原发性肝细胞性肝癌中p16基因的失活与P16蛋白表达的研究

为探讨ｐ１６基因与原发性肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）的关系,作者分别采用多重ＰＣＲ、ＳＳＣＰ以及以ＰＣＲ为基础的甲基化分析法,对２５例原发性ＨＣＣ标本及其相应的非肿瘤肝组织标本中ｐ１６基因的缺失,点突变及甲基化情况进行了检测。另用免疫组化ＳＬＡＢ法对３５例（包括前述已作基因检测的２５例）原发性ＨＣＣ肿瘤标本及其相应的非肿瘤组织标本中Ｐ１６蛋白的表达情况进行了检测。结果：２５例原发性ＨＣＣ肿瘤标本中,３例     

膀胱移行细胞癌P16基因5‘CpG岛甲基化与肿瘤恶性程度关 …

目的：了解Ｐ１６基因在膀胱移行细胞癌（ＴＣＣ）中甲基化改变及这一改变与肿瘤恶性程度的关系。方法：采用ＰＣＲ法检测３１例膀胱ＴＣＣｓ标本及９例正常膀胱粘膜Ｐ１６基因甲基化。结果：正常膀胱粘膜无甲基化Ｐ１６基因外元１甲基化率为２９．０３％,外元２为３５．４８％;外元１甲基化与肿瘤恶性程度有显著相关性（Ｐ〈０．０１）,外元２甲基化与肿瘤恶性程度无相关性（Ｐ〈０．０５）。结论：膀胱ＴＣＣＰ１６基因存在甲基     

ALL病人P16基因的失活与mRNA表达的关系

目的：探讨ＡＬＬ和各亚型中Ｐ１６基因失活和纯合缺失的发生率及ｍＲＮＡ表达。方法：对４０例ＡＬＬ（Ｂ－ＡＬＬ２８例,Ｔ－ＡＬＬ７例,前Ｂ－ＡＬＬ５例）和１５例对照组骨髓标本,采用ＰＣＲ法检测Ｐ１６基因的纯合缺失,ＲＥＰ法检测Ｐ１６基因的高度甲基化,ＲＴ－Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ法检测其ｍＲＮＡ的表达。结果：ＡＬＬ Ｐ１６基因高度甲基化;Ｂ－ＡＬＬ中高度甲基化多于纯合缺失。５例Ｐ１６基因高度甲基化尚有ｍＲＮＡ     

多重PCR法检测喉癌组织中P16基因纯合缺失及异常甲基化

目的：采用多重ＰＣＲ法检测喉癌及癌旁组织中Ｐ１６ 基因纯合缺失和异常甲基化。方法：选用二对引物分别扩增Ｐ１６ 基因外显子１ 和２,分析有无纯合缺失,对未检出缺失的样品用甲基化敏感内切酶Ｓｍ ａＩ消化后,再扩增外显子１,分析有无Ｐ１６ 基因异常甲基化。结果：３９ 例喉癌组织标本中９ 例标本有Ｐ１６ 基因纯合缺失,缺失率为２３．０８％ （９／３９）。３０ 例未检测到Ｐ１６ 基因缺失的喉癌组织标本,有４ 例检出异常甲基化,检出率为１３．３３％ （４／３０）。３９ 例癌旁组织标本均未检测到Ｐ１６基因缺失或异常甲基化。结论：采用多重ＰＣＲ法可检测出Ｐ１６ 基因常见的纯合缺失和异常甲基化失活。研究表明,Ｐ１６ 基因失活可能在喉癌的发生发展中起重要作用     

沙眼衣原体基因分型及其应用

本文分别以沙眼衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ，Ｃｔ）隐蔽性质粒引物（Ｐｐ）及主要外膜蛋白基因（ｏｍｐ；）引物（Ｐｍ）．用ＰＣＲ扩增Ｃｔ特异性ＤＮＡ，并用单链构象多态性（Ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｉｙｍｏｒｐｈ－ｉｓｍ，ＳＳＣＰ）作基因分型。４２６份标本中，９２例质粒ＰＣＲ阳性，用质粒ＰＣＲ阳性标本作ｏｍｐ：ＰＣＲ，６６例为阳性。其中５２例标本经ＳＳＣＰ分析显示７种不同的电泳图谱，１８例与标准株ＴＥ５５电泳图谱相同。其中两份标本分别取羊水及新生儿睑结膜，其ＳＳＣＰ图谱相同，表明两株Ｃｔ核酸序列完全相同。在分子水平上证实了Ｃｔ的垂直传播。临床标本可先采用敏感的质粒ＰＣＲ作初筛。阳性者再作ｏｍｐ１ＰＣＲ进行基因分型。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对Ｃｔ作基因分型，在分子流行病学研究中有重要意义。     

