氟桂利嗪对高血压大鼠脑缺血再灌注后HSP70表达的影响

目的探讨高血压大鼠急性脑缺血再灌注后氟桂利嗪对热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法将大鼠用双肾动脉狭窄术制成高血压大鼠模型,喂养2个月.随机分为氟桂利嗪组、缺血再灌注组和假手术组.除假手术组大鼠外,其他大鼠均制成大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,MCAO时间均为2小时,再灌注时间为1天.经免疫组化染色后用病理图像分析仪测出HSP70阳性细胞数,并计算阳性细胞率.比较三组HSP70阳性细胞率.结果氟桂利嗪组HSP70表达高于缺血再灌注组(P＜0.05).结论氟桂利嗪能促进HSP70表达,对缺血再灌注引起的受损脑组织起保护作用.     

氟桂利嗪对缺血再灌注后沙土鼠CA1区迟发性神经元死亡的保护作用

目的　探讨迟发性神经元死亡(DND)发生的机制及氟桂利嗪对海马CA1区神经元的保护作用。方法　将实验动物随机分为脑缺血再灌注组、给药组及假手术组。采用免疫组织化学染色及电镜下观察脑组织病理变化的方法观察缺血再灌注后海马各亚区谷氨酸及神经生长因子的表达变化及氟桂利嗪的神经保护作用。结果　脑缺血再灌注第1天和第2天海马各亚区谷氨酸表达增高,与药物组及对照组比较差异显著(P <0 .0 1) ,其第2天表达增高最为显著,与第1天比较P <0 .0 1;脑缺血再灌注第1天和第2天海马CA1区神经生长因子表达增高,与药物组及对照组比较P <0 .0 1,其第2天表达增高最为显著,与第1天比较P <0 .0 5 ;脑缺血再灌注第7天见海马CA1区神经元广泛性脱失,胶质细胞大量增生,缺血再灌注组和给药组海马CA1区存活的神经元均少于对照组(P <0 .0 1) ,但给药组存活的神经元数目又明显多于缺血再灌注组(P <0 .0 1)。结论　氟桂利嗪可以阻止谷氨酸的持续性高表达及神经生长因子的表达下降,从而对DND的发生起到保护作用。     

氟桂利嗪对复杂部分性发作癫痫患者脑脊液NO的影响

目的 探讨氟桂利嗪治疗复杂部分性发作癫痫（CP）患者的辅助疗效及其对CSF中一氧化氮（NO）变化的影响。方法 采用荧光分光光度法测定30例氟桂利嗪治疗组（A组）和30例常规治疗对照组（B组）治疗前后CSF中NO水平与癫痫发作次数改善。结果 两组患者CSF中NO水平治疗前无显著差异（P＞0.05)。治疗后差异显著（P＜0.05)，氟桂利嗪组癫痫发作明显减少。结论 氟桂利嗪辅助治疗复杂部分性发作癫痫患者有良好临床效果，值得临床推广使用。     

缝隙连接阻断剂辛醇对大鼠脑缺血再灌注后核转录因子κB通路的影响

目的探讨缝隙连接阻断剂辛醇对大鼠脑缺血再灌注后NF-κB通路的影响。方法选择健康雄性SD大鼠72只随机分为假手术组、对照组、DMSO组和辛醇组,每组18只,于建立脑缺血模型前30min,辛醇组腹腔注射辛醇溶液,对照组及假手术组腹腔注射等量生理盐水,DMSO组腹腔注射等量5%DMSO溶液。采用改良的神经功能缺损评分(mNSS)进行行为学评估,检测各组脑组织含水量、脑梗死体积,Western blot检测P65、磷酸化P65、IκB-α、磷酸化IκB-α蛋白表达。结果假手术组无脑梗死灶。与假手术组比较,辛醇组、对照组及DMSO组脑组织含水量、mNSS及脑梗死体积明显增加(P0.05),且对照组和DMSO组磷酸化P65和磷酸化IκB-α蛋白表达明显增加,P65和IκB-α蛋白表达明显降低(P0.05)。辛醇组mNSS、脑组织含水量、脑梗死体积、磷酸化P65和磷酸化IκB-α蛋白表达明显低于对照组和DMSO组;辛醇组P65和IκB-α蛋白表达明显高于对照组和DMSO组(72.13±2.01 vs 50.39±1.83、49.97±1.92,68.24±2.23 vs 43.45±1.53、42.56±1.48,P0.05)。对照组与DMSO组mNSS、脑组织含水量、脑梗死体积、P65和磷酸化P65蛋白表达、IκB-α和磷酸化IκB-α蛋白表达比较,无统计学差异(P0.05)。结论缝隙连接阻断剂辛醇能减轻缺血再灌注损伤,机制可能与调节NF-κB信号通路有关。     

