黄芪多糖体外干预对大鼠骨髓源性内皮祖细胞增殖、分化、周期分布的影响

目的:观察黄芪多糖体外干预培养对大鼠骨髓源性内皮祖细胞增殖、分化、周期分布的影响。方法:实验采用密度梯度离心法分离、培养、纯化大鼠骨髓源性内皮祖细胞;利用FITC-UEA-1和Dil-ac LDL双染色及流式细胞术检测细胞表型对其进行抽样鉴定;收集贴壁细胞,将其随机分成6组(设立对照组),予以不同浓度的黄芪多糖(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mg/m L)干预培养24 h;其中,细胞增殖实验时效关系研究中予以黄芪多糖(0.4 mg/m L)进行干预培养不同的时间(0、6、12、24、48 h),MTT比色法检测大鼠骨髓源性内皮祖细胞的增殖能力,流式细胞术检测大鼠骨髓源性内皮祖细胞的分化能力和细胞周期分布。结果:黄芪多糖体外干预能有效促进大鼠骨髓源性内皮祖细胞的增殖(P0.01);能促进细胞向内皮细胞系分化(P0.05或P0.01);增加大鼠骨髓源性内皮祖细胞S+G2期细胞的比例,G0/G1期细胞比例明显减少,具有一定的量效关系(P0.05或P0.01);黄芪多糖干预浓度为0.4 mg/m L时最为显著;细胞增殖实验时效关系研究中呈时间依赖性增加(P0.05或P0.01),24 h达到最佳效应。结论:黄芪多糖体外干预能够有效增加大鼠骨髓源性内皮祖细胞的增殖能力,进而促进细胞向内皮细胞系分化。     

健脾补肾活血方对大鼠骨髓源内皮祖细胞生物学功能的影响

目的:探讨健脾补肾活血方对大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖、迁移及黏附的影响。方法:体外分离培养大鼠骨髓源内皮祖细胞,设空白对照组、健脾补肾活血方低剂量组(0.35 g/ml)、健脾补肾活血方中剂量组(0.65 g/ml)、健脾补肾活血方高剂量组(1.0 g/ml)。药物干预24 h后,MTT法检测细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移能力,黏附实验检测细胞黏附能力。结果:与空白对照组比较,不同浓度的健脾补肾活血方以剂量依赖方式显著提高大鼠骨髓源内皮祖细胞的增殖水平,促进细胞迁移,增强细胞的黏附能力,且健脾补肾活血方高剂量组对细胞增殖、迁移及黏附的影响最大。结论:健脾补肾活血方能促进大鼠骨髓源内皮祖细胞的增殖、迁移及黏附功能,具有恢复细胞生物学功能的作用。     

黄芪主要活性成分及其提取物对鼠骨髓间充质干细胞增殖作用的影响

目的研究黄芪注射液、黄芪甲苷及黄芪多糖对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖的影响。方法将黄芪注射液、黄芪甲苷及黄芪多糖添加入大鼠BMSC培养基中,并利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测培养不同时间(24,48,72h)后的细胞活性。结果 MTT法检测结果显示0.05g/ml浓度的黄芪注射液、100μmol/L的黄芪甲苷及1mg/ml的黄芪多糖后,大鼠BMSC的细胞活性均明显高于未添加组(P0.05)。结论适宜浓度的黄芪注射液、黄芪甲苷和黄芪多糖可显著促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖。     

黄芪多糖对肺癌微环境中BMSCs增殖及TAFs分化的影响

目的:探讨黄芪多糖(APS)对肺癌微环境中骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖、分化及肿瘤相关成纤维细胞(Tumor-associated Fibroblasts,TAFs)相关分子表达的影响。方法:采用CCK-8法筛选黄芪多糖作用于肺癌细胞Lewis(Lewis Lung Cancer,LLC)、BMSCs的最佳药物浓度;利用Transwell小室建立BMSCs与LLC细胞的共培养体系,并以黄芪多糖最佳药物浓度干预该体系;通过CCK-8法、流式细胞术及Western blot分别检测黄芪多糖对共培养体系中BMSCs细胞增殖、周期及TAFs标记分子α-SMA、FAP蛋白的表达变化。结果:50 mg/L黄芪多糖可促进BMSCs细胞增殖,同时对LLC细胞有明显抑制作用;与正常对照组相比,共培养组细胞生长速度加快,G0/G1期比例降低,S期比例升高,且α-SMA、FAP蛋白表达显著增加;与共培养组相比,黄芪多糖组(50mg/L)生长速度减慢,G0/G1期比例升高,S期比例降低,且α-SMA、FAP蛋白表达显著降低。结论:肺癌微环境中BMSCs细胞形态、增殖特性发生异常改变,具有向肿瘤相关成纤维细胞分化性,且黄芪多糖可抑制肺癌微环境中BMSCs的异常改变。     

