烟曲霉中的血管生成抑制剂5-demethoxyfumagillol[英]／Kim D…／／Chem Pharm Bull

作者在从烟曲霉Aspergillus fumigatus(IMI-069714)培养液筛选新的血管生成抑制剂的过程中，将已知成分5-去甲氧基烟曲霉素经碱性水解得到一新的具血管生成抑制活性的成分5-demethoxyfumagillol(1)。     

抑制肿瘤血管生成的新药开始试验

新奥尔良消息:波士顿的研究人员现已开展了用一种真菌衍生的新药抑制儿科脑肿瘤血管生成的Ⅰ期试验。抗血管生成药物TNP-470是一种效力较高,且毒性较低的化学药物,它是抗生素烟曲霉素的姐妹药,烟曲霉素是从烟曲霉fresenius衍生出来的。     

植物来源抑制血管生成的活性成分研究进展

抑制血管生成是肿瘤治疗一个重要策略，从治疗血管生成有关疾病的中药中进行有效成分的筛选可能将提高筛选成功机率，植物来源的小分子血管生成抑制剂的寻找越来越受到关注。通过查找近5年来植物来源的抑制血管生成活性成分的相关文献，按照化合物结构类型进行分类，发现近年来植物来源的抑制血管生成的活性成分主要集中在萜类、生物碱、黄酮类和多酚类上，尤其是萜类化合物数量最多。以期为从植物中发现新的抑制血管生成活性成分提供参考。     

一种改良的猪肺动脉干平滑肌细胞培养方法

在本室已建立的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)培养方法的基础上作了改进①用含400ml.LPASMC条件培养液和100ml／L胎牛血清(FBS)的PASMC混合培养液(PASMCMM)代替含100ml/LFBS的M199培养液;②传代时间选在90％长满,即PASMC处在对数生长期末而停滞期前;③用5～8滴／瓶混合消化液传代,然后用含100ml／L小牛血清的M199培养液终止反应,并使其贴壁,第2d改换成PASMCMM。经此法培养的PASMC具有生长快、分散更均匀的特点。细胞倍增时间(45．6h)较改进前(56．8h)缩短11．2h。改进后的培养方法更加简便、实用、高效。因此是一种快速、并可大量获取优质PASMC的有效方法。     

NF-κB和TNF-α在烟曲霉菌感染小鼠肺组织中的表达

目的探讨核因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在小鼠抗烟曲霉菌早期感染中的作用。方法将小鼠分4组:正常组、免疫抑制组、正常+烟曲霉菌接种组和IPA模型组。小鼠鼻吸入烟曲霉菌48 h处死,取肺组织用western blot法检测胞核NF-κB p65蛋白和细胞中TNF-α的表达。结果正     

β-胡萝卜素对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究β-胡萝卜素(β-C)对高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法在血管内皮细胞长至80%以上融合时,将其分为5组:正常对照组、高糖损伤组及低、中和高剂量β-C组,每组6个复孔。正常对照组加入10%葡萄糖注射液5.5mmol·L-1,高糖损伤组加入10%葡萄糖注射液33mmol·L-1,低、中和高剂量β-C组分别加入β-C 10、20、40μmol·L-1+10%葡萄糖注射液33mmol·L-1。各组放置5%CO2培养箱中培养48h后,收集细胞或培养液进行实验。使用酶联免疫检测仪、采用MTT比色法检测5组血管内皮细胞存活率,采用流式细胞仪检测血管内皮细胞凋亡率、血管内皮细胞中活性氧(ROS)水平,使用全自动生化仪、采用乳酸→丙酮酸连续监测法检测5组血管内皮细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,使用全自动生化仪、采用硫代巴比妥酸比色定量法检测5组血管内皮细胞培养液中丙二醛(MDA)的水平;先参照NO检测试剂盒的使用说明书进行实验,后采用酶联免疫检测仪检测5组血管内皮细胞培养液中NO水平。结果与正常对照组比较,高糖损伤组的血管内皮细胞存活率、血管内皮细胞培养液中NO水平均明显降低,血管内皮细胞培养液中LDH活性、MDA水平,血管内皮细胞凋亡率、血管内皮细胞中ROS水平均明显升高(均P<0.01);与高糖损伤组比较,中、高剂量β-C组的血管内皮细胞存活率、血管内皮细胞培养液中NO水平均明显升高,血管内皮细胞培养液中LDH活性、MDA水平及低、中和高剂量β-C组的血管内皮细胞凋亡率、血管内皮细胞中ROS水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论β-胡萝卜素对高糖诱导的脐静脉内皮细胞的损伤具有保护作用,其机制可能与增加NO水平和促进ROS的降解有关。     

