2型糖尿病大鼠肾脏转化生长因子-β1Ⅳ型胶原和细胞间黏附分子-1表达的变化

<正>糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病患者常见并发症,也是糖尿病患者死亡的主要原因之一。DN典型的病理改变是肾小球硬化,其组织学特征是肾小管和肾小球基底膜增厚,系膜基质扩张、肾肥大以及肾小管间质纤维化[1]。许多学者已证明转化生长因子(TGF)-β1为致纤维化因子,其表达增多可指导细胞外基质(ECM)的生成,并抑制其降解,在DN发病机制的各个环节起着重要的作用。Ⅳ型胶原的合     

人工虫草对间质纤维化大鼠转化生长因子-β1和结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨人工发酵虫草对肾间质纤维化大鼠肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 雄性SD大鼠30只随机分为3组(正常对照假手术组、造模组及造模灌胃组),每组10只.运用单侧输尿管结扎法(UUO)制造肾间质纤维化模型,于第5周处死大鼠,切片做Masson染色观察肾小管及间质的病理变化;应用免疫组织化学方法检测肾组织中TGF-β1、CTGF的蛋白质表达.结果 与对照组比较,5周时肾小管间质损伤指数升高(P＜0.01);肾组织内TGF-β1、CTGF的蛋白质表达均显著上调(P＜0.05).虫草干预后,上述上调指标均被显著抑制(P＜0.05).结论 虫草可通过抑制TGF-β1和CTGF的过度表达,从而改善间质纤维化.     

TGF-β1对糖尿病肾病早期ECM沉积影响的实验研究

目的 研究TGF-β1对糖尿病肾病早期ECM沉积的影响.方法 制作清洁级雄性SD大鼠DN模型,饲养14周后取肾脏进行HE染色、PAS染色,用免疫组化方法检测FN、IV-C含量及TGF-β1活性,并进行图像分析;同时设立正常对照组.结果 ①DN组大鼠肾小管TGF-β1高表达,与正常组比较有较明显的区别;②DN组大鼠镜下见肾小球体积增大,部分以基底膜增厚及系膜物质增多为主,部分以毛细血管管腔扩张为主,肾小管上皮细胞水肿,间质少量纤维组织增生伴炎细胞浸润;③DN组大鼠PAS染色肾小球阳性物质含量明显增加,与正常组比较差别有统计学意义,P＜0.05;④DN组肾小球内FN阳性表达高于正常组,差别有统计学意义,P＜0.05;⑤DN组肾小管IV-C强阳性表达,与正常组比较差别有统计学意义,P＜0.05.结论 DN早期肾小球ECM增加主要与FN大量沉积有关,肾小管ECM增加主要与IV-C大量沉积有关.TGF-β1在肾小管区域的高表达是促使IV-C沉积的主要原因,而肾小球FN的增加可能还有TGF-β1以外的促ECM沉积因素的参与.     

Association of TGF-β1 and CTGF with Early Diabetic Nephropathy

目的:探讨转化生长因子(TGF)-β1、结缔组织生长因子(CTGF)在早期糖尿病肾病(DN)中的作用.方法:建立链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组(NC)和糖尿病组(DM).每周测量体质量,每2周测定血糖,于实验第8周末处死大鼠后测定相关的生化指标及肾功能指标,同时留取肾皮质液氮冻存,应用实时定量PCR方法检测肾皮质TGF-β1、CTGF的mRNA水平,用免疫组化法检测肾小球中TGF-β1和CTGF的蛋白表达情况,并进行半定量分析.结果:与NC组相比,DM组血尿素氮、24h尿量及尿微量蛋白、肾脏肥大指数明显升高(P＜0.01),但血肌酐明显下降(P＜0.01).实时定量PCR及免疫组化结果显示,DM组较NC组TGF-β1、CTGF mRNA及蛋白表达量均明显增高.结论:TGF-β1与CTGF在肾病早期表达明显升高,对于评价DN进程具有重要意义.     

糖尿病肾病诊治进展

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是由糖尿病(diabetes mellitus,DM)本身引起的肾脏损害.其肾脏病理改变以肾小球肥大、肾小球系膜区细胞外基质增生、肾小球毛细血管基底膜增厚、肾小管间质纤维化最终导致肾小球硬化为特征.     

