青蒿琥酯抑制Twist1蛋白表达和血管再生以及降低口腔鳞癌细胞Tca8113转移的作用

目的 研究青蒿琥酯抑制Twist 1表达、降低口腔鳞癌细胞的转移及对血管生成的抑制作用.方法 采用50、100、150、200 μg·mL-1的青蒿琥酯体外培养的口腔鳞癌细胞,然后分别采用Western blot法、MTT法、划痕实验及流式细胞仪检测不同浓度的青蒿琥酯干预对口腔鳞癌细胞Twist1表达、增殖、迁移及凋亡的影响;采用鸡胚尿囊膜检测青蒿琥酯对鸡胚尿囊膜血管生成的影响.结果 与对照组对比,青蒿琥酯可抑制Twist1蛋白的表达、口腔鳞癌细胞的增殖和迁移,且存在时间和剂量依赖性;青蒿琥酯可引起细胞的凋亡,处理组的细胞凋亡率显著高于对照组;青蒿琥酯对鸡胚尿囊膜血管新生有一定的抑制作用(P＜0.05).结论 中药青蒿琥酯可抑制Twist 1蛋白的表达、细胞增殖、迁移,同时可有效抑制血管再生.     

蛇毒金属蛋白酶抑制剂重组蛋白抗肿瘤血管生成作用及其机制

目的研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂重组蛋白(recombinant snake venom metalloproteinase inhibitor,r SVMPI)对血管生成的影响及其分子机制。方法应用鸡胚绒毛尿囊膜(chicken chorioallantoic membrane,CAM)血管生成模型观察SVMPI重组蛋白对血管生成的影响;采用Alamar Blue分析方法检测人脐静脉内皮细胞(human umbilical veins endothelial cells,HUVECs)增殖能力、Annexin V-FITC双标记流式细胞术检测细胞凋亡、划痕标记法检测细胞体外迁移能力、Boyden小室分析方法检测细胞体外趋化能力及管腔形成法检测体外血管新生能力;通过real-time PCR及Western blot检测重组蛋白处理后的HUVECs KDR、FGFR-1表达。结果r SVMPI减少鸡胚尿囊膜新生血管密度指数,减弱由VEGF诱导的HUVECs趋化能力,抑制HUVECs体外新生小管的形成,降低HUVECs细胞KDR和FGFR-1的表达水平。结论r SVMPI可能通过阻断VEGF-KDR或b FGF-FGFR信号转导途径,发挥抑制血管生成的作用。     

新生霉素抑制血管生成及其与长春新碱的协同作用

目的研究新生霉素的抑制血管生成作用及其机制。方法以鸡胚尿囊膜模型测定对血管生成的作用，并分别用MTT法、明胶酶谱法等观察新生霉素对于内皮细胞和肺癌PG细胞的影响。结果新生霉素200 μg/egg对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制率为68.7％，且呈浓度依赖性抑制内皮细胞的增殖、运动、MMP-2分泌以及管腔的形成；新生霉素和长春新碱对血管生成及PG细胞的增殖均有明显的协同作用。结论本研究首次确定新生霉素具有抑制血管生成活性,与长春新碱联合可增强对血管生成的抑制作用。     

青蒿琥酯抑制新生血管生成的作用

目的　为研究青蒿琥酯成为抗血管生成药物的可能性 ,观察其对新生血管的影响 ,并初步探讨其机制。方法　采用鸡胚绒毛尿囊膜、大鼠主动脉环无血清培养、人脐静脉内皮细胞损伤迁移等实验 ,检测青蒿琥酯对新生血管增殖与迁移的抑制作用。结果　鸡胚绒毛尿囊膜实验表明 ,青蒿琥酯有较强的血管增殖抑制作用 ,对微血管作用强于大血管 ;大鼠主动脉环无血清培养实验表明 ,青蒿琥酯能明显推迟血管新生 ,减少新生血管数量 ;人脐静脉内皮细胞损伤迁移实验表明青蒿琥酯对内皮细胞具有增殖和迁移抑制作用。在这些体内外实验中 ,青蒿琥酯抑制血管生成作用呈剂量依赖性。结论　青蒿琥酯具有抑制新生血管生成作用 ,此作用可能与抑制血管内皮细胞迁移有关。     

