候选抑癌基因ING4的研究进展

ING4基因是近年来发现的一个ING(生长抑制因子家族)新成员,可能通过抑制细胞生长,增强其化学敏感性、增强P53的活性、抑制HIF活性、抑制肿瘤血管增生等途径抑制肿瘤的生长.ING4基因在正常组织中表达丰富,而在肿瘤组织中表达异常与发生突变,但其在肿瘤发生、发展过程中的确切作用尚不清楚.     

乳腺癌组织中ING4、HIF-1α和HIF-2α表达及与肿瘤微血管新生的关系

目的 探讨乳腺癌组织中生长抑制因子4(ING4)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)表达及与肿瘤微血管新生的关系.方法 选取择期行手术治疗的乳腺癌病人107例,利用实时荧光定量PCR技术检测乳腺癌和癌旁组织中HIF-1α、HIF-2α、ING4和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达,免疫组化染色检测乳腺癌和癌旁组织中微血管密度(MVD).结果 乳腺癌组织中HIF-1α mRNA、HIF-2α mRNA相对表达量均高于癌旁组织,而ING4 mRNA 相对表达量低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1α mRNA相对表达量与淋巴结转移有关(P<0.05),HIF-2α mRNA相对表达量与肿瘤大小、淋巴结转移有关(P<0.05),ING4 mRNA相对表达量与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);乳腺癌组织中VEGF mRNA相对表达量和MVD计数均高于癌旁组织,均差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析显示,乳腺癌组织中HIF-1α mRNA、HIF-2α mRNA相对表达量均与VEGF mRNA相对表达量和MVD计数呈正相关(r=0.382、0.417和0.408、0.491,P<0.05),ING4 mRNA相对表达量均与VEGF mRNA相对表达量和MVD计数呈负相关(r=-0.395、-0.502,P<0.05).结论 乳腺癌组织中HIF-1α、HIF-2α基因表达升高,而ING4基因则被抑制,可能共同参与了乳腺癌组织中血管新生.     

脑胶质瘤中p33ING1蛋白表达及其与细胞凋亡和增殖关系的研究

目的检测p33 ING1蛋白在脑胶质瘤中的表达,探讨其与肿瘤细胞增殖、凋亡及肿瘤恶性程度的关系。方法应用免疫组化S-P法分别检测p33 ING1和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,并用TUNEL法做原位细胞凋亡检测,实验数据进行统计分析。结果50例脑胶质瘤中p33ING1蛋白表达的总阳性率为90%（28/50）,随着胶质瘤恶性度的增高其表达水平下降,而且表达水平与细胞凋亡指数（AI）呈正相关与细胞增殖指数（PI）呈负相关（P〈0.01）。结论胶质瘤细胞中抑癌基因p33ING1的表达可促进细胞凋亡,抑制细胞过度增殖,与胶质瘤恶性程度密切相关。检测其表达水平的变化对胶质瘤的诊断、治疗及判断预后均有重要指导意义。     

p33ING1b在胶质瘤中的表达及意义

目的：检测抑癌基因p33ING1b在脑胶质瘤中的表达及其意义。方法：选取行脑胶质瘤手术切除的新鲜胶质瘤组织标本66例及正常脑组织15例,应用S-P免疫组织化学方法检测p33ING1b在瘤组织及正常组织中的表达。结果：p33ING1b在66例胶质瘤标本中的阳性表达率为71.2%（47/66）,而在正常组织中全部为阳性表达（100%）;且随着肿瘤级别的增高,p33ING1b的表达水平呈明显的下降趋势。结论：p33ING1b在胶质瘤组织中低表达,且与肿瘤恶性程度密切相关,检测其表达水平将为判断肿瘤的恶性程度、确定治疗策略及评估预后提供一定的帮助。     

