碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓细胞生物学活性的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对体外培养的人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPCs)生物学活性的影响.方法:常规组织块培养法获得HDPCs,采用四唑盐比色(MTT)法、ALP活性检测法观察不同浓度bFGF(0.1、1、10、100 μg/L)对体外培养的HDPC粘附性、伸展性以及ALP活性的影响.结果:不同浓度bFGF均可提高HDPCs粘附性和伸展性,与对照组相比P＜0.05;不同浓度bFGF与HDPCs共同培养一定时间后,均能显著抑制其ALP活性(P＜0.05);并且浓度越高,抑制作用出现的时间越早,100 μg/L组在培养第1天时与对照组相比P＜0.05.结论:0.1 ～ 100 μg/L范围内不同浓度bFGF均能促进HDPCs的粘附性和伸展性,并可抑制HDPCs的ALP活性.     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙髓细胞增殖和迁移的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）对体外培养人牙髓细胞增殖、迁移活性的影响。方法以常规组织块培养法体外获得人牙髓细胞,实验组分别加入终浓度为1.0、5.0、10.0和50.0ng/ml的bFGF,对照组仅加入等量的空白培养基,采用CCK-8法分别测定450nm下各组光吸收度A值,研究bFGF对牙髓细胞增殖活性的影响;应用Transwell小室培养法,研究bFGF对牙髓细胞迁移活性的影响。结果与对照组相比,bFGF在1.0～50.0ng/ml浓度下可促进牙髓细胞的增殖（P〈0.05）,bFGF最低显效浓度为1.0ng/ml,最佳显效浓度为10.0ng/ml。bFGF在1.0～50.0ng/ml浓度下诱导细胞迁移（P〈0.05）。结论 bFGF可诱导体外培养人牙髓细胞的增殖和迁移,在牙髓牙本质复合体修复中可能发挥重要作用。     

骨形成蛋白—2和碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的联合效应

目的了解重组人骨形成蛋白-2（rhBMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单独和联合作用对人牙周膜细胞（PDLC）碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法体外培养人PDLC,分别用不同浓度的rhBMP-2和bFGF单独或联合作用,用酶动力学方法检测PDLC的ALP活性。结果50～200μg/L浓度的rhBMP-2可显著增强人PDLC的ALP活性（P<0.01）,而10μg/L浓度的bFGF可显著抑制人PDLC的ALP活性(P<0.01),rhBMP-2和bFGF联合作用仍可较明显地增强人PDLC的ALP活性（P<0.05）。结论rhBMP-2和bFGF联合应用可增强人PDLC的ALP活性。     

骨形成蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的联合效应

目的 :了解重组人骨形成蛋白 - 2 (rhBMP - 2 )和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)单独和联合作用对人牙周膜细胞 (PDLC)碱性磷酸酶 (ALP)活性的影响。方法 :体外培养人PDLC ,分别用不同浓度的rhBMP- 2和bFGF单独或联合作用 ,用酶动力学方法检测PDLC的ALP活性。结果 :5 0～ 2 0 0 μg/L浓度的rhBMP - 2可显著增强人PDLC的ALP活性 (P <0 .0 1) ,而 10 μg/L浓度的bFGF可显著抑制人PDLC的ALP活性(P <0 .0 1) ,rhBMP - 2和bFGF联合作用仍可较明显地增强人PDLC的ALP活性 (P <0 .0 5 )。结论 :rhBMP - 2和bFGF联合应用可增强人PDLC的ALP活性     

表皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓干细胞分化的影响

目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响。方法确定EGF与bFGF最大效应浓度后,对细胞分组,根据EGF和bFGF单独或联合应用,分为4组:EGF组、bFGF组、EGF联合bFGF组、不加任何生长因子的对照组。作用1、3、5、7、14 d后,采用ALP活性检测法(酶动力法)检测hDPSCs细胞ALP活性。结果 1～14 d bFGF组ALP活性与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);在5、7、14 d,EGF组和EGF联合bFGF组ALP活性显著高于对照组(P<0.05);EGF联合bFGF组的ALP活性明显高于bFGF组(P<0.05),但EGF联合bFGF组ALP活性与EGF组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 bFGF单独应用不能诱导hDPSCs分化,EGF在hDPSCs的分化中发挥作用,EGF和bFGF无明显协同作用。     

