机械压力对人牙周膜成纤维细胞增殖活力的影响

采用细胞加载装置,对细胞分别施加0、0.25、0.5、1.0MPa的压力30min;施加1.0MPa的压力,分别持续10、30、50min,通过四唑盐比色实验(MTT法)检测细胞受力后6、12、18、24、30、36h的OD值。结果:0.25、0.5MPa组的OD值与对照组无显著性差异(P>0.05);1.0MPa压力下,加载30min和加载50min组有显著性差异(P<0.05),表现为受力后6h细胞OD值即明显降低,12h进一步降低,与对照组     

压力作用时间对人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1的影响

目的:探讨压力作用不同时间对人牙周膜成纤维细胞表达TGF-β1的影响.方法:本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加1.0MPa的压力,分别持续1Omin、30min、50min、通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量.结果:加载1Omin组在细胞受力后的各个时段TGF-β1含量与对照组相比无显著性差异(P>0.05).加载30min组(0.51±0.06)和加载50min组(0.46±0.06)TGF-β1含量在细胞受力后的第12h同对照组(0.78±0.08)相比明显降低(P<0.05).结论:在一定加载时间内,人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1量随着压力作用时间的延长而有所降低.     

人牙周膜成纤维细胞的培养及牵张应变诱导凋亡研究

目的:探讨人牙周膜成纤维细胞的分离、培养及在牵张应变作用下发生早期凋亡的情况。方法:刮取健康人前磨牙牙周膜,进行牙周膜成纤维细胞的分离、培养及生长曲线描绘。经3～4代传代培养后,对细胞加载1%～20%的牵张应变,加载时间分别为30min,1h、6h、12h然后通过流式细胞仪检测Annexin V-FITC(异硫氰酸荧光素)及激光扫描共聚焦显微镜进行细胞的早期凋亡鉴定。结果:人牙周膜成纤维细胞传代到12代以后,细胞逐渐呈衰老生状,胞体变大,细胞生长缓慢。人牙周膜成纤维细胞的凋亡率在30min组低于对照组,但两者间无统计学差异。在6h内,人牙周膜成纤维细胞的凋亡情况随加载时间和加载应力的增加而增加(P<0.05)。在12h时所有组的细胞凋亡均减少。结论:人牙周膜成纤维细胞的使用最好在12代以内,尤其是3～4代细胞的活力、增殖能力较好。牵张应变可以诱导细胞发生早期凋亡。     

成骨细胞承受不同大小和不同时间压力后增殖变化的研究

目的探讨不同大小和时间的压应力对成骨细胞的成活以及细胞周期的影响。方法将培养的MC3T3-E1成骨细胞分为加力组和对照组,使用离心机分别给加力组的细胞施加不同大小和不同作用时间的机械压力。用胎盘蓝细胞记数法检测成骨细胞的成活率,并且在成骨细胞受力后0h、24h和4d观察细胞数量的改变,同时使用流式细胞技术检测受力后成骨细胞细胞周期的改变。结果成骨细胞受到100g与200g压力后的增殖速度均大于对照组;持续30min和60min加压后的增殖速度也大于对照组;随着所受压力的增大和时间的延长,成骨细胞S期细胞百分比越高。结论 100g和200g压力以及持续30min和60min的压力能明显增加成骨细胞的增殖,同时细胞周期与细胞加力也有一定的关系。     

机械牵张作用对牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 :观察机械牵张作用对牙周膜成纤维细胞 (PDLFs)增殖能力的影响。方法 :用自行研制的细胞加载系统对PDLFs施以频率为 6次 /min(每次为 5s牵拉、5s松弛 ) ,幅度 12 %的牵张力 ,于加载 2 4、48、96h后 ,通过细胞计数、流式细胞仪检测观察PDLFs增殖能力的改变情况。结果 :在不同的时间点 ,加力组及对照组的细胞数均不断增加 ,在 48h及 96h时加力组结果明显高于对照组。流式细胞仪结果显示在不同时间点加力组处于DNA合成期的细胞数明显高于对照组。结论 :在对培养的人PDLFs施加频率为 6次 /min、幅度 12 %的牵张力时 ,对细胞的增殖起一定的促进作用     

