1-42)3.3μM、Aβ_(1-42)10μM、Aβ_(1-42)30μM。采用实时无标记动态细胞分析技术(Real Time Cell Analusis,RTCA)和MTT法检测各组PC12细胞存活率;Western blotting检测PC12细胞的IL-1β和TNF-α蛋白表达的变化。(2)将对数生长期PC12细胞随机分为正常对照组、Aβ_(1-42)模型组、β-细辛醚18.5μg·mL~(-1)、β-细辛醚55.5μg·mL~(-1)、β-细辛醚166.7μg·mL~(-1)。采用Western blotting检测PC12细胞的IL-1β和TNF-α蛋白表达的变化。结果:(1)3.3μM Aβ_(1-42)能显著增加PC12细胞IL-1β和TNF-α的蛋白表达(P<0.05),对PC12细胞的存活率无显著影响(P>0.05)。(2)与正常对照组相比,Aβ_(1-42)模型组细胞的IL-1β和TNF-α的表达明显增加(P<0.01)。与Aβ_(1-42)模型组相比,β-细辛醚(55.5μg·mL~(-1)、166.7μg·m L~-1)能显著降低PC12细胞IL-1β、TNF-α的表达(P<0.01),β-细辛醚(18.5μg·mL~(-1))能降低PC12细胞IL-1β的表达(P<0.05),但对TNF-α的表达无显著影响(P>0.05)。结论:β-细辛醚可以有效地抑制Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞分泌IL-1β、TNF-α的蛋白表达。     

HPLC法测定补肾强身片中5种化学成分的含量

目的:同时测定补肾强身片中原儿茶酸、绿原酸、金丝桃苷、特女贞苷和淫羊藿苷的含量。方法:采用Acclaim C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱;检测波长为260、325、660、224、270 nm;流速为1.0 mL·min~(-1);进样量为10μL;柱温为35℃。结果:原儿茶酸、绿原酸、金丝桃苷、特女贞苷和淫羊藿苷的线性范围分别为0.782 0～156.4μg·mL~(-1)(r=0.999 69)、0.543 0～108.6μg·mL~(-1)(r=0.999 96)、0.5155～103.1μg·mL~(-1)(r=0.999 64)、0.547 5～109.5μg·mL~(-1)(r=0.999 67)、0.512 0～102.4μg·mL~(-1)(r=0.999 63)。结论:该方法操作简便、结果准确,可用于补肾强身片的质量控制。     

淫羊藿苷对TGF-β1诱导的HK-2细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的考查淫羊藿苷(Icariin)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖以及纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)表达的影响。方法采用体外培养HK-2细胞,分为空白对照组、模型组(5 ng·mL~(-1)TGF-β1)、淫羊藿苷不同浓度给药组(5 ng·mL~(-1)TGF-β1+25、50、100、200μg·mL~(-1)淫羊藿苷),培养24 h后给药处理。药物作用72 h后,观察细胞形态变化,并采用MTT法检测细胞增殖情况;采用实时荧光定量PCR法检测细胞FN mRNA的表达;采用ELISA法检测细胞上清液中FN蛋白的含量。结果与空白对照组比较,模型组的细胞增殖受到明显抑制(P0.01),HK-2细胞的FN mRNA表达显著增加(P0.01),细胞培养液中FN蛋白含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,25μg·mL~(-1)淫羊藿苷可以促进HK-2细胞的增殖(P0.01),并使细胞形态逐渐趋向正常;不同浓度组的淫羊藿苷对TGF-β1诱导的HK-2细胞FN mRNA表达以及细胞培养液中的FN蛋白含量均有下调作用,50、100、200μg·mL~(-1)浓度组作用明显(P0.01)。结论淫羊藿苷可能通过促进HK-2细胞增殖与抑制其FN mRNA及蛋白表达,发挥抗TGF-β1诱导的HK-2细胞向成纤维细胞转化的作用。     

