120例胎儿β地中海贫血产前基因诊断分析

目的β地中海贫血（β地贫）产前基因诊断分析。方法采用等位特异寡核苷酸探针／反向点杂交技术,对７例孕早期绒毛标本,１０２例孕中期羊水标本和１１例孕后期脐血标本进行β地贫产前诊断。结果１２０例产前诊断,检出正常胎儿３０例;β地贫杂合子携带者（轻型）６３例;β地贫纯合子或双重杂合子（重型）２６例;１例由于母方未能查出β突变基因不能确诊。结论对已出生婴儿追踪查访,尚未发现与产前诊断不符的情况,基因诊断准确率达１００％。产前诊断标本以孕中期羊水为最佳选择。     

郴州地区103例胎儿地中海贫血产前基因诊断分析

[目的]通过对孕妇进行产前地中海贫血(简称地贫)基因分析,以避免中、重型地贫患儿出生,降低出生缺陷.[方法]收集2013年1月至2015年4月在本院确诊的同型地贫高风险夫妇103对,根据孕妇妊娠月份抽取羊水或脐带血进行胎儿地贫基因分析.采用Gap-PCR技术检测3种常见缺失型α-地贫,PCR-RDB技术检测17种常见β-地贫及3种非缺失型α-地贫.[结果]同型地贫高危夫妇103对,90例接受产前诊断,产前基因诊断率87.38％.检出重型α地贫胎儿12例(13.33％),中间型α地贫胎儿8例(8.89％),中重型β地贫胎儿14例(15.56％).经产前诊断检出的中重型地贫胎儿中,除3例血红蛋白H病(HbH)病胎儿家属选择继续妊娠,其余均在知情同意下终止妊娠.引产标本结果与产前诊断一致.[结论]对同型地贫高危夫妇行产前诊断,可有效阻断Bart's胎儿水肿及中、重型β地贫患儿的出生.     

孕妇地中海贫血的产前筛选与诊断

目的总结在我院进行产前体检者中开展地中海贫血的产前筛选与诊断结果。研究运用血红蛋白分析法进行孕妇产前筛选与诊断的意义。方法对2 219对夫妇使用血红蛋白定量法结合基因分析,进行常规地中海贫血筛选。从中筛选出双方同为地中海贫血基因携带者的夫妇,建议其进行相关的产前诊断。对同意进行产前诊断的孕早期孕妇,采取其羊水或绒毛样本进行地中海贫血基因诊断;对同意进行产前诊断的孕中晚期孕妇,以B超下穿刺法抽取脐静脉血样进行地中海贫血基因诊断。结果检查出夫妇一方为轻度α-地中海贫血基因携带者221例,检出率为4.98%;检查出夫妇一方为轻度β-地中海贫血基因携带者133例,检出率为3.00%。检查出双方均为地中海贫血基因携带者共13对,其中同意进行产前诊断的11例,诊断为中、重型地中海贫血胎儿5例。结论开展孕妇地中海盆血的产前筛选与诊断,可尽早确诊中、重型地中海贫血胎儿,为家庭和社会减轻了负担与痛苦。     

实时荧光PCR熔解曲线法在β-地中海贫血基因诊断和产前诊断中的临床应用评价

目的 对荧光PCR熔解曲线法用于β-地中海贫血(β-地贫)基因诊断和产前诊断进行临床评价.方法 收集2011年1至8月柳州市妇幼保健院外周血标本451份,其中经血液学表型分析为β-地贫阳性表型标本372份,β-地贫阴性表型标本79份.同时收集2011年6至9月夫妇双方经PCR-RDB探针法确诊为β-地贫基因携带者,在我院行β-地贫产前诊断的胎儿绒毛、羊水及脐带血标本共84份,其中孕10～ 13周胎儿绒毛标本16份、孕16 ～24周羊水标本64份、孕17周以上胎儿脐血标本4份.按双盲对照试验,分别采用荧光PCR熔解曲线法(可检测24种β珠蛋白基因突变)、PCR-反向点杂交(RDB)探针法(可检测17种β珠蛋白基因突变)和DNA测序法同时对451份外周血标本和84份胎儿绒毛、羊水、脐带血产前诊断标本进行检测.计算荧光PCR熔解曲线法和PCR-RDB探针法、DNA基因测序法检测结果的野生型符合率、突变型符合率和总符合率.结果 利用荧光熔解曲线法在451份外周血标本中共检出13种突变类型、19种基因型,其中有447份标本与PCR-RDB探针法的基因型检测结果相符,符合率为99.1％ (447/451),902个等位基因位点检出符合率为99.6％(898/902),有4份标本与PCR-RDB探针法的基因型检测结果不相符,经DNA测序法验证,有3份标本与荧光熔解曲线法的检测结果完全一致,1份标本的β珠蛋白基因突变不在荧光熔解曲线法检测范围而未被检出.450份外周血标本的荧光熔解曲线法检测结果与DNA测序法相符,符合率为99.8％ (450/451).利用荧光熔解曲线法在84份产前诊断胎儿标本中共检出8种突变类型、18种基因型,168个等位基因位点的检测结果与PCR-RDB探针法和DNA基因测序法检测结果符合率为100％.结论 荧光PCR熔解曲线法可同时检测多份待测标本,并可准确检出多种基因突变类型,可用于β-地贫的基因诊断和产前诊断.     

