超氧化物岐化酶参与p38 MAPK介导的肢体缺血预处理对大鼠全脑缺血的保护作用(英文)

目的探讨超氧化物岐化酶(SOD)在p38有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)介导的肢体缺血预适应(LIP)脑保护中的作用。方法永久凝闭椎动脉的Wistar大鼠,重复夹闭双侧股动脉3次(每次10min,间隔10 min)作为LIP,之后即刻夹闭双侧颈总动脉8 min造成全脑缺血。SB 203580+LIP+脑缺血组于LIP前30min侧脑室内注射p38 MAPK抑制剂SB 203580 (100μmol·L-1, 25μL)。黄嘌呤氧化酶法测定海马SOD活性,硫代巴比妥酸法测定海马丙二醛(MDA)含量,硫堇染色观察海马的组织学分级。结果LIP显著抑制脑缺血引起的海马CA1区SOD活性下降、MDA含量增加及延迟性神经元死亡。预先侧脑室注射SB 203580显著阻断LIP对缺血脑组织的上述保护作用。结论 SOD可能作为p38 MAPK的下游分子参与LIP诱导的脑缺血耐受。     

p38 MAPK信号通路在异氟醚诱导新生大鼠海马神经细胞凋亡的作用

目的探讨异氟醚麻醉对新生大鼠海马组织的p38丝裂原活化蛋白激酶通路(mitogen-activated protein kinase,MAPK)激活的影响,以及p38 MAPK信号通路对异氟醚诱导海马神经细胞凋亡的影响。方法 48只出生后7 d的新生大鼠随机分为DMSO对照组(Air+DMSO组)、p38 MAPK抑制剂SB203580对照组(Air+SB20组)、异氟醚+DMSO组(Iso+DMSO组)和异氟醚+SB203580组(Iso+SB20组)。对照组吸入空气,异氟醚组吸入体积分数为0.011异氟醚4 h。麻醉前30 min,分别侧脑室注射SB203580(20 nmol)或者体积分数为0.1 DMSO 5μl。麻醉结束后6 h,部分幼鼠灌注取脑,TUNEL荧光染色检测幼鼠脑海马CA1区神经细胞凋亡(n=6);部分幼鼠取新鲜脑海马,Western blot法检测磷酸化p38(phospho-p38,p-p38)、p38、cleaved caspase-3、磷酸化NF-κB(phospho-NF-κB,p-NF-κB)、Bcl-2、Bax等蛋白表达的变化(n=6)。结果 Iso+DMSO组海马CA1区TUNEL阳性细胞数比Air+DMSO组增加了4.8倍(P<0.01),与Iso+DMSO组相比,Iso+SB20组海马CA1区TUNEL阳性细胞数降低了约3/5(P<0.01);Iso+DMSO组海马cleaved caspase-3蛋白表达较Air+DMSO组表达增加(P=0.003),Iso+SB20组减少了异氟醚引起的海马cleaved caspase-3增加(P=0.007);与Air+DMSO组比较,异氟醚增加了p-p38及其下游p-NF-κB的表达,增加了Bax的表达,降低了Bcl-2的表达;而p38抑制剂SB203580则减少了异氟醚引起的pp38、p-NF-κB和Bax的增加,增加了Bcl-2的表达。结论异氟醚通过激活p38 MAPK信号通路诱导发育期大鼠海马神经细胞凋亡。     

SP600125对大鼠脑缺血再灌注神经元的保护作用

目的探讨SP600125-JNK特异性抑制剂对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤的保护性作用及其作用机制。方法雄性SD大鼠54只,体重230～250g,随机分成假手术组(SH组),缺血再灌注组(IR组)和JNK抑制剂SP600125组(SP组),每组根据再灌注时间分为30min、24h和72h3个亚组,每亚组6只动物。采用4-VO法建立SD大鼠脑缺血模型,三组于缺血前30min侧脑室注射DMSO,DMSO及JNK抑制剂SP600125(溶媒采用DMSO),容积均为10μl;脑缺血再灌注后30min、24h、72h免疫组织化学方法测定各时间点海马CA1区Bcl-2和Bax蛋白表达阳性细胞数量,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞。结果缺血再灌注使海马CA1区Bcl-2和Bax阳性锥体细胞数目表达增加,再灌注24h阳性锥体细胞数目表达至高峰(P<0.01),再灌注24～72h可见阳性锥体细胞数目表达减少(P<0.05)。其中SP组Bcl-2阳性锥体细胞数目显著多于IR组(P<0.05),而Bax阳性锥体细胞数目显著小于IR组(P<0.05)。脑缺血再灌注后海马CA1区神经元存活数目SP组高于IR组(P<0.01),凋亡细胞数目低于IR组(P<0.01)。结论 SP600125对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤具有保护作用。     

