重组葡激酶加中药对重症急性胰腺炎大鼠心肌核转录因子κB的激活作用

[目的]研究重症急性胰腺炎（SAP）心肌功能损害时心肌核转录因子κB（NF-κB）的活化及葡激酶的干预作用。[方法]63只SD大鼠随机分为假手术组（n=9）、对照组（n=27）、葡激酶合用益活清胰汤治疗组（n=27），SAP模型采用5％牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立。ELISA法测定6、12、24h各时点血肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平，RT-PCR检测心肌NF-κB mRNA的表达，免疫组化法检测心肌NF-κB蛋白的表达，苏木精-伊红染色光镜下观察胰腺及心肌组织的病理变化。[结果]术后6h大鼠心肌NF-κB mRNA及其蛋白表达异常增高，TNF-α、IL-6呈进行性升高，治疗组用药后心肌NF-κB mRNA及蛋白表达下调，血TNF-α、IL-6明显下降，与对照组相比P＜0．05，治疗组胰腺及心肌组织的病理变化减轻。[结论]SAP大鼠心肌损伤可能与循环中TNF-α、IL-6水平升高导致的心肌NF-κB活化有关，益活清胰汤合用葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用。     

环氧合酶-2、核因子-κB在胃癌、癌前病变中的表达及尼美舒利逆转其表达的实验研究

目的探讨环氧合酶（COX）-2、核因子（NF）-κB在胃癌及异型增生中的表达，并研究尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2、NF-κB表达的影响。方法采用免疫组化Powervi-sionTM两步法对84例胃癌和54例胃异型增生组织中COX-2、NF-κB的表达进行检测；在体外实验中对人胃癌SGC-7901细胞采用细胞培养，MTT法检测不同浓度尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用，免疫组化、Western blot方法检测药物对COX-2、NF-κB表达的影响。结果COX-2、NF-κB在胃癌中的阳性表达率分别为66．67％、59．52％，均高于异型增生（P〈0．05），COX-2表达与肿瘤的大小、淋巴转移呈正相关（P〈0．05），并与NF-κB的表达相关（P〈0．05），COX-2与肿瘤浸润深度正相关（P〈0．05）。体外实验中结果显示尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并具有浓度、时间依赖性；与阴性对照组相比，药物作用48h后尼美舒利100、200 μmol／L组COX-2、NF-κB蛋白表达明显减弱并具有剂量依赖性（P〈0．05），COX-2、NF-κB之间正相关（P〈0．05）。结论COX-2、NF-κB与胃癌的发生转移相关，并且NF-κB蛋白作为上游调控因子调节COX-2的表达。尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖，抑制COX-2、NF-κB的表达在其抑制肿瘤机制中可能具有一定作用。     

老年心力衰竭患者核因子-κB活化与细胞凋亡抑制因子的相关性研究

目的 探讨充血性心力衰竭（CHF）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中核因子-κB（NF-κB）表达与细胞凋亡抑制因子（CD95）分泌的相关性。方法 采用凝胶电泳迁移率变动分析法（EMSA）测定60例心力衰竭患者和20例健康对照组PBMCs NF-κB的表达，用双抗体夹心ABC—ELISA法测定CD95，多普勒超声心动图测定患者的心功能。结果 心力衰竭患者PBMCs NF-κB活性和血清CD95含量显著高于健康对照组（P〈0．01），且NF-κB和血清CD95含量呈正相关（P〈0．05）。结论 CHF患者NF-κB表达增高，CD95分泌增多。在CHF，可能通过NF-κB表达的上调促进CD95的分泌。     