氟桂利嗪阻滞小鼠皮质神经元胞浆钙离子内流的实验研究

目的　研究缺血状态下神经元胞浆内游离钙离子的变化及氟桂利嗪阻滞钙离子内流的作用。方法　用Flu 3 AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的小鼠皮质神经元标记物 ,应用激光共聚焦技术检测缺血条件和加用氟桂利嗪后细胞内荧光强度 (△FI)的变化。结果　给予缺血处理 10min后 ,神经元胞浆内钙离子△FI明显升高(17.5 2± 3.16 ) ;经氟桂利嗪预处理后 ,可以明显抑制钙离子的△FI(9.5 5± 2 .10 ) ,差异具有显著性意义 (P <0 .0 1) ,氟桂利嗪对无钙培养液缺血神经元胞浆内的钙离子浓度亦有抑制作用。结论　缺血状态下 ,神经元内钙离子明显升高 ,氟桂利嗪抑制胞浆内钙离子的升高 ,除通过阻断胞膜的电压敏感性钙通道外 ,可能还影响细胞内钙池的钙释放功能。     

核因子-κB及其与心脏缺血-再灌注

核因子-κB（nuclear factor-tcappaB,NF-κB）是一种具有基因转录多项调控作用的转录因子,是参与炎症反应的一个重要转录因子,广泛存在于真核细胞中参与许多基因表达的调控。Sen和Baltimore1986年首先从B淋巴细胞核提取物中,检测到的一种能与免疫球蛋白κ链基因增强子κB序列（GCGACTTTC）特异性结合,并能促进κ基因表达的核蛋白因子,称之为核因子-κB,在此后的30年的研究中发现,NF-κB是普遍存在于细胞浆中的一种快反应转录因子,参与几十种蛋白质类细胞因子的转录,也因此而参与许多病理过程的发生与发展。     

类缺血再灌注损伤对体外培养神经干细胞活性和胞内钙浓度及增殖的影响

目的观察类缺血再灌注损伤对体外培养的胚胎小鼠纹状体神经干细胞活性、胞内Ca2+浓度以及增殖的影响。方法将体外培养的小鼠神经干细胞分为类缺血再灌注组、药物预处理组(1μmol/L氟桂利嗪)和对照组。前两组进行类缺血处理并分别于再灌注0、30 min、1、2、3 h检测细胞内Ca2+浓度,于03、0 min、12、、31、2、24、36、486、0 h检测细胞活性,对照组在相同时间点检测细胞活性,比较3组间细胞内Ca2+浓度及细胞活性的差异。结果类缺血再灌注后神经干细胞内游离Ca2+浓度显著升高,在相同时间点药物预处理组胞内Ca2+浓度均低于类缺血再灌注组,其中0、30 min1、h时有显著性差异(P<0.05);类缺血再灌注后细胞活性降低,在相同时间点药物预处理组细胞活性均高于类缺血再灌注组,其中03、0 min、1、2 h时差异显著(P<0.05)。再灌注后12~60 h类缺血再灌注组和药物预处理组的细胞增殖率明显高于对照组(P<0.01)。结论类缺血再灌注可以导致胞内Ca2+浓度升高及神经干细胞活性的降低,氟桂利嗪预处理可抑制胞内Ca2+的升高,减轻神经干细胞的损伤;另外类缺血再灌注后存活的神经干细胞的增殖能力增强。     