缺血预处理对全脑缺血大鼠脑组织超微结构及细胞凋亡的影响

目的：为探讨脑缺血预处理对全脑缺血大鼠脑组织超微结构及细胞凋亡的影响。方法：本文以Wistar大鼠为受试对象,筛选后144只大鼠随机分为正常对照组(24只)、假手术组(24只)、脑缺血预处理对照组(32只)、脑缺血组(32只),脑缺血预处理组(32只)5组和术后12、24、48、72h四个时间点。采用“4-动脉阻断”方法建立大鼠全脑缺血模型,脑缺血后大脑皮层、海马CA1区HE染色观察组织形态学变化、电镜观察组织超微结构,原位末端标记(TUNEL染色)法检测神经元凋亡。结果：正常组、假手术组、脑缺血预处理对照组大脑皮层、海马CA1区无形态学改变,未见有细胞凋亡。脑缺血组大脑皮层、海马CA1区神经元缺失明显,12h、24h、48h、72h神经元凋亡逐渐加重。与脑缺血组相比,脑缺血预处理组大脑皮层、海马CA1区神经元损伤小,水肿程度轻,神经元形态恢复快,凋亡细胞数目少。结论：脑缺血预处理对全脑缺血大鼠大脑皮层、海马CA1区神经元具有保护作用,可以抑制全脑缺血大鼠大脑皮层、海马CA1区神经元凋亡。     

3-硝基丙酸预处理诱导沙土鼠脑缺血耐受与海马星形胶质细胞的激活

目的：探讨海马区星形胶质细胞的激活与3－硝基丙酸（3－NPA）预处理诱导脑缺血耐受的关系。方法：阻断沙土鼠双侧颈总动脉造成前脑缺血模型，通过HE染色和免疫组化观察海马锥体细胞死亡和星形胶质细胞的反应。结果：对照组海马CA1区已失去正常结构，锥体细胞大部分丧失，存活神经元计数显低于假手术组。3－NPA预处理组存活神经元减少，但高于对照组，假手术组海马CA1区仅见少量胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性细胞，染色较弱，突起不明显，对照组海马CA1区GFAP阳性细胞增多，多为弱阳性。3－NPA预处理组海马CA1区GFAP阳性细胞数目明显增多，染色较深，突起增粗。结论：星形胶质细胞形态和机能的改变可能与3－硝基丙酸预处理诱导脑缺血耐受有关。     

JNK信号通路参与Aβ毒性对大鼠海马神经元的损伤

目的探讨β-淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)毒性对大鼠海马神经元的损伤以及JNK信号转导通路在此过程中的作用。方法应用Aβ1-40注射大鼠双侧海马CA1区建立毒性损伤模型,通过HE染色、Nissl染色、TUNEL染色、免疫组化法、透射电镜并结合图像分析技术研究海马的病理学变化以及神经元的存活与凋亡、超微结构及p-JNK阳性细胞率。结果与对照组比较,大鼠注射Aβ后,海马CA1区锥体细胞排列松散,数目减少,神经元固缩、浓染,胶质细胞明显增生,超微结构可见明显凋亡特征,TUNEL阳性细胞数明显增多(P<0.01),p-JNK阳性细胞比例明显升高(P<0.01)。结论 Aβ可明显诱导海马神经元凋亡,JNK信号转导通路参与了Aβ的神经毒性损伤作用。     

白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用和机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用及其机制。方法♂SD大鼠60只,随机分为假手术组(Sham)、缺血/再灌注组(I/R)、白藜芦醇预处理组(Res+I/R),每组20只。采用线栓法阻断大脑中动脉血供90 min,拔出栓线造成局部脑区缺血/再灌注损伤。Res+I/R组缺血前1 h腹腔注射白藜芦醇(30 mg·kg-1)。缺血/再灌注后第5天,TUNEL法原位标记海马CA1区凋亡的神经元细胞,免疫组化法检测海马CA1区PI3K、p-Akt及Caspase-3的表达。结果 TUNEL染色结果显示,与I/R组相比较,白藜芦醇预处理明显减少脑缺血/再灌注损伤所引起的大鼠海马CA1区神经元凋亡(P<0.05);免疫组织化学结果显示,与I/R组相比,白藜芦醇预处理使海马CA1区PI3K、p-Akt表达明显增多(P<0.05),Caspase-3表达明显减少(P<0.05)。结论缺血前1 h白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡具有保护作用,其主要作用机制可能是通过激活PI3K-Akt信号通路进而抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的表达有关。     