岩藻糖基化海参硫酸软骨素抑制肿瘤血管新生作用的研究

目的从美国肉参(Isostichopus badionotus)中分离纯化岩藻糖基化海参硫酸软骨素(sea cucumber chondroitin sulfate,SC-CHS),体外研究其对肿瘤诱导血管生成的抑制作用。方法采用MTT法检测SC-CHS对95D细胞增殖活性的影响;小管形成实验研究SC-CHS对脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成能力的抑制作用;采用鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管模型,研究其对血管生成的影响;通过RT-PCR和WesternBlot法检测其对肿瘤诱导血管生成相关因子缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,Hif-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA和蛋白的表达。结果结果显示SC-CHS能显著抑制95D细胞的增殖,能抑制HUVEC的小管形成作用和CAM血管新生。RT-PCR和Western Blot检测结果表明,高剂量SC-CHS能显著降低95D细胞中Hif-1α和VEGF mRNA的表达,减少VEGF蛋白的合成。结论SC-CHS体外能显著抑制肿瘤血管生成,这可能是通过影响肿瘤细胞中VEGF的合成发挥作用。     

用CAM技术评价鲨鱼软骨提取物抑制新生血管生长的活性

采用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）技术，检测了鲨鱼软骨提取物（SCAE）抑制新生血管生长的活性。其方法是将肿瘤组织、SCAE等样品接种在置于孵化5d鸡胚CAM膜上的硅环中，继续孵育2d后取膜，观察新生毛细血管生长情况，并采用Crums顺序进行评判。结果表明，SCAE能显著地抑制CAM的新生血管生长，并对BI。黑色素瘤促新生血管形成作用亦有非常显著的抑制作用。     

片仔癀体外抗肿瘤作用研究

目的研究片仔癀对体外肿瘤细胞增殖的影响,以及对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制作用。方法采用MTT法检测片仔癀对体外培养肿瘤细胞(肝癌SMMC-7721细胞、胃癌SGC-7901细胞、宫颈癌HeLa细胞)的抗肿瘤作用;以鸡胚尿囊膜血管生成(CAM)实验,研究片仔癀对新生血管生成的抑制作用。结果片仔癀在0.2～1.0mg/mL对各肿瘤细胞的增殖有显著抑制作用,1.0mg/mL片仔癀对肝癌细胞增殖抑制率达到81.55%;片仔癀在0.1～1000μg/mL对鸡胚尿囊膜血管生成有显著抑制作用,给药鸡胚的新生血管数减少,血管变细,其中10μg/mL抑制率最高,一级血管抑制率为61.1%,二级血管抑制率为59.1%。结论在实验给药浓度下,片仔癀对受试肿瘤细胞的增殖具有较强抑制作用,对鸡胚尿囊膜血管生成有显著抑制作用。     

31种中药材的乙醇提取物抑制血管生成的活性研究

目的筛选具有抑制肿瘤新生血管生成作用的药物。方法建立抑制人血管内皮细胞(HMEC1)生长的高通量筛选模型,采用75%乙醇为溶剂浸提药材,研究提取物对HMEC1生长和鸡胚尿囊血管生成的抑制活性,筛选具有抑制HMEC1增殖活性和鸡胚尿囊血管生成的中药。结果 31种中药中对HMEC1增殖具有明显抑制活性的药材有7种,其中对鸡胚尿囊血管生成有明显抑制活性的有4种。结论五倍子、钩藤、黄芩、蒲黄等4种中药具有潜在的研究开发的价值。     