烟曲霉感染后人脐静脉内皮细胞表达组织因子的变化

目的 通过建立烟曲霉菌丝感染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的体外模型,观察烟曲霉菌丝感染后HUVEC表达组织因子(tissue factor,TF)的变化,以及用不同干预因素处理对HUVEC表达TF的影响,以探讨侵袭性肺曲霉病(invansive pulmonary aspergillosis, IPA)血管侵袭的机制. 方法 实验分为6组,即对照组、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)组、烟曲霉菌丝组、细胞松弛素D组、N-cadherin抗体组和地塞米松组,分别于0、2、6、12、18h获取细胞冻融液,采用ELISA法检测TF浓度. 结果 实验组2、6、12、18h TF表达量与0h比较均升高(P﹤0.05),而对照组则无明显变化;实验组TF表达量在2、6、12、18h高于对照组 (P﹤0.05);TNF-α组的TF表达量在2、6、12h高于烟曲霉菌丝组(P﹤0.01);N-cadherin抗体组的TF表达量在2、6、12h低于烟曲霉菌丝组 (P﹤0.05);细胞松弛素D组或地塞米松组的TF表达量在各时间点与烟曲霉菌丝组比较差异均无统计学意义. 结论 烟曲霉菌丝感染后,HUVEC过度表达TF,N-cadherin单克隆抗体可减少TF的表达,而细胞松弛素D或地塞米松对TF的表达无明显影响.     

观察大鼠血管平滑肌细胞与间充质干细胞直接接触培养对细胞的诱导分化

目的 观察血管平滑肌细胞与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)直接接触对MSCs向血管成分细胞的诱导分化.方法 分别将MSCs(DAPI标记)与血管平滑肌细胞按一定的比例混合直接接触培养;MSCs加血管平滑肌细胞条件培养液或单独常规培养后,用平滑肌细胞抗体SM-α-actin、Calponin及内皮细胞抗体CD31免疫荧光染色,并观察MSCs的细胞形态变化,检测MSCs的分化情况.结果 MSCs与血管平滑肌细胞混合培养3 d后免疫荧光染色,可见胞核蓝染的MSCs与抗SM-α-actin(绿色),抗Calponin、CD31(红色)的双标细胞出现;5 d后阳性表达率增加.而加血管平滑肌细胞条件培养液或常规单独培养的MSCs抗SM-α-actin阳性,抗Calponin、CD31均为阴性.结论 与血管平滑肌细胞直接接触可以诱导MSCs向血管成分细胞分化.     

条件培养基抑制L-抗坏血酸钠介导的小鼠黑色素瘤细胞凋亡

目的探讨肿瘤细胞B16F10通过自分泌对抗由L-抗坏血酸钠(VitCNa)介导的凋亡作用。方法常规在75 cm~2培养瓶中培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10,待细胞长至90%～95%融合时吸取原DMEM/高糖培养液,用PBS反复清洗后加入无血清的DMEM/高糖10ml在培养箱中培养6～8 h,收集培养液用2500 r/min离心5min后上清用0.22μm滤器过滤,-20℃保存备用,在6孔板中每孔接种1×10~6 B16F10,常规培养24h后,实验组每孔加入2ml条件培养液(含有10%胎牛血清),对照组用普通培养液,两组均用10 mmol/L VitC Na促凋亡,分别在3、6、24 h观察细胞凋亡情况,hoechst染核,收集细胞免疫荧光检测caspase3和TUNEL、RT-PCR检测Bcl2表达。进而分离出条件培养液中相对分子质量大于5 000和小于5 000成分,分别煮沸,用蛋白酶K灭活后对B16F10促凋亡。结果发现条件培养基能够抑制VitC Na介导的小鼠黑色素瘤细胞B16F10凋亡,抗凋亡成分小于5 000,且不能被煮沸和蛋白酶K灭活,提示其是小分子抗凋亡物质。结论 B16F10可以分泌出拮抗细胞凋亡的小分子物质。     