内毒素刺激单核细胞培养上清对人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的:观察经内毒素脂多糖(LPS)刺激的单核细胞培养上清对人牙髓细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,探讨单核细胞介导下LPS和CD14在人牙髓细胞分化中的作用.方法:采用经具核梭杆菌LPS刺激的单核细胞培养上清作用于体外培养的人牙髓细胞,通过OD值测定,观察单核细胞培养上清对人牙髓成纤维细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响.结果:LPS直接刺激人牙髓细胞,牙髓细胞ALP活性明显上升,但LPS刺激的单核细胞培养上清对人牙髓细胞ALP活性有明显的抑制作用.抗CD14抗体在有血清的条件下作用于单核细胞,可以阻断单核细胞介导下LPS对牙髓细胞ALP活性的抑制.结论:单核细胞介导的LPS对牙髓细胞ALP活性有抑制作用,其机制可能依赖CD14.     

脂多糖对人牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:了解脂多糖(LPS)对人牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性的影响。方法:Ⅰ型胶原酶消化组织块法体外培养牙髓细胞,检测细胞表面LPS受体CD14(mCD14);流式细胞术观察不同浓度LPS(0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml)对牙髓细胞细胞周期的影响,测定不同浓度LPS对牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响,采用χ2检验以及单因素方差分析对实验数据分别进行统计学分析。结果:人牙髓细胞不表达mCD14,LPS在浓度为0.1μg/ml、1μg/ml和10μg/ml时可以抑制牙髓细胞增殖(P<0.01)及碱性磷酸酶活性(P<0.05)。结论:LPS具有抑制牙髓细胞增殖及牙髓细胞分化的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对人体外培养牙髓细胞增殖的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养的人牙髓细胞增殖和分化的影响.方法 以常规体外组织块培养法获得牙髓细胞,采用MTT比色测定bFGF对牙髓细胞的影响.结果 bFGF在1～100ng/ml浓度范围内,可促进人牙髓细胞的增殖,与对照组相比差异显著(P<0.01).bFGF最小显效浓度是1ng/ml,而10ng/ml的bFGF促增殖作用最强,与1ng/ml的bFGF相比差异显著(P<0.01),但与100ng/ml的bFGF无显著差异(P>0.05).从第3天起,与对照组相比bFGF对人牙髓细胞有显著的促增殖作用(P<0.01).结论 bFGF能明显促进人牙髓细胞的增殖,在牙髓组织康复治疗中起到重要作用.     

大鼠牙本质基质蛋白1对人牙髓细胞增殖和ALP活性的影响

目的 :探讨大鼠牙本质基质蛋白 1(DMP1)对体外培养的人牙髓细胞增殖和ALP活性的影响。方法 :利用MTT法研究牙髓细胞的细胞增殖情况 ,碱性磷酸酶检测试剂盒检测牙髓细胞内ALP活性。结果 :DMP1在细胞培养 3d和 5d时 ,5 μg/mL组可促进人牙髓细胞增殖 (P <0 .0 5 )。细胞培养 3d时 ,仅5 μg/mL组可促进人牙髓细胞ALP活性 (P <0 .0 5 ) ;培养 5d时 1μg/mL和 5 μg/mL均可促进人牙髓细胞ALP活性 (P <0 .0 5 ) ;培养 7d时促进作用进一步加强 (P <0 .0 5 )。结论 :DMP1在一定浓度下可促进牙髓细胞的增殖 ;DMP1对牙髓细胞ALP活性的促进作用呈浓度依赖性 ,高浓度DMP1可以促进人牙髓细胞ALP活性 ,随着时间的延长 ,促进ALP活性的作用也增强。     