核转录因子-κB对β-淀粉样肽25-35诱导下PC12细胞周期的影响

目的 探讨核转录因子κB(NF-κB)在β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)肽段诱导的PC12细胞周期异常中的机制.方法 应用流式细胞仪检测技术及Western印迹方法,在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中检测NF-κB的活性和细胞周期相关蛋白周期蛋白A(cyclin A)、周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白E(cyclin E)、周期蛋白依赖性激酶2(CKD2)、周期蛋白依赖性激酶4(CKD4)、周期蛋白依赖性激酶6(CKD6)表达量的变化.分别将PC12同步化于G0期和S期,再检测Aβ25-35诱导对上述指标的影响.抑制NF-κB活性后,进一步检测上述细胞周期相关蛋白在Aβ25-35诱导下的变化.结果 Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中NF-κB活性增加(P＜0.05),同时细胞周期相关蛋白量升高;细胞同步化于G0期,Aβ25-35处理PC12细胞,细胞凋亡率下降,NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均受抑制;而同步化于S期,则细胞凋亡率、NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均无显著性变化;Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,抑制NF-κB活性则会引起细胞周期相关蛋白表达受抑制.结论 NF-κB主导了Aβ25-35诱导PC12细胞周期的异常变化,异常发生在G0期到G1期的过渡以及G1期到S期过渡,而不是S期到G2期以及G2期到M期的过渡.     

Rho激酶抑制剂对大鼠脑缺血再灌注后核转录因子和新型趋化因子表达的影响

目的 探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤后的保护作用及可能机制.方法 健康成年雄性SD大鼠90只,随机分为3组:假手术组、模型组、法舒地尔组,每组30只,每组再按照再灌注时间不同分为6、1 2、24 h3个时间点,每个时间点10只,线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型.术后对大鼠进行神经功能评分,RT-PCR检测缺血侧脑组织中新型趋化因子mRNA、NF-κB p65 mRNA表达.结果 与假手术组比较,模型组和法舒地尔组大鼠脑缺血再灌注6、12、24 h NF-κB p65 mRNA、新型趋化因子mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,法舒地尔组大鼠脑缺血再灌注6、12、24 h神经功能缺损评分明显降低,12、24 h NF-κB p65 mRNA、新型趋化因子mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 法舒地尔的脑保护作用可能与其减轻大鼠脑缺血再灌注损伤后的炎性反应有关.     

甘氨酸对大鼠肝移植缺血再灌注损伤库普弗细胞CD14和核因子-κB的影响

目的 探讨甘氨酸对大鼠肝移植缺血再灌注损伤库普弗细胞CD14和核因子-κB(NF-κB)的影响。 方法 将大鼠分为肝移植缺血再灌注组、等渗盐水预处理组、甘氨酸预处理组,检测再灌注后受体存活率、肝脏功能和病理组织学改变。分离培养再灌注后库普弗细胞,检测细胞CD14 mRNA的表达、NF-κB活性、培养上清液肿瘤坏死因子α和白细胞介素-1分泌情况。 结果 甘氨酸预处理能明显提高大鼠术后1周存活率(x2值分别为6.67和8.57,P值均<0.0 1)、改善肝功能、减轻肝脏病理组织学改变;甘氨酸预处理能明显下调库普弗细胞CD14 mRNA的表达(F=7.64,P<0.01)、降低NF-κB活性(F=11.47,P<0.01)、减少上清液肿瘤坏死因子α和白细胞介素-1分泌(F值分别为14.08和9.56,P值均<0.01)。 结论 甘氨酸能够有效地减轻肝移植后缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制库普弗细胞CD14表达和NF-κB活性、减少肿瘤坏死因子α和白细胞介素-1的分泌有关。     