家蚕丝胶对糖尿病大鼠肾脏胞外信号调节激酶信号转导通路活性的影响

<正>糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病的严重并发症,其病理特征是肾小球肥大,系膜细胞增生、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)积聚和基底膜增厚,从而导致肾小球高滤过和蛋白尿,最终导致肾小球硬化和肾间质纤维化。近年来有研究显示胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)信号转导通路与DN密切相关。ERK是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein ki-     

蛋白酶体抑制剂MG132对早期糖尿病肾病大鼠肾脏纤维连接蛋白表达的影响

<正>糖尿病肾病(DN)是糖尿病常见微血管并发症之一[1],其发病机制仍不清楚,亦无特异性治疗措施[2]。DN早、中期肾脏表现为肾小球、肾小管上皮细胞肥大,肾小球高滤过,胶原Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、层粘连蛋白和纤维连接蛋白(FN)增加[3];晚期表现为肾小球、肾小管基底膜增厚,肾小球系膜区细胞外基质增加,肾小管间质纤维化,肾小球纤维结节形成,最终发生肾小球硬化[4]。本实验通过对蛋白酶体抑制剂MG132作     

结缔组织生长因子在单侧肾静脉结扎大鼠肾组织中的表达

目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)在单侧肾静脉结扎大鼠肾组织中的表达及与肾小管上皮细胞表型转化的关系.方法:雄性Wistar大鼠50只,随机均分为模型组和对照组,模型组25只行左侧肾静脉结扎术,分别于术后5、10、15、20、25d处死大鼠(每组5只).对照组只分离但不结扎.模型组大鼠取双侧肾脏行HE和Masson染色,观察各时间点肾小管间质的改变;采用免疫组化SABC法检测角蛋白(CK)、CTGF和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肾组织内的表达和分布;应用计算机图像分析系统对各项结果进行半定量分析.结果:随结扎时间的延长,模型组大鼠小管间质纤维化逐渐加重,且CTGF、α-SMA的表达逐渐增加;CTGF与α-SMA的表达呈正相关;二者与胶原蛋白的表达均呈正相关.结论:肾静脉结扎导致CTGF的表达增加,CTGF可能通过促进间质中肌成纤维细胞的形成而参与肾间质纤维化.     

替米沙坦对5/6肾切除肾衰竭大鼠的肾脏保护作用及其机制研究

目的 探讨血管紧张素AT1受体拮抗剂替米沙坦对5/6肾切除肾衰大鼠的肾脏保护作用及可能作用机制.方法 选用180 ～ 200 g雄性SD大鼠30只建立5/6肾切除肾衰模型,分为假手术组、模型组和替米沙坦组,各10只.第12周时采用断头法处死大鼠,并检测各组大鼠血清尿素氮、肌酐及24h尿蛋白水平;取残余肾组织行病理检查,判断肾小球硬化、肾小管间质损伤程度;利用反转录聚合酶链反应( RT-PCR)和Western Blot检测过氧化物酶增殖体活化受体γ(PPARγ)和神经型一氧化氮合酶(nNOS)蛋白和mRNA的表达水平.结果 3组肌酐、血清尿素氮及24 h尿蛋白情况:假手术组:(35±4)μmol/L,(6.6±1.0) mmol/L,(30 ±4) mg/d;模型组:(91±10) μmol/L,(23.0±3.4)mmol/L,(96±21) mg/d;替米沙坦组(62±10) μmol/L,( 15.3 - 1.3) mmol/L,(45±17) mg/d;与假手术组相比,模型组和替米沙坦组大鼠上述指标均明显升高(P＜0.01);但与模型组相比,替米沙坦组各指标则明显降低(P＜0.05).病理学检查示模型组大鼠肾组织有明显的肾小球硬化及肾小管间质损伤,肾小球硬化指数及肾小管间质损伤指数均较假手术组明显增高(P＜0.01);而替米沙坦组上述指标则较模型组明显降低(P＜0.05).Western Blot和RT-PCR显示模型组PPARγ、nNOS蛋白和mRNA的表达较假手术组明显下降(P＜0.05),而替米沙坦组PPARγ和nNOS的表达则较模型组明显升高(P＜0.05).结论 大鼠5/6肾切除后,给予替米沙坦可以明显减轻肾小球硬化和肾间质纤维化的程度,其作用机制可能与其上调PPARγ和nNOS基因的表达有关,且二者有明显的相关性.     