菠萝蛋白酶对哮喘大鼠的治疗作用及其机制

目的制备哮喘大鼠模型,观察菠萝蛋白酶治疗哮喘的作用及可能机制。方法将Wistar大鼠随机分为4组：模型组（A）、菠萝蛋白酶组（B）、菠萝蛋白酶干预对照组（C）、对照组（D）。用卵蛋白复制大鼠哮喘模型;行支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞计数;用免疫组织化学染色方法观察核因子-κB（NF-κB）在大鼠肺组织中的表达变化。结果NF-κB主要表达在气道上皮细胞;A、B、C、D组NF-κB胞核阳性的细胞数占气道上皮细胞数百分比分别为（29．86±2．59）％、（19．26±2．43）％、（10．22±3．41）％和（9．42±2．02）％,A、B组高于C、D组（P均〈0．01）,B组低于A组（P〈0．01）。结论菠萝蛋白酶能显著抑制哮喘大鼠气道上皮细胞核内NF-κB的表达,可能是菠萝蛋白酶治疗哮喘的作用机制之一。     

红霉素衍生物抑制活化T淋巴细胞核转录因子-κB表达的研究

目的 通过观察红霉素衍生物9（S）-羟基红霉素对活化T淋巴细胞核转录因子（NF）-κB表达的影响．探讨红霉素衍生物在RA治疗中的潜在意义。方法 事先加入不同剂量的红霉素或9（S）-羟基红霉素后，用肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导活化T淋巴细胞NF—κB表达，体外培养1h后，利用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法观察上述化合物对NF—κB的mRNA表达影响，利用Western Blot方法观察上述化合物对NF-κB蛋白水平表达的影响。结果 红霉素和9（S）-羟基红霉素均可抑制活化T淋巴细胞NF—κB的mRNA和蛋白表达，并与剂量呈相关性，在100μg／ml时红霉素和9（S）-羟基红霉素使NF—κB mRNA的相对表达分别降低36％、45％（P〈0．01），使蛋白表达分别降低46％，56％（P〈0．01）。结论 红霉素及其衍生物的抗炎活性可能是通过对活化T淋巴细胞NF—κB信号途径的作用实现的。提示红霉素衍生物在类风湿关节炎治疗中具有潜在意义。     

新辅助化疗对子宫颈癌组织中NF-κB、LRP mRNA和蛋白表达的影响

目的观察新辅助化疗（NACT）前后子宫颈癌组织中NF-κB、LRP mRNA和蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR和免疫组化法检测40例子宫颈癌患者NACT前后癌组织中的NF-κB、LRP mRNA和蛋白。结果 NACT后子宫颈癌组织中NF-κB、LRP mRNA表达量分别为67.595±0.914、66.912±0.752,明显高于NACT前的50.340±0.780、50.048±0.770,P均〈0.05。NACT后子宫颈癌组织中NF-κB、LRP蛋白阳性表达率分别为80.0%、92.5%,明显高于治疗前的50.0%和62.5%,P均〈0.05。化疗前后肿瘤组织中的NF-κB、LRP蛋白表达均呈正相关（r分别为0.389、0.379,P均〈0.05）。结论 NACT后子宫颈癌组织中的NF-κB、LRP mRNA和蛋白较化疗前均明显升高（P均〈0.01）。NF-κB与LRP可能参加了子宫颈癌多药耐药的发生。NACT前联合检测子宫颈癌组织中的NF-κB、LRP mRNA和蛋白有助于评估预后及避免多药耐药。     

NF—κB、P—gP、e—erbB-2蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨核因子κB（NF-κB）、P-gp、c-erbB-2蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Power vision^TM步法检测97例乳腺癌组织中NF-κB、P-gp、c-erbB-2的表达情况。结果乳腺癌组织中NF-κB、P-gp、c—erbB-2的阳性表达率分别为65．97％、43．29％、50．51％；NF-κB、c—erbB-2与乳腺癌淋巴转移及病理分期相关（P〈0．05）；在乳腺癌标本中NF—κB、P—gp、c—erbB-2蛋白表达两两间均有相关性（P〈0．05）。结论乳腺癌中NF—κB、P—gp、C-erbB-2三者间蛋白表达均有相关性，其在乳腺癌多药耐药发生中具有一定作用。     

