高危型HPV检测在宫颈病变诊断中的价值

目的探讨高危型HPV检测在宫颈病变诊断中的价值。方法720例宫颈病变患者先进行HPV DNA的杂交捕获法二代（HPV—HCⅡ）和液基细胞学（TCT）的检测,其中224例因细胞学异常（意义未明的非典型鳞状细胞以及以上的病变）行阴道镜下活检。结果720例患者HPV阳性者264例（36．7％）,阴性者456例（63．3％）。HPV阳性组患者年龄（37．77±8．48）岁,HPV阴性组年龄（39．25±8．83）岁,两组比较P〈0．05。224例细胞学异常患者HPV感染率分别为炎症和复鳞上皮乳头瘤样增生64．9％（61／94）、宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ82．8％（24／29）、CINⅡ89．7％（26／29）、CINⅢ93．5％（58／62）、浸润癌100％（10／10）,随病理级别的升高HPV感染率显著升高（P〈0．05）。57例细胞学检测为ASC-US的患者中宫颈高度病变（≥CINⅡ）检出率为24．6％（14／57）,HPV阳性组检出率为33．3％（12／36）,阴性组为9．5％（2／21）,两组比较,P〈0．05,阴性组无浸润癌和CINⅢ的检出。87例细胞学为LSIL的患者中宫颈高度病变检出率为34．5％（30／87）,HPV阳性组检出率为39．5％（30／76）,阴性组为0,两组比较P〈0．01,阴性组无高度病变的检出。结论高危型HPV检测可以明显提高宫颈高度病变在细胞学为ASC-US及LSIL中的检出率。     

宫颈脱落细胞HPV E6/E7mRNA、HR-HPV DNA在宫颈病变筛查中的应用

目的 探讨HPV E6/E7 mRNA与高危型孔头瘤病毒（HR-HPV） DNA在宫颈病变筛查中的应用价值.方法 对301例宫颈病变疑似病例进行宫颈脱落细胞取样,分别检测慢性宫颈炎、宫颈癌前病变、宫颈鳞状细胞癌中HPV E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA的表达,比较二者在不同年龄组及病变程度中表达的差异.结果 在宫颈癌前病变及宫颈鳞状细胞癌患者中HPV E6/E7 mRNA的特异性和阳性预测值高于HR-HPV DNA（P均＜0.05）,敏感性低于HR-HPV DNA（P ＜0.05）.30岁以下与30～39岁受检者中HPV E6/E7 mRNA的阳性率低于HR-HPV DNA（P均＜0.05）.CIN2、CIN3及宫颈癌患者HPV E6/E7 mRNA阳性率高于慢性宫颈炎患者,且CIN3者高于CIN2者（P均＜0.05）,CIN1、CIN2、CIN3及宫颈癌患者HR-HPV DNA阳性率高于慢性宫颈炎患者（P均＜0.05）.结论 对于宫颈癌及癌前病变,HPV E6/E7 mRNA的阳性率及其诊断的特异性高于HR-HPV DNA,可作为筛查和随访的指标.     

髙危型HPV检测在宫颈病变诊断中的价值

目的探讨高危型HPV检测在宫颈病变诊断中的价值。方法720例宫颈病变患者先进行HPV DNA的杂交捕获法二代（HPV—HCⅡ）和液基细胞学（TCT）的检测,其中224例因细胞学异常（意义未明的非典型鳞状细胞以及以上的病变）行阴道镜下活检。结果720例患者HPV阳性者264例（36．7％）,阴性者456例（63．3％）。HPV阳性组患者年龄（37．77±8．48）岁,HPV阴性组年龄（39．25±8．83）岁,两组比较P〈0．05。224例细胞学异常患者HPV感染率分别为炎症和复鳞上皮乳头瘤样增生64．9％（61／94）、宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ82．8％（24／29）、CINⅡ89．7％（26／29）、CINⅢ93．5％（58／62）、浸润癌100％（10／10）,随病理级别的升高HPV感染率显著升高（P〈0．05）。57例细胞学检测为ASC-US的患者中宫颈高度病变（≥CINⅡ）检出率为24．6％（14／57）,HPV阳性组检出率为33．3％（12／36）,阴性组为9．5％（2／21）,两组比较,P〈0．05,阴性组无浸润癌和CINⅢ的检出。87例细胞学为LSIL的患者中宫颈高度病变检出率为34．5％（30／87）,HPV阳性组检出率为39．5％（30／76）,阴性组为0,两组比较P〈0．01,阴性组无高度病变的检出。结论高危型HPV检测可以明显提高宫颈高度病变在细胞学为ASC-US及LSIL中的检出率。     