氯沙坦对局灶节段性肾小球硬化大鼠转化生长因子-β1及结缔组织生长因子的影响

目的探讨局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1),结缔组织生长因子(CTGF)在肾组织中的表达,检测尿液中两者的水平.观察氯沙坦对肾组织TGF-β1、CTGF蛋白的表达及尿液两者水平的影响.方法40只Wistat大鼠随机分为实验组和治疗组.采用单侧肾摘除后重复静脉注射多柔比星(ADR)制作加速FSGS大鼠动物模型.第1次注药后1周,治疗组大鼠给予氯沙坦50 mg·kg-1·d-1灌胃,实验时间12周.于第6,12周免疫组化观察肾组织TGF-β1、CTGF蛋白质的表达,EIISA检测尿液中两者水平.结果与治疗组相比,实验组12周时尿液TGF-β1、CTGF水平,肾组织内TGF-β1、CTGF蛋白质的表达明显升高(P＜0.01).肾组织内TGF-β1蛋白与CTGF蛋白的表达显著正相关(r=0.83,P＜0.01),尿液中两者排泄量亦明显正相关(r=0.74,P＜0.01).结论FSGS大鼠TGF-β1、CTGF蛋白在肾组织表达及尿液中的排泄明显升高.氯沙坦可减轻肾组织TGF-β1、CTGF蛋白的表达,减少两者尿液中的排泄而有肾保护作用.     

伊贝沙坦预防链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠肾损伤的作用机制(英文)

目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂伊贝沙坦(Irb)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠的肾保护作用机制。方法:SD大鼠随机分为3组:正常对照组(N组,n=7),糖尿病肾病组(DN组,n=6)Irb治疗组(DNI组,n=7)。SD大鼠单侧肾切除后,腹腔注射STZ诱导糖尿病模型,观察治疗后第4, 8,12周的血糖(BG)、体重(BW)、尿白蛋白排泄、24小时尿总蛋白的改变,同时观察12周时肌酐清除率(Ccr)、肾重(KW)、肾脏肥大指数(KW/BW)、肾组织总蛋白含量(RTP)、肾小球面积(A_G)和体积(V_G)、肾小球毛细血管基底膜(GBM)厚度的改变。通过免疫组化观察肾组织结缔组织生长因子(CTGF)和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)的表达。结果:DN组和DNI组间BG无差异(p>0.05)。Irb可显著抑制大鼠尿白蛋白、24小时尿总蛋白的排泄,抑制过度增高的Ccr(均为P<0.01)。而且Irb可显著抑制糖尿病大鼠KW、KW/BW、RTP、A_G和V_G的增加(P<0.05或P<0.01)。我们首次证实Irb能够显著抑制GBM的增厚和CTGF的表达(均为P<0.01)。另外,大鼠肾脏CTGF的表达与TGF-β_1的表达和肾小球体积呈显著正相关(均为P<0.01)。结论:早期应用Irb对糖尿病大鼠的肾保护作用可能与抑制肾脏肥大和肾脏CTGF表达有关。     

Effect of rosmarinic acid on experimental diabetic nephropathy

Connective tissue growth factor (CTGF) plays a pathogenic role in diabetic nephropathy (DN). Rosmarinic acid (RA) is a naturally occurring phenolic acid. This study was conducted to investigate the efficacy of RA on DN and to elucidate the potential mechanism. High glucose (HG)-stimulated cultured human renal proximal tubular epithelial cells (HK-2) analysed CTGF expression by western blotting, and it was investigated whether extracellular signal-regulated kinase (ERK) signalling pathway was involved. Using streptozotocin (STZ)-induced rat animal models, diabetic rats were randomized to receive intragastric (i.g.) doses of RA. Renal tissue, blood and urine samples were collected to determine biochemical index and analyse protein expression. In vitro study, RA reduced CTGF excretion in HG-induced HK-2 cells through the ERK signalling pathway. In an in vivo study, I.g. of RA 7.5 or 15 mg/kg significantly ameliorated renal function and increased body-weight. Meanwhile, RA reduced renal CTGF expression by immunohistochemical staining and reduced serum levels of CTGF. Besides, there were no significant differences in glycaemia levels between the RA groups compared with the STZ-treated group. Furthermore, RA ameliorated renal pathology. These results suggest that RA exerts an early renal protective role to DN. Inhibition of CTGF may be a potential target in DN therapy, which highlights the possibility of using RA in the treatment of DN.     

