肾气丸对非酒精性脂肪性肝炎大鼠Bcl-2/Bax、Fas/FasL信号通路的影响

目的:观察Bcl-2/Bax、Fas/Fas L介导的信号转导通路在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎大鼠的作用及肾气丸对其的影响。方法:采用高脂饲料连续喂养12周建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,同时以肾气丸进行干预12周。HE染色观察大鼠肝组织病理组织学变化,免疫组织化学检测肝组织中Fas、Fas L、Bcl-2、Bax、Caspase-8蛋白的表达;Realtime-PCR法检测肝组织Caspase-8 mRNA表达。结果:模型组大鼠肝组织Bcl-2、Bax、Fas、Fas L蛋白以及Caspase-8 mRNA和蛋白表达均较正常组显著增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比值较正常组明显的降低(P<0.05);大鼠肝组织Caspase-8蛋白表达与Fas、Fas L蛋白表达均呈明显正相关(r分别为0.907、0.804,P均<0.01);予以肾气丸干预后,Bax、Fas、Fas L蛋白的表达以及Caspase-8 mRNA和蛋白的表达均较模型组明显的降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值较模型组明显的增加(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:肾气丸可能通过影响Bcl-2/Bax、Fas/Fas L信号转导通路,下调Bax、Fas、Fas L、Caspase-8表达,减少肝细胞的脂性凋亡,从而防治大鼠非酒精性脂肪性肝炎的发生发展。     

剔毒肝方介导HEPG2细胞凋亡的实验研究

目的探讨剔毒护肝方介导HEPG2细胞凋亡的可能机制.方法培养24h的HEPG2细胞,分别给予剔毒护肝方(12.5mg/dl)及阿霉素(10μmol/ml)作用8d,同时设空白对照组,细胞凋亡采用流式细胞仪测定,Bcl-2、Bax、Fas采用S-P免疫组化法检测.结果剔毒护肝方、阿霉素及空白对照组的凋亡率分别为24.43%、10.58%、2.05%.剔毒护肝方组细胞Bcl-2、Bax、Fas的表达量分别为0.118±0.015、0.152±0.028、0.121±0.018,与空白对照组及阿霉素组相比有显著性差异(P＜0.01).结论剔毒护肝方有明显介导HEPG2细胞凋亡的作用,并可能通过介导凋亡调控基因Fas、Bax的高表达及下调Bcl-2基因的水平来介导凋亡.     

抗Fas单克隆抗体诱导人胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡

目的探讨抗Fas单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡的规律及在胃癌治疗中的意义.方法应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术检测抗Fas 单克隆抗体对胃癌细胞SGC-7901增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式,并检测了SGC -7901细胞表面Bcl-2的表达情况..结果抗Fas单克隆抗体有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用. 经抗Fas单克隆抗体处理后,SGC-7901细胞表面Bcl-2蛋白表达无明显变化. .结论抗Fas单克隆抗体可以诱导胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡. 抗Fas单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡与Bcl-2表达无关.     

卡托普利预处理对急性心肌损伤大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的 探讨卡托普利预处理对急性心肌损伤大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响.方法 将Wistar雄性大白鼠随机分为3组:对照组、异丙基肾上腺素损伤组(Iso损伤组)、卡托普利预处理组(Cap预处理组).用TUNEL方法检测心肌细胞凋亡,用免疫组化方法检测Fas、FasL、Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 Cap预处理组与Iso损伤组比较,心肌细胞凋亡指数减少,Fas、FasL和Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达增高(P＜0.01或P＜0.05).结论 卡托普利可通过减少心肌细胞凋亡及降低凋亡相关基因的表达发挥心肌保护作用.     

针刺对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及Bcl-2、Fas蛋白表达的影响

目的探讨针刺对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白、介导细胞凋亡蛋白(Fas)表达的影响及针刺治疗围绝经期综合征的作用机制。方法从32只SD雌性大鼠中筛选出符合围绝经期特征的SD雌性大鼠24只,随机分为针刺组、药物组、围绝经期组,各8只,另选择8只5个月雌性SD大鼠作为青年大鼠组,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记法(TUNEL法)、免疫组化法检测卵巢颗粒细胞的凋亡及Bcl-2、Fas表达,采用IMS细胞图像分析法对染色图像进行分析,对各组阳性染色面积均值进行统计分析,对比各组组间的差异。结果与青年大鼠组相比,围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞凋亡、Bcl-2蛋白表达、Fas蛋白表达均具有极显著差异(P0.01);针刺治疗后大鼠体内卵巢颗粒细胞凋亡减少(P0.05),Bcl-2蛋白表达提高(P0.05),Fas蛋白表达降低(P0.05),针刺组与药物组之间大鼠体内卵巢颗粒细胞凋亡、Bcl-2蛋白及Fas蛋白的表达无显著性差异(P0.05)。结论针刺具有抑制围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞凋亡、增加Bcl-2蛋白表达及降低Fas蛋白表达的作用。     