HPV E6/E7 mRNA联合液基薄层细胞学检测在宫颈病变中的诊断价值

目的评价人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA检测联合液基薄层细胞学(TCT)方法在宫颈病变中的诊断价值。方法对750例高危型HPV DNA阳性患者分别进行TCT、HPVE6/E7 mRNA检测和阴道镜病理活检,比较HPV E6/E7 mRNA在各宫颈病变中阳性率的差异,以及比较单独检测和联合检测在宫颈病变中诊断价值的差异。结果 750例高危型HPV阳性患者进行阴道镜活检检出宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌293例,E6/E7 mRNA阳性患者占286例,各种宫颈病变(意义不明不典型鳞状细胞、低度鳞状上皮内瘤变、高度鳞状上皮内瘤变、鳞状癌变)患者HPV E6/E7 mRNA阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。单用TCT检出CIN阳性256例,单用E6/E7 mRNA检出CIN阳性247例,两者比较无统计学差异,单用TCT或E6/E7 mRNA检测出CIN阳性率均低于联合检测(P均<0.05)。结论 HPV E6/E7 mRNA检测联合TCT方法可降低宫颈病变的漏诊率,优于单独检测。     

HPV DNA HCⅡ检测在宫颈病变筛查中的应用

目的探讨用第二代杂交捕获技术（HCⅡ）行HPV DNA检测在宫颈病变筛查中的价值。方法采用HCU对2153例宫颈疾病患者行宫颈脱落细胞HPV DNA检测。结果2153例受检者中701例（32．6％）检测出HPV DNA。其中宫颈癌患者检出率为93．9％,宫颈上皮内瘤变为54．6％,明显高于其他妇科良性疾患的31．5％,P均〈0．05。CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ宫颈病变中HPV检出率分别为29．9％、53．8％、80．2％,HPV检出率随着病变的严重程度增高而增高。结论HCⅡ技术检测HPV DNA是宫颈癌前病变筛查的重要手段。     

HPV E6/E7 mRNA联合TCT在老年妇女宫颈疾病诊断中的临床应用价值

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV) E6/E7 mRNA联合液基薄层细胞检测(TCT)在老年妇女宫颈疾病诊断中的临床应用价值。方法选取2015～2017年我院收治的疑似宫颈癌病人98例,分别采用HPV E6/E7mRNA以及TCT进行检测,分析其在宫颈疾病诊断中的临床应用价值。结果 HPV E6/E7 mRNA检查与病理检查结果差异无统计学意义(P>0. 05),TCT检测结果与病理检查结果比较,差异均有统计学意义(P<0. 05)。TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测可以极大程度地提高检测的灵敏度(96. 2%)以及特异度(95. 0%)。结论在老年妇女宫颈疾病的诊断过程中,采用HPV E6/E7 mRNA联合TCT检查可以有效提高诊断准确率。     

高危型HPV载量在人宫颈LSIL筛查中的应用

目的探讨子宫颈病变与高危型人乳头状瘤病毒（HR-HPV）感染和病毒载量的关系。方法对213例HR-HPV DNA载量≥1的低度鳞状上皮内病变（LSIL）患者的年龄进行分层,分析HR-HPV DNA载量与宫颈病理类型的关系。结果本组213例LSIL中,≤30岁者感染75例（35．2％）,〉30岁者感染138例（64．8％）;≤30岁患者的HR—HPV DNA载量明显高于〉30岁者（P〈0．05）。慢性宫颈炎27例,其病毒载量均低于CINⅠ级（135例）和CINⅡ级（47例）患者（P均〈0．05）。结论HR-HPV感染和病毒载量在LSIL中具有年龄分布特征,HR—HPV DNA载量与宫颈病变严重程度有关。     

