斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原的分离提取

采用8mol/L尿素并以简化的方法,从斯氏狸殖吸虫成虫水溶性抗原(PsAWA)制备后的离心沉渣中,进一步分离提取出尿素溶解性抗原(PsAWU)。210mg虫体干粉,收获PsAWA 50.18mg,PsAWU 63.19mg,使抗原制备总收获量增加1.26倍。ELISA初步鉴定表明:PsAWU具有比PsAWA更高的血清学活性,4℃保存一定时期其活性变化亦与之相似。     

广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原分析及其诊断价值的探讨

目的分析广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原,探讨其诊断价值。方法广州管圆线虫成虫匀浆后沉渣经尿素溶解,与成虫水溶解性抗原同时进行SDS-PAGE和Western-blot,分析蛋白谱与抗原谱;用ELISA检测不同样本中相应抗体。结果SDS-PAGE结果显示尿素抗原蛋白条带少于水溶解性抗原;尿素抗原与感染大鼠血清、免疫兔血清和广州管圆线虫病患者血清在32000Mr处均出现强反应带,尿素抗原的反应带条数较水溶性抗原少。两种抗原包被ELISA检测广州管圆线虫病疑似病人血清和感染大鼠血清的阳性率相同;尿素抗原用于检测血吸虫感染小鼠血清的交叉阳性率明显低于水溶性抗原,检测正常大鼠血清、献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较水溶性抗原少。结论广州管圆线虫成虫尿素抗原含有32000Mr抗原;广州管圆线虫尿素抗原用于诊断时,与水溶性抗原有同样的敏感性,而特异性高于水溶解性抗原。     

酶免疫转移印渍试验(EITB)分析斯氏狸殖吸虫成虫抗原

本文应用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离斯氏狸殖吸虫成虫抗原,并通过转移电泳至硝酸纤维薄膜(NC)上,然后用酶联免疫试验观察成虫抗原蛋白与感染斯氏狸殖吸虫的病人、犬及大鼠血清的反应,检测和识别特异性虫体抗原蛋白。实验结果呈示;虫体抗原经SDS-PAGE分离、染色后可显示20余条蛋白区带;分子量分别为22、24、26KD的抗原蛋白对人体和动物的斯氏狸殖吸虫感染具有诊断价值。     

丰富并殖吸虫后尾蚴、成虫及小睾并殖吸虫成虫的蛋白电泳分析(摘要)

对于并殖吸虫生活史各期(如虫卵、囊蚴、童虫、成虫)的抗原性研究国内外已有许多报道,由于并殖吸虫感染早期或并殖吸虫肺外型寄生者大多为未成熟虫体,因此,对囊蚴、童虫等抗原的期特异性分析与应用已受到许多学者的重视。对于丰宫并殖吸虫而言,极大多数情况     

广州管圆线虫抗原IF的中间纤维蛋白组织来源分析和定位

目的 对广州管圆线虫抗原IF进行中间纤维蛋白家族分类和细胞组织定位.方法 IFTG诱导重组基因pET-IF在大肠杆菌中表达广州管圆线虫抗原IF,用组氨酸亲和层析纯化表达产物,用Western blot方法鉴定抗原IF的中间纤维蛋白类型;小鼠皮下多点注射法制备抗IF抗体血清,用免疫组织化学方法检测抗原IF在虫体组织和细胞上的定位.结果 广州管圆线虫抗原IF在体外成功表达并纯化,其属于中间纤维蛋白家族的角蛋白,定位于广州管圆线虫成虫肠管壁,存在于细胞质中.结论 广州管圆线虫抗原IF分布于虫体肠管壁,同时从组织学角度证明广州管圆线虫存在中间纤维结构.     