IGF-1通过PI3K/AKT信号通路促进牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的研究

目的:研究IGF-1对牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用酶消化法分离培养原代人牙髓细胞。Western blot检测牙髓组织中IGF-1蛋白表达,不同浓度的IGF-1处理牙髓细胞7d,CCK8法检测细胞增殖。用IGF-1(100 μg/L)及LY294002(10 μmol/L)分别单独或同时处理牙髓细胞,培养7 d后MTT实验检测细胞增殖;在培养第3、5、7、14天时检测细胞ALP 活性;在培养第7天时用Western blot检测AKT和p-AKT蛋白表达情况。结果:IGF-1在牙髓炎组织中低表达, IGF-1在20~100 μg/L浓度范围内从作用第3天开始能够显著促进牙髓细胞增殖(P<0.05或P<0.01),且具有剂量和时间依赖效应。LY294002能够抑制牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性,具有时间依赖性。IGF-1能促进p-AKT蛋白表达,而 LY294002能减低IGF-1对p-AKT蛋白表达的促进作用。结论:IGF-1可以促进牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性,且具有浓度和时间依赖性,作用机制可能与PI3K/AKT信号通路相关。[关键词] 牙髓细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶     

体外培养的冠髓和根髓细胞中碱性磷酸酶的活性

目的：比较根部和冠部牙髓培养细胞的碱性磷酸酶活性，探讨牙髓干细胞在牙髓中的定位。方法：用组织块法分别培养根髓、冠髓细胞，用Gomori碱性磷酸酶染色法对根、冠髓培养细胞在加入条件孵育液(20％DMEM 10nmol／L地塞米松 10mmol/L β-甘油酸钠 50mg／L L-抗坏血酸)后的第5、10、15天的碱性磷酸酶活性进行测定，从牙髓干细胞的功能角度，探讨其在牙髓中的定位。结果：根髓、冠髓细胞均出现碱性磷酸酶染色阳性，染色强度在第5天无差别，在第10、15天根髓染色强度大于冠髓。结论：碱性磷酸酶的活性在根髓中大于冠髓。牙髓干细胞可能存在于全部牙髓之中．其密度在根髓中大于冠髓。     

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子-1对人牙髓细胞碱性磷酸酶活性及矿化能力的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子(IGF)-1对人牙髓细胞碱性磷酸酶活性及矿化能力的影响。方法经10ng/mlbFGF(或)和100ng/mlIGF-1刺激4d后,在410nm波长,检测牙髓细胞的碱性磷酸酶活性值;经矿化液诱导后,采用VonKossa染色法检测不同组细胞的矿化能力。结果培养4d后,IGF-1组及bFGF加IGF-1组均高于对照组(P<0.05),而且bFGF加IGF-1组高于IGF-1组(P<0.05),而bFGF组吸光度值与对照组差异无显著性(P>0.05)。结论IGF-1可促进牙髓细胞向具有矿化能力的细胞分化,而bFGF可能起协同促进作用。     

牛血浆FN对人牙髓成纤维细胞骨形成蛋白和碱性磷酸酶分泌和表达的影响

目的：观察纤维粘连蛋白（ＦＮ）与牙髓细胞分化的关系．方法：将传代的人牙髓细胞接种于９６孔板,分别用不同浓度牛血浆ＦＮ（１０,２０,４０,８０μｇ／ｍｌ）作用３天,进行骨形成蛋白（ＢＭＰ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）的免疫组化染色,图象分析仪半定量测定,并测定培养上清液中ＡＬＰ活性．结果表明：四种浓度的ＦＮ组的牙髓细胞ＢＭＰ和ＡＬＰ表达无明显差异,ＦＮ（２０,４０μｇ／ｍｌ）组培养上清液中ＡＬＰ活性较强．结论：ＦＮ在牙髓细胞分化过程中的作用是有限的．     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓细胞增殖和分化的作用