来氟米特对糖尿病肾病大鼠RANTES与FOXP3表达的影响

目的:观察RANTES、FOXP3、ED-1在肾组织中的蛋白表达,探讨LEF对糖尿病肾病肾组织炎症反应及病理改变的影响。方法:35只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组N(n=10)、模型DN(n=13)、来氟米特组DD(n=12)。采用弗氏完全佐剂(CFA)和链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病肾病模型。检测24 h尿蛋白定量,HE染色观察肾脏组织学改变,免疫组织化学方法检测肾组织RANTES、FOXP3、ED-1表达。结果:与对照组比较,模型组24 h尿蛋白排泄量显著上升(P<0.05),模型组大鼠肾组织肾小球肥大、肾小管上皮细胞变性或脱落、单核/巨噬细胞浸润、肾间质病变等病理变化明显;模型组大鼠肾组织内RANTES、FOXP3、ED-1表达均明显增强(P<0.05);与模型组比较,LEF治疗组大鼠24 h尿蛋白下降,肾组织RAN-TES、FOXP3、ED-1表达显著减少,肾脏病理改变有所减轻。结论:LEF可能是通过抑制RANETS、FOXP3、ED-1在肾组织中的表达,减少炎症细胞在肾组织中的浸润,对延缓糖尿病肾病的发展具有一定的作用。     

TGF-β1、CTGF基因的过表达与早期糖尿病肾病关系的研究

目的:探讨转化生长因子(TGF)-β1、结缔组织生长因子(CTGF)在早期糖尿病肾病(DN)中的作用。方法:建立链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组(NC)和糖尿病组(DM)。每周测量体质量,每2周测定血糖,于实验第8周末处死大鼠后测定相关的生化指标及肾功能指标,同时留取肾皮质液氮冻存,应用实时定量PCR方法检测肾皮质TGF-β1、CTGF的mRNA水平,用免疫组化法检测肾小球中TGF-β1和CTGF的蛋白表达情况,并进行半定量分析。结果:与NC组相比,DM组血尿素氮、24h尿量及尿微量蛋白、肾脏肥大指数明显升高(P<0.01),但血肌酐明显下降(P<0.01)。实时定量PCR及免疫组化结果显示,DM组较NC组TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白表达量均明显增高。结论:TGF-β1与CTGF在肾病早期表达明显升高,对于评价DN进程具有重要意义。     

普罗布考治疗糖尿病肾病的实验研究

目的探讨普罗布考治疗糖尿病肾病的临床疗效。方法将60只大鼠随机分为NC、DN以及DP组各20例,人工建立糖尿病模型后,观察各组大鼠的血糖、血脂、血肌酐、尿白蛋白排泄率、肾质量、肾肥大指数、肾病理改变以及TGF-β1和p47phox的表达。结果 DN组与DP组大鼠的各项指标与NC组大鼠相比均有明显的升高,同时DP组大鼠的肾肥大指数、尿蛋白、TGF-β1以及p47phox均明显优于DN组大鼠。结论普罗布考对糖尿病肾病的肾损伤可以起到有效的保护作用,为糖尿病肾病的预防和治疗提供了理论依据。     