ING1蛋白在宫颈癌组织中的表达

目的探讨ING1蛋白在宫颈癌中表达的临床意义及其相互关系。方法应用Envision免疫组化法检测69例宫颈癌,21例原位癌,18例不典型增生,组织中P^33ING1、p53基因蛋白的表达,并与正常宫颈组织10例对照。结果对照组中P^33ING1均阳性表达100％(10／10)而宫颈原位癌和宫颈浸润癌组织中表达分别为57．1％(11／21)和59．4%(41／69),明显下降,与对照组之间差异显著P^33ING1和R53的表达有相关性。结论P^33ING1是抑癌基因,在宫颈癌中表达下降,对宫颈癌发生、发展可能起重要作用,P^33ING1和R53在宫颈癌中表达有相关性。     

皮肤鳞状细胞癌组织中p33~(ING1)蛋白的表达

目的研究p33ING1基因表达与皮肤鳞状细胞癌的发生、发展的关系。方法应用免疫组化检测我科在1999年²004年35例皮肤鳞状细胞癌及25例原位鳞癌(Bowen病)组织中的p33ING1表达情况。结果皮肤鳞状细胞癌p33ING1蛋白表达阳性率为42.9%(15/35),明显低于正常组的82.9%(29/35),二者比较有明显差异性,χ2=11.99,P<0.05。其原位鳞癌中阳性表达为14(56%),同样明显低于正常组织的阳性率82.9%(29/35),二者比较有明显差异性,χ2=5.18,P<0.05。结论 p33ING1蛋白在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达下降,提示p33ING1蛋白在皮肤鳞状细胞癌的发生、进展有重要意义,并有可能成为肿瘤检测蛋白之一。     

脑胶质瘤中P33ING1和PINCH蛋白的表达及意义

目的 检测P33ING1及PINCH蛋白在脑胶质瘤中的表达,探讨其在胶质瘤发生、发展中的作用.方法 选取行脑胶质瘤手术切除的新鲜胶质瘤标本50例,应用S -P免疫组织化学方法检测P33ING1和PINCH在瘤组织及正常组织中的表达.结果 50例胶质瘤标本中P33ING1阳性表达率为90%(45/50),正常组织中全部表达阳性(100%);随着肿瘤级别的增高,P33ING1表达水平下降,2者呈负相关(P ＜0.01).PINCH蛋白的阳性表达率为76%(38/50),正常组织中有3例表达,阳性率为37. 5%(3/8);随着肿瘤级别的增高,PINCH表达水平越高,2者呈正相关(P＜0.01).P33 ING1与PINCH在胶质瘤中的蛋白表达水平(LI)呈明显的负相关(r=-0.5422,P＜ 0.01).结论 抑癌基因P33ING1的表达对脑胶质瘤细胞增殖起抑制作用,而作为信号连接蛋白PINCH的表达则对胶质瘤的侵袭与转移起促进作用.P33ING1 与PINCH的表达存在相关性,是影响脑胶质瘤发生发展的重要因素.     

DNA结合抑制因子4在肿瘤发生发展中的作用

DNA结合抑制因子4(Id4)是Id转录因子的成员之一,Id4基因的表达受多种调控元件的调控,在正常组织及肿瘤组织中均有表达。Id4蛋白在细胞增殖,细胞分化及细胞凋亡的调控中起着重要的作用,并在肿瘤的发生和发展过程中起着不同的作用。     

激活蛋白-2对Hela细胞中survivin的抑制作用

目的探讨激活蛋白-2(AP-2)对Hela细胞中survivin基因表达的影响,为靶向抑制survivin基因表达的肿瘤治疗奠定理论和临床应用基础。方法共转染survivin启动子-荧光素酶报告基因质粒和AP-2,双荧光素酶活性检测AP-2对survivin启动子活性的影响;转染AP-2到Hela细胞中,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot检测AP-2对Hela细胞中survivin基因表达的影响。结果AP-2能抑制survivin核心启动子活性;并在转录和翻译水平上抑制Hela细胞中的survivin基因表达。结论AP-2可抑制Hela细胞中survivin基因的表达,为有效控制survivin基因表达提供了新的思路,为靶向survivin的肿瘤基因治疗奠定基础。     

p33ING1在结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤中的表达

目的探讨抑癌基因p33ING1任结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤（下称ENKL）中的表达情况,研究ENKL的发病机制,寻找有助于判断预后的分子标志物。方法用免疫组化方法检测p33ING1蛋白在37例ENKL和37例良性淋巴组织增生中的表达,统计各蛋白表达与临床特点及生存期的关系。结果37例良性淋巴组织增生p33ING1呈强阳性表达,在ENKL中的表达率约分别为67．57％（25／37）,显著低于良性淋巴组织增生组（P〈0．01）,p33ING1表达与LDH水平有关（P〈0．05）。结论p33ING1蛋白表达低下可促进ENKL的发生和发展。     