机械压力对人牙周膜成纤维细胞TGF-β1蛋白表达的影响

目的：探明机械压力与人牙周膜成纤维细胞转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）蛋白表达的关系。方法：本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加0kPa、250kPa、500kPa、1000kPa的压力,通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量。结果：加载250kPa组、500kPa组在细胞受力后各个时段TGF-β1含量没有变化;1000kPa组在细胞受力后的第12h,TGF-β1含量显著降低。结论：人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1受到机械压力的调控;在一定载荷作用下,TGF-β1的含量随着压力的增大而有所降低。     

不同离体时间和保存液对犬离体牙牙周膜细胞活力影响的实验研究

目的:探讨完全脱位牙不同离体时间和保存液对牙周膜细胞活力的影响。方法:麻醉拔除犬牙35个,首先将20个牙随机分为5组,分别为室温干燥放置0、30、60、120、240 min组,另15个牙室温干燥放置30 min后,随机分为3组,分别放入牛奶、HBSS液,100 g/L蜂胶液中浸泡2 h。各组处理完成后,采用全牙消化法获得牙周膜细胞,并通过4 g/L台盼蓝染色法检测各组牙周膜活细胞数和存活率。结果:室温干燥放置30、60、120、240 min后,牙周膜细胞存活率依次为33.6%、23.6%、18.5%、0.8%,而0 min的牙周膜细胞存活率可达95.5%。拔后30 min,经牛奶、HBSS液和100 g/L蜂胶液中保存2 h后,牙周膜细胞均有活力,其细胞存活率大小依次为100 g/L蜂胶液、HBSS液和牛奶,其中100 g/L蜂胶液与HBSS液相比无统计学差异(P>0.05),但与牛奶组相比,均有统计学差异(P<0.05)。结论:随着离体时间延长,完全脱位牙根面牙周膜细胞活力明显下降。100 g/L蜂胶液和HBSS液保存犬牙牙周膜细胞活力优于牛奶液。     

静压力对体外人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究静压力对体外人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)增殖活性的影响。方法用静压力加载装置对第4代HPDLFs分别施加0、15、30、45 kPa的持续性静压力,加力时间为1 h。加力后采用流式细胞术及噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察HPDLFs增殖活性。结果流式细胞术检测结果显示0、15、30 kPa静压力下HPDLFs增殖指数分别为(40.11±0.59)%、(49.89±0.75)%、(55.77±1.57)%,呈递增趋势(P<0.05);静压力达到45 kPa时,HPDLFs增殖指数有所降低,为(35.35±0.85)%。MTT法检测结果显示在0、15、30 kPa静压力下吸光度值分别为0.30±0.04、0.35±0.05、0.40±0.07,呈递增趋势(P<0.05);静压力达到45 kPa时,吸光度值有所降低,为0.25±0.04。结论适当大小的静压力能促进HPDLFs的增殖,过大的静压力会抑制HPDLFs的增殖。     

周期性动态压力对人牙周膜干细胞中力生长因子表达的影响

目的:探讨周期性动态压力对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)膜片中力生长因子(MGF)表达的影响。方法:取第3代h PDLSCs及其膜片,并按照不同压力将其随机分为0(对照)、0~90、0~120、0~150 KPa组后,置于细胞压力加载室内以0.1 Hz频率连续加载1 h。分别于加压后0、12、24、36 h各时间点,用CCK-8法检测各组细胞的增殖;RT-PCR法检测各组h PDLSCs膜片中MGF、ALP、Col-ⅠmRNA的表达。结果:0~120 KPa组可显著促进h PDLSCs增殖(P<0.05),其次为0~150 KPa组;各周期性动态压力作用于h PDLSCs膜片后12 h均能明显上调其MGF mRNA表达水平(P<0.05),受力后24 h达到峰值;36 h后表达水平下降,除0~120 KPa组仍明显高于对照组(P<0.05)外,其他两组均回到对照组水平。其中以0~120 KPa组的MGF mRNA表达水平最高(P<0.05),且在该压力条件下还能明显促进h PDLSCs膜片中Col-Ⅰ、ALP mRNA的表达(P<0.05)。结论:0~120 Kpa/1 h周期性动态压力能促进h PDLSCs膜片中MGF mRNA的表达,促进该细胞的增殖与分化潜能。     

