珍珠梅黄酮纳米粒诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的实验研究

目的探讨珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌Hep G-2细胞凋亡的影响。方法采用MTT法观察不同时间(24,48,72h)、不同浓度(50,100,200μmol/L)的珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌细胞(Hep G-2,Hep3B,PLC/PRF/5)及人正常肝细胞(Chang Liver)的增殖抑制作用;利用光学、荧光和透射电子显微镜观察Hep G-2细胞凋亡,并应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 MTT法检测细胞增殖抑制结果显示:不同浓度的珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌细胞(Hep G-2,Hep3B,PLC/PRF/5)及人正常肝细胞(Chang Liver)均有不同程度的抑制作用,对人肝癌Hep G-2细胞抑制最明显;形态学检测结果显示:珠梅黄酮纳米粒干预Hep G-2细胞48 h后,细胞出现明显的凋亡;流式细胞术检测阴性对照组、5-Fu阳性对照组及不同浓度珍珠梅黄酮纳米粒干预组(50,100μmol/L)凋亡率分别为为4.9%,89.6%,50.0%,86.2%。结论珠梅黄酮纳米粒可以抑制人肝癌Hep G-2生长并诱导其凋亡。     

珍珠梅黄铜纳米粒通过调节MAPK通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡和保护性自噬的实验研究

目的探讨中药珍珠梅黄酮纳米粒(5,2’,4’-trihydroxy-6,7,5’-trimethoxy flavone nanoparticle,TTF1-NP)处理HepG2细胞后是否发生凋亡和自噬、自噬和凋亡关系及其可能的作用机制。方法不同浓度(0,40,80,120μmol·L~(-1)) TTF1-NP处理HepG2细胞24 h后,MTT法检测细胞的增殖能力;通过Hoechst染色观察TTF1-NP处理HepG2细胞后的形态学变化;利用流式细胞术检测细胞凋亡比例; HepG2细胞转染GFP-LC3质粒后,荧光显微镜观察自噬情况;Western blot检测自噬标志蛋白LC3B I/II,凋亡相关蛋白Cleaved caspase3,以及MAPK通路相关蛋白p38MAPK,ERK1/2,JNK活性变化;采用自噬抑制3-甲基腺苷(3-methyladenine,3-MA)处理细胞后,进一步检测细胞凋亡及MAPK通路相关蛋白的表达。结果 TTF1-NP能够抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡及自噬; Western blot结果显示,TTF1-NP增加LC3B-II蛋白表达,并上调MAPK通路相关分子JNK,下调ERK的活性;加入自噬抑制剂3-MA后,细胞增殖进一步下降,细胞凋亡进一步增加。结论 TTF1-NP可以诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡及保护性自噬,其作用机制可能与调节MAPK通路有关。     

姜黄素通过PI3K/Akt信号通路抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡

目的研究姜黄素(Cur)对人胃腺癌细胞(SGC-7901)PI3K/Akt信号通路的影响。方法采用CCK-8检测不同浓度Cur对SGC-7901细胞的24、48、72h的抑制作用;TUNEL检测各浓度Cur作用24h后SGC-7901细胞凋亡的发生率;Western blot、RT-PCR法检测各浓度Cur作用SGC-7901细胞后PI3K、p-Akt、Akt蛋白和PI3K、Akt mRNA的表达。结果 CKK-8实验证明了姜黄素对SGC-7901细胞增殖具有抑制作用,且随作用浓度的增强而增强;TUNEL法检测姜黄素作用SGC-7901细胞后凋亡率的变化,发现细胞凋亡率随浓度的增强而显著增加;Western blot、RT-PCR法检测Cur作用SGC-7901细胞后,PI3K、p-Akt、Akt蛋白和mRNA的表达水平降低。结论 Cur具有抑制人胃癌细胞增殖和促凋亡的作用,其机制与抑制PI3k/Akt信号通路有关。     

苦参碱抑制Akt信号通路诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的:研究苦参碱对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及其可能的分子机制。方法:噻唑蓝比色法(MTT)测定苦参碱对SW480细胞株增殖的影响;Hoechst33258染色检测苦参碱对SW480细胞凋亡的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测苦参碱对SW480细胞中总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的干预作用。结果:苦参碱(0.25,0.5,1.0,1.5,2.0 g·L~(-1))能浓度和时间依赖性地抑制SW480细胞增殖。作用24,48,72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为1.72,1.08,0.67 g·L~(-1),Hochest33258染色和流式细胞术结果显示苦参碱能显著诱导细胞凋亡(P0.01),随着药物质量浓度的提高,细胞凋亡率逐渐上升。Western blot检测显示,SW480细胞加入苦参碱后,胞内总Akt的含量无显著变化,但p-Akt的生成被显著抑制,凋亡抑制性蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增高(P0.05)。结论:苦参碱能够诱导SW480细胞凋亡,该药理作用可能与苦参碱对Akt信号通路的抑制有关。     