血管内皮生长因子拮抗内皮细胞凋亡的实验研究

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)对血管内皮细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2与apo-1/Fas mRNA表达的影响。方法:将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分成对照组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理组、TNF-α加VEGF处理组;采用原位末端标记法、流式细胞术观察各组细胞的凋亡发生情况,通过RT-PCR法观察各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2与apo-1/Fas mRNA表达的变化。结果:TNF-α处理组凋亡细胞和apo-1/Fas mRNA的表达明显高于对照组和TNF-α加VEGF处理组,而Bcl-2 mRNA表达情况相反。结论:VEGF能拮抗TNF-α诱导的内皮细胞凋亡,其抗凋亡的机制可能与其上调Bcl-2 mRNA表达与下调apo-1/Fas mRNA表达有关。     

季德胜蛇药含药血清对人肝癌细胞Hep-G2增殖和凋亡的影响

目的:探讨季德胜蛇药含药血清对人肝癌细胞Hep-G2增殖和凋亡的影响。方法:采用Hep-G2作为细胞模型。以季德胜蛇药给中国大耳白兔灌胃制备含药血清,以不同浓度的含药兔血清培养Hep-G2,并同时设相应浓度的正常兔血清对照组。应用CCK-8(Cell counting kit-8)法检测Hep-G2增殖状况,应用膜联蛋白(Annexin V)/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术检测Hep-G2的凋亡情况。结果:12.5%和15%的含药血清作用于细胞12小时和24小时后,对Hep-G2的增殖均有抑制作用(P<0.05),10%和12.5%的药物血清组作用于Hep-G2细胞12小时后,细胞凋亡率均明显高于相应的正常对照组(P<0.01),12.5%含药血清组的凋亡率明显高于10%的含药血清组(P<0.01)。结论:季德胜蛇药血清可抑制Hep-G2细胞增殖,诱导其凋亡。     

雷帕霉素诱导大鼠肝星状细胞凋亡的研究

目的观察雷帕霉素(RAPA)对大鼠肝星状细胞系rHSCs-99增殖、凋亡的影响。方法将rHSCs-99分成4组:对照组(A组),RAPA 50 nmol/L组(B组),RAPA 100 nmol/L组(C组),RAPA 150 nmol/L组(D组)。RAPA作用72 h后,分别用MTT法检测rHSCs-99增殖,ELISA法检测I型胶原表达,流式细胞仪Annexin-V FICT/PI法检测细胞凋亡情况,Wright-Giemsa染色法观察细胞形态学改变,细胞免疫组化法检测Fas、P53与Bcl-2的表达变化。结果 RAPA作用后,rHSCs-99增殖受到抑制,I型胶原含量降低,凋亡率增高,Fas、P53表达增多,Bcl-2表达减少。结论 RAPA能抑制rHSCs-99的增殖及I型胶原合成。促进rHSCs-99凋亡,其机制可能是通过开启Fas/FasL凋亡途径及上调凋亡相关基因P53、下调Bcl-2的表达来实现。     

自身免疫性甲状腺疾病甲状腺组织中凋亡调控蛋白Fas/FasL、Bcl-2/Bax的表达及意义

目的探讨凋亡调控蛋白Fas/FasL、Bcl-2/Bax在Graves病(GD)和桥本氏病(HT)中的表达及意义。方法取外科手术切取的GD及HT病人甲状腺组织标本,颈部手术时取正常甲状腺组织作为对照;采用免疫组织化学方法检测甲状腺标本Fas/FasL、Bcl-2/Bax的表达和分布状况。结果(1)Fas/FasL在GD和HT甲状腺滤泡上皮细胞表达均较正常对照组增高(P<0.01)。(2)在GD甲状腺滤泡上皮细胞Bcl-2及Bax表达明显高于HT组及正常对照组,以Bcl-2表达强度显著高于同组Bax(P<0.01),而在HT,Bcl-2表达强度与正常对照组比较差异无统计学意义。(3)GD与HT相比较,GD甲状腺滤泡细胞及浸润淋巴细胞Fas,Bcl-2抗原表达均强于HT,但其浸润淋巴细胞表达强度明显低于同组甲状腺滤泡细胞(均P<0.05)。结论Fas/FasL高表达和Bcl-2的低表达可能引起HT甲状腺滤泡上皮细胞的凋亡。在GD,Fas、Bax诱导细胞凋亡的作用可能被高表达Bcl-2对抗,从而致甲状腺体积增大、功能亢进。此外,Bcl-2与Bax表达强度的比值对于凋亡的调控有重要影响作用。     