模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响

目的：观察模拟咬合压力对人牙周膜成纤维细胞环氧化酶-2(COX-2)基因表达的影响。方法：原代培养人牙周膜成纤维细胞，应用可控压力细胞加载装置模拟咬合压力，分别施加30、60、90kPa的间歇性压力，每次15min，每天3次，在3、5d后提取细胞总RNA，定量后点于尼龙膜上，同时利用引物扩增COX-2基因的一段特异性片段作为cDNA探针，将探针同位素标记后与膜杂交，以观察COX-2在mRNA水平表达的变化。结果：加载模拟咬合压力的人牙周膜成纤维细胞COX-2表达水平明显高于对照组，而且在一定范围内表达水平与加压力值成剂量依赖关系；各加压组加压3d与5d之间细胞COX-2mRNA表达无明显差异。结论：加载模拟咬合压力条件下培养的人牙周膜成纤维细胞COX-2基因表达增高。     

人牙周膜成纤维细胞增殖与压力关系的初步观察

目的：在体外培养环境下观察压力对人牙周膜成纤维细胞（HPLF）增殖的影响。方法：取第4－6代培养的HPLF,应用可控压力细胞加载装置分别间断性施加30、60、90kPa的压力,分别在培养3、5、7d后用MTT法测定各组的A值。结果：HPLF在30、60、90kPa的压力培养环境下MTT反应的A值显著小于对照组,压力值越大,A值越小。结论：30、60、90kPa间断性压力显著抑制PLF细胞增殖,该抑制作用随压力值增大而增强。     

静态张应力作用下人牙周膜成纤维细胞β-catenin和Wnt3a蛋白的表达

目的:研究人牙周膜成纤维细胞在不同大小机械张应力作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化。方法:运用酶解组织块法体外培养人牙周膜成纤维细胞,将细胞按加力时间的不同(2 h、4 h、6 h)分为3组,每组再按形变率不同将其分为8%、12%和16%3个亚组,并取加力时间0h、形变率0%作为对照组。用western blot技术检测细胞在不同时间点和不同形变率作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化。结果:Western blot结果显示,人牙周膜成纤维细胞在机械力加载后β-catenin 和Wnt3a蛋白表达显著减少(P<0.05)。在加力时间相同的组内(2 h、4 h、6 h),β-catenin 和Wnt3a蛋白表达随着形变率的增大而逐渐减少(P<0.05)。结论:β-catenin和 Wnt3a参与了静态张应力作用下牙周膜成纤维细胞的代谢,机械力对牙周膜成纤维细胞中Wnt/β-catenin信号通路有抑制作用。     

bFGF与米贝拉地尔对人牙周膜成纤维细胞增殖的调节

目的:研究成纤维细胞生长因子(bFGF,以下用B代表)与米贝拉地尔(Mibefradil,以下用M代表)这两种药物对人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)增殖的调节作用。方法:B分10.0、20.0、30.0 μg/L 3种浓度(分别为B1、B2、B3),M分2.5、5.0、10.0 μmol/L 3种浓度(分别为M1、M2、M3),再按加药时间分为1 d组、2 d组和3 d组,用WST法检测两种药物单独使用和按先后不同顺序联合使用后HPLFs的增殖率。结果:两种药物单独使用可分别起到促进和阻滞细胞增殖的效果,但是B作用时间过长细胞表现为增殖受阻滞。其中,B3作用1 d组细胞增殖率最高(P<0.05),M2作用1 d组细胞增殖率最低(P<0.05)。M仅对加用B3的细胞有明显阻滞作用,与单独使用B3的细胞增殖率有显著性差异(P<0.05)。另外,只有B1不能改变细胞加用M后增殖受阻滞的现象。所有联合用药后的细胞增殖率均与正常细胞增殖率无统计学差异。结论:bFGF与Mibefradil单独使用有各自的最佳作用浓度和作用时间。除过度增殖状态外,HPLFs增殖状态很难受到阻滞,并且处于增殖受阻滞状态的细胞很容易恢复增殖状态,以维持HPLFs不断处于增殖平衡状态。     