乙肝病毒X基因与人肝细胞癌关系的研究

目的 探讨乙肝病毒（ＨＢＶ）Ｘ基因与肝癌发病的关系，为从分子水平上研究肝癌病因提供有关信息。方法 采用ＰＣＲ技术对ＨＢＶ不同状态的１０２例原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）、３６例肝硬化（ＬＣ）及２８例慢性肝炎（ＣＨ）血清中ＨＢＶＸ基因进行了检测。结果 在ＨＢＶ５项标志均阴性的５３例ＰＨＣ检出Ｘ基因２０例（３７．７％），３１例ＬＣ中检出５例（１６．１％），１１例ＣＨ中检出２例（１８．２％）。所有ＨＢＶ Ｘ基     

对非同位素PCR-SSCP检测基因突变方法的探讨

目的：建立适合本实验室条件的非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＲＦＬＰ基因突变分析技术。方法：应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测石蜡包埋复发肝细胞癌（Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）组织中Ｐ５３基因第七外显子突变。采用系列步骤克服非特异扩增；分析影响ＳＳＣＰ诸参数的优化；并与ＲＦＬＰ结果相印证。结果：检测复发ＨＣＣ标本２２例，ＳＳＣＰ阳性率７７．２７％（１７／２２），２４９位点突变率７２．７２％（１６／２２），ＲＦＬＰ与ＳＳＣＰ分析结果符合率１００％；另有２例发生２４９位点以外的突变。结论：该实验流程可靠、高效，适合大量标本的基因突变筛查     

胃癌p16基因缺失与突变的研究

目的：探讨ｐ１６抑癌基因外显子２缺失、突变与胃癌发生发展及组织学类型的关系。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、聚合酶链反应一单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析分别检测胃癌中ｐ１６基因外显子２的缺失及突变。结果：５５例胃癌样本中ＰＣＲ扩增,８例无扩增产物,２例产物明显减少,１０例均可能为ｐ１６基因缺失,缺失率为１８．１８％（１０／５５）,其余４５例胃癌、癌旁及正常胃组织均有ＰＣＲ扩增产物出现;但所有胃癌标本ＳＳＣＰ分析均未见异常泳动带,无ｐ１６基因突变。结论：ｐ１６基因外显子２缺失可能与胃癌发生发展有关;而ｐ１６基因突变可能与胃癌发生无关。     

白血病中P16基因突变的检测

用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、ＤＮＡ直接测序和多重ＰＣＲ法，检测了１８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ），１例Ｋ５６２细胞株，９例急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ），６例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ），２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血／培养细胞ＤＮＡ中Ｐ１６基因的点突变和基因缺失。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ共筛查出５例ＣＭＬ中Ｐ１６基因的异常，突变率为２７．８％（５／１８），对其中１例外显子２异常者经测序证实为第１５１密码子ＣＣＣ→ＣＧＣ的转换，导致Ｐｒｏ→Ａｒｇ的错义突变；并检出１例ＭＭ中Ｐ１６基因外显子３的异常；受检的ＡＬＬ，ＡＭＬ，Ｋ５６２细胞株中，未检出突变。各病例中均未检出Ｐ１６基因的缺失。本文探讨了白血病中Ｐ１６基因突变的意义。     

P53基因突变、人乳头瘤病毒16，18型感染与肺鳞癌发病的关系

应用单链构象多态性分析多聚酶链反应ＥＢ染色法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＥＢ）对４０例肺癌组织标本的Ｐ５３基因序列５～８外显子突变进行分析，同时应用ＰＣＲ方法检测上述标本及１８例肺良性疾病组织标本中ＨＰＶ１６、１８型ＤＮＡ相关序列，旨在分析二者在肺鳞癌发病中的作用及相互关系，并就肺鳞癌与Ｐ５３基因结构和功能异常的关系进行初步探讨。     