反应停的抗新生血管形成及抗肿瘤作用研究

目的　研究反应停的抗新生血管形成及抗肿瘤作用。方法　在HUVECs中MTT法检测细胞活性,电镜观察细胞死亡类型,流式细胞仪定量细胞凋亡率;用鸡胚尿囊膜模型观察新生血管形成;肉瘤S180小鼠体内模型观察反应停的抗肿瘤作用,并通过免疫组化观察反应停对肿瘤组织微血管数的影响。结果　反应停对HUVECs有直接抑制作用,IC50为(22 .91±1. 74) μmol·L-1;经反应停作用48h后的HU VECs,随剂量增加,电镜下可见核不规则,染色体浓集,空泡状内质网及凋亡小体等不同时期细胞凋亡现象;流式细胞检测显示反应停可依剂量诱导HUVECs凋亡或坏死;鸡胚尿囊膜新生血管形成模型中,反应停抑制新生血管形成的阳性率随剂量而增加;小鼠S180肿瘤移植模型中,反应停单独使用,虽可明显减少肿瘤血管密度, 无抑制肿瘤生长作用;与环磷酰胺联合使用,可减少环磷酰胺用量,与环磷酰胺有协同抗肿瘤作用。结论　反应停有抗新生血管形成作用,单独应用对小鼠S180肿瘤无抑制作用,但与环磷酰胺有协同作用。     

靶向内皮细胞α7受体的新化合物对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的 :研究靶向内皮细胞α7受体的新化合物对鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)血管新生的影响。方法 :应用鸡胚绒毛尿囊膜模型 ,通过计数血管的分支点数 ,观察 16种靶向内皮细胞α7受体的新化合物对于在体血管新生的影响。结果与结论 :化合物 13、14在 1～ 10 0 μmol·L-1浓度范围内 ,既没有促进血管新生的作用 ,也没有抑制血管新生的作用 ,与生理盐水组相比无显著差异 ,而在浓度为 10 0 0 μmol·L-1时 ,对CAM的血管新生有促进作用。化合物 5在浓度为 10 0和 10 0 0 μmol·L-1有抑制血管新生的作用 ,而在浓度为 1和 10 μmol·L-1时 ,则对血管新生没有影响     

姜黄素具有抑制血管生成与诱导肿瘤细胞凋亡双重作用

目的　探讨姜黄素的抗肿瘤机制。方法　采用鸡胚绒毛尿囊膜模型观察姜黄素对血管生成的影响 ;利用培养的肿瘤细胞SMMC 772 1,采用电子显微镜及流式细胞仪观察姜黄素诱导SMMC 772 1细胞凋亡的作用。结果　姜黄素能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜内的血管生成 ,2 0 μmol·L-1的姜黄素即可诱导SMMC 772 1细胞凋亡。结论　姜黄素的抗肿瘤机制是多方面的 ,既可抑制血管生成又可诱导肿瘤细胞凋亡     

Evaluation of antiangiogenic and antiproliferative potential of the organic extract of green algae chlorella pyrenoidosa

Objective:

algae isolates obtained from fresh and marine resources could be one of the richest sources of novel bioactive secondary metabolites expected to have pharmaceutical significance for new drug development. This study was conducted to evaluate the antiangiogenic and antiproliferative activity of Chlorella pyrenoidosa in experimental models of angiogenesis and by MTT assay.

Materials and Methods:

lyophilized extract of C. pyrenoidosa was extracted using dichloromethane/methanol (2:1), concentrated and vacuum evaporated to obtain the dried extract. The crude extract was evaluated in the vascular endothelial growth factor (VEGF)-induced angiogenesis in in ovo chick chorioallantoic membrane assay (CAM) at various concentrations (n = 8) using thalidomide and normal saline as positive and untreated control groups, respectively. The crude extract was also subjected to the antiangiogenic activity in the silver nitrate/potassium nitrate cautery model of corneal neovascularization (CN) in rats where topical bevacizumab was used as a positive control. The vasculature was photographed and blood vessel density was quantified using Aphelion imaging software. The extract was also evaluated for its anti proliferative activity by microculture tetrazolium test (MTT) assay using HeLa cancer cell line (ATCC).