黏着斑激酶在鼻咽癌细胞系6-10B中的表达及其对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨黏着斑激酶(FAK)在鼻咽癌细胞6-10B中的表达及其对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的影响。方法鼻咽癌细胞6-10B培养后利用RNA干扰(RNAi)技术下调FAK在6-10B中的表达水平,通过RT-PCR、Real-time PCR、Western印迹检测其干扰效率,通过Western印迹检测干扰后凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平,通过Hoechst染色观察细胞凋亡形态。结果干扰后FAK在鼻咽癌细胞6-10B中表达量较低、下调明显(P0.05);鼻咽癌细胞系6-10B干扰FAK后,Bcl-2和Bax的表达量发生较明显改变(P0.05);Hoechst染色结果显示干扰后细胞出现明显的凋亡形态。结论干扰FAK后促进鼻咽癌细胞凋亡,提示可以通过下调FAK表达水平促进肿瘤细胞凋亡,为鼻咽癌的基因治疗提供新的思路。     

凋亡基因Bcl-2,Fas及Bax在慢性肝病的表达及临床价值

目的观察凋亡调节基因Bcl-2,Fas及Fax在慢性肝病中发病中的意义.方法95例慢性肝病肝脏或癌组织石蜡包埋标本.其中慢性肝炎69例,肝硬变11例,原发性肝癌15例.均取连续切片HE染色及Bcl-2,Fas,Bax免疫组化检测.对其中10例慢肝取外周血单个核细胞(PBMC)进行上述免疫组化染色.结果肝组织Bcl-2阳性表达63例(66.3%),其表达阳性率依次为肝癌>肝硬变>慢性肝炎,各组相比差异显著(P<0.01).强阳性表达率依次为肝癌>慢性肝炎>肝硬变.Fas表达的慢性肝炎的阳性率为100%,Bax为95.2%,但Bcl-2仅为33.4%,慢性肝炎时以Fas及促凋亡因子Bax的表达为主,而在肝癌时以抗凋亡因子Bcl-2的表达为主.结论三种凋亡基因的异常表达与肝癌发生密切相关,在肝组织或PBMC中联合检测可能对肝硬变癌变的早期诊断和预后判断有指导意义.     

肝内胆管癌细胞9810凋亡和bcl-2基因表达关系研究

应用阿霉素诱导肝内胆管癌细胞 9810凋亡 ,研究其凋亡与bcl- 2基因表达之间的关系。应用流式细胞仪检测肝内胆管癌细胞凋亡的情况 ,并同时检测bcl- 2基因表达。随着阿霉素浓度的增加 ,细胞凋亡率逐步上升 ,同时bcl- 2基因表达下调。bcl- 2基因表达下调是阿霉素诱导肝内胆管癌细胞凋亡机制之一。     

Fas转导大肠癌细胞中凋亡相关基因表达的变化

目的观察Fas转导大肠癌细胞株在诱导细胞凋亡中凋亡相关基因的变化,进一步探讨凋亡信号传导途径。方法运用流式细胞直接免疫荧光术(FICM)检测凋亡相关基因的表达。细胞分组包括:Fas转导细胞组(对照组)、Fas转导细胞+Fas抗体组(12 h)、Fas转导细胞+Fas抗体组(24 h),Fas抗体浓度1∶100。结果在Fas抗体诱导的Fas转导株大肠癌细胞凋亡中,bcl-2蛋白表达水平明显下降(P0.01);bax蛋白表达水平有所增加(P0.05)。初步验证了Fas途径诱导的细胞凋亡中部分凋亡相关基因变化。结论Fas表达大肠癌细胞株在Fas抗体作用下能够有效通过下调bcl-2及上调bax表达诱导细胞凋亡。     

慢性肝病肝细胞凋亡Fas、FasL、Bax、Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-2α等蛋白表达