Hederacolchiside A1通过调节PI3K / Akt / mTOR信号通路诱导肿瘤细胞凋亡

目的：Hederacolchiside A1在体外对各种肿瘤细胞表现出细胞抑制和细胞毒活性,但其机制尚不清楚。本研究主要探讨白头翁中提取分离的Hederacolchiside A1的抗肿瘤活性和机制。 方法：用MTT法检测Hederacolchiside A1对A549,SMMC-7721,BEL-7402和MCF-7细胞增殖的抑制作用。通过流式细胞术分析鉴定经Hederacolchiside A1处理的肿瘤细胞凋亡状况。 结果：根据Western blotting和JC-1染色结果：hederacolchiside A1降低肿瘤细胞线粒体膜电位和Bcl-2蛋白表达水平,并升高cleaved caspase-3蛋白表达水平。此外,hederacolchiside A1可有效地抑制磷脂酰肌醇（-3）激酶（PI3K）,蛋白激酶B（Akt）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达水平。体内研究表明,在肝癌H22移植瘤模型中,Hederacolchiside A1（3.0,4.5和6.0mg / kg,ip）可显著抑制肿瘤的重量;在人乳腺癌MCF-7移植瘤模型中,用Hederacolchiside A1（3.25,7.5和15.0mg / kg,ig）进行治疗,观察到类似的抑制活性。 结论：这些数据表明,Hederacolchiside A1可通过调节PI3K / Akt / mTOR信号传导途径诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的增殖。     

萜类化合物Telekin通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导HGC-27细胞自噬

目的:研究从天名精中分离得到的萜类化合物Telekin诱导的胃癌细胞HGC-27自噬并探讨其分子作用机制。方法:MTT法研究Telekin对不同肿瘤细胞的细胞毒活性;透射电镜观察Telekin诱导的HGC-27细胞自噬;用mRFP-GFP-LC3点状聚集物的形成,评价HGC-27细胞内自噬流的变化;MTT法研究用不同自噬抑制剂氯喹(CQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)和mTOR抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)预处理时,Telekin对HGC-27细胞的细胞毒活性,研究自噬与细胞死亡的关系。Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路关键蛋白PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-ULK1、ULK1、Beclin1、p-Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白的表达。结果:MTT实验结果表明Telekin对胃癌细胞HGC-27具有较好的细胞毒活性和一定的选择性;透射电镜和激光共聚焦显微镜观察到Telekin诱导HGC-27细胞发生了明显的自噬和显著的自噬流变化;用Rapamycin预处理时增强了Telekin的细胞毒性,IC_(50)值由22.78μM降为14.4μM。用3-MA和CQ预处理后降低了Telekin的细胞毒性,IC_(50)值从22.78μM增加为30.06μM和29.46μM,说明自噬促进了细胞死亡;Western blot结果显示Telekin降低了p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p62、LC3Ⅰ的表达,增强了p-ULK1、p-Beclin1、LC3Ⅱ的表达,而对PI3K、Akt、mTOR、ULK1、Beclin1总蛋白没有明显影响。结论:Telekin通过降低p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p62、LC3Ⅰ的表达水平,增强p-ULK1、p-Beclin1、LC3Ⅱ的表达水平,来诱导HGC-27细胞发生自噬,从而促进细胞死亡。     

新藤黄酸通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的研究

目的:探讨新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的机制。方法:MTT试验检测新藤黄酸对B16细胞增殖抑制的作用;采用Hochest 33258荧光染色观察新藤黄酸对B16细胞的影响;透射电镜观察新藤黄酸对B16细胞的超微结构的改变;Western blot法检测PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt,p-mTOR,PTEN蛋白的变化以探讨新藤黄酸诱导B16细胞凋亡的分子机制。结果:新藤黄酸对黑色素瘤细胞B16生长和增殖有明显地抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加和作用时间的延长细胞活力明显下降;Hochest 33258染色结果显示,新藤黄酸处理的细胞中呈现明显的凋亡特征;透射电镜观察发现新藤黄酸作用B16细胞后,细胞发生明显凋亡的形态学变化;Western blot检测表明p-PI3K蛋白表达呈时间依赖性下降;p-Akt蛋白表达呈时间依赖性下降,而PI3K,Akt蛋白表达量基本不变,p-mTOR蛋白的表达随着时间的延长有所下降,PTEN蛋白的表达呈时间依赖性增加。结论:新藤黄酸在一定的时间和浓度范围内能够抑制黑色素瘤B16细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