2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞体外诱导培养及黄芪多糖干预研究

目的:探讨黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides,APS)对T2DM外周血EPCs增殖的影响。方法:密度梯度离心法获取T2DM患者与健康人外周血单个核细胞,培养7d后鉴定EPCs。观察不同浓度黄芪多糖(0,50,200,800,3200,6400mg/L)分别干预6,12,24,48h对T2DM患者EPCs影响的量效和时效关系。结果:T2DM外周血单个核细胞在鼠尾胶原包被的培养瓶中培养后呈梭形、铺路石样,表达内皮细胞的特异性抗原CD34和KDR,表达干/祖细胞抗原CD133;具有吞噬Dil-acLDL及结合FITC-UEA-1的特性。T2DM患者EPCs的增殖能力较健康对照组明显下降(P<0.05)。黄芪多糖(APS)显著增加T2DM患者EPCs的增殖能力,呈一定的量效与时效关系,在200mg/L浓度时开始较T2DM对照组明显增强(P<0.01),于800mg/L时达最大效应(P<0.01)。200mg/LAPS作用6h后,T2DM患者EPCs增殖能力开始明显增强,24h达到高峰,48h时略有下降,但仍明显高于对照组。结论:鼠尾胶原可代替EPCs培养中常用的纤维连接蛋白,是体外分离培养外周血EPCs更节省的一种方法。APS在一定剂量和时间范围内能促进T2DM外周血EPCs增殖。     

黄芪甲苷对内皮祖细胞生物学功能影响的实验研究

目的:观察黄芪甲苷对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学功能的影响。方法:采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞培养内皮祖细胞,培养7d后,收集贴壁细胞并随机分为对照组及黄芪干预组(黄芪甲苷浓度分别为5、25和75μg/mL),各自干预24h后采用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、黏附能力测定试验、Matrigel体外成血管试验及Transwell小室法观察黄芪甲苷对EPCs增殖、黏附、成血管及迁移能力的影响。结果:与对照组比较,黄芪甲苷各剂量干预组内皮祖细胞增殖能力、黏附细胞数、血管数、迁移细胞数均明显增加。结论:黄芪甲苷可显著提高内皮祖细胞多种细胞生物学功能。     

5种中药多糖及其含药血清对MSCs增殖的影响

目的：探讨当归多糖、何首乌多糖、熟地多糖、枸杞多糖、黄芪多糖及其含药血清对骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖的影响。方法：分离、培养大鼠MSCs,各中药多糖及其含药血清,分别加入培养基诱导72h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况。结果：1mg/mL黄芪多糖及其10%含药血清对大鼠MSCs增殖的影响,与相应浓度的空白组及空白血清组比较,差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：黄芪多糖及其含药血清可促进大鼠MSCs增殖。     

黄芪对人外周血内皮祖细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究黄芪对人外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、细胞周期的影响。方法采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,培养7天后,收集贴壁细胞并加入不同浓度黄芪注射液(0.2、2、20和200mg/ml)干预一定时间(6、12、24和48小时)。激光共聚焦显微镜鉴定人外周血EPCs,噻唑蓝比色试验(MTT法)检测黄芪对人外周血EPCs体外增殖作用,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果黄芪明显促进人外周血EPCs的增殖,呈一定的量效时效关系;流式细胞仪分析表明,黄芪作用后,细胞周期中S期、G2/M期细胞比例增加,G0/G1期细胞相对比例减少(P<0.01)。结论黄芪对人外周血EPCs增殖有显著促进作用,其作用机制可能是通过促进DNA合成,增加进入S期细胞数目来实现的。     

黄芪甲苷对人外周血内皮祖细胞的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对人外周血内皮祖细胞的保护作用。方法:用密度梯度离心法获取单个核细胞(MNCs),培养7天后,收集贴壁细胞,采用多波长激光共聚焦显微镜(laserscanningeonfoealmicroscope,LSCM)鉴定后将细胞随机分成:(l)对照组;(2)辛伐他汀对照组;(3)黄芪甲苷组。24h后采用流式细胞仪检测EPCs的增殖周期;MTT比色法、黏附能力实验检测内皮祖细胞(En-dothelialprogenitoreells,EPCs)的增殖能力、黏附能力。结果:黄芪甲苷在10-1mmol/L～10-10mmol/L的浓度范围中均有效,在黄芪甲苷10-9mmol/L浓度时,EPCs的增殖力最强,黄芪甲苷能明显增强EPCs的黏附、增殖能力。结论:黄芪甲苷能够增强EPCs的生物学功能,对EPCs有保护作用。     