卫氏并殖吸虫期特异性抗原的鉴定

为了建立检测卫氏并殖吸虫抗原的血清学诊断方法，我们制备了针对卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫的单克隆抗体，部分鉴定了为单克隆抗体所识别的抗原表位，其中，囊蚴期特异性抗原表位对高碘酸敏感而对蛋白酶具有抵抗力，系碳水化会物；反之，成虫期特异性抗原表位对高碘酸具有抵抗力而对蛋白酶敏感，系多肽。应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，以并殖吸虫的期特异性单克隆抗体能够检测人血清中０．３～７５ｎｇ／ｍｌ相应的并殖吸虫抗原。     

斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原血清学特性

采用高浓度尿素并以简化方法,从斯氏狸殖吸虫成虫水溶性抗原(PsAWA)制备后的离心沉渣中,已分离、提取出尿素溶解性抗原(PsAWU),效果较满意。本工作用ELISA和对流免疫电泳对PsAWU与PsAWA血清学特性进行了比较分析。 敏感性 用ELISA(间接法)以两种抗原不同浓度(80～0.312 μg/ml)检测阳     

浙江省永嘉县卫氏并殖吸虫染色体核型的调查

应用空气干燥法对永嘉县小长坑村肺吸虫病流行区的卫氏并殖吸虫染色核型观察。采集该村小长坑溪的溪蟹分离卫氏并殖吸虫囊蚴感染动物（猫获取成功。共检测２１个卫氏并殖吸成虫染色体核型，９个体体的生殖细胞中期图象显示为二倍体型：１２个虫体为嵌合体型，其中５个虫体的生殖细胞染色体数为二倍体／三倍体的嵌合体型；２个虫体为二倍体／四倍体的嵌合体型；另５个虫体为二倍体／三倍体四倍体的嵌合体型。测量囊蚴７３个，其大小平     

用核酸原位杂交技术观察细粒刺球绦虫66kDa抗原mRNA在虫体上的细胞定位

目的用核酸原位杂交技术观察细粒棘球绦虫66kDa抗原mRNA在虫体上的细胞定位以及在虫体发育的不同时期mRNA含量的变化.方法以66kDa抗原的cDNA克隆EgA31为模反制备RNA探针,与细粒棘球绦虫原头蚴、育囊和成虫虫体进行原位杂交实验.结果原位杂交实验显示EgA31 mRNA主要位于原头蚴和成虫的皮层下某种细胞中，暗藏在棘球蚴育囊的生发层中也存在这种细胞.在原头蚴向成虫的发育过程中虫体吸盘处细胞内EgA31 mRNA含量显著增加，结论含EgA31 mRNA的细胞很可能是皮层细胞EgA31蛋白可能参与吸盘上肌纤维的收缩作用并与虫体的免疫逃避功能有关.     

用核酸原位杂交技术观察细粒棘球绦虫66kDa抗原mRNA在虫体上的细胞定位

目的：用核酸原位杂交技术观察细粒棘球绦虫66kDa抗原mRNA在虫体上的细胞定位以及在虫体发育的不同时期mRNA含量的变化。方法：以66kDa抗原的cDNA克隆EgA31为模板制备RNA探针，与细粒棘球绦虫原头蚴、育囊和成虫虫体进行原位杂交实验。结果：原位杂交实验显示EgA31 mRNA主要位于原头蚴和成虫的皮层下某种细胞中，并在棘球蚴育囊的生发层中也存在这种细胞。在原头蚴向成虫的发育过程中虫体吸盘处细胞内EgA31 mRNA含量显著增加。结论：含EgA31 mRNA的细胞很可能是皮层细胞；EgA31蛋白可能参与吸盘上肌纤维的收缩作用并与虫体的免疫逃避功能有关。     