调合消毒法对藻酸盐印模材消毒效果的研究

目的:研究藻酸盐印模材料与消毒液直接调拌对微生物的杀灭效果。方法:用0.25%NaC lO、0.525%Na-C lO、1?、0.5?、0.25?消毒液调拌藻酸钾印模材制作实验样本,以无菌生理盐水调拌相同材料做阳性对照和阴性对照,分别接种枯草芽胞杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌(以下简称金葡萄)、绿脓杆菌并在接种30 m in和60 m in取样,经培养后计算各组样本的CFU数并进行统计学分析。结果:0.25%NaC lO、0.525%NaC lO、1?、0.5?在30 m in和60 m in均能完全杀灭大肠杆菌和金葡菌,对枯草芽胞杆菌的杀灭率分别为43.6%~46.1%、61.5%~65.6%、63.7%~66.4%、50.0%~54.7%,对绿脓杆菌的杀灭率分别为60.9%~60.9%、68.5%~70.7%、72.2%~74.1%、66.3%~66.8%。而0.25?对大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、金葡菌和绿脓杆菌的杀灭率分别为53.7%~52.7%、29.3%~35.5%、56.0%~60.1%、35.6%~34.9%。统计学分析表明,0.25%NaC lO、0.525%NaC lO、1?、0.5?对4种微生物各自的杀菌效果没有显著性差异,但显著高于0.25?的消毒效果。结论:0.25%NaC lO、0.525%NaC lO、1?、0.5?可完全杀灭大肠杆菌和金葡菌并有效杀灭枯草芽胞杆菌和绿脓杆菌,可用于口腔印模的消毒。     

两种体外培养人牙周韧带成纤维细胞方法比较

目的探索一种在体外短时间内简便、可靠获取大量人牙周韧带成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPLF)、建立稳定的体外培养体系的方法。方法采用酶消化法和组织贴块法进行HPLF体外原代培养及传代培养的对比研究。通过细胞形态学、超微结构观察及波形蛋白和角蛋白免疫组化染色等对细胞进行定性研究;测定细胞生长曲线了解细胞生长基本规律及其增殖能力。结果采用酶消化法和组织贴块法均可成功的进行HPLF连续传代培养。最高传代数为30代。培养的细胞具有成纤维细胞的典型形态,波形蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,生长稳定期倍增时间为48~72h。组织块培养法需培养时间长,原代培养获取的细胞量较少,较难传代。酶消化法可短时间内获取大量细胞,细胞产量高,但操作手续复杂易污染,细胞易受损伤。结论成功建立了一个稳定的HPLF体外培养体系。除常用的组织块法外,胰蛋白酶及胶原酶联合消化法不失为一种简便、快速、可靠的组织原代分离培养方法。     

根管消毒药物体外细胞毒性和细胞回复能力的研究

目的:探讨5种常用根管消毒药物的细胞毒性以及毒性的可逆性,寻找一种较理想的根管消毒药物。方法:用体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPLFs),通过MTT法、ALP活性测定法以及透射电镜等方法,系统评价甲醛甲酚(FC)、樟脑酚(CP)、甲硝唑、氢氧化钙和中药制剂的细胞毒性及其毒性的可逆性。采用SPSS11.5软件包,所有数据均经正态分布检验、方差齐性检验、t检验和方差分析。结果:FC和CP对HPLFs的增殖、ALP活性均有显著抑制作用(P<0.01、P<0.05)。FC的细胞毒性为3～4级,细胞回复度<30%。CP的细胞毒性为1～3级,细胞回复度<30%。甲硝唑对HPLFs的增殖、ALP活性有轻微抑制作用,细胞毒性为1级,细胞回复度为32%～85%。氢氧化钙和中药制剂对HPLFs的增殖和ALP活性均无显著抑制作用(P>0.05),细胞毒性为0～1级,细胞回复度>90%。通过透射电镜观察,HPLFs的超微结构显示,FC、CP有重度毒性,甲硝唑有轻度毒性,而氢氧化钙和中药制剂基本无毒性。结论:FC、CP细胞毒性大,且毒性不可逆;甲硝唑有轻微细胞毒性,但毒性可逆;氢氧化钙和中药制剂无细胞毒性。临床上可用氢氧化钙或中药制剂作为较理想的根管消毒药替代有毒性的FC、CP。     

静态拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞的影响

目的：研究人牙周膜成纤维细胞(PDLF)在机械拉伸应变作用下，细胞和细胞核投影面积及其细胞骨架的改变情况，探讨PDLF的形态、功能和应变之间的关系。方法：采用自制的细胞体外静态机械加载装置用不同的拉伸应变量加力于细胞上，通过激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态及其改变情况，并进行统计分析。结果：在8％、12％、16％力值组，细胞和细胞核投影面积随着加力时间和力值的增加而每天递增，肌动蛋白纤维也随之逐渐增粗，排列更有规律；而在20％力值组，其结果则反之。结论：静态拉伸应变可影响牙周膜成纤维细胞的骨架。