284例珠蛋白生成障碍性贫血产前基因诊断结果分析

目的 对284例珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)产前基因诊断结果进行回顾性分析.方法 缺失型α地贫的产前诊断采用跨越断裂点PCR技术,非缺失型α地贫和β地贫的产前诊断采用反向斑点杂交技术进行检测.产前基因诊断完成6～8个月后,实验室检测的284例样本均由产前诊断科医生进行随访.结果 284例产前诊断样本均来自清远地区,α地贫基因共检测215例,其中产前诊断严重类型地贫47例(21.86％),包括重型α地贫36例(16.74％)和中间型α地贫11例(5.12％),轻型α地贫111例(51.63％),正常基因型αα/αα57例(26.51％);β地贫基因共检测52例,其中严重类型β地贫17例(32.08％),轻型β地贫20例(35.09％),正常基因型αα/αα15例(28.30％).复合型地贫17例,检出重型α地贫1例(6.67％),重型β地贫1例(6.67％),中间型α地贫复合轻型β地贫1例(6.67％),轻型α地贫复合轻型β地贫14例(82.35％).3例样本结果为轻型α地贫同时合并18三体综合征.37例重型α地贫、9例中间型α地贫、18例严重类型β地贫和3例轻型α地贫伴随18三体综合征,均在知情同意和自愿选择的原则下接受了终止妊娠的处理.结论 地贫高风险夫妇进行产前基因诊断,可有效检出严重类型地贫患儿,并能有效地防止重症地贫患儿的出生.     

91例同型地中海贫血基因携带者产前基因检测结果分析

目的回顾分析91例同型地中海贫血(简称地贫)基因携带者的产前基因检测结果,以提供有效的遗传咨询。方法选取2016年1月—2017年12月在南宁市第二人民医院进行常规产前检查或优生遗传咨询的孕妇及其配偶,确诊受检夫妻双方均为α-地贫基因携带者74对,均为β-地贫基因携带者13对,一方为复合α-、β-地贫基因携带者4对。抽取羊水样本,并提取基因组DNA。采用跨越断裂位点聚合酶链反应(Gap-PCR)和聚合酶链反应反向斑点杂交(PCR-RDB)对羊水样本进行缺失型和突变型检测,并同时进行染色体核型分析。结果在74对α-地贫基因携带者夫妻中--SEA/αα的比例最高(36.5%),其次为--SEA/--SEA(14.9%)、-α3.7/αα(9.5%)、αWSα/αα(6.8%)。13对β-地贫基因携带者夫妻中杂合子突变占61.5%,双重杂合子突变占23.1%,纯合子突变占7.7%。4对复合α-、β-地贫基因携带者夫妻中均检出复合α-、β-地贫基因型胎儿。15例重型地贫胎儿均进行了引产。结论对地贫高发地区育龄夫妻进行孕前地贫筛查和产前地贫基因检测是防止重症地贫患儿出生的关键。     