日本血吸虫成虫分泌抗原的鉴定

目的制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原,对其免疫原性以及免疫反应性进行初步鉴定。方法日本血吸虫尾蚴感染家兔,42 d后剖杀获取成虫,将虫体置无血清DMEM培养基中,5%CO2孵箱37℃培养4 h,得到成虫分泌代谢抗原;用该抗原免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体反应;用该抗原包板,ELISA法检测血吸虫感染人血清抗体效价;采用十二烷基硫酸钠聚丙酰烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其组分进行分析,然后用Western blot分析其对抗成虫分泌代谢抗原单抗发生反应的蛋白条带。结果成功制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原;免疫小鼠可产生较高滴度(1∶16 000)抗体反应;急性血吸虫病患者、慢性血吸虫病患者、晚期血吸虫病患者和钩虫病患者血清抗该抗原的抗体效价分别为1∶800、1∶400、1∶800和1∶100,华支睾吸虫患者和正常人血清均为阴性;SDS-PAGE显示其具有4条蛋白条带,分子量分别是13、40、60和180 ku左右;Westernblot结果表明该抗原能够被抗成虫分泌代谢抗原单抗在5ku左右处识别。结论制备的日本血吸虫成虫分泌代谢抗原具有较强的免疫原性和免疫反应性。     

华支睾吸虫颗粒蛋白在虫体及宿主中的表达

目的探讨华支睾吸虫颗粒蛋白(CsGRN)在虫体和宿主中的表达。方法使用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测华支睾吸虫成虫、囊蚴和虫卵及猫的肝脏、胆管组织和全血CsGRN基因mRNA表达水平;免疫组化检测CsGRN在成虫及宿主猫、人和实验感染的Balb/c小鼠肝脏中的定位。结果 CsGRN基因mRNA在虫体的各阶段都有表达,在感染的猫肝和胆管组织中高表达;CsGRN主要定位在成虫的睾丸、外膜和虫卵,在宿主人、猫和小鼠中主要分布在胆管上皮和肝细胞。结论 CsGRN可能参与虫体的生长发育,它作为分泌排泄抗原之一可能损害肝胆管组织,有进一步研究价值。     

Identification of excreted and metabolic antigens from adult worms of Schistosoma japonicum

目的 制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原,对其免疫原性以及免疫反应性进行初步鉴定.方法 日本血吸虫尾蚴感染家兔,42 d后剖杀获取成虫,将虫体置无血清DMEM培养基中,5% CO2孵箱37℃培养4 h,得到成虫分泌代谢抗原;用该抗原免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体反应;用该抗原包板,ELISA法检测血吸虫感染人血清抗体效价;采用十二烷基硫酸钠聚丙酰烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其组分进行分析,然后用Western blot分析其对抗成虫分泌代谢抗原单抗发生反应的蛋白条带.结果 成功制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原;免疫小鼠可产生较高滴度(1:16 000)抗体反应;急性血吸虫病患者、慢性血吸虫病患者、晚期血吸虫病患者和钩虫病患者血清抗该抗原的抗体效价分别为1:800、1:400、1:800和1:100,华支睾吸虫患者和正常人血清均为阴性;SDS-PAGE显示其具有4条蛋白条带,分子量分别是13、40、60和180 ku左右;Western blot结果 表明该抗原能够被抗成虫分泌代谢抗原单抗在5 ku左右处识别.结论 制备的日本血吸虫成虫分泌代谢抗原具有较强的免疫原性和免疫反应性.     

4种抗原用于斑点免疫金银染色试验诊断日本血吸虫病的比较

采用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)试验对4种日本血吸虫抗原的敏感性及特异性进行比较。结果显示粗提成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(JWU)、硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测40例日本血吸虫病人血清抗体的敏感性均达100.0％,40例正常人血清的可疑阳性反应分别为2.5％、0、2.5％和0,40例肝吸虫病人血清的可疑交叉率分别为2.5％、0、2.5％和0,表明在高敏感的IGSS检测系统中,粗提成虫抗原的敏感性和特异性与部分纯化者和虫卵抗原无显著性差异(P>0.05)。     