糖基化终末产物对真皮成纤维细胞细胞核因子κB活化的影响普罗布考的保护作用

目的 研究糖基化终末产物（AGEs）对真皮成纤维细胞（Fb）细胞核因子κB（NF-κB）活化的影响及普罗布考的保护作用. 方法 体外分离培养Fb,分为对照（Con）组、AGE-BSA组及普罗布考干预（Probucol）组.水溶性四唑盐（WST）法检测细胞增殖,免疫荧光染色检测NF-κB的活化、实时定量PCR检测MCP-1mRNA表达. 结果 与Con组相比,AGE-BSA组细胞增殖能力减退,NF-κB表达增加,细胞MCP-1mRNA表达升高（P＜0.05或P＜0.01）;与AGE-BSA组相比,Probucol组细胞增殖能力增强,NF-κB表达下降,细胞MCP-1mRNA表达下调（P＜0.05或P＜0.01）. 结论 普罗布考对AGE-BSA诱导的Fb的保护作用可能是通过促进Fb增殖,抑制NF-κB活化及减低MCP-1表达来实现的.     

核因子-κB和表皮生长因子受体在胃癌及癌前病变中的表达

目的 研究核因子-κB（NF-κB）和表皮生长因子受体（EGFR）在胃癌及癌前病变中的表达和作用。方法 应用免疫组化法检测NF-κB与EGFR在35例正常胃黏膜、31例肠上皮化生、34例不典型增生与55例胃癌中的表达情况，并分析与胃癌临床病理之间的关系。结果 NF-κB出阳性率在胃癌、不典型增生、肠上皮化生、正常胃黏膜中分别为78．2％、61．8％、58．1％、2．9％。在胃癌中高于肠上皮化生（P〈0．05），EGFR阳性率在胃癌、不典型增生、肠上皮化生、正常黏膜中分别为83．6％、61．8％、80．6％、0％，在胃癌中高于不典型增生（P〈0．05）。NF-κB与EGFR阳性率在胃癌及癌前病变明显高于止常胃黏膜（P〈0．01），低分化、浸润或淋巴结转移的胃癌中阳性率更高，并且在胃黏膜中表达存在等级相关性（r=0.588 P〈0.01）。结论 NF-κB与EGFR可能协同作用参与胃癌发生及进展，可以作为估计预后的指标。     

扩张型心肌病患者外周血单个核细胞NF-κB/p65的表达及阿托伐他汀钙的影响

目的探讨扩张型心肌病（DCM）患者外周血单个核细胞（PBMCs）核转录因子xappaB（NF—κB）／p65的表达及阿托伐他汀钙（Ale）的干预作用。方法对25例DCM患者和18名健康对照者分离出的PBMCs进行培养，共培养24h，并将培养的PBMCs分成3组：空白对照组、脂多糖（LPS）组和Ale组。对3组培养后的PBMCsNF—κB／p65的表达进行免疫组化染色检测和半定量分析。结果DCM患者PBMCsNF—κB／p65胞核染色阳性率明显高于健康对照者[（14．86±3．21）％比（6．32±2．25）％，P〈0.01]；脂多糖组DCM患者和健康对照者PBMCsNF—κB／p65胞核染色阳性率与空白对照组比较均显著增加（P〈O．01）；Ale组DCM患者和健康对照者PBMCsNF—κB／p65胞核染色阳性率与脂多糖组比较则显著下降（P〈0．01）。结论DCM患者NF—κB／p65表达增高，而Ale可下调脂多糖刺激下NF-κB／p65表达增高。     

抗氧化剂对大肠癌细胞MMP-3表达的影响及其机制

采用FQ-PCR检测大肠癌细胞中MMP-3 mRNA的表达,EMSA法测定细胞核内核因子-κB(NF-κB)结合活性.结果 发现,抗氧化剂可阻断大肠癌细胞培养体系TNF-α诱导的MMP-3 mRNA的表达,TNF-α可诱导大肠癌细胞NF-κB的激活并被抗氧化剂阻断.认为TNF-α诱导的大肠癌细胞MMP-3基因表达依赖于NF-κB的激活,抗氧化剂可通过抑制NF-κB的活化而阻断MMP-3基因的诱导表达.     