Results:

VEGF increased the blood vessel density by 220% as compared to normal and thalidomide treatment decreased it to 67.2% in in ovo assay. In the in-vivo CN model, the mean neovascular density in the control group, the C. pyrenoidosa extract and bevacizumab group were found to be 100%, 59.02%, and 32.20%, respectively. The Chlorella pyrenoidosa extract negatively affected the viability of HeLa cells. An IC₅₀ value of the extract was 570 μg/ml, respectively.

Conclusion:

a significant antiangiogenic activity was observed against VEGF-induced neovascularization and antiproliferative activity by MTT assay. In this study, it could be attributed that the activity may be due to the presence of secondary metabolites in the C. pyrenoidosa extract.KEY WORDS: Algae, angiogenesis, chorioallantoic membrane, corneal neovascularization, vascular endothelial growth factor     

沉默LIMK1促进DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭

目的探讨LIMK1沉默对DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭的影响。方法 RNA干扰技术建立稳定LIMK1-miRNA/SW480细胞株;免疫组化和Western blot检测DADS对沉默LIMK1结肠癌SW480细胞LIMK1和磷酸化LIMK1蛋白表达的影响。划痕实验和侵袭实验检测LIMK1 RNA沉默与DADS对SW480细胞迁移与侵袭的影响。结果 RT-PCR与Western blot显示,LIMK1-miR/SW480细胞LIMK1mNRA与蛋白表达明显下调,表明成功构建稳定沉默LIMK1基因的SW480细胞株。免疫组化和Western blot显示,45 mg.L-1DADS处理和沉默LIMK1组较未转染组与空载体组SW480细胞LIMK1蛋白和磷酸化LIMK1明显下调(P<0.05)。划痕实验和侵袭实验发现,沉默LIMK1或DADS处理SW480细胞的迁移与侵袭能力较未转染组与空载体组明显抑制(P<0.05)。而DADS处理沉默组抑制SW480细胞迁移和侵袭能力更为明显(P<0.05)。结论沉默LIMK1基因可抑制SW480细胞迁移与侵袭,增强DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭作用。     

新生大鼠视网膜新生血管模型的制备

目的 建 立大 鼠 视 网 膜新 生 血 管 模型 进 行 大 鼠视 网 膜 新 生血 管 模 型 的 可行 性 研 究 ，并 探 讨 视网膜新 生 血管 的发 病 机制 。方 法 ７ ｄ 龄有 色大 鼠 （Ｂｒｏｗｎ Ｎｏｒｗａｙ ｒａｔ）在浓 度为 ７５％ 的高 氧 环 境中 生 活 ５ ｄ，然 后回到正 常 氧环 境 中。 通 过 相 对分 子 质 量 高的 荧 光 素 造影 视 网 膜 铺片 和 视 网 膜组 织 病 理 切 片检 查 ，反映 视 网 膜 血管的增 生 ；利 用分 子生 物 学技 术蛋 白 质印 迹法 （Ｗ ｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）测定 视 网膜 血管 内 皮生 长因 子 （Ｖ ＥＧＦ）含 量的 变 化。结果 给 氧组 新生 有 色 大鼠 视 网 膜 大血 管 显 著 扩张 ，大 片无 灌 注 区 ，大 量 新生 血 管 芽 形成 ；大 量 新生 血 管 突 破视 网膜 内界 膜 长 入 玻璃 体 腔 ；视 网 膜 ＶＥＧ Ｆ 的 表 达 明 显增 强 。 结 论 新 生 有 色大 鼠 可 以 作为 视 网 膜 新生 血 管 模 型的实验 用 鼠。     