黄芪多糖对大鼠原代成骨细胞的影响及其机制研究

目的研究黄芪多糖对体外培养大鼠原代成骨细胞增殖、分化及矿化的影响及其作用机制。方法体外培养的新生SD大鼠颅骨原代成骨细胞体系中分别加入不同质量浓度(0.1、0.3、1、3、10、30、100μg/mL)的黄芪多糖,24、48 h后MTT法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(AKP)活性检测法检测细胞分化,茜素红染色法观察黄芪多糖10μg/mL对细胞矿化的影响,Western blotting法检测黄芪多糖1、10μg/mL作用于细胞24 h后,对细胞中骨形成蛋白(BMP-2)的表达、MAPK信号通路中关键蛋白ERK、P38、p-ERK、p-P38等表达的影响。结果黄芪多糖能剂量相关地促进大鼠原代成骨细胞的增殖、分化及矿化,同时上调BMP-2、p-ERK、p-P38蛋白的表达,提高p-ERK/ERK、p-P38/P38值。结论黄芪多糖可通过促进BMP-2的表达、上调其下游的ERK MAPK和P38 MAPK的磷酸化水平来促进成骨细胞增殖、分化。     

不同剂量血小板源性生长因子-B及黄芪注射液对体外高糖培养大鼠视网膜毛细血管周细胞的影响

目的观察不同剂量的血小板源性生长因子-B(PDGF-B)、不同剂量的黄芪注射液以及两者合用对体外高糖培养大鼠视网膜毛细血管周细胞(RMPs)生长的影响。方法取体外培养第3代大鼠RMPs,饥饿培养24 h后,分为空白组(5.5 mmol/L葡萄糖的低糖DMEM)、对照组(50 mmol/L葡萄糖的高糖DMEM)、不同浓度PDGF-B组(0.25 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL+高糖DMEM)、不同浓度黄芪注射液组(0.2 mg/mL、2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL+高糖DMEM)和PDGF-B+不同浓度黄芪注射液组(1.00 ng/mL PDGF-B+0.2 mg/mL、2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL黄芪注射液+高糖DMEM),培养48 h后,采用CCK8法检测各组RMPs增殖情况,并用免疫荧光法鉴定增殖后的细胞。结果与对照组比较,不同浓度PDGF-B组,2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL黄芪注射液组及1.00 ng/mL PDGF-B+2 mg/mL、20 mg/mL、200 mg/mL黄芪注射液各组均能促进体外高糖培养的RMPs增殖,并在一定浓度内呈剂量-效应关系,差异均有统计学意义(P均0.05);其中1.00 ng/mL PDGF-B组及200 mg/mL黄芪注射液组促增殖作用均优于1.00 ng/mL PDGF-B+200 mg/mL黄芪注射液组(P均0.05)。加药培养后各组细胞表达周细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及血小板源性生长因子受体-β(PDGFR-β),不表达血管性血友病因子(vWF),几乎不表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结论 PDGF-B及黄芪注射液均对体外高糖培养大鼠RMPs的生长有促进作用,短期内未使RMPs发生变异,单用PDGF-B或黄芪注射液促生长作用优于两者合用。     

低氧环境下黄芪注射液对人骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的探讨低氧环境下黄芪注射液对人骨髓间充质干细胞(h MSCs)体外增殖的影响。方法将体外培养的h MSCs分成常氧组和低氧组,分别用0、25、50、100、150、200、300、400、500、600、1 000μg/m L的黄芪注射液干预48 h,采用倒置相差显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的增殖情况。结果低氧环境下,25、50、100、150、200μg/m L的黄芪注射液均可明显促进h MSCs的增殖(P<0.01),其中50μg/m L黄芪注射液的增殖效果最显著(P<0.01),达600μg/m L时产生抑制作用;常氧环境下,黄芪注射液以300μg/m L对h MSCs的促增殖作用最为明显(P<0.01),25、50、100、150、200、600、1 000μg/m L黄芪注射液均抑制h MSCs的增殖。结论黄芪注射液在一定质量浓度下可促进体外培养的h MSCs的增殖。低氧环境下,低质量浓度促进其增殖;常氧环境下,低质量浓度抑制其增殖。     