银杏叶提取物通过Akt/mTOR通路抑制难治性癫痫大鼠海马组织细胞凋亡研究

目的:探讨银杏叶提取物抑制难治性癫痫大鼠海马组织细胞凋亡的作用机制.方法:将SD大鼠分为对照组、模型组及给药组.除对照组外,其余2组制备难治性癫痫模型.模型制备成功后,给药组按60 mg/ (kg·d)的剂量灌胃银杏叶提取物,对照组和模型组给予等体积生理盐水,持续4周.观察各组大鼠行为,记录癫痫发作次数和总时间,并根据...     

珍珠梅黄酮纳米粒调控STAT3抑制人肝癌HepG2细胞侵袭和转移作用的研究

目的探讨中药珍珠梅黄酮纳米粒(5,2’,4’-trihydroxy-6,7,5’-trimethoxy flavone nanoparticle,TTF1-NP)调控STAT3抑制人肝癌Hep G2细胞侵袭、转移的作用和分子机制。方法利用Western blot技术检测人肝癌HepG2细胞STAT3和p-STAT3蛋白表达,利用Transwell和细胞划痕技术检测人肝癌Hep G2细胞侵袭和转移能力,采用Western blot技术检测细胞侵袭迁移的相关蛋白MMP2和MMP9表达。结果 Western blot检测发现TTF1-NP可以抑制人肝癌Hep G2细胞STAT3的活化表达,通过抑制MMP2和MMP9表达抑制人肝癌Hep G2细胞侵袭和转移。结论 TTF1-NP通过抑制STAT3的活化抑制MMP2和MMP9蛋白表达抑制人肝癌Hep G2细胞侵袭和转移。     

基于Akt/mTOR通路研究地榆皂苷II诱导肝癌细胞凋亡和自噬作用机制

目的 探讨地榆皂苷II抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡和自噬的作用机制。方法 采用不同浓度（0、10、20、40 μmol/L）地榆皂苷II处理人肝癌HepG2细胞和小鼠肝癌Hepa1-6细胞,通过CCK-8和EdU实验观察地榆皂苷II对HepG2和Hepa1-6细胞增殖的影响;运用流式细胞术检测地榆皂苷II对细胞凋亡的影响;通过Western blotting检测地榆皂苷II对细胞凋亡和自噬相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cysteine-aspartic acid protease-3,Caspase-3）、Caspase-8、Caspase-9、B细胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、cleaved Caspase-3、微管相关蛋白1A/1B-轻链3-II（microtubule-associated protein light chain3-II,LC3II）、微管相关蛋白1A/1B-轻链3-Ⅰ（microtubule-associated protein light chain3-Ⅰ,LC3Ⅰ）、自噬相关蛋白p62、Beclin1及蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）通路关键蛋白表达的影响。结果 地榆皂苷II显著抑制HepG2和Hepa1-6细胞活力,且呈现一定的剂量相关性;流式细胞检测发现地榆皂苷II给药后细胞凋亡率显著增加（P＜0.01、0.001）;Western blotting结果显示,与对照组比较,地榆皂苷II给药后Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2表达显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）,cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高（P＜0.05、0.01）,LC3Ⅱ/LC3I值显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）,Beclin1蛋白表达量显著升高（P＜0.05、0.01）,p62蛋白表达量显著下降（P＜0.05、0.01）,p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR值显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。结论 地榆皂苷II通过Akt/mTOR通路诱导HepG2和Hepa1-6细胞自噬和凋亡实现对肝癌细胞增殖的抑制,为抗肝细胞癌新药发现提供药理学证据。     