迷迭香酸通过核转录因子-κB信号通路对抗谷氨酸诱导PC12细胞损伤

目的观察迷迭香酸(RA)对抗谷氨酸诱导的PC12细胞损伤发挥神经保护作用,探讨其机制是否与NF-κB信号通路相关。方法将培养细胞分为对照组、损伤组(16 mmol/L谷氨酸)、RA1组(30μmol/L RA+16 mmol/L谷氨酸)、RA2组(60μmol/L RA+16 mmol/L谷氨酸)。采用MTT法检测细胞活力;Hoechst33258荧光染色观察细胞核形态的改变,碘化丙啶染色流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达水平的变化。结果不同浓度谷氨酸(0、4、8、12、16、20 mmol/L)作用PC12细胞24 h后,细胞存活率呈剂量依赖性下降。与损伤组比较,RA1组和RA2组细胞存活率明显升高(P<0.05)。16 mmol/L谷氨酸作用PC12细胞1 h后,细胞质中IκBα蛋白和NF-κB p65蛋白表达明显减少,p-IκBα蛋白表达明显增加,NF-κB p65蛋白在细胞核中表达明显增加,2 h达到高峰;给予30、60μmol/L RA预处理1 h后,能抑制NF-κB p65蛋白活化进入细胞核。结论 RA通过抑制NF-κB信号通路的活化,对谷氨酸诱导损伤的PC12细胞有保护作用。     

氟桂利嗪抗神经细胞内脂褐素积累与钙超载的研究

目的 观察氟桂利嗪对细胞内脂褐素和细胞内游离钙离子的影响。方法 运用神经细胞老化实验研究摸型——无血清条件下培养小鼠神经母细胞瘤细胞,检测细胞内脂褐素自发荧光和结合细胞内游离钙的Fluo3／AM激发荧光,比较氟桂利嗪对神经细胞内钙离子浓度和脂褐素的影响。结果 1．含40μmol/L的氟桂利嗪的无血清培养液能显减少细胞内脂褐素含量(荧光值)(与对照组相比);2.含40μmol/L氟桂利嗪的无血清培养液能降低细胞内钙离子浓度(荧光值)(与对照组比较)。结论 氟桂利嗪能抵抗或延缓神经细胞内脂褐素积累和钙超载(细胞老化的两个重要指标),其抗神经细胞衰老与保护神经细胞的作用值得进一步研究探讨。     

不同剂量的地塞米松对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及核因子кB表达的影响

目的探讨不同剂量地塞米松预处理对大鼠缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及NF-κB表达的影响。方法 64只SD大鼠,随机分为大剂量组、中剂量组、小剂量组及对照组,每组1 6只,分别予2.5、0.8和0.4 mg/kg的地塞米松及蒸馏水预处理。预处理24 h后,构建体外心脏I/R模型,观测缺血前期及再灌注期左心室发展压(LVDP)、左心室压力最大上升和下降速率(±dp/dt_(max))、冠状动脉流出量(CF);测冠状动脉流出液肌酸磷酸激酶同工酶(CK MB)漏出率;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;免疫组织化学法检测NF-κB活化水平。结果与对照组比较,大、中剂量组LVDP、±dp/dt_(max)及CF明显改善(P<0.05),CK-MB漏出率明显降低(P<0.05),心肌细胞凋亡指数及NF-κB表达明显减少(P<0.01);小剂量组上述指标虽有改善,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论地塞米松预处理对大鼠I/R的心肌保护作用可能与抑制NF-κB活性,减少心肌细胞凋亡有关,且有一定的剂量依赖性。     

氟桂利嗪联合卡马西平和苯巴比妥治疗难治性癫痫的疗效观察

目的 探讨氟桂利嗪联合卡马西平和苯巴比妥治疗难治性癫痫的疗效和用药安全性.方法 通过对本院2006年1月-2011年1月难治性癫痫患者60例治疗前后进行自身对照研究.结果 所有患者治疗后癫痫发作次数明显少于治疗前(P＜0.01),总有效率为91.67%,每种类型治疗后的发作频率比治疗前的发作频率低(P＜0.01);且复杂部分性发作、继发性全身性发作类型治疗后较治疗前发作频率均少于简单部分性发作类型,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 氟桂利嗪联合卡马西平和苯巴比妥对难治性癫痫具有较理想的疗效,用药不良反应小.     

