壳聚糖-羟基磷灰石聚合物的理化、生物学性质以及在骨组织工程中的应用

人体骨组织由无机的骨盐成分和有机的骨基质成分紧密结合而组成,骨盐主要由针状结晶羟基磷灰石以及无定形磷酸钙的形式分布在胶原基质上,其中无机成份约占77%〔1〕。在器官移植方面、外科中的功能重建和治疗骨组织损耗或功能减退的方面已经取得显著的发展。过去的二十年中壳聚糖在骨     

磁响应纳米材料在骨组织工程中的应用

［摘要］　生物材料作为骨组织替代物为治疗骨缺损或骨折不愈合提供了新的思路。传统纳米材料具有损伤细胞黏附、细胞毒性强等缺点。制备高效、毒性低的生物材料成为了目前组织工程领域的研究热点。磁性纳米粒子为骨再生提供磁力刺激,电磁场作为一种非侵入性物理疗法促进骨修复,两者结合制备的磁响应纳米材料在生物医学领域得到了广泛的研究和应用。该文对磁响应纳米材料的制备、分类及在骨组织工程中的应用作一综述。     

钙网蛋白的生物学特点及在肿瘤免疫治疗中的应用

钙网蛋白(Calretictdin,CRT)最先由Ostwald和Maclennan于1974年从骨骼肌肌浆网中首次分离获得,是一种普遍存在且高度保守的内质(Endoplasmic reticulum,ER)钙结合蛋白,广泛参与Ca2+平衡调节、新生蛋白折叠、血管新生和细胞凋亡等重要的生理过程。新近研究发现,CRT是肿瘤细胞发生免     

高迁移率族蛋白1在胶原诱导性关节炎大鼠滑膜中的表达及丙酮酸乙酯对其拮抗作用的研究

目的 本研究以胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠为研究对象,通过比较丙酮酸乙酯干预前后正常大鼠、CIA大鼠及与丙酮酸乙酯(EP)干预组大鼠关节滑膜组织高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达,阐明HMGB1在关节炎中的作用及EP对其拮抗作用.方法 实验分为正常对照组、CIA大鼠组与EP干预组,每组12只大鼠,分别在造模开始的第6、9周每组解剖6只大鼠.采用免疫组织化学检测关节滑膜组织HMGB1的表达,以病理图像分析软件IPP对胞质部位进行图像分析,表达水平以表达强度表示;采用实时定量-聚合酶链反应(PCR)检测各组大鼠滑膜组织HMGB1 mRNA的表达量,以正常对照组第6周大鼠滑膜组织HMGB1 mRNA表达量为参照的相对定量来表达.采用t检验比较各组间大鼠滑膜组织HMGB1的表达.结果 关节滑膜组织HMGB1免疫组织化学检测结果:第6周时,正常对照组、CIA大鼠组及EP干预组表达强度分别为2.1±0.6、7.3主1.2、6.0±1.2;第9周时,分别为2.2±0.7、12.4±4.5、5.5±1.0;大鼠滑膜组织HMGB1 mRNA实时定量PCR检测结果:第6周时,正常对照组、CIA大鼠组及EP干预组相对定量分别为1、2.865、2.602;第9周时,分别为1.005、4.694、1.729.在第6、9周采用免疫组织化学及实时定量PCR检测HMGB1在CIA组的表达明显高于正常对照组(P＜0.05),CIA组关节滑膜中HMGB1的表达在第9周时较第6周明显增高(P＜0.05);第6周时,EP干预组滑膜HMGB1的表达较CIA组降低,但差异无统计学意义(P＞0.05),第9周时,其表达明显降低(P＜0.05).结论 HMGB1在CIA大鼠滑膜中的表达量明显增高,在晚期尤甚,推测HMGB1可能作为炎症因子参与了CIA的疾病过程,尤其作为晚期致炎因子发挥重要的作用;经EP干预后HMGB1表达量明显下降,推测EP可能对HMGB1具有拮抗作用,为RA患者提供新的的治疗手段.     

生长素诱导的蛋白敲减系统在刚地弓形虫Chinese 1虫株中的应用及验证

目的应用生长素诱导的蛋白敲减(AID)系统调控刚地弓形虫Chinese 1虫株中荧光蛋白的表达。方法人工合成3′端融合有标签FLAG的植物生长素受体--运输抑制剂响应蛋白1(TIR1)的核苷酸序列TIR1-FLAG,将其连接至pTub-e GFP-CAT载体中,构建pTub-TIR1-FLAG-CAT表达质粒;表达质粒经电穿孔转染至弓形虫Chinese 1虫株TgCtwh3,经氯霉素筛选和极限稀释后筛选单克隆虫株。PCR扩增及蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测单克隆虫株中TIR1基因的插入和相应蛋白的表达,将验证正确的阳性克隆命名为TIR1虫株。构建表达荧光蛋白mCherry-Ty-AID报告基因的表达质粒pTub-mCherry-Ty-AID-DHFR,并通过电穿孔转染将其整合至TIR1虫株基因组中,乙胺嘧啶筛选后极限稀释筛选获得稳定表达mCherry-AID的虫株,命名为TIR1:m Cherry-AID虫株。将TIR1:mCherry-AID虫株的虫体分为吲哚乙酸(IAA)调控组和对照组,IAA调控组加IAA至终浓度500μmol/L,对照组加等量乙醇,培养3 h后,分别以抗TgGAP45和抗Ty-1抗体为一抗,间接免疫荧光试验(IFA)和Western blotting分析IAA调控下mCherry荧光蛋白的表达情况。结果PCR扩增结果显示,在1816 bp处有一条特异性扩增条带。Western blotting分析结果显示,抗FLAG-Tag抗体可识别TIR1虫株中相对分子质量(Mr)约70000的蛋白;Ty-1抗体可在TIR1:mCherry-AID虫株的对照组中检测到约Mr58000的特异性条带,与理论上C端融合了AID的mCherry-Ty蛋白大小相同;在IAA调控组中未检测到特异性条带。IFA结果显示,TIR1:mCherry-AID虫株对照组可见红色荧光蛋白,IAA调控组未检测到mCherry蛋白。结论应用AID系统可成功调控弓形虫Chinses 1虫株中mCherry荧光蛋白的表达。     