京大戟提取物pekinenin D通过PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的:通过观察京大戟提取物pekinenin D对肝癌SMMC-7721细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。方法:采用MTT法分析不同剂量的pekinenin D对体外培养SMMC-7721细胞增殖的影响;原位末端标记法(TUNEL)和Annexin V/PI双染法检测对细胞凋亡的作用;应用流式细胞术分析对细胞周期的影响;采用RT-PCR检测pekinenin D对PI3K/AKT/m TOR mRNA的影响;应用生物膜干涉技术(BLI)分析pekinenin D与PI3K启动子是否存在相互作用。结果:MTT结果显示3.988ug/ml的pekinenin D可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,抑制率过半,并且呈剂量依赖性。Annexin V/PI双染法结果显示,随着pekinenin D剂量的增加,SMMC-7721细胞的凋亡率明显增加,与对照组比较,差异具有明显统计学意义。TUNEL法检测结果表明,0.249、0.997、3.988 ug/ml的pekinenin D作用于SMMC-7721细胞后均可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡指数(AI)随着药物浓度的升高明显增加。流式细胞术分析显示,0.249、0.997、3.988 ug/ml的pekinenin D均可使细胞被阻滞于S期,RT-PCR显示pekinenin D显著下调SMMC-7721细胞中PI3K,AKT,m TOR的mRNA表达量。采用BLI技术分析发现pekinenin D与PI3K的启动子存在一定亲和力。结论:pekinenin D具有抑制肝癌细胞增殖及诱导凋亡的作用,显著下调SMMC-7721细胞中PI3K,AKT,m TOR的mRNA表达,其机制可能是与PI3K的启动子相结合从而抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路有关。     

乌药挥发油通过AMPK/mTOR信号通路诱导胃癌AGS细胞凋亡和自噬

目的 研究乌药挥发油对人胃癌细胞AGS凋亡和自噬的的影响,并探讨腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在其中的调控作用。方法 利用水蒸气蒸馏法提取乌药挥发油,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测乌药挥发油对人胃癌细胞AGS细胞活力的影响,并根据半抑制浓度（IC₅₀）确定最佳给药浓度与时间,用于后续研究;设置空白组、乌药挥发油低、中、高质量浓度组（0、15、30、60 mg·L^-1）及阳性药环磷酰胺（CTX）组（350 mg·L^-1）。用不同浓度的乌药挥发油处理AGS细胞48 h,采用细胞集落形成实验检测细胞增殖能力的变化、流式细胞仪检测细胞周期的变化、细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化、苏木素-伊红（HE）染色观察细胞形态的变化、Annexin-V/碘化丙啶（PI）双染法检测AGS细胞凋亡率、吖啶橙（AO）染色观察自噬水平的变化、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测自噬效应蛋白Beclin-1、p62、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、B细胞淋巴瘤因子-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、剪切的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、剪切的多聚ADP-核糖聚合酶（cleaved PARP）、单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、雷帕霉素机械靶蛋白（mTOR）及磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达水平的变化。结果 与空白组比较,AGS细胞经乌药挥发油干预24、48 h,细胞活性被明显抑制（P<0.05,P<0.01）,呈浓度和时间依赖性;乌药挥发油各浓度组细胞增殖与迁移能力明显降低（P<0.05,P<0.01）,且随浓度的上升抑制能力越明显;乌药挥发油将AGS细胞周期阻滞于G₂/M期（P<0.05,P<0.01）,呈浓度依赖性;乌药挥发油各浓度组出现细胞圆化,体积变小并伴随凋亡小体形成等现象,细胞凋亡率明显增加（P<0.05,P<0.01）;随着乌药挥发油浓度的增加,自噬体数量增加致红色荧光逐渐增强,提示自噬水平的提升;乌药挥发油各浓度组Beclin-1、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、Bax/Bcl-2及AMPK蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）;p62与p-mTOR蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 乌药挥发油通过调节AMPK/mTOR信号通路诱导AGS细胞凋亡和自噬介导的生长抑制。     

黄芪甲苷通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌细胞自噬和凋亡

目的：探讨黄芪甲苷对鼻咽癌细胞自噬与凋亡的影响及潜在分子机制。方法：在体外实验中,通过单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透射电镜观察黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对鼻咽癌细胞自噬的影响。在体内实验中,建立裸鼠移植瘤模型后采用免疫荧光法(IF)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组别中自噬和凋亡情况的变化及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路关键蛋白的表达变化。结果：与空白组比较,不同浓度AS-Ⅳ(5、10、20μmol·L^-1)作用于5-8F细胞后,各AS-Ⅳ组的自噬荧光强度均明显增强,其中,干预24 h,各AS-Ⅳ组的自噬荧光表达最强,10μmol·L^-1AS-Ⅳ组的荧光表达最明显;与空白组比较,透射电镜下自噬激活剂雷帕霉素(RAPA)诱导5-8F细胞内出现较多自噬体;3-甲基腺嘌呤(3-MA)作为自噬抑制剂,透射电镜下并未观察到5-8F细胞内有自噬体的形成;AS-Ⅳ10μmol·L^-1组细胞内结构和细胞膜完整、清楚,可见自噬体形成;与空白组比较,AS-Ⅳ各组的肿...     