逍遥散对非酒精性脂肪性肝炎肝郁脾虚证大鼠TLR-4/TRIF信号转导通路的影响

目的:观察逍遥散对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝郁脾虚证大鼠肝细胞Toll样受体-4(TLR-4)/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)信号转导通路活性的影响。方法:选取32只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、逍遥散治疗组和甘氨酸治疗组(n=8)。除正常组大鼠给与基础饲料常规饲养外,其余实验组均按"高糖高脂饲料+饥饱失常+慢性束缚应激"法饲养14周以建立NASH肝郁脾虚证大鼠模型,并分别给与生理盐水2 mL·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,1 g·mL~(~(-1))逍遥散溶液按3.24 mL·kg~(-1)·d~(-1)剂量灌胃,2.5 g·mL~(~(-1))甘氨酸溶液按2 mL·kg~(-1)·d~(-1)剂量灌胃,给药4周后处死。大鼠处死前均计算其肝郁脾虚证证侯积分和检测尿D-木糖排泄率,无菌低温条件下提取肝脏及脑组织。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠脑组织内去甲肾上腺素(NE),5羟色胺(5-HT)的含量,苏木素-伊红(HE)染色检测肝细胞脂肪变性及炎细胞浸润程度,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测大鼠肝组织TLR-4,TRIF蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型大鼠肝郁脾虚证证侯积分明显升高,而尿D-木糖排泄率和脑组织内5-HT,NE含量明显降低,肝组织HE染色可见肝细胞胞质内出现大量脂肪空泡及肝小叶内可见散在的点状坏死和炎细胞浸润,TLR-4和TRIF mRNA表达以及TLR-4和TRIF蛋白表达量明显升高(P0.05);与模型组比较,逍遥散治疗组和甘氨酸治疗组明显降低大鼠肝郁脾虚证证侯积分,明显升高尿D-木糖排泄率和脑组织内5-HT,NE的含量,明显减轻肝细胞脂肪变性程度及炎细胞浸润程度,明显降低TLR-4和TRIF mRNA表达以及TLR-4和TRIF蛋白表达量(P0.05)。结论:逍遥散可通过调节TLR-4/TRIF信号转导通路的活性以发挥"疏肝健脾"之功效,从而参与NASH肝郁脾虚证的治疗。     

TRPM7参与诱发心肌纤维化作用及药物干预

目的:研究脂多糖(LPS)引起的成纤维细胞上TRPM7通道的上调和细胞增殖间的关系,并利用黄芪甲苷进行干预。方法:分离大鼠乳鼠心脏成纤维细胞,分成7组,正常组、模型组(LPS 0.1μg·mL~(-1)、1μg·ml~(-1))、TRPM7通道阻断剂组(carvacrol 500μmoL·L~(-1)、2-APB 100μmoL·L~(-1))、黄芪甲苷(ASGⅣ)组(1μmoL·L~(-1)、10μmoL·L~(-1)),后4组在加入1μg·mL~(-1)LPS的同时,分别给予500μmoL·L~(-1)carvacrol、100μmoL·L~(-1)2-APB、1μmoL·L~(-1)ASGⅣ、10μmoL·L~(-1)ASGⅣ,孵育72h,通过全细胞膜片钳技术检测TRPM7电流的变化,利用RT-PCR和Western Blot方法分别测定TRPM7通道的基因和蛋白的表达,利用MTT方法测定成纤维细胞的增殖能力。结果:与正常组相比,LPS两个组的TRPM7电流大小及基因、蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组相比,carvacrol、2-APB通道阻断剂组的电流大小、基因和蛋白表达显著降低(P0.01);此外,ASGⅣ对电流、基因和蛋白表达也有不同程度的抑制作用(P0.05)。模型组的成纤维细胞增殖能力明显强于其他组(P0.01),通道阻断剂组及黄芪甲苷组均能不同程度抑制细胞的异常增殖(P0.01)。结论:脂多糖(LPS)能够使成纤维细胞上TRPM7电流大小及通道表达上调,且该上调能增强细胞增殖能力,而ASGⅣ能通过下调TRPM7表达抑制成纤维细胞的增殖。     

