T淋巴瘤侵袭与转移诱导因子1在早孕小鼠蜕膜的表达动态过程

目的:探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(T-lymphoma invasion and metastasisi nducing proteinI,Tiam1)在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律。方法:采用RT-PCR和Western blotting方法分别检测早孕小鼠子宫内膜中Tiam1mRNA和蛋白的表达水平。结果:①Tiam1mRNA的表达量随妊娠天数的增加逐渐增高,到妊娠第5日表达量达到峰值,于妊娠第6日、第7日开始逐渐降低;②Tiam1蛋白表达与其mRNA表达规律基本一致。结论:Tiam1在妊娠早期子宫内膜中持续表达,可能参与小鼠胚胎植入过程。     

骨形态发生蛋白-7(BMP-7)促进小鼠子宫内膜蜕膜化研究

目的:探讨骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)在子宫内膜蜕膜化过程中的作用。方法:①采用RT-PCR和免疫组织化学技术分别观察BMP-7的mRNA和蛋白在妊娠第5～8日小鼠子宫中的表达情况;②原代培养小鼠子宫基质细胞,用孕酮(P4)、E2和cAMP诱导蜕膜化的同时分别加入1ng/ml、10ng/ml、100ng/mlBMP-7重组腺病毒,Westernblotting检测催乳素(PRL)的表达。结果:①BMP-7mRNA在妊娠第5～8日小鼠子宫着床位点的表达高于着床旁组织(P<0.01),且在着床点的表达随着妊娠天数的增加逐渐增强(P<0.05)。BMP-7蛋白在妊娠第5日、第6日分别表达于植入胚胎周围的基质细胞和初级蜕膜带,第7日、第8日时主要表达于次级蜕膜带以及植入位点系膜侧基质细胞。②在小鼠子宫基质细胞的蜕膜化过程中,BMP-7重组腺病毒组的催乳素蛋白表达均显著增加(P<0.01),其中10ng/ml组增加最明显(P<0.01)。结论:BMP-7蛋白具有促进小鼠子宫内膜蜕膜化的效应。     

sLe~x在小鼠胚泡植入早期子宫内膜中的表达及作用

目的:探讨唾液酸化的路易斯寡糖(sLex)在胚泡植入早期小鼠子宫内膜的表达及作用。方法:①应用免疫组化方法对sLex在小鼠妊娠早期子宫内膜的表达进行定位,免疫印迹法以另一侧为自身对照,检测妊娠d1-5小鼠子宫内膜sLeX的表达情况。②向妊娠小鼠一侧子宫角注射sLeX单克隆抗体,观察其对胚胎着床的影响。结果:妊娠d1-5小鼠子宫内膜组织中,sLeX表达量逐渐增加,在植入窗口期(d4)达高峰;子宫角注射抗体后对胚泡植入有明显的抑制作用。结论:在小鼠胚泡植入早期,sLex参与了胚泡的植入过程,在胚泡和子宫内膜的识别过程中发挥重要的作用。     

肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)在早孕小鼠子宫内膜的表达规律

目的:探讨肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)在胚胎植入过程中的作用。方法:①用RT-PCR及免疫组化方法分别检测未孕(n=10)及孕d1-7小鼠(n=10×7)子宫内膜TACE mRNA和蛋白的表达;②向妊娠小鼠(n=6)左侧子宫角注射TACE抗体,观察TACE对胚胎着床数的影响。并以右侧为自身对照和注射生理盐水为手术对照组(n=6)。结果:①TACE mRNA在早孕期小鼠子宫内膜的表达明显高于未孕期,且随妊娠天数的增加而逐渐增加,于孕d4达高峰,随后渐降。免疫组化结果与RT-PCR一致;②子宫角TACE抗体注射后胚胎植入数目明显减少。结论:在小鼠妊娠早期,TACE表达增高,其在胚泡植入中可能发挥着重要作用。     