姜黄素在缺血和肺癌模型中的抗血管生成作用:计算机模拟、体外和体内试验（英文）

OBJECTIVE With the rapid development of computer technology,achievements have been gained in the research and application of computer.Network pharmacology combines biological networks and drug network integration,analysis of drug relationship with the node or network module in the network.Since many diseases are caused by complex factors,we try to apply the network pharmacology techniques to study the targets and networks of drugs for complex diseases.METHODS We investigated the angiogenic effects of curcumin on an ischemia and lung cancer model.To induce ischemia combined with lung cancer models,unilateral femoral arteries of C57BL/6 mice were disconnected on one side of the mouse and Lewis lung carcinoma(LLC)cells were xenografted on the opposite side.Angiogenic effects and underlying mechanisms associated with curcumin were investigated.Molecular target(s),signaling cascades and binding affinities were detected by Western blot,two-dimensional gel electrophoresis(2-DE),computer simulations and surface plasmon resonance(SPR)techniques.RESULTS Curcumin promoted post-ischemic blood recirculation and suppressed lung cancer progression in inbred C57BL/6 mice via regulation of the HIF1α/mTOR/VEGF/VEGFR cascade oppositely.Inflammatory stimulation induced by neutrophil elastase(NE)promoted angiogenesis in lung cancer tissues,but these changes were reversed by curcumin through directly reducing NE secretion and stimulating α1-antitrypsin(α1-AT)and insulin receptor substrate-1(IRS-1)production.Meanwhile,curcumin dosedependently influenced endothelial cells(EC)tube formation and chicken embryo chorioallantoic membrane(CAM)neovascularization.CONCLUSION Curcumin had opposite effects on blood vessel regeneration under physiological and pathological angiogenesis,which was effected through negative or positive regulation of the HIF1α/mTOR/VEGF/VEGFR cascade.Curcumin had the promise as a new treatment modality for both ischemic conditions and lung cancer simultaneously in the clinic.     

TRAP1对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

摘要：目的　探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1（TRAP1）在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法　通过Oncomine数据库分析TRAP1在结直肠癌组织和正常肠黏膜组织中的表达,Western blot检测TRAP1在结直肠癌组织及其配对癌旁黏膜组织、LOVO、HT29、HCT116、RKO、SW480、NCM460细胞中的表达及干扰TRAP1对细胞周期相关蛋白、凋亡相关蛋白及PI3K/AKT通路的影响,CCK-8检测TRAP1对结直肠癌细胞增殖的影响,平板克隆实验检测TRAP1对结直肠癌细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测TRAP1对细胞周期及凋亡的影响。结果　生物信息学分析显示TRAP1在结直肠癌中的表达高于正常肠黏膜组织,Western blot结果显示TRAP1在结直肠癌组织和细胞中蛋白表达水平均高于正常组织和细胞（P＜0.05）,干扰TRAP1的表达可以显著抑制SW480细胞的增殖及克隆形成能力（P＜0.05）,并且将细胞阻滞在G0/G1期,增加细胞凋亡（P＜0.01）,细胞周期相关蛋白CyclinD1表达降低,凋亡相关蛋白Cleaved-Casp3表达增加,p-PI3K和p-AKT表达降低（P＜0.05）。结论　TRAP1在结直肠癌中高表达,干扰TRAP1的表达可以通过抑制PI3K/AKT通路的激活,从而降低结直肠癌细胞的增殖能力,促进细胞凋亡。     

The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for in vivo research on anti-angiogenesis

Anti-angiogenesis, i.e. inhibition of blood vessel growth, is being investigated as a way to prevent the growth of tumors and other angiogenesis-dependent diseases. Pharmacological inhibition interferes with the angiogenic cascade or the immature neovasculature with synthetic or semi-synthetic substances, endogenous inhibitors or biological antagonists. The chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) is an extraembryonic membrane commonly used in vivo to study both new vessel formation and its inhibition in response to tissues, cells, or soluble factors. Angiogenesis or anti-angiogenesis is evaluated quantitatively or semiquantitatively. The fields of application of CAM in the study of anti-angiogenesis, including our personal experience, are illustrated in this paper.