硝苯吡啶对人肾上腺组织分泌血管紧张素Ⅱ和醛固酮的影响(简报)

正常人背上腺组织块经O．25％胰酶消化后置于25ml培养瓶中，加入DMEM（含IO％胎牛血清）后放在37C、C（）2培养箱中培养，经过9d培养后进行药物实验。将培养的肾上腺组织随机分为3组：对照组（6瓶）每瓶加入15oplo．9％NaCI溶液；实验组分为氯化钙组（8瓶，每瓶浓度为SXIO－’mol／L）和硝苯毗院组（8瓶，每瓶浓度为6X10’mol／L）。实验前各组细胞经过24h培养后取出培养液，换人新鲜培养液预培养Zh并取培养液作实验自身对照，然后给药培养O．5、l、2、4、24和96h后分别取出培养液，测定培养液中血管紧张素！和醛固酮的含量。本实…     

根癌农杆菌介导的尿嘧啶缺陷烟曲霉转化是基因敲除的有效方法

目的:探讨用嘧啶营养缺陷作为筛选标记、根癌农杆菌介导的转化方法敲除烟曲霉基因.方法:以pyrG作为筛选标记,在双元载体pDHt/sk上分别构建烟曲霉FAPI,和SHOI基因的打靶序列.构建好的质粒分别转化入根癌农杆菌.24℃条件下,含打靶质粒的根癌农杆菌与烟曲霉在不含尿嘧啶和尿苷的诱导培养基上共培养48h;然后将培养物转移到37℃,筛选转化子.结果:根癌农杆菌介导的烟曲霉转化同源重组率较高,FAPI基因为44%(7/16)、SHOI基因为35%(7/20).结论:以pyrG作为筛选标记、根癌农杆菌介导的转化方法能高效敲除烟曲霉基因,为烟曲霉基因功能研究提供了有效方法.     

Amadori糖化白蛋白对牛视网膜血管二酯酰甘油--蛋白激酶C级联的影响

目的 :探讨Amadori糖化血清白蛋白对牛视网膜血管二酯酰甘油 (DAG)———蛋白激酶C(PKC)信号级联的影响及d-α-生育酚的干预作用。方法 :体外制备的Amadori糖化的牛血清白蛋白 (AGSA)分别在生理浓度葡萄糖 (5 .5mmol/L)和高浓度葡萄糖 (2 0mmol/L)培养液中作用于新鲜牛视网膜血管。采用薄层层析和放射自显影法测定DAG含量和PKC活性 ;并检测d -α-生育酚预处理后DAG、PKC改变。结果 :在生理葡萄糖浓度下 ,牛视网膜血管暴露于AGSA2 4h或 72h后细胞内DAG含量、PKC活性均较对照组显著增加 ,当AGSA和高葡萄糖同时作用于牛视网膜血管时 ,DAG -PKC级联显著激活 ,分别为正常葡萄糖组的 3.4 7倍和 4 .5 4倍 ;在正常血清培养液中 ,与 5 .5mmol/L的葡萄糖相比 ,2 0mmol/L高糖在 2 4h时并不刺激DAG含量增加 (P >0 .0 5 ) ,而 72h时则较对照组增加 4 5 % ,PKC活性较对照增加 5 6 % ,而d -α -生育酚可逆转上述生化改变。结论 :Amadori糖化血清白蛋白可在生理葡萄糖浓度下刺激DAG -PKC途径活化 ,从而影响血管一系列生理功能 ,而d -α-生育酚对血管生化改变有保护作用。     

RepSox对X射线辐照后血管内皮细胞ALK5表达的抑制作用

目的 研究X射线辐照后血管内皮细胞中激活素受体样激酶5(ALK5)的表达变化以及RepSox对ALK5及其下游靶点的抑制作用.方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为对照组(Control)、辐照组(IR)和RepSox干预组(IR+RepSox).RepSox干预组辐照前24 h进行干预,然后用X射线进行照射.辐照...     