广西壮族地区β-珠蛋白生成障碍性贫血产前诊断分析

目的：预防和控制广西地区β-珠蛋白生成障碍性贫血患儿的出生。方法1058对夫妇均为β-珠蛋白基因突变者，在孕早期取胎儿绒毛组织，孕中期取脐血或羊水，孕晚期取脐血；对羊水细胞和绒毛组织进行原位培养，脐血进行血液学和血红蛋白分析，分别采用培养前后的组织或脐血进行β-珠蛋白基因检测。结果1068例胎儿中检出β-珠蛋白生成障碍性贫血胎儿253例，携带者500例，正常胎儿315例。所有β-珠蛋白生成障碍性贫血胎儿均终止妊娠。结论在组织培养和血液学指标检测的基础上，基因检测能准确地对所有β-珠蛋白基因突变进行产前诊断，有效地避免了β-珠蛋白生成障碍性贫血患儿的出生。     

地中海贫血产前基因诊断中的护理配合

目的通过对地中海贫血(地贫)高危孕妇的产前基因诊断,早期发现重症地贫胎儿,以达到优生目的。方法通过Gap-PCR和RDB技术及配合临床医护人员介入,对高危孕妇113例进行α地贫和β-地贫基因诊断。产前诊断术前、术中、术后给予护理配合,解释和心理安慰。结果113例地贫家系中,完全正常胎儿32例,α地贫杂合子14例,β地贫杂合子43例,血红蛋白H病3例,重症胎儿21例。重症胎儿中α地贫5例,β地贫16例。重症总检出率18.6%。结论地贫高危孕妇在与护理良好配合中进行产前基因诊断,可取得更好临床疗效。     

应用多重等位基因特异性PCR技术对β地中海贫血进行产前诊断

为研究β地中海贫血（β地贫）产前诊断的新途径，应用多重等位基因特异性多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术对１０例有重型β地贫风险的胎儿进行了产前诊断。将相应于－２８Ａ→Ｇ，ＣＤ１７→０，ＣＤ４１－４２（－４ｂｐ），ＣＤ７１－７２（＋Ａ）和ＩＶＳ－Ⅱ－６５４Ｃ→Ｔ等中国人最常见的五种β地贫突变类型的五组扩增引物组合成一个ＰＣＲ体系，以羊水细胞以及父母的ＤＮＡ为模板进行多重等位基因特异性扩增，结果显示：４例胎儿为２种不同突变类型复合杂合子，２例胎儿为一种突变类型的纯合子，３例胎儿为一种突变类型的杂合子，还有１例为正常胎儿。所有产前诊断的结果均与ＰＣＲ／等位基因特异性寡核苷酸探针点杂交或ＤＮＡ测序结果一致。该方法为β地贫的产前诊断提供了一种简便、快速和可靠的新途径。     

一个HPFH复合β地中海贫血家系的基因分析及其高危胎儿的产前基因诊断

目的调查一种缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征（ＨＰＦＨ）的基因型和表型的关系;探索进行β地中海贫血（地贫）复合这种缺失型ＨＰＦＨ的高风险胎儿的快速产前诊断方法。方法用跨越断裂点的三引物聚合酶链反应直接分析法检测ＨＰＦＨ缺失突变;用反向点杂交技术筛查β地贫基因突变。结果发现先证者（中间型地贫患儿）为一种缺失型ＨＰＦＨ和β地贫双重杂合子,其ＨＰＦＨ基因自母方遗传,在该家系三代６名成员中共检测到４例携带了这一基因;β地贫基因［密码子１４１５（＋Ｇ）移码突变］自父方遗传。在此基础上,我们对该家庭的中间型地贫高风险胎儿进行了产前基因诊断,结果显示胎儿的基因型与先证者完全相同,为ＨＰＦＨ和β地贫双重杂合子,故建议终止妊娠。人工流产后取样分析进一步证实了产前诊断的结果。结论这是国内首次完成并报告的对由ＨＰＦＨ基因与β地贫点突变双重杂合导致的中间型地贫高风险胎儿的产前诊断。所采用的技术简便、快速,可用作解决同类事件的参考。     