锌指转录因子Slug在早孕小鼠子宫内膜的表达

目的:初步探讨锌指转录因子Slug在早孕小鼠胚胎植入过程中的作用。方法:用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测未孕及妊娠1-7d小鼠子宫内膜Slug在mRNA水平和蛋白水平的表达。结果:RT-PCR半定量结果显示,早孕小鼠子宫内膜组织Slug的表达高于未孕小鼠子宫内膜组织,且随着妊娠天数的增加呈现逐渐增加的趋势,到妊娠4d达最高。进一步通过免疫组化也显示小鼠子宫内膜有Slug蛋白表达,且其表达规律与RT-PCR结果基本一致。结论:Slug在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与了胚泡植入过程。     

肿瘤转移抑制因子CD9/MRP-1基因在小鼠围着床期子宫内膜的动态表达

目的:探讨肿瘤转移抑制基因(CD9)/运动相关蛋白(MRP-1)mRNA和蛋白在胚胎着床过程中的作用。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术观察CD9/MRP-1mRNA和蛋白在早孕和假孕小鼠子宫中的表达规律。结果:早孕d1-4小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,且d4表达最多;其蛋白主要表达在d1-4的子宫内膜上皮细胞,且早孕d2-4CD9/MRP-1在子宫基质细胞散在阳性表达。假孕d1-8小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,假孕d5表达开始增加,至d6达到峰值。而CD9/MRP-1蛋白在假孕d1-8子宫内膜腺上皮均有表达,而子宫内膜腔上皮均无表达。假孕d2-5,子宫基质细胞出现散在阳性表达。结论:①CD9/MRP-1在早孕小鼠子宫中呈动态表达,提示它在胚胎精确侵袭子宫内膜的调节中发挥作用。②CD9/MRP-1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。     

α-1,3岩藻糖转移酶各亚型在小鼠胚胎着床前后子宫内膜表达的半定量研究

目的 :研究小鼠胚胎着床前后蜕膜组织α 1,3岩藻糖转移酶 (FucT)III～VII型的表达及其在胚胎着床中的作用。方法 :取未孕和孕 1～ 7d小鼠子宫内膜 ,每组 6例。用RT PCR法测定III～VII型mRNA水平的表达 ,并经测序鉴定。结果 :正常小鼠内膜有一定的FucT IV的表达 ,其表达在妊娠第 1天和胚胎着床前后即妊娠第 4天出现峰值。结论 :5种糖基转移酶中只有FucT IV参与了胚胎着床的过程。它的作用可能是参与了胚泡表面特异性抗原Lex等抗原的糖基化 ,从而促进胚胎的植入。     

TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达

目的:检测TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达,探讨它在蜕膜细胞凋亡中的作 用。方法:采用RT-PCR及免疫组化技术检测妊娠d 1-8小鼠子宫组织TRAILmRNA及蛋白的表 达情况。结果:妊娠d 1-8的小鼠子宫组织均有TRAIL mRNA的表达,且着床期间的表达较着床前 明显增加(P<0．05)。妊娠d 1-3,小鼠子宫内膜无TRAIL蛋白表达;妊娠d 4,TRAIL表达在小鼠胚 胎定位、黏附点的子宫内膜腔上皮细胞;妊娠d 5-6,TRAIL定位于胚胎着床点附近的蜕膜细胞中; 妊娠d 7-8,TRAIL表达在与子宫蜕膜邻近的胚胎滋养层细胞中。结论:在小鼠胚胎着床过程中, TRAIL诱导子宫内膜腔上皮细胞凋亡可能是胚胎跨越上皮屏障的重要机制之一,且TRAIL诱导的 蜕膜细胞和胚胎滋养层细胞的凋亡在滋养层细胞对子宫内膜的适度侵入过程中起重要作用。     

肿瘤抑制基因p16~(INK4A)在小鼠早孕子宫内膜中的表达

目的:初步探讨p16INK4A在胚胎着床过程中的作用。方法:采用实时FQ-PCR和免疫组织化学技术分别检测未孕(d0)及孕d2、d3、d4、d5、d6、d7小鼠子宫内膜p16INK4AmRNA及其蛋白的表达。结果:实时FQ-PCR显示妊娠子宫内膜组织p16INK4A的mRNA表达高于未妊娠的子宫内膜组织,且随着妊娠天数的增加呈现逐渐增强的趋势,到孕d5达到最高。免疫组化显示p16INK4A蛋白在子宫内膜的表达及规律与实时FQ-PCR的结果一致。结论:小鼠胚胎着床过程中p16INK4A诱导的小鼠子宫内膜上皮细胞的凋亡可能是胚胎着床的重要机制之一。     