目的 探讨慢性肝病时肝细胞凋亡蛋白Fas、FasL、Bax、Bcl-2、BcL-XL、Bcl-2α等的表达与线粒体的改变。方法 慢性肝炎72例、肝炎后肝硬化29例，以上患者肝组织采用免疫组化SP法检测促凋亡蛋白Fas、FasL、Bax和抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-2α等的表达，并对其中15例肝组织着重观察了线粒体的超微结构。结果 促凋亡蛋白与抑凋亡蛋白相比，表达差异有非常显著性(P＜0．001)，前者最高达94．4％，明显高于后者的最高值61．1％，两组Fas、FasL的表达程度以( )、( )为主，未见差别；但慢性肝炎组Bax( )表达多达16例(22．2％)、肝硬化组未见( )表达者。提示慢性肝炎组有明显的细胞凋亡现象而肝硬化组的凋亡相对不活跃。凋亡肝细胞的线粒体普遍存在明显的改变，包括线粒体嵴的扩张，外膜破裂、基质外漏等。结论 慢性肝炎时肝细胞的凋亡激活途径很可能偏重以线粒体途径为主，但尚需进一步研究证实。     

原发性干燥综合征唇腺组织中细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的研究原发性干燥综合征(primarySj觟gren'ssyndrome,pSS)患者唇腺组织上皮细胞凋亡及相关基因表达与pSS组织损伤的关系。方法应用原位末端标记及免疫组织化学的方法,对30例pSS患者及10例对照唇腺组织中凋亡细胞及Fas、FasL、Bc1-2相关基因蛋白的表达进行检测和组织细胞定位。结果pSS患者唇腺组织中腺泡上皮细胞(AEC)及导管上皮细胞(DEC)凋亡率均明显高于对照组(P<0.001),而浸润的单核细胞(IMC)凋亡率与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。pSS患者唇腺AEC、DEC及IMC中,Fas阳性表达的细胞百分比均明显高于对照组(P<0.001),并与细胞凋亡率呈正相关(r=0.431,0.415,0.804;P<0.05);FasL阳性表达的细胞百分比均明显高于对照组(P<0.001),并与细胞凋亡率呈正相关(r=0.654,0.619,0.489;P<0.01);Bcl-2阳性表达的细胞百分比,AEC和DEC均明显低于对照组(P<0.05),而IMC明显高于对照组(P<0.001),DEC和IMC与细胞凋亡率呈负相关(r=-0.400,-0.364;P<0.05),但AEC与细胞凋亡率无相关性(r=-0.329,P>0.05)。结论pSS患者唇腺组织中上皮细胞凋亡增加和淋巴细胞凋亡减少可能是导致腺体破坏进而功能丧失的原因之一;Fas、FasL增加及Bcl-2减少皆与促进细胞凋亡有关;Bcl-2在pSS唇腺IMC中表达增加暗示IMC似乎逃脱凋亡,形成炎性浸润灶。     

安心颗粒对心力衰竭大鼠细胞凋亡基因Bcl-2及Fas表达的影响

目的探讨安心颗粒防治心力衰竭的作用机制。方法将50只雌性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、卡托普利组、安心颗粒小剂量组、安心颗粒大剂量组,每组10只。采用阿霉素腹腔注射造模,各用药组同时灌胃给药。连续给药6周后,分别用TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡,用免疫组化法检测大鼠心肌Bcl-2,Fas蛋白的表达。结果安心颗粒能减少心肌细胞凋亡指数,促进Bcl-2蛋白表达,抑制Fas蛋白的过渡表达,其抑制细胞凋亡的作用与卡托普利相当。结论安心颗粒能够上调心肌细胞Bcl-2蛋白、下调Fas蛋白的表达,抑制心肌细胞凋亡,这可能是安心颗粒防治心力衰竭的作用机制之一。     

舒林酸诱导人肝细胞癌凋亡及对环氧合酶-2和Bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨舒林酸在肝细胞癌化学预防和治疗中的应用价值。方法 采用人肝细胞癌细胞株SMMC7721，HepG2作为研究对象。体外药物敏感试验检测不同浓度和作用时间的舒林酸对细胞的增殖抑制效应；分别用Hoechst33258细胞核荧光染色和透射电镜观察舒林酸诱导的细胞凋亡的形态学改变，并计算相应的细胞凋亡指数（AI）；应用Western斑点印迹法观察不同浓度舒林酸作用后细胞内环氧合酶-2（COX-2）和凋亡抑制蛋白Bcl-2表达程度的变化。结果 舒林酸对人肝细胞癌细胞SMMC7721，HepG2具有显著的增殖抑制和凋亡诱作用，并且具有时间和剂量依赖性，舒林酸对不同类型细胞的杀伤率和凋亡诱导效应有显著差异。经舒林酸2mmol/L和4mmol/L作用24h后，细胞内COX-2和Bcl-2蛋白的表达比未经舒林酸作用的细胞表达明显减少。结论 舒林酸在体外对人肝细胞癌细胞株SMMC7721和HepG2具有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用。且与其抑制细胞内COX-2和Bcl-2蛋白的表达有关。     