三七制剂对血管性痴呆大鼠海马神经元ERK的影响

目的:探讨三七制剂对血管性痴呆大鼠海马神经元ERK的影响。方法:采用改良2-VO即不同时间点分别永久性结扎左右颈总动脉的方法制备血管性痴呆大鼠动物模型;将24只Wistar雄性大鼠分为四组:正常对照组、假手术组、血管性痴呆组和三七制剂灌胃组;制作实验大鼠脑组织标本,通过HE(苏木精-伊红)染色、免疫组织化学染色方法进行观察比较。结果:①各组大鼠海马CA1区HE染色:假手术组大鼠海马HE染色观察CA1区锥体细胞体积完整,排列规则,胞核呈圆形或椭圆形,核仁显现明显,染色质质地均匀,细胞数量多,相比较模型组大鼠锥体细胞破碎不完整,坏死明显,结构松散,排列紊乱,细胞数量明显减少;治疗组大鼠正常细胞胞核呈圆形或椭圆形、核仁清晰、染色质丰富、排列较密,少见固缩变性的神经元,神经元数量较多。②各组大鼠海马CA1区免疫组化海马ERK结果:痴呆组大鼠海马CA1区神经元ERK的表达量与正常对照组和假手术组相比较,有明显降低(P<0.01);治疗组大鼠海马CA1区神经元ERK的表达量较痴呆组升高,与正常对照组和假手术组相比较ERK的表达量降低(P<0.01)。结论:三七制剂可减少血管性痴呆大鼠海马神经元的缺血坏死,减轻脑组织的不可逆损害,具有神经元保护作用,ERK参与血管性痴呆的发生发展过程。     

亚低温对沙土鼠海马CA1区缺血后细胞凋亡的影响

目的 探讨亚低温对沙土鼠短暂性脑缺血后海马CA1区细胞凋亡的影响。方法 阻断沙土鼠双侧颈总动脉15分钟造成前脑缺血模型。实验动物随机分为假手术组、缺血再灌注组、亚低温治疗组。用光镜观察海马CA1区的神经元死亡过程．采用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡的神经元。结果 脑缺血后．海马CA1区锥体神经元于再灌注后2～7天死亡,再灌注第3天神经元开始凋亡．第5天达高峰。亚低温治疗抑制了缺血后海马CA1区神经元的死亡及细胞凋亡。结论 亚低温治疗对脑缺血后的神经元具有保护作用．并可抑制神经细胞凋亡的发生。     

亚硒酸钠对沙土鼠海马CA1区神经元缺血/再灌注损伤的影响

目的探讨亚硒酸钠对沙土鼠海马CA1区神经元缺血/再灌注损伤的影响。方法采用夹闭双侧颈动脉法制备沙土鼠前脑缺血/再灌注模型,双重染色,电镜下观察各组海马CA1区神经元的超微结构变化。TUNEL染色光镜下观察和计数凋亡神经元,计算凋亡密度。结果硒处理组沙土鼠脑缺血/再灌注后,神经元超微结构的病理形态损伤减轻,凋亡细胞减少,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论亚硒酸钠对沙土鼠脑缺血/再灌注损伤的海马CA1区神经元超微结构及凋亡细胞具有保护作用。     

槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞p38、iNOS表达的影响

目的探讨槐定碱(sophoridine,SRI)在内毒素导致的炎症反应中的作用。方法采用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,实验细胞分为5组(n=6):空白对照组、LPS组、槐定碱组、SB203580组、SB203580+槐定碱组,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测RAW264.7巨噬细胞p38 mRNA表达量;利用Western blot技术检测RAW264.7巨噬细胞p-p38与iNOS蛋白的表达量。结果槐定碱组与LPS组比较p-p38蛋白表达量和p38 mRNA表达量降低,但高于空白对照组(P<0.01),表明槐定碱可以抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞p-p38蛋白表达和p38 mRNA表达量;与LPS组比较,槐定碱组iNOS蛋白表达量降低,但高于空白对照组(P<0.01),SB203580+槐定碱组iNOS蛋白表达量低于槐定碱组和SB203580组(P<0.01),表明槐定碱可以抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞P38MAPK信号通路下游iNOS蛋白表达,并且与SB203580有协同作用。结论槐定碱可以通过抑制p38MAPK位点而下调p-p38、iNOS蛋白表达而发挥抗炎作用。     