淮南市区华支睾吸虫病流行危险因素的研究

目的调查淮南市区华支睾吸虫病流行的危险因素。方法现场采集豆螺、沼螺,用直接压片法分离尾蚴,并感染淡水鱼,分离囊蚴,用该囊蚴感染家猫,分离成虫;对市区部分居民作现场查询、体检和粪检,以确定有无华支睾吸虫感染及伴随症状。结果从现场捕获的豆螺、沼螺体内可分离出有尾鞘的单尾蚴,用该尾蚴感染淡水鱼可获囊蚴,用该囊蚴感染家猫可获华支睾吸虫成虫;从淮南市区部分居民粪便中及其放养家猪粪便中均可检出华支睾吸虫卵;市区部分居民有炊事时菜刀、砧板生熟不分和生食或半生食淡水鱼虾的习惯,等等。结论 淮南市区存在多种华支睾吸虫病流行的危险因素,各危险因素构成华支睾吸虫病在淮南市区传播和流行。     

血吸虫病间接红细胞凝集试验的标准化研究——抗原的筛选及标准化

分别用日本血吸虫的虫卵可溶性抗原(SEA)、成虫尿素提取抗原(AUA)、成虫表皮膜抗原(ATA)以及SEA与AUA、SEA与ATA的混合抗原致敏绵羊红细胞,并用于检测198例日本血吸虫病人血清,IHA的阳性符合率分别为95.45％、84.67％、90.23％、98.08％、96.25％;检测100例健康人血清,结果全部阴性;检测191例肺吸虫病,旋毛虫病、华枝睾吸虫病和囊虫病患者血清,其总交叉反应率分别为13.61％(SEA)、3.14％(AUA)、4.71％(ATA)、8.37％(SEA+ATA)和3.66％(SEA+AUA)。结果表明:SEA+AUA的制备方法简单,并具有较高的敏感性和特异性。     

吸虫囊蚴寄生于蚊虫的报道(摘要)

1984年7月作者在解剖蚊幼虫时,发现中华按蚊和三带喙库蚊幼虫的胸部,有呈袋状具吸盘并能轻微蠕动的虫体存在,进一步调查又发现三带喙库蚊成虫体内有呈球形具囊壁和吸盘的虫体。经反复观察,该虫体有吸虫囊蚴的特点,可定为吸虫囊蚴。蚊虫作为吸虫的中间宿主,国内尚未见有报道,这是一个值得重视和进一步研究的问题。现将部分结果报道如下:     

牛丝虫成虫抗原间接荧光抗体试验诊断丝虫病的实验观察

本文进一步用牛丝虫成虫抗原IFAT检测马来丝虫微丝蚴血症者69例,晚期病人42例,其IFAT阳性率分别为88.1％和85.7％。223例非丝虫病流行区健康者假阳性率是3.8％,对肠蠕虫感染者,过敏性哮喘,荨麻疹,过敏性疾病伴肠蠕虫感染者及急性肝炎者有一定的交叉反应。牛丝虫成虫抗原IFAT的敏感性高于寄生虫学检查,可作丝虫病的辅助诊断。     

斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原蛋白组成及活性成份

采用8M尿素和简化方法分离、提取斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗 原(PsAWU),并对该抗原和水溶性抗原(PsAWA)的血清学特性进行了分析比较,结果表明PsAIVU的敏感性高于PsAWA,初步证明具一定的特异性,是一种可实际应用的新型抗原。为进一步分析两种抗原,对其蛋白组成及活性成份进行了初步研究。 氨基酸组成的分析 两种抗原浓度均为1 mg/ml,用稀盐酸加热处理后,以氨基酸分析仪(Beckman公司)进行测定。结果表明两种抗原的氨基酸种类基本一致,但绝大     

华支睾吸虫成虫抗原纯化及鉴定

用葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析法、三氯醋酸-乙醇提取物DEAE-Cellulose(DE52)柱层析法、尿素提取物Sepharose 4B柱层析法对华支睾吸虫成虫可溶性抗原进行部分纯化,获得8种不同的抗原活性组分.并用免疫电泳、聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳(PAGE)、薄层等电聚焦电泳、微板法动力学酶联免疫吸附试验进行鉴定.认为经纯化的抗原组分较粗抗原更适宜于临床诊断及考核疗效