子宫内膜整合素蛋白β_3亚基在妊娠中的变化

为探讨整合素蛋白 β3亚基在胚胎着床期的作用 ,本实验应用特异性抗整合素蛋白 β3抗体 ,采用免疫和 Western印迹法 ,二氨基联苯胺显色 ,VDS扫描等技术 ,检测妊娠 d3、5、7、1 5小鼠子宫内膜及人分泌期子宫内膜和妊娠早期中整合素β3亚基的表达量。结果 :小鼠子宫内膜整合素蛋白 β3亚基表达量在妊娠 d5明显上升 ,至 d7时达高峰 (与对照组比较 ,P<0 .0 1 )。此后下降 ,d1 5时 ,整合素蛋白 β3的表达量与对照组相比 ,无明显差异。人蜕膜组织和分泌期子宫内膜均有整合素蛋白β3的表达。蜕膜整合素蛋白β3的表达量与胚囊大小无关 ,但比分泌期子宫内膜高 4～ 5倍 (P<0 .0 0 0 1 )。这些结果提示 :整合蛋白 β3亚基在子宫内膜中的特异性变化 ,可能启动、促进胚胎的粘附和着床 ,在着床过程中起重要作用。     

对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜容受性的研究

目的:建立胚泡着床障碍小鼠模型,并研究其子宫内膜容受性。方法:于妊娠d4上午利用米非司酮诱导昆明小鼠胚泡着床障碍,12h后处死小鼠,观察小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,利用光镜观察小鼠子宫内膜形态结构,采用免疫组化SP法检测子宫雌、孕激素受体(ER、PR)表达,采用RT-PCR检测子宫ER、PR基因表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数明显降低,子宫内膜发育明显受抑制;子宫内膜腺体、间质ER、PR表达范围和强度均显著降低。结论:米非司酮能成功诱导建立胚泡着床障碍模型,其着床期子宫内膜发育受抑制,子宫内膜容受性降低,胚泡着床失败。     

Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨Survivin在早孕小鼠子宫内膜中的动态表达及在胚胎着床中的作用。方法:用FQ-PCR及免疫组化方法分别检测未孕及妊娠d2-7各组小鼠子宫内膜Survivin基因和蛋白的表达。结果:FQ-PCR检测妊娠组Survivin mRNA的表达明显高于未孕组(P<0.01),并且随着妊娠天数的增加子宫内膜Survivin mRNA的表达逐渐增加,到孕d6达到高峰,随后下降,但孕d7仍明显高于未孕组(P<0.01)。免疫组化检测Survivin蛋白在子宫内膜的表达规律与FQ-PCR结果一致。结论:早孕小鼠子宫内膜着床期Survivin mRNA和蛋白均高表达,然后下降,提示Survivin可能通过抗细胞凋亡,促细胞增殖和血管形成的作用,参与胚胎着床。     

HOXA-10、HOXA-11、Esr2、Pgr在控制性超排卵小鼠围着床期子宫内膜表达的研究

目的:检测同源框基因HOXA-10、HOXA-11以及雌激素受体Esr2、孕激素受体Pgr在控制性超排卵(COH)小鼠围着床期子宫内膜中的表达,探讨COH对子宫内膜容受性的影响。方法:将30只SPF级雌性昆明小鼠随机分为模型组(GnRH-a+HMG+HCG)和对照组(生理盐水),每组15只,造模成功后,计算子宫脏器指数,光学显微镜观察子宫内膜组织学变化;应用RT-PCR和Real-time PCR方法检测小鼠子宫内膜中HOXA-10、HOXA-11、Esr2、Pgr mRNA的表达。结果:模型组围着床期小鼠子宫脏器指数较对照组显著降低(P<0.05),子宫内膜发育延迟,子宫内膜成熟度及厚度降低;模型组小鼠HOXA-10、HOXA-11、Pgr mRNA表达较对照组显著下降(P<0.05),而Esr2 mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论:COH引起HOXA-10、HOXA-11、Pgr mRNA表达下降,Esr2mRNA表达升高,致使围着床期内膜准备不足,子宫内膜容受性下降。     