乐胃煎对大鼠胃粘膜上皮异型增生细胞凋亡及调控基因的影响*

目的研究乐胃煎对大鼠胃粘膜上皮异型增生细胞凋亡及调控基因(Bcl-2、Fas、ICE)蛋白表达的影响,探讨乐胃煎治疗胃粘膜癌前病变的作用机制.方法用N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)建立大鼠胃粘膜异型增生模型,对大鼠胃粘膜用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测Bcl-2、Fas蛋白表达水平.结果治疗组癌前病变发生率与造模组和对照组比较,均有显著性差异(P＜0.05).Bc1-2蛋白表达率及过量表达率,治疗组与造模组比较,均有显著性差异(P＜0.05);治疗组与造模组比较,Fas蛋白表达率亦有显著性差异(P＜0.05),过表达率无显著性差异(P＞0.05).结论乐胃煎治疗可抑制大鼠胃粘膜Bcl-2基因蛋白的表达,促进Fas基因蛋白的表达,从而使胃粘膜上皮细胞发生正常凋亡,逆转或阻止胃癌的发生.     

芬太尼与5-氟尿嘧啶联合诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡及其机制

目的研究芬太尼与5-氟尿嘧啶(FU)联合应用对MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响及内、外源性途径的调控机制。方法作用48 h后通过流式细胞技术(FCM)检测Annexin V-EGFP/PI染色的细胞凋亡情况,通过免疫细胞化学检测Bcl-2、Bax、Fas表达情况。结果单独应用芬太尼时1μmol/L与10μmol/L浓度组凋亡率均增加(P0.05,P0.01),Bcl-2表达减弱(P0.05,P0.01)、Bax表达增强(P0.01)、Fas表达增强(P0.01);单独应用500μmol/L 5-FU后凋亡率亦明显增加(P0.01),Bcl-2表达减弱(P0.01)、Bax、Fas表达增强(P0.01);联合应用芬太尼与5-FU,协同作用在3组均显现(P0.05,P0.01)。结论芬太尼、5-FU在一定浓度范围内单独或联合应用可促进MCF-7乳腺癌细胞凋亡,并使Bcl-2表达下调,Bax、Fas表达上调。联合应用两类药物可能在内源性、外源性途径调控细胞凋亡上显示协同效应。     

小鼠暴发性肝衰竭肝细胞凋亡形态学及其调控机制

目的:研究在实验性暴发性肝衰竭(fulminant hepatic failure,FHF)中肝细胞凋亡的形态学变化以及一氧化氮(nitric oxide,NO)、Fas和Bcl-2对肝细胞凋亡的调控作用．方法:脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)联合应用制备FHF小鼠模型;采用免疫组化方法检测肝组织Fas 及Bcl-2表达,分别采用硝酸还原酶法和RT-PCR法检测血清NO水平及肝组织iNOS mRNA表达;TUNEL法检测肝细胞凋亡;在用药后动态观察Fas及Bcl-2表达、血清NO水平及肝组织iNOS mRNA表达及肝细胞凋亡的变化,并对模型鼠给予iNOS的抑制剂L-NMMA,动态观察上述指标的变化．结果:在FHF模型小鼠中,用药后2 h开始血清NO水平及iNOs mRNA的表达即升高,于4 h达高峰;用药后2 h 开始Fas有少量表达,至8 h和12 h表达均明显增多,与 2 h组比较差异显著(100％ vs 20％,P<0．01),与4 h组比较差异也比较显著(100％ vs 40％,P<0．05)．模型组2 h Bcl-2有较多表达,4 h表达最多,4 h与2 h比较差异显著 (90％ vs 60％,P<0．05),与8,12h比较差异非常显著(90％ vs 20%,均P<0．01)．8 h可出现典型的肝细胞凋亡表现．与模型组各时间点比较,给予iNOS的抑制剂L-NMMA 后血清NO水平及iNOs mRNA的表达均为正常水平, Fas及Bcl-2表达均无显著差异(P>0．05),阻断后8 h亦可见典型的肝细胞凋亡表现,阻断NO可使病变较模型组更为严重．结论:在FHF中,Fas及Bcl-2的表达均增加,Fas的表达与肝细胞凋亡相一致,而Bcl-2的表达与肝细胞凋亡呈负相关．单纯应用NO拮抗剂对肝细胞凋亡及肝损伤无保护作用．