Ad-ING4抑制人A549肺癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长

目的 研究腺病毒介导的ING4基因(Ad-ING4)对肺癌体内外的抑制作用及其潜在的分子机制.方法 体外采用50 MOI的Ad-ING4感染A549肺癌细胞,并用MTT法检测Ad-ING4对A549细胞的抑制作用,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡率.采用A549细胞株建立人肺癌裸鼠模型,瘤体局部注射干预用药,每隔5天测量一次肿瘤体积,并计算瘤重抑瘤率;瘤块免疫组化检测ING4、生存素(survivin)、CD34、HIF-1等基因的表达.结果 Ad-ING4感染A549细胞抑制率可达47.62%;72 h凋亡率为18.5%;荷瘤裸鼠经治疗后,Ad-ING4组和顺铂(DDP)组的肿瘤体积、瘤重均明显缩小,其抑瘤率分别达到42.43%和46.47%,DDP组出现不良反应;免疫组化检测Ad-ING4组和DDP组与对照组比较,生存素、CD34、HIF-1的表达下调(P<0.01).结论 Ad-ING4对人A549肺癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用.其抑瘤机制可能与下调生存素、CD34、HIF-1的基因表达进而诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成等有关.     

糙苏素的抗肿瘤作用及机制研究

目的:研究糙苏素的抗肿瘤作用及其对端粒酶活性和细胞周期的影响。方法:采用血清药理学与体内、外抑瘤实验相结合的方法,MTT法检测糙苏素含药血清对体外培养的人白血病K562细胞增殖的抑制作用,聚合酶链反应-酶联免疫吸附法检测K562细胞在糙苏素作用后端粒酶活性的变化,流式细胞仪分析细胞周期的改变;体内实验采用小鼠肝癌H22细胞株接种小鼠,连续给药14d,计算抑瘤率。结果:糙苏素含药血清在10%～50%剂量范围内对K562细胞有抑制作用,且呈剂量依赖关系(P<0.05);糙苏素作用后端粒酶活性出现抑制,且各给药组随糙苏素浓度增加抑制作用显著增强(P<0.01),同一浓度随作用时间延长,抑制作用逐渐增强(P<0.05);K562细胞的DNA合成后期/分裂期(G2/M)细胞含量显著增高(P<0.01);糙苏素(2.5、5、10mg·kg-1)灌胃能显著抑制小鼠移植性肝癌H22细胞的生长。结论:糙苏素具有抗肿瘤作用,其作用是通过抑制肿瘤细胞的端粒酶活性而实现的。     

N-三甲基壳聚糖包衣多柔比星脂质体肿瘤新生血管靶向性的体内评价

目的：考察N-三甲基壳聚糖（TMC）包衣的多柔比星（ADM）阳离子脂质体抗肿瘤活性及对肿瘤新生血管的靶向性。方法：采用动物移植性肿瘤实验法,建立小鼠H22肿瘤模型,比较TMC包衣脂质体组和其他各给药组的肿瘤抑制率并通过小鼠尾静脉注射异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖（FITC—Dextran）,分析肿瘤组织中的在体荧光,定性观察肿瘤新生血管的形态排布情况,定量测定肿瘤组织中的血管相对密度。结果：TMC包衣的ADM脂质体组,其小鼠的瘤重抑制率迭53．47％,显著高于游离药物组和未包衣脂质体组（8．75％,34．88％）（P〈0．05）;给予TMC包衣ADM脂质体的小鼠,其肿瘤新生血管形态良好,排布均匀,血管分支少,而其他给药组的肿瘤新生血管多扭曲,粗细不均,一个节点有多个血管分支等;通过比较不同给药组肿瘤组织黏附的FITC—Dextran量,TMc包衣ADM脂质体组的肿瘤血管密度明显低于游离药物组和未包衣脂质体组（P〈0．05）。结论：TMC包衣的ADM阳离子脂质体不仅具有较强的抗肿瘤活性,而且具有很好的肿瘤新生血管靶向性。     