Molecular and immunohistochemical study of the inactivati on of the p16 gene in primary hepatocellular carcinoma

Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｏｆｐ16ｇｅｎｅａｒｅｋｎｏｗｎｔｏｏｃｃｕｒｉｎｍａｎｙｐｒｉｍａｒｙｔｕｍｏｒｓ ,ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｍｅｌａｎｏｍａ ,ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｓ ,ｅｓｏｐｈａｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ ,ｂｒａｉｎｔｕｍｏｒｓａｎｄｔｈｅｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ 1 5　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｐ16ｇｅｎｅｏｃｃｕｒｓｖｉａｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ,ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓｄｅｌｅｔｉｏｎ,ｐｏｉｎｔ…     

原发性肝细胞性肝癌中p16基因的失活与P16蛋白表达的研究

作者分别采用多重PCR、SSCP以及以PCR为基础的甲基化分析法,对２５例原发性HCC标本及其相应的非肿瘤肝组织标本中p16基因的缺失、点突变及甲基化情况进行了检测。另用免疫组化SLAB法对３５例（包括前述已作基因检测的２５例）原发性HCC肿瘤标本及其相应的非肿瘤组织标本中P16蛋白的表达情况进行了检测。结果：２５例原发性HCC肿瘤标本中,３例有p16基因缺失,无p16基因缺失的２２例肿瘤标本中均未发现有p16基因点突变存在。肿瘤标本中基因的甲基化发生率为24%（6/25）,而全部非肿瘤组织均未出现p16基因甲基化。在３５例HCC肿瘤标本中共发现P16蛋白表达缺失16例(45.7%),而全部非瘤组织P16蛋白均表达阳性。由此提示,p16基因的失活与P16蛋白表达的丧失与原发性肝细胞性肝癌的发生及发展有关。     

垂体腺瘤组织P16蛋白表达缺失及原因分析

目的 :探讨垂体腺瘤组织中p16的表达及表达缺失的原因。方法 :取尸体解剖正常垂体标本 6例 ,临床病理证实的垂体腺瘤标本 40例 ,采用蛋白杂交技术检测P16蛋白的表达 ;核酸杂交分析p16基因的纯和性缺失 ;单链构象多态性分析筛选p16基因突变 ;甲基化分析检测无纯和性缺失和突变的 30例肿瘤组织p16基因启动子的甲基化状态。结果 :40例垂体腺瘤组织中P16蛋白表达缺失。核酸杂交 40例标本 10例出现p16基因的纯和性缺失 ,该 10例MRI表现为侵袭性垂体腺瘤。单链构像多态性分析 ,30例无p16纯合性缺失标本血与肿瘤DNA配对扩增电泳筛选p16第一和第二外显子碱基突变 ,未发现p16的主要编码区第一、第二外显子存在突变。对无p16纯合性缺失和突变的 30例进行甲基化分析发现p16基因启动子存在甲基化。结论 :垂体腺瘤的发生与p16的表达缺失有关 ,其缺失的原因包括p16基因的纯和性缺失和启动子的甲基化 ,p16基因的纯和性缺失是侵袭性垂体腺瘤的分子标志之一。     

人脑胶质瘤组织P~(16INK4)蛋白的表达及其基因突变SSCP分析

目的 :探讨人脑胶质瘤组织 P16INK4蛋白低表达水平与胶质瘤恶性程度的关系及其基因突变的情况。方法 :采用免疫组化方法测定人脑胶质瘤标本 41例 ,同时采用新鲜胶质瘤组织标本1 5例进行 p1 6m RNA表达逆转录 PCR检测 ,并进行基因突变单链构象多态性分析 ( SSCP)。结果 :P1 6蛋白阳性表达 30例 ,阴性表达 1 1例 ,胶质瘤组织 p1 6m RNA表达水平相对低于对照组 ,p1 6基因外显子 2未发生基因突变 ,也未发生外显子 2的纯合缺失。结论 :胶质瘤组织p1 6m RNA和蛋白表达水平降低 ,并与其分级相关 ,提示 P1 6蛋白及其 m RNA异常是影响胶质瘤发生发展的重要因素 ,胶质瘤组织 p1 6基因突变率较低     