黄芪多糖体外对非接触共培养HUVECs细胞诱导SGC7901细胞转移的影响

目的探索黄芪多糖体外对人血管内皮细胞HUVECs诱导的胃癌细胞系SGC7901细胞EMT转化及其转移的影响。方法 MTT检测黄芪多糖对HUVECs、SGC7901细胞增殖抑制的影响。建立Transwell细胞共培养系统,并分为SGC7901组(单独培养SGC7901细胞)、HUVECs/SGC7901组(共培养HUVECs/SGC7901细胞)、黄芪多糖组(黄芪多糖干预共培养HUVECs/SGC7901细胞),Transwell实验检测各组SGC7901细胞侵袭能力,qRT-PCR检测各组细胞E-cadherin、Vimentin mRNA表达,免疫荧光检测各组细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达,Western blot检测各组细胞LOX、Snail1蛋白表达。结果与单独培养的SGC7901细胞相比,共培养的SGC7901细胞侵袭能力,MMP-2、MMP-9、LOX、Snail1蛋白及Vimentin mRNA表达均升高(P<0. 01),E-Cadherin mRNA表达下降(P<0. 05)。经黄芪多糖干预后,共培养的SGC7901细胞侵袭能力、MMP-2、MMP-9、LOX、Snail1蛋白及Vimentin mRNA表达下降(P<0. 01),ECadherin mRNA表达升高(P<0. 05)。结论与HUVECs细胞共培养可激活SGC7901细胞EMT转化,促进SGC7901细胞转移,但黄芪多糖可通过抑制EMT转化阻止非接触共培养人血管内皮细胞诱导的SGC7901转移。     

肾气丸对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度肾气丸水提液对体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖的影响。方法：应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,传代扩增,倒置显微镜进行细胞形态学观察,免疫组化法检测细胞表面抗原鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度肾气丸水提液干预组,采用MTT比色法观察其增殖情况。结果：采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态呈长梭形,呈集落样生长,免疫细胞化学鉴定,CD44、CD29阳性,CD34阴性。MTT检测结果显示,与空白对照组相比,肾气丸水提液干预24h后,4、2、1、0.5mg/ml浓度肾气丸干预组吸光度值均增高（P〈0.05）,其中2mg/mL肾气丸干预组增高明显;0.25mg/mL浓度肾气丸水提液干预组吸光度与空白组相比无差异（P〉0.05）。结论：本实验采用全骨髓贴壁法培养的骨髓基质细胞符合BMSCs的生物特性,可以用于BMSCs相关研究。在一定浓度范围内,肾气丸水提液可以提高BMSCs的体外增殖能力。     

姜黄素对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞分泌VEGF及IL-6的影响

目的观察姜黄素对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)释放血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-6(IL-6)的影响。方法体外原代培养佐剂性关节炎大鼠FLS。取第3代FLS分别加入浓度为0,10,20,40,80μmol/L的姜黄素溶液,共同培养24h,48 h,72 h。ELISA法检测共培养上清液中VEGF、IL-6含量。结果共培养24 h后40,80μmol/L浓度组和48 h、72 h后所有浓度组的VEGF值与相应空白对照组比较均有显著性差异。共培养24 h后40,80μmol/L浓度组,48 h后20,40,80μmol/L浓度组和72 h后所有浓度组IL-6值相对对照组均明显降低。结论姜黄素能抑制佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞释放VEGF、IL-6,这可能是姜黄素治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

地龙提取物对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的:探讨地龙提取物对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖的影响。方法:全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,用流式细胞术鉴定P3代BMSCs。将地龙配制成终浓度为500、50、5、0.5 mg/m L的提取物溶液作为药物干预组,以0 mg/m L组为空白对照组,CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况。通过比较OD值判断地龙提取物对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响,比较增殖率。结果:全骨髓贴壁法培养的P3代BMSCs表现为集落生长,经流式细胞术检测,CD90呈阳性表达,CD45呈阴性表达;CCK-8法检测结果为,剂量为0.5-50 mg/m L的药物干预组OD值较对照组显著升高;地龙浓度为5 mg/m L组OD值出现最大值,继续提高浓度OD值逐渐减小,当提取物浓度达到500 mg/m L时表现为细胞生长受到抑制。结论:培养的骨髓基质细胞在形态和表型上具备BMSCs的特性。地龙提取物在一定浓度范围内能促进BMSCs增殖。浓度为5mg/m L时促进BMSCs增殖作用最为明显,浓度为500 mg/m L时会抑制BMSCs的增殖。     