三氧化二砷联合Ad-IκBαM诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的研究三氧化二砷（As2O3）对胃癌SGC-7901细胞作用过程中细胞内核转录因子KB（NF-κB）的激活及重组腺病毒Ad—IκBαM通过抑制NF-κB的活化增强As2O3的诱导凋亡作用。方法培养胃癌SGC-7901细胞,以非感染组及感染Ad—IκBα组为对照,采用凝胶电泳迁移率实验（EMSA）及免疫组化法检测As2O3处理后细胞核内NF-κB的激活情况,以及感染Ad—IκBαM对NF-κB活性的影响;四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Hoechest染色、原位末端标记（TUNEL）法分别检测感染Ad—IκBαM对As2O3诱导细胞凋亡的影响。结果EMSA及免疫组化法显示As2O3作用于胃癌细胞可使细胞内NF-κB激活,感染Ad—IκBαM使NF-κB活性受到明显抑制;MTT法证明,As2O3作用后,感染Ad—IκBαM细胞的凋亡率（59．2±2．5）％较感染Ad-IκBα组（47．5±2．3）％及未感染组（40．0±1．2）％明显升高,各组间比较P〈0．01;Hoechest法显示,感染Ad—IκBαM组的凋亡率为（27.7±2．6）％,明显高于感染Ad—IκBα组（18．3±1．5）％及未感染组（11.0±1．7）％（P〈0．05）。TUNEL法结果与Hoechest法一致,感染Ad—IκBαM组的凋亡率为（31．1±2．5）％,高于感染Ad-IκBα组（20.7±2．1）％及未感染组（13.0±1、7）％（P〈0．05）。可见,感染Ad—IκBαM可明显提高As2O3诱导的细胞凋亡。结论As2O3作用于胃癌细胞可使细胞内NF-κB激活,从而表明NF-κB激活可能为胃癌细胞抗诱导凋亡作用的重要机制;感染Ad．IKBctM可有效抑制NF-κB的活性,并增强As2O3的诱导凋亡作用。     

卡维地洛对心衰大鼠心肌细胞凋亡及NF-κB活性的影响

目的：探讨核因子-κB（NF-κB）活化与充血性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的关系及卡维地洛（CAR）的作用机制。方法：观察雄性Waistar大鼠心肌梗死（MI）8周后的心肌细胞凋亡指数、心肌总抗氧化能力、丙二醛的浓度、Fas和FasL的mRNA水平、KB抑制蛋白-α（I-κB-α）表达及NF-κB的核结合活性的改变，并于MI后1周对大鼠进行7周的CAR和美托洛尔（MET）干预，观察CAR和MET对上述指标的影响。结果：MI后心肌细胞凋亡指数、丙二醛水平、Fas和FasL的mRNA水平、NF-κB活性增高，I-κB-α表达下调、总抗氧化能力下降（P〈0．05）。CAR和MET可不同程度地改善心功能指标（P〈0．05），CAR降低心肌细胞凋亡指数、丙二醛浓度、Fas和FasL表达及升高总抗氧化能力的效果优于MET，并上调I-κB-α表达、显著降低NF-κB活性（P〈0．05）。结论：氧化应激可激活NF-κB，启动Fas和FasL转录，介导心肌细胞凋亡，促进MI后充血性心力衰竭的发生、发展。CAR具有抗氧化作用，可通过抑制I-κB-α降解、降低心肌NF-κB活性，减少心肌细胞凋亡。     