小鼠神经元类缺血/再灌注后钙离子浓度和细胞活性的变化

目的 研究小鼠类缺血／再灌注状态下神经细胞质内游离钙离子及细胞活性变化,探讨氟桂利嗪对缺血／再灌注损伤神经元的治疗意义。 方法 采用原代神经元培养法,建立类缺血／再灌注小鼠皮质神经元模型,将培养的小鼠脑细胞分为实验组(给予类缺血／再灌注处理),药物干预组(类缺血／再灌注处理+氟桂利嗪预处理),分别于再灌注30min、1h、2h、3h检测细胞质内钙离子浓度和细胞活性变化。结果再灌注30 min至2 h检测钙离子浓度,实验组与药物干预组差异有显著意义(P<0.01),至再灌注3 h,两者差异无显著意义;再灌注30min至2 h检测细胞吸光度,两组差异有显著性意义(P<0.01),到再灌注3 h,两组差异无显著性意义。 结论 氟桂利嗪可明显抑制类缺血／再灌注后小鼠皮质神经细胞质内钙离子的升高,减轻由此引发的神经元损伤。     

局灶性脑缺血-再灌注大鼠脑中Kuppel样转录因子2表达及核因子κB抑制剂的作用

目的：探讨Kuppel样转录因子2（KLF2）在大鼠局灶性脑缺血-再灌注（I／R）损伤后的表达及核因子κB（ NF-κB）抑制剂的干预作用。方法取健康雄性SD大鼠60只,按照随机数字表法分为假手术组、I／R组、NF-κB抑制剂组,每组20只,采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑I／R模型,并给予NF-κB抑制剂———吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（ PDTC）进行干预,观察时间点为I／R后6、12、24、48 h。采用逆转录PCR及Western Blot测定缺血脑组织KLF2 mRNA及其蛋白的表达,采用ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子α（ TNF-α）水平并进行各组间的比较。结果与假手术组比较,I／R组6、12、24、48 h缺血脑组织中KLF2 mRNA及蛋白表达水平均降低（ KLF2 mRNA相对表达量分别为：0.46±0.03比0.82±0.04,0.30±0.04比0.78±0.05,0.18±0.04比0.76±0.02,0.26±0.02比0.81±0.04;KLF2蛋白相对表达量分别为：0.46±0.04比0.80±0.02,0.30±0.02比0.79±0.02,0.15±0.02比0.77±0.01,0.24±0.01比0.79±0.02）,I／R后24 h达最低值,而血清TNF-α水平升高,差异均有统计学意义（均P<0.05）;给予NF-κB抑制剂PDTC后,I／R后6、12、24、48 h KLF2 mRNA及蛋白表达水平较I／R组出现不同程度的上调,KLF2 mRNA相对表达量分别为0.61±0.04、0.44±0.03、0.34±0.02、0.43±0.04,KLF2蛋白水平的相对表达量分别为0.60±0.02、0.43±0.02、0.33±0.01、0.44±0.03,而TNF-α含量降低,差异均有统计学意义（均 P<0.05）。I／R组及PDTC组各时间点脑组织中KLF2 mRNA水平与血清中TNF-α水平呈负相关（ r=—0.728,P<0.05）。结论脑I／R后脑组织中KLF2 mRNA表达水平降低,且与血清TNF-α水平存在负相关,其可能通过NF-κB通路介导炎性反应参与脑I／R病理过程。     