目的 探讨碱笥成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）对培养人牙髓细胞增殖和分化的效应。方法 采用四唑盐法、^3Ｈ－ＴｄＲ掺入法、图象分析,检测重组人ｂＦＧＦ（ｈｂＦＧＦ）对细胞ＤＮＡ、胶原蛋白、纤维为连蛋白、碱笥磷酸酶、骨形成蛋白合成和凝集素表达的影响。结果 ｈｂＦＧＦ浓度在１～１０μｇ／Ｌ时显著促进细胞增殖,浓度为１～１００μｇ／Ｌ）,Ⅰ型胶原     

Alkaline phosphatase activity in dental pulp of orthodontically treated teeth.

INTRODUCTION: The aim of this study was to examine alkaline phosphatase (ALP) activity in the dental pulp of orthodontically treated teeth. METHODS: Sixteen healthy subjects (mean age 17.0 +/-1.6 years) who required extraction of 4 first premolars for orthodontic reasons participated. One maxillary first premolar subjected to orthodontic force was the test tooth. The contralateral first premolar, bracketed but not subjected to mechanical stress, was the control tooth. After a week of treatment, the first premolars were extracted and the dental pulp removed from the teeth. ALP activity was determined spectrophotometrically and the results expressed as units/liter per milligram of pulp tissue [U/(L x mg)]. RESULTS: ALP activity was 89 +/- 26 U/(L x mg) in the test teeth and 142 +/- 33 U/(L x mg) in the control teeth. The difference between the groups was statistically significant (P < .01). CONCLUSIONS: Orthodontic treatment can lead to significant early-phase reduction in ALP activity in human dental pulp tissue.     

碱性成纤维细胞生长因子及其受体在人牙髓中的表达

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子及其受体在人牙髓中表达和意义。方法:用免疫组化方法检测碱性成纤维细胞生长因子及其受体在人牙髓中的表达。结果:碱性成纤维细胞生长因子在成牙本质细胞层强阳性表达, 在牙髓其它细胞和血管内皮细胞阳性表达;碱性成纤维细胞生长因子受体在成牙本质细胞层弱阳性表达,牙髓其它细胞为阴性。结论:碱性成纤维细胞生长因子及其受体在反应性及修复性牙本质形成过程中可能起重要作用。     

Growth and Differentiation Factor-5 Regulates the Growth and Differentiation of Human Dental Pulp Cells

Introduction

Growth and differentiation factor-5 (GDF-5) is a multifunctional protein that regulates the development and repair in many tissues. The purpose of this study was to investigate whether GDF-5 may influence the proliferation, differentiation, and collagen turnover of human dental pulp cells.

Methods

Human dental pulp cells were treated with different concentrations of GDF-5 (0–500 ng/mL). Morphology of pulp cells was observed under a microscope. Cell proliferation was evaluated by 3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide assay. Immunofluorescent assay was used to observe the percentages of cell mitosis. Collagen content was measured by Sircol collagen assay. Tissue inhibitor of metalloproteinase-1 level in the culture medium was measured with enzyme-linked immunosorbent assay and Western blotting. Cell differentiation was evaluated by alkaline phosphatase (ALP) staining and ALP enzyme activity assay.

Results

After exposure of dental pulp cells to various concentrations of GDF-5, cell number was up-regulated significantly in dose-dependent manner. GDF-5 also stimulated mitosis of dental pulp cells as indicated by an increased percentage of binucleated cells from 28% to 35%–45%. GDF-5 did not affect the collagen content and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 level of pulp cells. GDF-5 decreased the ALP activity of pulp cells as analyzed by ALP staining and enzyme activity assay, with 14%–44% of inhibition.

Conclusions

GDF-5 revealed mitogenic and proliferative activity to dental pulp cells. GDF-5 showed inhibitory effect on ALP activity but little effect on the collagen turnover. These events are crucial in specific stages of dental pulp repair and regeneration. GDF-5 may be potentially used for tissue engineering of pulp-dentin complex.