丁香活性组分抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的研究

筛选丁香活性组分(active fraction from clove, AFC)对人结肠癌细胞敏感的细胞株,研究AFC对其增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR(phosphoinositide 3-kinase/Akt/mechanistic target of rapamycin pathway)信号通路的影响,揭示AFC诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机制。实验采用CCK-8法检测不同浓度的AFC的细胞毒作用;采用Hoechst 33258荧光染色、Annexin V-FITC/PI双染法检测AFC诱导细胞凋亡的发生;Western blot法检测AFC单独或AFC联合IGF-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ)作用于细胞后,凋亡相关蛋白caspase-3,caspase-9,PARP(poly ADP-ribose polymerase)以及PI3K/Akt/mTOR信号通路PI3K,p-PI3K,Akt, p-Akt, mTOR和p-mTOR蛋白表达情况。结果显示,AFC抑制作用最明显的是人结肠癌HCT116细胞,最佳作用时间为48 h; AFC处理HCT116细胞后,剂量依赖性地出现典型的细胞凋亡特征,如核染色质浓缩、核碎裂、凋亡小体的出现等;Annexin V-FITC/PI双染法结果显示,与对照组比较,50,100μg·mL~(-1) AFC组诱导HCT116细胞凋亡率显著上升(P0.001);凋亡相关蛋白caspase-9,cleaved caspase-3,cleaved PARP均被AFC以浓度依赖方式激活,cleaved caspase-3/procaspase-3,cleaved PARP/PARP,caspase-9/β-actin在100μg·mL~(-1) AFC组与对照组间比较,差异均有统计学意义(P0.001);p-PI3K,p-Akt, p-mTOR蛋白相对表达量呈浓度依赖性的递减,而Akt, mTOR在各组间无明显变化,p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt, p-mTOR/mTOR在50,100μg·mL~(-1) AFC组与对照组间比较,差异均有统计学意义(P0.01)。联合IGF-Ⅰ,削弱了AFC抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的作用,p-Akt/Akt, p-mTOR/mTOR在AFC组和AFC+IGF-Ⅰ组间比较,差异有统计学意义(P0.05);联合IGF-Ⅰ,AFC诱导的cleaved caspase-3,cleaved PARP蛋白表达减弱,cleaved caspase-3/procaspase-3,cleaved PARP/PARP在AFC组和AFC+IGF-Ⅰ组间比较,差异有统计学意义(P0.01)。综上,AFC浓度相关性地激活caspase级联反应诱导人结肠癌HCT116细胞发生凋亡,凋亡发生与PI3K/Akt/mTOR信号通路的抑制有关。     

苦参碱通过PI3K/Akt信号通路诱导肺癌A549细胞凋亡机制研究

目的探究苦参碱通过PI3K/Akt信号通路诱导肺癌A549细胞凋亡机制。方法对人肺癌A549细胞进行培养,培养后分为对照组、低浓度组、中浓度组以及高浓度组,对照组中加入生理盐水,分别向低浓度组、中浓度组以及高浓度组,加入浓度为30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L的苦参碱,作用48小时后采用流式细胞仪及MTT检测法检测A549细胞凋亡情况,计算生长抑制率,并采用Western Blotting和real time PCR检测PI3K、p-AKT蛋白以及PI3K、AKT mRNA表达水平,比较四组之间的差异。结果高浓度组、中浓度组、低浓度组生长抑制率和凋亡率显著高于对照组(P0.05),且随着浓度的升高生长抑制率和凋亡率显著升高(P0.05);高浓度组、中浓度组、低浓度组PI3K、AKT mRNA及PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于对照组(P0.05),且随着浓度的升高PI3K、AKT mRNA及PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论苦参碱可诱导肺癌A549细胞凋亡,推测其作用机制与PI3K/Akt信号通路有关。     

肝复乐调控PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导肝癌细胞凋亡的作用机制

目的:探讨肝复乐通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制人肝癌HepG2细胞增殖的作用机制.方法:以不同质量浓度(0.1、0.5、1mg/mL)的肝复乐、阳性对照药(顺铂,3.58×10-6mg/mL)处理HepG2人肝癌细胞细胞和L02人正常肝细胞,采用CCK-8法检测细胞活性;细胞划痕实验检测药物干预后细胞迁移能...     