硝普钠对体外培养的海马神经元NF-κB和caspase-3基因表达的影响

目的探讨NO供体硝普钠（SNP）诱导体外培养的海马神经元凋亡与核因子-kappaB（NF）-κB p65和caspase-3表达变化的关系。方法终浓度分别为0、25、50、100、200、400μmol/L的SNP处理海马神经元24 h,用MTT比色法分析细胞存活率;Hoechst33258荧光染色观察凋亡的形态学改变;DNA琼脂糖凝胶分析凋亡的生化特征;用RT-PCR检测NF-κB p65、caspase-3 mRNA表达变化;Western印迹检测NF-κB p65、caspase-3蛋白表达的变化。结果SNP可剂量依赖性的降低神经元的存活率;荧光显微镜可见染为高亮蓝色的典型凋亡小体,其细胞核明显固缩、凝聚和断裂;电泳图谱显示清晰的DNA梯度。随着SNP剂量的增加,NF-κB p65 mRNA、NF-κB p65蛋白表达逐渐增加;caspase-3 mRNA表达无改变,但caspase-3酶原被裂解活化;从50μmol/LSNP起,caspase-3相对酶活性显著增加,为对照组的3.02倍,100μmol/L达最大值。结论SNP可诱导培养的海马神经元凋亡,其凋亡机制可能与增加NF-κB p65表达及激活caspase-3酶原有关。     

脂质体转染NF-κB诱捕物寡核苷酸抑制大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的探讨转染NF-κB诱捕物寡核苷酸(decoy ODN)对肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法制作20只肝脏缺血再灌注SD大鼠模型,无序ODN对照组、decoy ODN实验组各10只。阻断肝脏血流后,实验组行脂质体包裹的NF-κBdecoy ODN溶液门静脉注射转染,对照组行脂质体包裹的无序ODN门静脉注射。开放肝脏血流后3h取出肝脏,应用病理学、EMSA和RT-PCR分别检测移植肝脏病理改变、肝脏组织NF-κB转录活性和TNF-αmRNA表达情况。结果实验组肝脏损伤减轻,肝细胞NF-κB转录活性、TNF-α mRNA表达较对照组明显减小或减少(均P0.01)。结论 NF-κBdecoy ODN可有效抑制肝脏细胞NF-κB的激活从而抑制肝脏缺血再灌注损伤。     

喉鳞癌组织中NF-κB p65与Bcl-cL蛋白的表达及意义

采用免疫组化法检测50例喉鳞癌（LSCC）和20例声带息肉组织中的NF-κB p65和BeL-xL。结果LSCC和声带息肉组织中NF-κB p65阳性表达率分别为66．0％和5．0％，P〈0．05；Bcl—xL阳性表达率分别为70．0％和10．0％，P均〈0．05。NF—κB p65的表达与喉鳞癌的淋巴结转移有关。认为LSCC组织中NF—κB p65异常活化，Bel—xL呈高表达，两者可能共同参与了LSCC的发生和发展。     

弥漫大B细胞淋巴瘤p-AKT、NF-κB的表达变化及意义

目的 观察弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）和核转录因子（NF-κB）蛋白表达变化,并探讨其临床意义.方法 DLBCL石蜡包埋组织标本55例,用免疫组化SP法检测p-AKT和NF-κB的表达情况,并用SPSS11.5统计软件对其与各临床病理参数的关系进行分析.结果 p-AKT和NF-κB蛋白在DLBCL组织中的阳性表达率分别为70.91％ （39/55）和67.27％（37/55）;两者在DLBCL中的表达呈明显正相关（r=0.358,P＜0.01）.p-AKT的表达与DLBCL临床分期呈正相关（P＜0.05）,NF-κB表达与DLBCL临床分期和结外累及呈正相关（P＜0.05）.结论 DLBCL组织中p-AKT和NF-κB蛋白表达呈正相关,并与临床分期有关,NF-κB蛋白表达与结外累及亦相关.两者的异常表达在DLBCL发生发展中起着重要作用.     