白皮杉醇对糖尿病肾病大鼠ERK1/2通路及CTGF蛋白表达的影响

目的：探究白皮杉醇（PIC）对糖尿病肾病（DN）大鼠细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）通路及其调控的结缔组织生长因子（CTGF）蛋白表达的影响。方法：取健康雄性SD大鼠,采用高脂高糖喂养+腹腔注射链脲霉素建立大鼠DN模型,并将造模成功的50只SD大鼠随机分为模型组（DN组）、PIC低（50 mg·kg^-1）、中（100 mg·kg^-1）、高（200 mg·kg^-1）剂量组,阳性对照组（厄贝沙坦25 mg·kg^-1）,每组10只;另取10只大鼠,正常饲养,作为正常对照组。各组均于造模成功后开始给药,PIC低、中、高剂量组及阳性对照组分别灌胃给予相应剂量的PIC及厄贝沙坦溶液,正常对照组和DN组灌胃给予10 mL·kg^-1生理盐水,各组大鼠连续给药4周,每天1次。给药期间观察大鼠饮食状况,于末次给药12 h后,称重、收集大鼠尿液,麻醉处死大鼠,取腹主动脉血和肾脏组织;用酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒检测血液肾功能指标血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）、空腹血糖及尿液中24 h尿蛋白量及空腹血糖（FBG）含量;取肾脏组织,称重,并用苏木精-伊红染色法检测大鼠肾脏组织病理形态;用黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸缩合法检测肾组织氧化指标超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量;用蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测肾脏组织缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血红素加氧酶-1（HO-1）、ERK1/2、CTGF蛋白相对表达水平。结果：与正常对照组相比,DN组大鼠精神萎靡、形体消瘦及肾小球基底膜增厚、肾小管扩张、肾间质炎性浸润等病理损伤严重,肾脏/体质指数、FBG、血清Scr和BUN、尿液中24 h尿蛋白量、肾脏组织中MDA含量、HIF-1α、HO-1、p-ERK1/2、CTGF蛋白表达升高（P<0.05）,SOD活性明显降低（P<0.05）;与DN组相比,PIC低、中、高剂量组及阳性对照组大鼠精神萎靡、形体消瘦及肾小球基底膜增厚、肾小管扩张、肾间质炎性浸润等病理损伤现象缓解,肾脏/体质指数、FBG、血清Scr和BUN、尿液中24 h尿蛋白量、肾脏组织中MDA含量、HIF-1α、p-ERK1/2、CTGF蛋白表达降低（P<0.05）,HO-1、SOD活性明显升高（P<0.05）,且PIC各剂量组上述指标呈剂量依赖性。阳性对照组上述指标变化与PIC组相比差异无统计学意义。结论：PIC可抑制ERK1/2-CTGF信号通路激活,升高HO-1表达、降低HIF-1α表达,抑制肾脏氧化应激损伤,改善DN大鼠肾脏损伤     

贝纳普利对糖尿病大鼠肾脏中ICAM-1 mRNA和尿微量白蛋白的影响

目的探讨血管紧张素转换酶抑制剂贝纳普利对糖尿病肾脏病变的保护作用和对细胞间粘附分子(ICAM-1)mRNA及蛋白表达的影响.方法STZ诱发大鼠糖尿病,实验设正常组,糖尿病对照组,贝纳普利组和胰岛素治疗组,贝纳普利1.1mg·kg-1·d-1治疗2月,观察肾脏肥大、尿蛋白变化以及用免疫组化和RT-PCR方法检测ICAM-1在肾组织的定位、半定量表达.结果与糖尿病组相比,贝纳普利能显著降低肾重/体重,24h尿微量白蛋白(P<0.01).免疫组化和RT-PCR半定量结果显示贝纳普利能显著降低ICAM-1表达(P<0.01).结论贝纳普利能够降低STZ诱发糖尿病大鼠肾脏组织ICAM-1 mRNA和蛋白表达,对糖尿病肾脏病变有保护作用.     

雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠组织TGF-β1及OPN表达的影响

目的:观察雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠组织TGF-β1及OPN表达的影响。方法:Wistar大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发DN大鼠模型。大鼠随机分三组,分别为:对照组、模型组和雷帕霉素治疗组,给药8周,实验第2,4,8周,测定24h尿蛋白定量;治疗8周后,定时定量PCR法测肾小管间质OPN mRNA表达;免疫组化法检测肾小管间质TGF-β1表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠24h尿蛋白定量明显升高(P<0.05),肾组织TGF-β1、OPN表达明显增加(P<0.01)。雷帕霉素治疗组大鼠24h尿蛋白定量明显降低,肾小管间质组织OPN、TGF-β1表达减少,与模型组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:雷帕霉素能减少DN大鼠尿蛋白,下调肾小管间质组织OPN、TGF-β1表达水平,减轻DN肾小管间质病变。     

糖尿病肾病相关药物研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病重要微血管并发症,其病理特征性表现为肾小球周边部位出现嗜酸性K-W结节,是糖尿病性肾病具有诊断意义的改变。但仅出现于约10%～20%的糖尿病性肾病患者。糖尿病性肾病其他病理改变特点包括肾小球基膜增厚,肾小球上皮细胞足突融合以及由于细胞外系膜基质增多所致肾小球增大。疾病晚期可出现肾小管萎缩肾内纤维化。糖尿病病程10年以上者约50%并发糖尿病肾病,每年新增终末期肾病中,糖尿病导致者所占比例逐年增高。近年关于血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)治疗糖尿病肾病的研究较多。其外内皮素拮抗剂等,被认为有一定的肾脏保护作用,基因治疗亦给糖尿病肾病带来新希望。现就有关内容综述如下。