SB203580对大鼠再灌注损伤肺细胞凋亡的干预

目的：探讨P38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）特异性抑制剂SB203580对再灌注损伤肺细胞凋亡的影响。方法：30只SD大鼠随机分为3组：假手术对照（control,C）组,肺缺血／再灌注（I／R）组,肺缺血／再灌注＋SB203580（S组）;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡的改变：免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达;电镜观察肺组织形态学改变。结果：I／R组与C组比较,Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达均明显上调（均P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值显著下降（P〈0．01）,凋亡指数（AI）显著增高（P〈0．01）,肺组织超微结构明显异常;使用SB203580后,Bcl-2蛋白表达上调（P〈0．01）,Bax蛋白表达下调（P〈0．01）,Bel-2／Bax比值上升（P〈0．01）,AI显著下降（P〈0．01）,肺组织超微结构异常改变不同程度减轻。结论：SB203580可通过上调Bcl-2蛋白的表达、下调Bax蛋白的表达、调控Bcl-2／Bax蛋白之间的平衡而减轻细胞凋亡,对肺缺血／再灌注损伤发挥积极的防治作用。     

p38MAPK在戊地昔布诱导Eca109细胞凋亡中的调控作用

目的探讨p38MAPK信号转导途径在戊地昔布诱导食管癌Eca109细胞凋亡中的调控作用。方法将正常培养的人食管癌Eca109细胞随机分为正常对照组、戊地昔布组和戊地昔布+SB203580组;采用流式细胞术和DNA Ladder检测凋亡情况;RT-PCR检测p38mRNA的表达变化;流式细胞术和免疫细胞化学检测p38蛋白的表达变化。结果①戊地昔布能够诱导Eca109细胞发生凋亡,并呈剂量依赖性,而SB203580能够部分降低戊地昔布诱导的Eca109细胞的凋亡率;②戊地昔布能够上调Eca109细胞中p38mRNA和蛋白的表达,而戊地昔布+SB203580组p38mRNA和蛋白的表达下降;③p38蛋白表达与凋亡率呈正相关。结论戊地昔布能够通过部分激活p38MAPK信号途径诱导Eca109细胞发生凋亡。     

选择性COX-2抑制剂NS398干预后对HIBD新生大鼠海马CA1区存活锥体细胞计数的变化

目的研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时应用选择性COX-2抑制剂NS398干预后海马CA1区存活锥体细胞计数的变化。方法于制备新生大鼠左脑的HIBD模型前30min,应用腹部注射NS39820mg/kg,同时建立未注射HIBD组及对照组,于HIBD后7d,测试左侧海马CA1区存活锥体细胞数。结果统计学比较,HIBD组CA1区存活锥体细胞计数显著低于对照组;NS398干预组存活锥体细胞数显著高于HIBD组。结论应用选择性COX-2抑制剂NS398可以减少新生鼠HIBD时锥体细胞缺失。     

硫化氢在SB203580影响肝星状细胞增殖、凋亡中的作用

【摘要】目的 探讨H₂S 在 P38 丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）阻断剂 SB203580 影响大鼠肝星状细胞（HSC）-T6增殖、凋亡中的作用及对Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达的影响。方法设对照组（HSC加含10%胎牛血清的DMEM培养液）、二甲基亚砜（DMSO）组（对照组基础上加DMSO）、NaHS组（对照组基础上加NaHS至最适浓度）、SB组（DMSO组基础上加SB203580至最适浓度）、SB+NaHS组。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定SB203580及H2S对HSC的增殖抑制率（IR）;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术（FCM）检测HSC凋亡率;逆转录PCR法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达。结果SB组（7.64±2.46）、SB+NaHS组（12.71±2.73）细胞凋亡率高于对照组（1.70±0.88）,且SB+NaHS组高于SB组（均P＜0.05）;DMSO组（2.07±1.18）、NaHS组（2.56±1.23）与对照组差异无统计学意义。Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA在各组细胞中均表达,其中NaHS组表达高于对照组（P＜0.05）,且表达量最多,条带最亮、最宽,SB组与SB+NaHS组表达低于对照组和NaHS组（P＜0.05）,表达量较少,条带较暗。结论H₂S激活P38MAPK信号通路,且SB203580特异性阻断P38MAPK信号通路后,H2S刺激的HSC增殖受到抑制,凋亡得到促进。     