肝癌形成过程中基因表达谱及转录核因子-κB动态改变

目的观察肝癌（HCC）形成过程中基因表达谱及转录核因子-κB（NF-κB）的动态改变。方法雄性SD大鼠以2-乙酰氨基芴（2-FAA）喂饲制备肝癌模型，以全基因组芯片分析基因表达谱的动态变化，经病理组织学（HE染色）分析肝细胞的形态学变化，在癌变不同时期定量观察NF-κB动态变化，并分析了人肝癌及非癌组织中总RNA及NF-κB表达水平。结果鼠肝癌形成过程中，经含有28000个基因芯片分析发现，早期2898个基因上调，晚期3208个基因上调。正常对照肝NF-κB表达水平较低，在诱癌后肝细胞发生颗粒样变性、不典型增生、高分化肝细胞癌形成过程中，随肝癌进展NF-κB表达呈梯度增加，在肝癌发展不同阶段NF到一KB表达水平均显著高于对照组，并与肿瘤坏死因子-α表达高度正相关。人肝癌组NF-κB表达，也明显高于自身对照的非癌组织（P〈0．01）。结论多种基因参与肝细胞的癌变过程，其中NF-κB信号转导途径激活起起重要作用。     

高脂血症兔主动脉NF-κB、VCAM-1和VEGF的表达及氟伐他汀的影响

目的观察高脂饮食后兔主动脉NF-κB、VCAM－1、VEGF的表达及氟伐他汀的影响，探讨高脂血症引起动脉粥样硬化可能的分子生物学机制和氟伐他汀的作用。方法健康雄性新西兰大耳白兔30只，随机分为5组，高脂饮食4周、6周、8周组，正常饮食和高脂饮食加氟伐他汀组。到规定时间点，处死动物取主动脉标本，观察组织形态学变化，用免疫组化的方法检查NF-κB、VCAM－1和VEGF的表达。结果①高脂血症可以引起NF-κB、VCAM－1、VEGF增加，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。②LDL水平与NF-κB表达呈显著正相关（r=0．922，P〈0．01）；NF-κB与VCAM－1、VEGF呈显著正相关（r＝0．937，P〈0．01，r=0．894，P〈0．01）。③氟伐他汀可以减少NF-κB、VCAM－1和VEGF的表达（P＜0．05）。结论NF-κB、VCAM－1和VEGF参与了动脉粥样硬化的进程，炎症是高脂血症的伴随因素，引起了细胞增殖，与动脉粥样硬化密切相关：氟伐他汀可以减少其表达起到抗动脉粥样硬化作用。     

铜绿假单胞菌肺炎大鼠核因子-κB表达及二硫代氨基甲酸吡咯烷对其的影响

目的探讨NF-κB及其诱导TNFα在大鼠铜绿假单胞菌（PA）肺炎中的表达及二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对其的影响。方法72只SD大鼠分为健康对照组、PA组、PDTC干预组。每组24只。PA组大鼠制作PA模型,PDTC干预组制作PA模型前腹腔注射PDTC200mg／kg体重。PA组、PDTC干预组接种铜绿假单胞菌悬液0．2ml（6×10^8CFU／m1）。观察大鼠肺组织形态学改变,免疫组化及Western blot检测肺组织NF-κB表达,RT-PCR检测肺组织TNFαmRNA表达。结果PA组大鼠肺组织明显充血、水肿,大量炎性细胞浸润;PDTC干预组大鼠肺组织充血、水肿等炎性表现较PA组明显减轻。PA组大鼠肺组织NF-κB表达阳性细胞明显增多,PDTC干预组NF—κB表达阳性细胞明显减少。Western blot显示,各时间点NF-κB表达不同,3h达高峰。RT—PCR显示,PA组TNFαmRNA高表达,以6h最为明显;PDTC干预组TNFαmRNA表达明显下调,与PA组相比,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论NF-κB及其诱导的TNFα在PA肺炎中发挥重要作用,PDTC可能通过抑制NF-κB的活性减轻PA引起的肺损伤。