L-1416, a novel MDR reversing agent with possible reduced calcium antagonism

BackgroundMultidrug efflux transporter P-glycoprotein (P-gp) is highly expressed on membrane of tumor cells and supposed to be implicated in the resistance to tumor chemotherapy. However, currently none of P-gp inhibitors has been approved by Food and Drug Administration not only due to toxicity but also lack of efficacy in clinical trials.MethodsTo solve the problem, our lab synthesized a novel compound named 1416 [1-(2,6-dimethylphenoxy)-3,4-dimethoxyphenylethylamino) propane hydrochloride] with the hope of high P-gp inhibition and low side effects. Caco-2 cell monolayer and tumor bearing mice were used to evaluate the P-gp inhibition of 1416 in vitro and in vivo, respectively. One of its potential side effects, calcium antagonism was also evaluated.ResultsResults showed that 1416 showed a similar P-gp inhibition as verapamil in Caco-2 cell monolayer. No significant difference was observed in antitumor enhancement when the optical isomers of 1416 (D-1416 and L-1416) were co-administered with vinblastine. In calcium antagonism, L-1416 showed less calcium inhibition than both D-1416 and verapamil.ConclusionThe novel compound 1416 could significantly increase the antitumor effects of cytotoxic drugs and one of its optical isomers, L-1416, might be more promising due to its potential low calcium antagonism.     

Inhibition of c-Jun N-terminal kinase sensitizes tumor cells to flavonoid-induced apoptosis through down-regulation of JunD

Reduction of susceptibility to apoptosis signals is a crucial step in carcinogenesis. Therefore, sensitization of tumor cells to apoptosis is a promising therapeutic strategy. c-Jun NH2-terminal kinase (JNK) has been implicated in stress-induced apoptosis. However, many studies also emphasize the role of JNK on cell survival, although its mechanisms are not completely understood. Previously, we found that inhibition of JNK activity promotes flavonoid-mediated apoptosis of human osteosarcoma cells. We thus determined whether inhibition of JNK sensitizes tumor cells to a bioflavonoid-induced apoptosis, and whether this effect of JNK is a general effect. As the results, quercetin and genistein as well as a flavonoid fraction induced apoptosis of tumor cells, which was further accelerated by specific JNK inhibitor, SP600125 or by small interfering RNA specific to JNK1/2. This effect was specific to types of cells because it was further apparent in tumorigenic cell lines. Inhibition of JNK by SP600125 also reduced flavonoid-stimulated nuclear induction of JunD which was known to have protective role in apoptosis, whereas JNK inhibition alone had little effect on apoptosis. The flavonoid-induced apoptosis of tumor cells was significantly enhanced by transfecting them with antisense JunD oligonucleotides. These results suggest that inhibition of JNK facilitates flavonoid-induced apoptosis through down-regulation of JunD, which is further sensitive to tumor cells. Therefore, combination with a specific JNK inhibitor further enhances the anti-cancer and chemopreventive potential of bio-flavonoids.     

白芍醇提液超滤膜分离药效部位体外抗肿瘤活性研究

目的:研究超滤膜对白芍醇提液分离的药效部位及其体外抗肿瘤的活性。方法:采用高效液相色谱法测定白芍超滤液中芍药苷的含量;以动物血清培养小鼠HT29、HL60和S180肿瘤细胞,观察白芍超滤液药效部位对肿瘤细胞的抑制作用及与给药量和给药时间的关系。结果:给药剂量在10～100g·kg-1含药血清范围内对各肿瘤细胞均有显著抑制作用,其作用与给药量呈正相关。药物血清在不同时间对各肿瘤细胞均有显著抑制作用,其作用与给药时间呈正相关。结论:超滤膜分离的白芍醇提液药效部位在体外有抗肿瘤活性。