胎儿细胞及游离DNA穿越胎盘的实验研究

目的 从胎盘组织中寻找胎儿细胞及其游离DNA穿越胎盘屏障的实验室证据,为利用孕妇外周血进行无创性产前基因诊断提供实验依据。方法 分娩胎盘组织22份(男婴的12份,女婴的10份),切片,平行分为2组。一组HE染色,光镜观察绒毛中胎儿细胞的分布;另一组用Dig-碱性磷酸酶标记男性性别特异性标记物SRY(sex determining region)基因扩增片断制成探针,通过原位杂交鉴定胎盘绒毛内特别是绒毛间隙是否存在相应的游离DNA。阳性对照由男性外周血有核细胞涂片经原位杂交提供。结果 HE染色光镜观察,22例胎盘组织切片可见胎儿细胞有穿越绒毛毛细血管内皮和滋养层基膜的现象;胎盘组织原位杂交结果显示：分娩男婴的12份胎盘切片的绒毛毛细血管腔内、绒毛滋养层基膜边缘、以及绒毛间隙,可见阳性信号;分娩女婴的10份胎盘切片均无阳性信号出现;阳性对照涂片杂交后可见清晰阳性信号。结论 胎盘组织切片HE染色、镜检观察胎儿细胞分布,结合原位杂交技术鉴定绒毛内、绒毛问隙游离核酸的性质,可以初步反映胎儿微量遗传物质穿越胎盘进入母亲血液循环的过程。     

86例胎儿地中海贫血产前基因诊断分析

目的探讨产前基因诊断在避免重型地中海贫血儿出生中的临床意义。方法夫妇同型地中海贫血孕妇86例,采用裂隙PCR及PCR结合反向点杂交法对α地中海贫血进行产前基因诊断,采用PCR结合反向点杂交法对β地中海贫血进行产前基因诊断。结果正常基因型14例（16.28%）,α地中海贫血55例（63.95%）（其中Bart’s水肿胎7例）,β地中海贫血15例（17.44%）（其中重型4例）,αβ复合型地中海贫血2例（2.33%）（其中重型1例）,15例胎儿于诊断后1周内终止妊娠,71例胎儿出生,出生后诊断结果与产前诊断结果相符。结论对同型地中海贫血基因携带者进行产前诊断可有效预防Bart’s水肿胎和重型β地中海贫血患儿出生。     

羊水细胞低密度脂蛋白受体基因突变分析在家族性高胆固醇血症产前诊断中应用

目的探讨羊水细胞低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor,LDLR）基因突变分析在家族性高胆固醇血症（familial hypercholesterolemia,FH）产前诊断中的应用价值。方法 3例曾生育FH重症患儿并再次妊娠的妇女及其核心家系成员,提取其外周血基因组DNA,筛查LDLR基因突变;于妊娠16～20周在超声引导下行羊膜腔穿刺术抽取羊水,提取胎儿脱落细胞DNA,分别对家系存在的LDLR基因突变进行检测,判断胎儿是否为重症FH。结果 3个家系均符合FH诊断,并分别在LDLR基因检测到2个互不相同的杂合突变位点;胎儿LDLR基因核苷酸序列分析证实,1号家系胎儿仅携带该家系1个突变位点判断为杂合（轻症）,2号家系胎儿携带该家系2个突变位点判断为复合杂合（重症）,3号家系胎儿未检到该家系的突变位点推测为正常个体。结论 FH孕妇羊水脱落细胞LDLR基因分析安全有效,可尽早发现FH纯合子患儿。     

QF-PCR在5358例地中海贫血产前诊断中对常见染色体病的诊断价值

目的:研究荧光定量PCR(Quantitative Fluorescent Polymerase Chain Reaction,QF-PCR)技术在地中海贫血(简称地贫)产前诊断病例中对常见非整倍体染色体的检测作用,了解此方法的运用对地中海贫血产前诊断,同时快速排除胎儿常见染色体病的诊断价值。方法:回顾分析2015年1月~2017年1月因夫妇双方为同型地贫在我院医学遗传中心行介入性产前诊断(取样标本包括绒毛、羊水与脐血)检测胎儿地贫基因,同时行QF-PCR快速诊断常见染色体数目异常的5 358例产前诊断结果。总结常见非整倍体染色体病在这组人群的检出率,QF-PCR异常而地贫基因正常或轻型的病例再次行胎儿染色体核型分析验证。结果:5 358例地贫产前诊断标本中,所有样本均同时行QF-PCR检测,选用STR(Short Tandem Repeat,STR)位点排查胎儿常见染色体非整倍体异常(13、18、21、X与Y染色体),共检测出染色体异常占0.47%(25/5 358),其中4例合并重型地贫,胎儿引产未行染色体核型分析,其余21例均行染色体核型分析确诊结果一致。结论:QF-PCR技术定量分析STR多态性位点能准确、快速诊断常见非整倍体染色体病,是产前诊断中不可缺少的重要检验方法,在常规地贫产前诊断病例中运用能避免漏诊染色体异常胎儿。     