丙泊酚对全脑缺血大鼠海马CA1区神经病理学和谷氨酸转运体1表达的影响

目的 观察丙泊酚对全脑缺血大鼠海马CA1区谷氨酸转运体1(GLT-1)表达的影响。方法 采用四血管闭塞法建立全脑缺血模型;脑缺血前3 h静脉输注丙泊酚90 mg·kg^-1,首次剂量(总剂量的1/3)15 min内推注,剩余剂量持续输注1 h。脑缺血再灌注后于0, 12, 24, 48 h和7 d取材。光镜下观察海马CA1区的组织学分级和神经元密度, Western印迹法检测海马CA1区GLT-1的表达。结果 组织学分级结果显示,假手术组及丙泊酚对照组所有动物均为0级,脑缺血模型组有5只动物均为Ⅲ级。丙泊酚+脑缺血组中3只动物的组织学分级为0级,2只动物为Ⅰ级。假手术组及丙泊酚对照组神经元密度分别为185±12及(181±11 )mm^-1。模型组中锥体细胞几乎全部死亡。与脑缺血组相比,丙泊酚+脑缺血组神经元密度为(125±14)mm^-1,说明存活细胞数显著增高(P<0.05)。Western印迹结果显示,与同一时间点的假手术组相比, 脑缺血后12 h,GLT-1的表达显著增强(0.31±0.03 vs 0.38±0.04), 随后逐渐降低,在脑缺血后7 d显著低于假手术组(0.19±0.03 vs 0.29±0.04)。丙泊酚对照组GLT-1的表达保持在较高的水平(0.47±0.05),直到7 d才降至假手术组水平0.29±0.03。在再灌注后24和48 h时,丙泊酚明显逆转脑缺血造成的GLT-1表达的下降, GLT-1表达分别为0.45±0.04 vs 0.29±0.04和0.47±0.05 vs 0.27±0.04(P<0.05),在7 d时与假手术组相当。结论 丙泊酚可保护海马CA1区的锥体细胞抵御缺血打击,并上调了大鼠海马CA1区GLT-1的表达。     

SB203580对大鼠再灌注损伤肺细胞凋亡的干预

目的：探讨P38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）特异性抑制剂SB203580对再灌注损伤肺细胞凋亡的影响。方法：30只SD大鼠随机分为3组：假手术对照（control,C）组,肺缺血／再灌注（I／R）组,肺缺血／再灌注＋SB203580（S组）;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡的改变：免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达;电镜观察肺组织形态学改变。结果：I／R组与C组比较,Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达均明显上调（均P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值显著下降（P〈0．01）,凋亡指数（AI）显著增高（P〈0．01）,肺组织超微结构明显异常;使用SB203580后,Bcl-2蛋白表达上调（P〈0．01）,Bax蛋白表达下调（P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值上升（P〈0．01）,AI显著下降（P〈0．01）,肺组织超微结构异常改变不同程度减轻。结论：SB203580可通过上调Bcl-2蛋白的表达、下调Bax蛋白的表达、调控Bcl-2／Bax蛋白之间的平衡而减轻细胞凋亡,对肺缺血／再灌注损伤发挥积极的防治作用。     

不同时间脑室注射脑源性神经营养因子治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤效果的比较

目的　比较新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后不同时间脑室注射脑源性神经营养因子 (BDNF)对脑损伤的影响。方法　 7d龄SD大鼠左侧颈总动脉结扎后行 8%低氧吸入 2 5h形成缺氧缺血性脑损伤 ,伤后 0、1和 4h分别向脑室注射0 5 μgBDNF ,观察对脑水肿、皮层和海马脂质过氧化物(MDA)水平和细胞凋亡的影响。结果　伤后即刻给予BD NF减轻脑水肿、防止MDA过量产生和细胞凋亡增加的效果最为显著 ,伤后 4h给予效果较差。结论　BDNF对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后的皮层和海马具有显著的保护作用 ,以早期应用效果较为明显     

SB203580对小鼠造血组织辐射损伤的保护作用

目的观察SB203580对接受γ射线照射的C57BL/6小鼠造血组织损伤的保护作用。方法小鼠随机分为对照(Ctr)组、照射(IR)组及SB203580给药(SB)组,以6.0 Gy 137Csγ射线全身均匀照射SB组和IR组的C57BL/6小鼠。收集并计数外周血红细胞、白细胞和血小板,以及单侧股骨骨髓有核细胞(BMMNC);骨髓细胞半固体培养法检测BMMNC增殖能力。另外收集小鼠BMMNC,同样分组,IR组与SB组细胞进行1 Gy体外照射,照射之后孵育过夜,酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果 SB组外周血白细胞、血小板的数量分别比IR组高111.8%和157.7%(P<0.05);SB组BMMNC较IR组高135.4%,CFU-GM高188.5%(P<0.05);SB组BMMNC内ROS较IR组低56.2%(P<0.05)。结论 SB203580对照射造成的小鼠造血组织损伤具有一定的保护作用,这种保护作用可能与其降低照射后细胞内ROS水平有关。