21种HPV亚型检测在宫颈病变诊断及预测中的价值

目的探讨HPV亚型感染与宫颈病变的关系。方法360例宫颈病变患者组织病理学检查诊断为宫颈炎／宫颈尖锐湿疣254例,宫颈上皮内瘤变（CIN）52例（其中CINⅠ12例、CINⅡ16例、CINⅢ24例）,宫颈癌54例,采用导流杂交基因芯片技术检测宫颈脱落细胞中HPV亚型,分析不同病变的HPV感染情况。结果本组HPV感染率为83．3％（300／360）;宫颈炎／宫颈尖锐湿疣、CIN、宫颈癌高危型感染率明显高于低危型（P〈0．01）;高危型HPV感染率随宫颈病变程度加重而升高;不同宫颈病变中单一型感染率明显高于多重型感染率（P〈0．01）,多重型感染率随宫颈病变程度加重而升高。不同HPV亚型致病性不同。结论HPV亚型检测可用于宫颈病变的筛查病情判断。     

p16和HPV对宫颈CIN分型的作用及相关文献复习

目的探讨宫颈癌癌前病变人乳头状瘤病毒（HPV）感染的表现和p16的表达以及二者之间的关系。方法回顾性研究经宫颈环切取下的组织,将这些组织进行HE染色,对病理诊断为低度鳞状上皮内瘤样病变（LSIL）和高度鳞状上皮内瘤样病变（HSIL）的样本进行p16染色、HPV及高危HPV检测,根据p16染色的分布范围和强度进行评估。结果所有HSIL样本和80%LSIL样本p16阳性。HSIL样本中染色分布范围：52%全层,41%基层,7%罕见染色。LSIL样本中染色分布范围：56.3%基层,43.7%罕见染色,无全层分布。所有样本在进行HPV筛查时49%阳性,33.4%为高危型HPV阳性,其中,HSIL样本阳性率为51%、LSIL样本为45%,HSIL样本高危HPV阳性率为36%、LSIL为23.6%。结论宫颈上皮中p16的强阳性染色和全层染色高度支持HSIL的诊断,而p16的染色弱阳性和仅见于基层或罕见染色更利于LSIL的诊断。HPV感染对划分SIL等级的意义不大。     

HPV16 E6/E7基因及蛋白表达与宫颈癌的相关性研究

目的研究人乳头状瘤病毒16型（HPV16）E6／E7基因及其蛋白表达在宫颈疾病及其癌变中的作用。方法运用PCR技术检测51例宫颈癌（癌症组）、20例富颈上皮瘤变（CIN）Ⅱ～Ⅲ级（CIN组）、20例宫颈炎（炎症组）患者病变组织中HPV16 E6／E7基因,并运用免疫组化SP法检测癌症组癌组织中HPV16E6、E7的表达情况。结果癌症组、CIN组、炎症组HPV16 E6检出率分别为5％、35％、45％．后两者明显高于前者（P〈0．05）,HPV16 E7检出率分别为65％、75％、68．6％,P均〉0．05;癌症组45例HPV16 E6和42例E7蛋白阳性表达（88．2％、82．3％）。HPV16 E6蛋白表达与临床分期、肿瘤分化程度和淋巴结有无转移均无相关性（P〉0．05）,HPV16 E7蛋白表达与临床分期和淋巴结有无转移相关（P〈0．05）,与肿瘤分化程度无相关性（P〉0．05）。结论HPV16 E6／E7基因与宫颈疾病及其癌变的关系密切。     

人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7编码区序列变异研究

目的获取人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7的编码区序列并进行变异分析,为新型分子诊断方法的研发提供目标序列。方法通过导流杂交基因芯片技术获取人乳头瘤病毒16型感染宫颈脱落细胞。设计特异性引物,扩增人乳头瘤病毒16型早基因E6/E7的编码区序列,克隆后测序并对序列进行变异分析。结果通过导流杂交基因芯片技术进行宫颈脱落细胞的分型检测,获得了人乳头瘤病毒16型感染阳性标本;选择其中3份阳性标本核酸为模板,通过特异性引物均成功扩增出大小介于750 bp和1 000 bp之间的目的序列;分别克隆到T载体上并测序,得到3条人乳头瘤病毒16型早表达基因E6/E7的编码区序列,克隆并测序后向GenBank核酸数据库提交获收录,登录号分别为EU869316、EU869317和EU869318;经BLAST分析,3条序列与GenBank序列PPH16（Accession：K02718）的E6/E7编码区序列一致性均为99%,且存在8种碱基置换,其中4种为同义突变,另4种则可引起所编码的相应氨基酸残基改变。结论本研究得到了与HPV高危型16型PPH16高度相似的E6/E7编码序列,为HPV致病机制和新型分子检测方法研究奠定了基础。     