珍珠梅黄酮固体脂质纳米粒的制备工艺

目的 探讨珍珠梅黄酮固体脂质纳米粒的制备工艺.方法 以硬脂酸为载体,以珍珠梅黄酮为模型药物,采用乳化蒸发-低温固化法制备固体脂质纳米粒.采用透射电镜研究载药纳米粒形态,激光粒度分析仪测定其粒径,X射线衍射仪进行物相鉴别,并对纳米粒的包封率及体外释药特性等进行了研究.结果 实验制备珍珠梅黄酮固体纳米粒为类球实体,粒径分布比较均匀,药物以分子或细小粒子分散于脂质骨架中.体外释药研究表明,纳米粒体外释药先快后慢,包封于降解材料骨架内的药物通过骨架溶蚀缓慢释放.结论 采用乳化-低温固化法制备TTF1可生物降解纳米粒,制备工艺简单,平均粒径和包封率较为理想,所制备纳米粒具有明显的缓释作用.     

牛黄−麝香联合应用通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制肝癌细胞增殖并诱导其凋亡

目的 探讨牛黄?麝香联合使用对人肝癌细胞SMMC-7721及裸鼠肝癌皮下移植瘤的影响,探讨其抗肝癌机制.方法 将牛黄?麝香联合应用于体内、体外两种肝癌模型.体外培养人肝癌SMMC-7721细胞系,实验分为牛黄?麝香处理组和对照组,采用不同浓度(生药量0.625、1.25、2.5、5 mg/mL)牛黄?麝香萃取液进行干预...     

桦木酸通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导人结肠癌细胞SW620凋亡及自噬

目的 研究桦木酸对人结肠癌细胞SW620凋亡和自噬的影响及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在其中的调控作用。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,确定最佳给药时间及给药浓度,用于后续实验;设置空白组、桦木酸低、中、高浓度组。采用苏木素-伊红（HE）染色观察桦木酸对SW620细胞形态的影响。采用Annexin-V/碘化丙啶（PI）双染法检测SW620细胞凋亡率。分别采用Hoechst33258染色及细胞自噬染色（MDC）观察细胞凋亡和自噬体发生情况。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶-9（Caspase-9）、活化的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）,微管相关蛋白Ⅰ轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、自噬关键分子酵母Atg6同系物-1（Beclin-1）、p62、磷酸化（p）-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达。结果 桦木酸以浓度、时间依赖性的方式抑制SW620、HT29、HCT116细胞的活性;与桦木酸给药24 h比较,W620、HT29、HCT116细胞给药48 h细胞活性明显降低（P<0.05,P<0.01）,给药48 h的半数抑制浓度（IC₅₀）显著降低（P<0.01）,其中SW620细胞给药48 h的IC₅₀最小。HE染色、Hoechst33258染色显示,桦木酸组可见浓度依赖性细胞凋亡;MDC染色可见细胞自噬体数量增加。与空白组比较,桦木酸低、中、高浓度组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。与空白组比较,桦木酸低、中、高浓度组Bax、Caspase-9、cleaved Caspase-3、LC3Ⅱ蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,桦木酸中、高浓度组Beclin-1蛋白表达显著升高（P<0.01）;桦木酸低、中、高浓度组p62、p-Akt、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 桦木酸对SW620细胞活性有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路从而诱导人结肠癌细胞SW620的凋亡及自噬有关。     

甘草查尔酮A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导肾癌细胞自噬的研究

研究甘草查尔酮A(licochalcone A,LCA)对肾癌细胞自噬的影响,并探讨其对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路的调控作用。实验以肾癌细胞系786-O,769-P细胞为研究对象,采用MTT检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞自噬状态;Ad-GFP-LC3转染实验观察细胞中绿色点状聚集的自噬小体;Western blot法检测自噬相关蛋白的表达,PI3K/Akt/m TOR信号通路的变化,以及抑制该通路后检测诱导自噬的变化。结果表明,LCA抑制细胞增殖呈时间-浓度依赖性,同时剂量依赖性地抑制细胞迁移和侵袭;LCA能够诱导细胞内酸性自噬泡和自噬小体的增多;LCA可明显诱导LC3-Ⅱ,beclin 1,Atg5蛋白表达,降低p62蛋白表达,同时减少Akt,m TOR的磷酸化。使用PI3K/Akt抑制剂(LY294002)以及m TOR抑制剂(rapamycin,Rap)可促进LCA诱导自噬的发生。以上结果提示,LCA通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路进而抑制肾癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导肾癌细胞发生自噬。