热休克蛋白27的抗凋亡机制及在神经保护中的应用

<正>热休克蛋白(Hsp)是Ritossa最先在果蝇唾液腺中发现的遗传高度保守的热应激蛋白质家族,又称应激蛋白。其广泛存在于多种生物细胞中,作为分子伴侣(分子伴侣是指在体内帮助其他含多肽的物质正确组装,但不参与其生物学作用),当遭受氧化应激、高热、缺血等应激时,在蛋白质内稳态、凋亡、侵袭、细胞信号转导中扮演重要角色~([1])。基于氨基酸序列和分子量大小,Hsp可分5个家族。Hsp27,鼠类为Hsp25,属于小分子量Hsp家族中的重要成员,普遍存在于     

血管化复合组织工程骨的构建及在实验性下颌骨缺损修复中的应用

目的构建血管化组织工程骨,并探讨其在实验性下颌骨缺损修复中的效果。方法将12只实验用犬随机分为四组各3只,分别对其双侧下颌骨体部造成30mm×15mm椭圆形缺损,用自身对照法进行对比研究,右侧骨缺损为实验侧,左侧为空白对照侧。A组实验侧植人自体骨髓基质干细胞（BMSc）、富血小板血浆（PRP）、人重组骨形成蛋白2（rhBMP-2）与聚乳酸（PLA）;B组植入BMSc、rhBMP-2与PLA;C组植入BMSc、PRP、PLA;D组植入PLA。术后4、8、12周时分别观察各组缺损处组织形态及X线影像学表现,测量横断面切片血管面积百分比及图像光学密度值,评价成骨效果。结果各组右侧缺损均有新生骨及血管形成,X线检查示有高密度骨痂影,数量A组〉C组〉B组〉D组,且呈时间依赖性;空白对照侧缺损区均未见新骨形成,缺损为纤维组织充填,均无阻射影像。各时间点A、C组横断面切片血管面积百分比均大于B、D组,A、B、C组骨光学密度均明显大于D组,P均〈0．05。结论本研究构建的血管化复合组织工程骨具有快速成骨及促进新生骨血管化的效能,且无异物排斥反应及毒副作用;取自自体的BMSCs及PRP来源丰富,采集、制备方便,具有良好的应用前景。     

日本血吸虫和曼氏血吸虫成虫31/32kD蛋白的纯化及在诊断中的应用

本研究以前染蛋白为指示,将制备型SDS—PAGE和电渗析技术相结合,分离、纯化日本血吸虫和曼氏血吸虫成虫31/32kD蛋白,用于ELISA中诊断血吸虫病。结果:纯化日本血吸虫成虫31/32kD蛋白(Psj31/32)与急、慢性日本血吸虫病和曼氏血吸虫病人血清反应的阳性率分别为100％、100％和98.4％;纯化曼氏血吸虫成虫31/32kD蛋白(Psm31/32)与上述病人血清反应的阳性率均为100％。与NHS和其它寄生虫病人血清反应的特异性较高。Psj31/32和Psm31/32检测同种血清,它们的OD值具有高度的正相关关系,但OD值与曼氏血吸虫病人粪便中虫卵数量(EPG)无相关关系。结果提示:两种纯化的31/32kD蛋白在血吸虫病诊断中具有较高的敏感性和特异性,并具有共同抗原决定簇存在,不仅可用于诊断急、慢性日本血吸虫病,而且Psj31/32也可作为诊断曼氏血吸虫病的候选抗原,用于我国输入性曼氏血吸虫病的诊断。     

人端粒相关蛋白HKR3、SMARCB1的筛选及其在胃癌细胞中的表达

背景：端粒酶与肿瘤的发生有十分密切的联系,研究与人端粒酶逆转录酶(hTERT)相互作用的端粒相关蛋白将有助于了解端粒酶在肿瘤细胞中的生物学特性和分子机制.目的:筛选新的人端粒相关蛋白,为进一步了解端粒酶的全酶结构、生物学特性及其作用机制奠定实验基础.方法:采用酵母双杂交技术进行人端粒相关蛋白分子的筛选.构建诱饵融合蛋白表达载体pGBKT7-hTERT,筛选人睾丸cDNA文库;以蛋白质印迹法测定pGBKT7-hTERT融合蛋白的表达.对筛选得到的阳性克隆质粒进行测序.在GenBank中行同源性比较.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTERT、HKR3、SMARCB1 mRNA在胃癌细胞株SGC-7901中的表达.结果:融合蛋白表达载体pGBKT7-hTERT可在酵母菌株AH109中有效、稳定地表达.cDNA文库筛选获得GenBank已收录的人cDNA序列HKR3和SMARCB1.hTERT、HKR3、SMARCB1 mRNA在胃癌细胞株SGC-7901中表达一致,均呈高表达.结论:HKR3、SMARCB1是人端粒相关蛋白成员.与hTERT有十分密切的联系,可能在胃癌的发生过程中存在相互调节或协同作用.