外源性内皮素-1对原代培养新生大鼠心肌细胞的影响

①目的　以原代培养的新生大鼠心肌细胞为模型 ,探讨外源性内皮素 1对心肌细胞的损伤作用。②方法　将原代培养的心肌细胞分成 4组 ,实验组分别使原代培养的心肌细胞培养液内皮素 1的浓度达 10 -7、10 -8、10 -9mol/L(A、B、C组 ) ,正常对照组换不含血清的培养液培养 ,分别于实验前和实验 12、2 4h ,取上清液 - 2 0℃冻存待测。用倒置相差显微镜对活细胞形态进行观察 ,用Hitachi 715 0全自动生化仪测定培养液中心肌细胞乳酸脱氢酶 (LDH)的活性 ,用微量邻苯三酚法测定心肌细胞超氧化物歧化酶 (SOD)的活性 ,用丙二醛 (MDA)测试盒测定培养液中MDA的含量。③结果　实验组较对照组心肌细胞形态及搏动特点有异常改变 ,内皮素 1(10 -7、10 -8、10 -9mol/L)作用 12或 2 4h后 ,同簇心肌细胞搏动节律变得不规整 ,心肌细胞胞体立体感差 ,胞浆也显得粗糙 ,成纤维细胞数目增多。实验组较对照组培养液中心肌细胞LDH的活性明显增加 ,差异有显著性 (F =5 5 .2 5、73.4 6 ,q =3.6 5～ 19.18,P <0 .0 5 )。实验组较对照组培养液中心肌细胞SOD的活性明显下降 ,差异有显著性 (F =5 2 .4 3、75 .82 ,q =4 .2 3～ 19.4 7,P <0 .0 5 )。实验组较对照组培养液中MDA的含量明显增加 ,差异有显著性 (F =15 2 .6 2、5 4 8.5 4 ,q=     

内皮抑素及其基因治疗肿瘤的新进展

1971年Ｆｏｌｋｍａｎ教授首次提出“肿瘤的生长依赖于血管生成 ,新血管的形成是体积 >1～ 2ｍｍ3 实体瘤生长和癌细胞转移的前提条件”。从此抑制肿瘤血管的生成成为肿瘤治疗学研究的新热点。 1997年Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ[1] 首次从鼠的血管内皮细胞瘤 (Ｅｏｍａ)培养液中提取出内皮抑素———一种新的血管生成抑制因子。经过 5年的实验动物研究和Ⅰ期临床试验证明 :内皮抑素能有效抑制血管内皮的增殖 ,促使肿瘤细胞的凋亡 ,抑制肿瘤的生长和转移 ,具有很强的抗肿瘤特性 ,而且无耐药性和毒副作用[1] 。本文就内皮抑素及其基因治疗肿瘤的研究应…     

VEGF及其受体KDR在肿瘤血管生成中的作用

人体肿瘤大部分都是实体瘤,肿瘤组织是由肿瘤细胞和间质构成,间质成分主要包括血管、淋巴管、结缔组织、炎细胞及细胞外基质等成分。其中,血管和结缔组织起营养、支持肿瘤细胞的作用。肿瘤内的新生血管是通过血管生成实现的,血管生成在肿瘤的生长、侵袭和转移中起到重要作用。血管生成是指活体组织在已存在的微血管床上芽生出新的以毛细血管为主的血管系统过程[1]。肿瘤的血管生成受多种血管生成因子调控,已知的血管生成因子有数十种,包括成纤维细胞生长因子家族、血管内皮生长因子(VEGF)家族及其受体、血管生成素家族及其受体家族以及表皮生长因子、血小板衍生生长因子、转化生长因子等。其中VEGF家族及其受体是已知的、特异性     