人乳头瘤病毒58型E6E7融合基因重组巨细胞病毒的构建及鉴定

目的 利用人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)58突变型E6E7(Mutant type E6E7,mE6E7)融合基因为靶点,巨细胞病毒株(Towne株)细菌人工染色体(SW102 Towne bacterial artificial chromosome,SW102-T-BAC)为载体,构建携带HPV58 mE6E7融合基因的重组病毒,探讨HPV58mE6E7的转化活性。方法 PCR扩增带有50 bp Towne 开放读码框(open reading frame,ORF)75左右同源臂的GalK、mE6E7及野生型E6E7(Wild type E6E7,wE6E7)融合基因片段,切胶回收纯化;将GalK片段电转到(SW102-T-BAC)感受态细胞,经过同源重组、GalK及氯霉素抗性筛选,获得SW102-T-ORF75-Galk-BAC克隆;然后分别将纯化的mE6E7及wE6E7电转到SW102-T-ORF75-Galk-BAC感受态细胞,经脱GalK及氯霉素抗性筛选,获得SW102-T-ORF75-mE6E7-BAC及SW102-T-ORF75-wE6E7-BAC克隆;提取所得克隆质粒DNA,转染ARPE-19细胞(以转染SW102-T-BAC的细胞及未转染细胞为对照),逆转录PCR及测序分析验证转染细胞中mE6E7及wE6E7的表达状况;观察重组病毒T-ORF75-mE6E7及T-ORF75-wE6E7对转染ARPE-19细胞的影响,通过软琼脂克隆分析mE6E7及wE6E7转化活性。结果 获得了SW102-T-ORF75-mE6E7-BAC及SW102-T-ORF75-wE6E7-BAC的克隆。逆转录PCR及测序分析验证转染细胞中mE6E7及wE6E7的表达正确。转染SW102-T-ORF75-wE6E7-BAC的细胞生长失去接触抑制,出现重叠生长现象,其形态由原来梭形变为变圆、肿胀、胞浆颗粒增多;并且在软琼脂中能够形成克隆;而转染SW102-T-ORF75-mE6E7-BAC、SW102-T-BAC及未转染细胞未出现上述细胞的特点。结论 获得了T-ORF75-mE6E7及T-ORF75-wE6E7重组病毒,并且重组病毒T-ORF75-mE6E7的转化活性已消除,为HPV58型治疗性疫苗的研究奠定了基础。     

广西地区宫颈癌患者HPV感染情况分析

目的观察基因芯片技术对宫颈癌人类乳头状瘤病毒（HPV）分型检测的可行性,探讨广西地区宫颈癌患者HPV感染情况及其亚型分布规律。方法采用基因芯片技术对163例宫颈癌组织标本进行HPV分型检测。结果HPV总感染率为95．1％,其中鳞癌131例,HPV阳性率为98．5％;腺癌分别为32例和81．3％（P〈0．05）。鳞癌最常见的感染亚型是HPV16（78．6％）,其次是HPV18（11．5％）、HPV59（5．3％）、HPV58（3．1％）、HPV33（3．1％）、HPV31（3．1％）;腺癌最常见的亚型是HPV18（59．4％）,其次是HPV16（21．9％）、HPV52（6．3％）、HPV35（3．1％）。鳞癌患者单一感染106例（82．2％）,双重感染27例（17．8％）;腺癌患者分别为22例（84．6％）、4例（15．4％）;均未见三重及以上多重感染。结论基因芯片技术检测宫颈癌组织中HPV分型简便、高通量。广西地区宫颈癌中HPV感染率极高,其中鳞癌中以HPV16最常见,腺癌中以HPV18最常见。     

Genotypic distribution of human papillomavirus and phylogenetic analysis of E6 and E7 gene of HR-HPV variants isolated from Pakistani population