原发性肝细胞癌中p16和cyclinD1蛋白表达及p16突变研究

目的：研究p16和cyclinD1蛋白表达及p16基因第2外显子突变与原发性肝细胞癌（HCC）发生的关系。方法：利用SP免疫组织化学方法与多聚酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）分析技术分别检测44例HCC及癌旁肝组织p16和cyclinD1蛋白表达和12例新鲜手术肝癌组织的p16基因突变。结果：HCC中p16蛋白阳性率和阳性信号强度明显低于癌旁肝组织（P＜0．01）,而cyclinD1蛋白阳性率和阳性信号强度明显高于癌旁肝组织,12例新鲜HCC标本中p16基因第2 子突变率为16．7％（2／12）,癌旁组织未发现p16基因第2外显子突变;有p16基因突变的HCCp16蛋白表达呈阴性。结论：P16蛋白失活或／和缺乏可能是肝细胞增殖失控的重要因素之一;HCC存在P16基因第2外显子突变,但不是频发事件;在HCC形成过程中,P16基因异常与cyclinD1过度表达可能存在协同作用。     

原发性肝细胞癌中p16和cyclin D1蛋白表达及p16突变研究

目的 :研究p1 6和cyclinD1蛋白表达及p1 6基因第 2外显子突变与原发性肝细胞癌 (HCC)发生的关系。方法 :利用SP免疫组织化学方法与多聚酶链反应———单链构象多态性 (PCR SSCP)分析技术分别检测 44例HCC及癌旁肝组织p1 6和cyclinD1蛋白表达和 1 2例新鲜手术肝癌组织的p1 6基因突变。结果 :HCC中p1 6蛋白阳性率和阳性信号强度明显低于癌旁肝组织 (P <0 .0 1 ) ,而cyclinD1蛋白阳性率和阳性信号强度明显高于癌旁肝组织。 1 2例新鲜HCC标本中p1 6基因第 2外显子突变率为 1 6 .7% (2 /1 2 ) ,癌旁组织未发现p1 6基因第 2外显子突变 ;有p1 6基因突变的HCCp1 6蛋白表达呈阴性。结论 :p1 6蛋白失活或 /和缺乏可能是肝细胞增殖失控的重要因素之一 ;HCC存在p1 6基因第 2外显子突变 ,但不是频发事件 ;在HCC形成过程中 ,p1 6基因异常与cyclinD1过度表达可能存在协同作用     

p~(16)蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

应用免疫组织化学方法检测了42例原发性肝细胞癌（HCC）和癌旁肝细胞中p16的表达。结果显示,所有癌旁肝细胞p16表达均为阳性,18例癌细胞内p16蛋白阳性,阳性率为42．86％。p16蛋白弥漫性分布在肝细胞浆内,少数细胞核内也可见阳性显色。同一标本中癌旁细胞p16蛋白表达阳性,癌细胞内则可为阴性,表明用免疫组织化学方法在正常细胞中可检测到p16蛋白,而某些癌细胞可因p16缺失或突变等不能表达。p16表达还与HCC的组织学分级有关,分化程度高的HCCp16的表达率为66．67％（12／18）,明显高于低分化HCC组（0／4）,提示p16失活可能发生在HCC早期。     

贲门癌组织中P53、P16和P21WAF-1蛋白的表达

目的：探讨贲门癌组织中肿瘤抑制基因P53、P16和P21^WAF-1蛋白的表达及其临床生物学意义。方法：采用免疫组织化学法检测60例贲门癌组织中P53、P16和P21^WAF-1蛋白的表达。30例正常人贲门粘膜组织作为正常对照。结果：贲门癌组织中P53蛋白的阳性表达率为66．7％，较正常对照组(13．2％)明显增高；贲门癌组织中P16蛋白的阳性表达率为41．6％，较正常对照组(79．2％)降低；贲门癌组织中P21^WAF-1蛋白的阳性表达率为21．6％，较正常对照组(43．2％)降低，差异有统计学意义。贲门癌组织中至少有一项基因表达改变。且多发生2种以上基因表达改变。结论：P53、P16和P21^WAF-1蛋白在贲门癌发生发展中起重要作用。基因改变的累积可能是贲门癌发生的重要分子生物学基础。