丹参素对氧化低密度脂蛋白损伤内皮祖细胞的影响及机制探讨

目的:观察丹参素对氧化低密度脂蛋白(oxidative low density lipopmtein Ox-LDL)损伤后外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能的影响,并探讨其可能的机制.方法:密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,通过流式细胞仪鉴定内皮祖细胞.培养7 d后,收集贴壁细胞并随机分为对照组,氧化低密度脂蛋白组(100 mg·L~(-1))及丹参素干预组(氧化低密度脂蛋白100 mg·L~(-1)加丹参素,浓度分为2,10,50 mg·L~(-1)),干预24 h后分别采用MTT比色法、黏附能力测定实验观察EPC的增殖能力、黏附能力.并取各组细胞上清液行超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量检测.结果:氧化低密度脂蛋白损伤后,外周血EPCs的增殖能力、黏附能力显著受损,细胞上清液SOD含量显著下降,MDA含量显著升高;丹参素干预24 h后,显著改善了外周血EPCs的功能,各组SOD含量显著增加,MDA含量显著减少.结论:丹参素对氧化低密度脂蛋白损伤后内皮祖细胞的功能有显著保护作用,其机制可能与抗氧化损伤有关.     

黄芪多糖对STZ糖尿病小鼠内皮祖细胞功能的作用

目的:观察黄芪多糖对STZ诱导一型糖尿病小鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)功能的作用。方法:糖尿病小鼠给予100mg/kg与400 mg/kg黄芪多糖腹腔注射4周,观察小鼠EPCs小管形成能力、粘附能力以及VEGF蛋白表达。结果:黄芪多糖给药4周后,100 mg/kg与400 mg/kg两个剂量组EPCs小组形成与细胞粘附显著多于对照组(P<0.05),明显降低STZ糖尿病小鼠血糖水平(P<0.05),并能明显升高VEGF蛋白表达(P<0.05)。结论:黄芪多糖能改善糖尿病EPCs功能,可能有助于糖尿病伤口愈合的内皮修复。     

黄芪多糖对骨骼肌成肌细胞增殖作用的研究

目的:观察黄芪多糖(APS)对C2C12骨骼肌成肌细胞(成肌细胞)的增殖作用。方法:将成肌细胞接种到96孔培养板,APS分为0.1、0.2、0.4、0.8和1 mg/mL 5组浓度;地塞米松(DEX)分为1、10、100和1 000μM 4组浓度,培养12 h、24 h,MTT法检测计算增殖率和抑制率。根据上述实验确定APS、DEX浓度,再分对照组、DEX组、DEX+APS组,培养24 h,MTT法检测OD值、流式细胞仪检测凋亡率、光镜检测肌管横径。结果:APS在0.6 mg/mL浓度以下对成肌细胞有增殖作用(P0.05),并在0.2 mg/mL达到峰值。100μM浓度以上DEX对成肌细胞有抑制作用(P0.05)。用100μM DEX建立成肌细胞萎缩模型,给予0.2 mg/mL APS干预后,细胞OD值和肌管横径均升高(P0.05),凋亡率下降(P0.05)。结论:APS对成肌细胞有良好的增殖作用,100μM DEX可作为成肌细胞萎缩模型造模有效浓度。     

黄芪甲苷改善高糖受损内皮祖细胞生物学功能的实验研究

目的:研究黄芪甲苷(Astragaloside IV,AS-IV)干预高糖受损人内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)增殖的最佳浓度,并探讨AS-IV对高糖受损EPCs生物学功能的影响。方法:取足月新生儿脐带血分离、培养并鉴定EPCs,将鉴定成功的EPCs用30 mmol/L的葡萄糖预处理120 h后,随机分为实验组(HG+AS-IV组)和对照组(HG组),同时设置正常组(NC组)。用CCK8检测不同浓度AS-IV(0、25、50、100、200、400 mg/L)干预EPCs 24 h后的增殖情况,绘制增殖曲线,初步得出AS-IV干预高糖受损人EPCs增殖的最佳浓度。进而通过CCK-8增殖实验、黏附能力测定试验、细胞划痕试验及Matrigel体外成血管实验检测最佳浓度的AS-IV对高糖受损EPCs增殖、黏附、迁移和成管功能的影响。结果:AS-IV促高糖受损EPCs增殖的最佳浓度为100 mg/L;与对照组比较,100 mg/L AS-IV干预后的高糖受损EPCs增殖能力、黏附细胞数、细胞迁移率、体外成管数均明显增加,差异均有统计学意义(P1<0.05);同时检测实验组与正常组差异无统计学意义(P2>0.05)。结论:AS-IV可显著改善体外高糖受损的人EPCs的生物学功能,恢复其原有活力并具有介导血管新生的潜能。