广州地区婚前孕前人群珠蛋白生成障碍性贫血基因检测结果分析

目的　了解广州地区婚前和孕前人群珠蛋白生成障碍性贫血的基因突变类型和构成比,并对其防控效果进行探 讨。方法　选取2018 年参加广州市免费婚前和孕前优生健康检查项目中血细胞检测初筛阳性夫妇12 572 对,进行血红 蛋白电泳及基因检测。随访高风险家庭至孕后,并追踪其产前诊断结果。结果　①经基因确诊珠蛋白生成障碍性贫血携 带者10 209 例,其中α- 为7 026 例,β- 为2 805 例,αβ 复合型为378 例。② α- 珠蛋白生成障碍性贫血基因以缺 失型为主,基因型以--SEA/αα 为主,占64.59％,β- 珠蛋白生成障碍性贫血基因型以CD41-42/N 为主,占38.97％。 ③在αβ 复合型珠蛋白生成障碍性贫血携带者中共检出46 种基因型,以--SEA/αα 和CD41-42/N 双重杂合子最常见, 占19.84％。④ 478 个高风险家庭中已孕197 个,最终确诊重型珠蛋白生成障碍性贫血胎儿42 例,均知情选择终止妊娠。 结论　广州地区是珠蛋白生成障碍性贫血的高发区,对婚前和孕前人群开展珠蛋白生成障碍性贫血筛查, 可更有效预防 重型珠蛋白生成障碍性贫血患儿出生。     

两广交界地区中重型珠蛋白生成障碍性贫血胎儿基因突变特征及妊娠结局分析

目的探讨产前诊断中重型珠蛋白生成障碍性贫血的类型及分布特征,为珠蛋白生成障碍性贫血防控提供咨询依据。方法对近年来在该院就诊的1274例夫妇为同型珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者的孕妇行羊膜腔穿刺术获取胎儿羊水细胞,并进行珠蛋白生成障碍性贫血基因检测与细胞遗传学检查。结果1274例珠蛋白生成障碍性贫血基因产前诊断结果中,共检出320例中重型珠蛋白生成障碍性贫血,占总检人数的25.1%。--SEA/--SEA、--SEA/-α3.7、--SEA/-α4.2、--SEA/αCSα为主要的中重型α珠蛋白生成障碍性贫血基因类型,而重型β珠蛋白生成障碍性贫血基因类型多样,其分布则以βCD41-42/βCD41-42、βCD41-42/βCD17、βCD41-42/βIVS-Ⅱ-654、βCD41-42/β-28、βCD17/β-28、βCD41-42/βCD71-72为主,这10种基因类型占总检出中重型珠蛋白生成障碍性贫血的84%,该地区α合并β珠蛋白生成障碍性贫血携带者的比例为18%。产前诊断胎儿为重型珠蛋白生成障碍性贫血的检出率为7.60%。珠蛋白生成障碍性贫血产前诊断标本中检出16例染色体异常核型,检出率为1.26%。结论利用珠蛋白生成障碍性贫血产前基因诊断可检出中重型珠蛋白生成障碍性贫血胎儿,降低出生缺陷儿的发生率。同型珠蛋白生成障碍性贫血携带夫妇产前诊断时应建议同时行细胞染色体检查,避免染色体患儿的出生。     

诊断超声对人体宫内绒毛细胞DNA的影响

将６０名早期孕妇随机分成照射组（用Ｂ型超声诊断仪照射宫内孕囊１０分钟）与对照组）未经照射），均行人工流产取绒毛组织。以碱性解链作用与羟基磷灰石层析分离绒毛细胞单链、双链ＤＮＡ，并以紫外分光光度法定量。结果表明，照射组与对照组间，绒毛细胞单链、双链ＤＮＡ量及百分含量均无显著性差异（Ｐ＞０．０５），提示该实验用诊断超声未引起绒毛细胞ＤＮＡ单链、双链断裂。     

PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的应用价值

目的:探讨PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的临床价值.方法:选取2016年1月-2019年8月在中山大学附属第一医院进行常规产前检查或优生遗传咨询的孕妇及其配偶1 001例,受检夫妻双方均为地中海贫血基因携带者,适时抽取羊水等样本,提取基因组DNA,采用PCR-流式荧光杂交技术和传统多重Gap-PCR...