PCNA在早孕小鼠子宫内膜的表达

目的:探讨增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA及蛋白在早孕小鼠子宫内膜的作用。方法:实时荧光定量PCR(FQ-PCR)及免疫组化方法分别检测未孕(d0)及早孕d2、d3、d4、d5、d6、d7小鼠子宫内膜PCNA mRNA和蛋白的表达。结果:随着小鼠妊娠天数的增加,PCNAmRNA及蛋白表达量也逐渐增高,在孕d4、d5达到峰值,孕d6、d7逐渐下降。结论:在胚泡植入窗口期子宫内膜PCNA的高表达,可能参与了子宫内膜蜕膜化过程,在胚泡早期植入中发挥作用。     

肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1在假孕小鼠子宫的表达及其对小鼠胚胎着床的影响

目的:研究CD82/KAI1mRNA及蛋白在假孕d1-8小鼠子宫中的表达规律,以及CD82/KAI1抗体对小鼠胚胎体外发育及着床的影响。方法:用RT-PCR及免疫组织化学技术观察CD82/KAI1mRNA及蛋白在假孕小鼠子宫的表达规律。将8-细胞小鼠胚胎培养于含不同浓度CD82/KAI1抗体的培养液中,观察囊胚形成及脱透明带的情况。妊娠d4小鼠宫角注射CD82/KAI1抗体,于妊娠d8观察小鼠胚胎植入数量。结果:①CD82/KAI1mRNA在假孕d1-8小鼠子宫中均有表达,于d4、d5表达最丰富。CD82/KAI1蛋白在假孕d1-8的子宫基质细胞及腺上皮细胞均有表达,假孕d1-4腔上皮细胞无表达,假孕d5子宫腔上皮细胞出现弱阳性表达,从d6开始子宫腔上皮细胞表达逐渐增强。②一定浓度的CD82/KAI1抗体可明显抑制囊胚的形成率(1∶400,P<0.05)和脱带率(1∶800,P<0.05)。③宫角注射一定量的CD82抗体可以显著提高小鼠胚胎的着床数(8.35±0.17vs4.52±0.24,P<0.05)。结论:CD82/KAI1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。CD82/KAI1在小鼠胚胎发育和着床过程中发挥重要作用。     

小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶-1 mRNA的降调节作用

目的:探讨小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶I(Dnmt1)mRNA表达的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测Dnmt1在小鼠输卵管的组织学定位;Real- timeRT- PCR检测正常妊娠和假孕小鼠在胚胎2细胞期、4细胞期和8细胞期时,输卵管上皮细胞Dnmt1mRNA表达水平的变化。结果:Dnmt1主要表达在小鼠输卵管的上皮细胞层;妊娠组小鼠各期输卵管上皮细胞Dnmt1mRNA表达水平均显著低于同期假孕组(P<0 05)。结论:小鼠植入前期的胚胎对母体输卵管上皮Dnmt1mRNA表达具有降调节作用,胚胎可能通过此作用间接调控输卵管上皮某些基因的表达。     

大鼠着床前后子宫雌激素受体基因表达的研究

本文对大鼠在正常动情期和早期妊娠阶段（ｄ１～ｄ１０）外周血雌二醇（Ｅ２）水平和子宫中雌二醇受体（ＥＲ）基因的表达（以３Ｈ－Ｅ２配体结合饱和分析测定胞浆受体ＥＲｃ和核受体ＥＲｎ，以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法测定ＥＲｍＲＮＡ）作了全面的分析。观察到：（１）在正常动情期和妊娠早期，子宫ＥＲ基因表达受到Ｅ２的上调作用，而且ＥＲｍＲＮＡ和蛋白水平基本同步，说明这种影响是在基因转录水平；（２）受孕后，ＥＲ基因表达水平随外周血Ｅ２的升高也逐步上升，于ｄ４～ｄ５（着床前夕）达到高峰，ｄ６～ｄ７（着床中）突然下跌至低谷，随后回升；（３）孕后ｄ６～ｄ１０子宫着床部位的ＥＲ表达明显低于非着床部位，同时胚胎也有一定的ＥＲ表达。