High-risk-human papillomavirus (HR-HPV)-induced cervical cancer is the second most common cause of death among females worldwide. HPV16 is the most prevalent HR-HPV infection worldwide. This study found the genotypic distribution of HR-HPV in the local population and investigated the sequence variations among the E6 and E7 oncogenes of the local HPV16 genotype to the E6 and E7 oncogenes of the foreign HPV16 genotypes and constructed a phylogenetic relationship based on nucleotide sequence comparison among the variants identified in our study along with previously reported isolates that were obtained from different regions of the world. The samples were collected from patients with cervical cancer. Genomic DNA was extracted, and HR-HPV genotypes were determined using real-time PCR. The HPV16 E6 and E7 genes were amplified and sequenced. A HPV16 phylogenetic tree was constructed using the maximum likelihood method with MEGA 7. HPV16 was the most prevalent human papillomavirus (HPV) type identified in the present study. HPV16 isolates belonged to the A1 sublineage of the European branch. Twenty-one nucleotide sequences were included in this analysis. The first, second, and third codon positions are also included. The final dataset included 776 positions.     

Association between the p53 arginine/arginine homozygous genotype at codon 72 and human papillomavirus E6/E7 mRNA expression

Objective

To evaluate the association between p53 polymorphisms and human papillomavirus (HPV) E6/E7 mRNA expression.

Molecular Mechanisms of MmuPV1 E6 and E7 and Implications for Human Disease

Human papillomaviruses (HPVs) cause a substantial amount of human disease from benign disease such as warts to malignant cancers including cervical carcinoma, head and neck cancer, and non-melanoma skin cancer. Our ability to model HPV-induced malignant disease has been impeded by species specific barriers and pre-clinical animal models have been challenging to develop. The recent discovery of a murine papillomavirus, MmuPV1, that infects laboratory mice and causes the same range of malignancies caused by HPVs provides the papillomavirus field the opportunity to test mechanistic hypotheses in a genetically manipulatable laboratory animal species in the context of natural infections. The E6 and E7 proteins encoded by high-risk HPVs, which are the HPV genotypes associated with human cancers, are multifunctional proteins that contribute to HPV-induced cancers in multiple ways. In this review, we describe the known activities of the MmuPV1-encoded E6 and E7 proteins and how those activities relate to the activities of HPV E6 and E7 oncoproteins encoded by mucosal and cutaneous high-risk HPV genotypes.     

HPV E6/E7蛋白在肺癌中的研究进展

肺癌是一种多因素参与的恶性肿瘤性疾病.目前在肺癌中检测到HPV E6/E7蛋白存在的报道不断出现,其在肺癌的作用也不断引起研究者的关注.本文就HPV E6/E7蛋白的生物特性与发病机制,以及在肺癌中所起的作用作一综述.     

局部细胞中HPVl6基因表达量及突变与其宫颈持续感染的关系

目的探讨宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒（HPV）16基因的表达量及突变与其宫颈持续感染的关系。方法选取96例HPVl6感染患者,其中33例宫颈脱落细胞HPVl6持续阳性（持续感染组）,63例6个月后复查转为阴性（非持续感染组）。采用半定量PCR技术检测两组（宫颈脱落细胞中）HPVl6E5、E6、E7及长控制区（LCR）基因表达量,基因测序法检测HPVl6E5、E6、E7及LCR基因突变。结果持续感染组HP~16E5、E6、E7、LCR基因表达量分别为0．20±0．02、0．30±0．02、0．19±0．01、0．53±0．02,非持续感染组分别为0．17±0．02、0．27±0．03、0．16±O．06、0．504-0．04,两组比较P均〉0．05。持续感染组与非持续感染组3978A→c（144L）位点突变例数分别为33、63例,4041A→G（165V）位点突变例数分别为33、63例,4076A—T（同义突变）位点突变例数分别为28、31例;两组4076A→T突变例数比较,P〈0．01。持续感染组与非持续感染组E6基因178T→G（D25E）位点突变例数分别为10、4例,两组比较,P〈0．05;持续感染组与非持续感染组E7基因647A→G（N29S）与846T→c（同义突变）联合突变例数分别为9、8例,两组比较,P〉0．05;持续感染组与非持续感染组7761c→T位点突变例数分别为33、63例,P〉0．05;7727A→c位点突变例数分别为14、4例,两组比较,P〈0．01。结论宫颈脱落细胞中HPVl6基因表达量与持续性感染无密切关系,HPVl6E5、E6、LCR基因突变与宫颈持续性感染有关,其中HPVl6E54076A→T（同义突变）、E6178T→G（D25E）与LCR7727A→c突变点可能是导致HPVl6持续感染的关键突变位点。