氟桂利嗪对体外培养海马神经元缺血缺氧损伤的影响及其机制的初步研究

目的　利用氟桂利嗪 (FNZ)研究钙离子拮抗剂对体外培养海马神经元缺血缺氧损伤的作用及其作用机制。方法　利用体外培养的海马神经元 ,通过去除培养液中的糖和氧气来模拟脑缺血缺氧 ,观察不同浓度FNZ对缺血缺氧海马神经元的形态学、乳酸脱氢酶 (LDH)和细胞存活率的影响 ,并观察FNZ对Bcl 2、BDNF蛋白表达的影响。结果　在一定浓度范围之内 ,FNZ可对缺血缺氧神经元起到保护作用 ,过高浓度不但没有保护作用 ,反而加重损伤。缺血缺氧可使Bcl 2蛋白表达明显下降 ,BDNF蛋白表达明显上升 ,FNZ(5 0 μmol/L)可使缺血缺氧神经元Bcl 2表达明显升高 ,BDNF表达下降。结论　在一定浓度范围之内FNZ可保护缺血缺氧神经元 ,可能与诱导Bcl 2蛋白表达和抑制BDNF蛋白表达有关 ;过高浓度FNZ有可能存在某种潜在毒性。     

诱导金属硫蛋白表达对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及核因子κB表达的影响

目的 探讨金属硫蛋白(MT)对大鼠缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及核因子κB(NF-κB)表达水平的影响.方法 32只SD大鼠随机分成实验组、对照组,每组16只.分别予硫酸锌(ZnS04)和蒸馏水预处理.预处理后构建Langendorff离体心脏I/R动物模型,动态观测缺血前及再灌注期左心室发展压(LVDP)、左心室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax)、冠状动脉流出量(CF);测定冠状动脉流出液肌酸磷酸激酶MB同工酶(CK-MB)的漏出率;Western印迹法检测金属硫蛋白(MT)表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;免疫组化法检测NF-κB的活化水平.结果 与对照组比较,实验组再灌注期LVDP、±dp/dtmax及CF得到改善(P ＜0.05);CK-MB的漏出率减少;金属硫蛋白的表达增加;细胞凋亡指数及NF-κB表达减少(均P＜0.01).结论 MT下调NF-κB表达可能与其抑制I/R心肌细胞凋亡有关.     

盐酸氟桂利嗪治疗脑动脉硬化症的疗效和安全性分析

目的观察分析盐酸氟桂利嗪治疗脑动脉硬化症患者的临床疗效和安全性。方法选取100例脑动脉硬化症患者,随机分为观察组和对照组各50例。两组均给予控制血糖、血压,调整血脂药物,抗血小板和应用血塞通治疗。在此基础上,观察组给予盐酸氟桂利嗪10 mg,每晚睡前服用1次,治疗2周后,观察比较两组的临床疗效及安全性。结果观察组显效27例,有效16例,无效7例;对照组显效13例,有效19例,无效18例。观察组临床疗效优于对照组(P0.01)。两组患者全血高切粘度、血浆粘度及全血低切粘度均较治疗前降低(P0.05或P0.01),观察组降低幅度明显大于对照组(P0.01),均未发生严重不良反应。结论在脑动脉硬化症常规治疗基础上加用盐酸氟桂利嗪可收到显著的疗效,并能兼顾心血管疾病、癫痫及周围血管病的治疗,能明显提高安全性。     

兴奋性氨基酸对体外培养大鼠皮质神经元的影响及氟桂利嗪对其干预的实验研究

目的：探讨兴奋性氨基酸对体外原代培养神经元的影响及氟桂利嗪在其保护机制中的作用。方法：原代培养小鼠皮质神经元，建立兴奋性氨基酸毒性损伤细胞模型，通过检测乳酸脱氢酶（LDH）释放率和形态学观察了解兴奋性氨基酸对神经元的毒性作用；用台酚蓝排斥实验测定细胞活力，并观察氟桂利嗪对神经元的保护作用。结果：经谷氨酸处理的神经元较对照组损伤明显加重，氟桂利嗪干预组较损伤组神经元死亡明显减轻。结论：兴奋性氨基酸对皮质神经元有明显的毒性作用，氟桂利嗪对兴奋性氨基酸毒性损伤神经元有保护作用。