烟曲霉感染对人脐静脉内皮细胞表达血管假性血友病因子的影响

目的通过建立烟曲霉菌丝感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的体外模型,观察烟曲霉菌丝感染后HUVEC表达血管假性血友病因子（vWF）的变化,以及用不同干预因素处理对HUVEC表达vWF的影响,以探讨侵袭性曲霉病血管侵袭的机制。方法实验分六组,即空白对照组、TNF-α组、烟曲霉菌丝组、细胞松弛素D组、N-钙黏蛋白抗体组和地塞米松组,分别于2、6、12及18 h提取细胞培养上清液,采用ELISA法检测vWF浓度。结果与2 h比较,空白对照组和TNF-α组的vWF表达量在18 h增加（P〈0.05）,其余各组vWF表达量在6、12及18 h均增加（P〈0.05）;各实验组与空白对照组比较,除N-钙黏蛋白抗体组HUVEC的vWF表达量在2 h无明显变化外,其余各时间点vWF表达量均升高（P〈0.05）。TNF-α组HUVEC的vWF表达量在2 h高于烟曲霉菌丝组,而在18 h低于烟曲霉菌丝组。N-钙黏蛋白抗体组HUVEC的vWF表达量在2 h和6 h分别低于烟曲霉菌丝组相应时间点。细胞松弛素D组和地塞米松组vWF在各时间点与烟曲霉菌丝组的差异均无统计学意义。结论烟曲霉菌丝感染后,HUVEC过度表达vWF,N-钙黏蛋白单克隆抗体可减少vWF的表达,而细胞松弛素D和地塞米松对vWF的表达无明显影响。     

毛脉酸模中二苯乙烯类成分对HepG2细胞肿瘤相关基因表达的影响

目的:探讨毛脉酸模提取物二苯乙烯类成分与肝癌发生、发展的关系及其作用机制.方法:用二苯乙烯类成分处理人肝癌细胞株HepG2 48 h后,提取药物处理组和对照组细胞的总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用Cy3和cy5两种不同的荧光染料进行线性扩增标记,然后与人肿瘤相关基因表达谱芯片杂交,扫描后埘获得的数据用LuxScan 3.0软件分析.结果:经二苯乙烯类成分诱导后HepG2细胞的2474个肿瘤相关基闪中,有GADD153,HPRG等5个基因表达明显上调,PRL-1,PAI-1等9个基因明显下调.结论:二苯乙烯类成分能改变细胞周期进程、细胞增殖、细胞凋亡、血管生成等相关基凶的表达,此可能是其抗肿瘤作用的机制.     

骨髓间充质干细胞对大鼠胶质瘤细胞的趋化性实验

目的用Transwell细胞迁移实验观察骨髓间充质干细胞是否具有对C6大鼠胶质瘤细胞的趋向性。方法在Transwell培养板的Transwell上室中放置一定量的用B rdU标记的骨髓间充质干细胞,Transwell培养板的培养孔中分别放置:IMDM培养基、C6细胞条件培养液、MRC-5细胞、C6鼠胶质瘤细胞。将以上Transwell培养板在CO2恒温培养箱中培养2h后,然后取胰酶加入培养孔中消化细胞5min,拿掉Transwell上室,取适量细胞悬液滴加在载玻片上,然后将4%多聚甲醛滴加在载玻片上的细胞上将其固定30min,然后对载玻片上的细胞进行B rdU免疫组化染色(S-ABC法)。免疫组化染色处理后,用显微图像分析仪计数载玻片上的阳性细胞数。结果迁移到C6及其条件培养液组的骨髓间充质干细胞明显多于IMDM和MRC-5组,并有统计学意义上的差异,且C6及其条件培养液组之间也有统计学意义上的差异,IMDM和MRC-5组两组之间差异无统计学意义。结论实验表明骨髓间充质干细胞对C6细胞及其分泌的各种因子具有趋向性。     

一种高选择性、高效的牛视网膜微血管内皮细胞培养方法

目的 建立一种高效、可行、特异性高的牛视网膜微血管内皮细胞(BREC)培养方法.方法 取新鲜牛眼,分离视网膜并用DMEM进行冲洗、匀浆剪碎,过75μm筛,将滤网上滤渣转移至50 ml离心管,用I型胶原酶、DNaseI及蛋白酶等多种酶混合液消化20 min,人血清中和后,过46μm网筛并冲洗,离心5 min,将组织扣在培养皿中,转入15 ml离心管,用10％人血清含生长因子ECGS的DMEM培养液培养于25 cm2,选择性培养视网膜血管内皮细胞,接种于明胶包被培养瓶中,采用ECGS配合肝素培养液促进内皮细胞生长,观察细胞形状生长特性,并用免疫化学荧光方法进行鉴定.结果 选择性培养视网膜微血管内皮细胞成单层、镶嵌铺路石状生长,Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检测为阳性纯度均大于95％以上,将细胞种在凝固的基质胶表面,12～18 h形成官腔结构.结论 本方法过程简单、可靠,培养的内皮细胞纯度高,生长状态良好,稳定传代,为视网膜血管生成疾病研究建立了模型.