粉防己碱对碱烧伤角膜中基质金属蛋白酶-2的影响

目的观察粉防己碱(Tetrandrine,Tet)对大鼠碱烧伤后角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)生长及基质金属蛋白酶(matrix metallopretcinases-2,MMP-2)表达的影响,探讨其抗血管生成的作用机制。方法建立SD大鼠角膜碱烧伤模型。实验用药后裂隙灯下观察各组大鼠角膜新生血管的生长情况;并用免疫组织化学法测定MMP-2表达。结果正常对照组角膜透明,MMP-2分泌较少;碱烧伤对照组新生血管最多;各时间点Tet治疗组角膜新生血管发展均较碱烧伤对照组轻,MMP-2的表达亦较碱烧伤对照组显著降低。三组各时间段MMP-2的表达均有统计学意义。结论粉防己碱可能通过抑制MMP-2的表达而抑制新生血管的生成。     

栀子苷、京尼平、栀子蓝的体内外肝毒性对比研究

目的:通过动物与细胞实验,比较栀子苷与京尼平、栀子蓝体内外肝毒性,进一步明确中药栀子致肝毒性的物质基础,为栀子临床安全应用提供科学依据。方法:(1)体内实验部分:采用动物实验方法测定大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),总胆红素(TBIL);(2)体外实验部分:采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测不同浓度栀子苷、京尼平及栀子蓝的细胞毒作用;试剂盒法测定细胞上清液中ALT,AST的活力。结果:(1)与空白组比较,栀子苷灌胃给药0.4、1.2 g·kg~(-1) 24 h后都表现为ALT、AST、TBIL值明显升高(P0.05,P0.01),腹腔注射0.4、1.2 g·kg~(-1) 24 h后生化指标未表现出异常。京尼平腹腔注射0.1 g·kg~(-1) 24 h后AST、TBIL明显升高(P0.05,P0.01),0.2、0.4 g·kg~(-1)组全部死亡,京尼平灌胃0.2、0.4 g·kg~(-1)组ALT、AST、TBIL肝功能指标不同程度升高(P0.05,P0.01)。栀子蓝腹腔注射1.5 g·kg~(-1) TBIL明显升高(P0.05),栀子蓝灌胃6 g·kg~(-1) ALP、ALT、AST、TBIL均无明显变化。(2)细胞毒性实验结果显示,与阴性对照组相比,栀子苷给药组800、1000μg·mL~(-1)抑制人体肝细胞L-O2细胞的增殖(P0.01,P0.05),同时ALT测定结果显示,800、1000μg·mL~(-1)可以显著提高肝细胞培养上清液中ALT的活力(P0.01,P0.05)。栀子蓝给药组200、600、800、1000μg·mL~(-1)可抑制人体肝细胞L-O2细胞的增殖(P0.01),ALT测定结果显示800、1000μg·mL~(-1)可显著增加ALT活力(P0.01)。京尼平给药组50、100、150、200、250、3000μg·mL~(-1)具有显著的细胞毒作用(P0.01),ALT测定结果显示100、150μg·mL~(-1)明显提高肝细胞培养上清液中ALT活力(P0.05)。结论:京尼平具有明确的体内外肝毒性,推测京尼平可能是栀子苷在体内的毒性物质基础。     

HPLC法同时测定理气舒心片中橙皮苷和柚皮苷含量

目的:建立理气舒心片中橙皮苷、柚皮苷的反相高效液相色谱(RP-HPLC)含量测定方法,进一步提高理气舒心片的质量标准。方法:采用Sunfire C_(18)色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-2%冰醋酸溶液(30∶70)为流动相,流速1.0mL·min~(-1),检测波长284nm,柱温30℃,进样量10μL。结果:柚皮苷和橙皮苷的线性范围分别为5.72~286.0μg·mL~(-1)、4.856~242.8μg·mL~(-1);回收率分别为97.1%(RSD=1.2%)、103.2%(RSD=1.1%)。不同厂家理气舒心片中柚皮苷、橙皮苷的含量差别很大,含量范围为0.198~2.670mg·g~(-1)、0.800~3.123mg·g~(-1)。结论:该方法经方法学验证,可用于理气舒心片中橙皮苷、柚皮苷含量的测定,可为理气舒心片的质量标准改进提供参考,有效控制其质量。